拟南芥LFY cDNA的克隆及转化菊花的研究

以野生型拟南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａ（Ｌ．）Ｈｅｙｎｈ．）为材料，克隆并测序了Ｌｅａｆｙ（ＬＦＹ）基因的全长ｃＤＮＡ；同时构建了ＬＦＹｃＤＮＡ以ＣａＭＶ３５Ｓ为启动子的植物表达载体，并转化菊花（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ（Ｒａｍａｔ．）Ｔｚｖｅｌ．）。该ｃＤＮＡ全长１２６３ｂｐ，共编码４２０个氨基酸残基，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，ＬＦＹｃＤＮＡ整合到菊花染色体组中。跟正常植株相比，转基因植株中有３株分别提早６５、６７、７０ｄ开花，２株分别推迟７８、９０ｄ开花。

Lfy cDNA高效单子叶植物表达载体的构建及转化兰花研究初报

构建一个适合在单子叶植物中高效表达的含有Ｌｆｙ ｃＤＮＡ的表达载体（ｐＢＩＬ－１），应用基因枪转化法将其导入兰花原球茎中，获得了一些卡那霉素抗性克隆。

拟南芥Lfy基因的克隆及全序列分析

以拟南芥花蕾为材料，对Leafy（简称Lfy）基因进行了克隆和全序列分析。结果表明，该基因全长1263bP，共编码420个氨基酸，与国外已报道的序列相比较，具有99．78％的氨基酸同源性。

核酸酶BN基因的克隆及序列分析

从解淀粉芽抱杆菌（Bacillusamyloliquefaciens）中提取染色体DNA经过PCR扩增得到Barnase（核酸酶BN）基因，然后克隆到质粒PGEM-7Zf(+)的Smal位点上并进行序列分析。结果表明．核酸酶BN基因的核着酸序列与已报道的序列相比具有99．7％的同源性，长度为336bp，根据核苷酸序列推断的氨基酸序列则完全一致。该工作为以后利用核酸酶的特异表达来获得雄性不育植物打下了基础。

烟草绒毡层特异启动子TA29、解淀粉芽孢杆菌Barstar基因的克隆与测序

以基因组ＤＮＡ 为材料，分别对普通烟绒毡层特异启动子ＴＡ２９ 和解淀粉芽孢杆菌Ｂａｒｓｔａｒ 基因的编码序列进行了克隆和全序列分析。结果表明，ＴＡ２９ 全长１５２６ｂｐ ，含有ＴＡＴＡｂｏｘ；Ｂａｒｓｔａｒ 基因的编码序列全长２７３ｂｐ，包括起始密码子ＡＴＧ 和终止密码子ＴＧＡ。

用RAPD技术鉴定橡胶树抗白粉病基因连锁标记

用52种RAPD引物对橡胶树11个抗白粉病品系和11个感病品系基因组DNA进行RAPD分析,找到了一个和橡胶树抗白粉病表型密切相关的DNA片段,此片段长390bp,命名为opv—390。opv—390为11个抗性品系所共有和11个感病品系所没有。用ECL(enhanced cheminesence)酶标法标记抗性品系RRIC52(CK)的OPV390为探针,经Southern blot表明,该序列在6个抗性品系中均为单一拷贝或低拷贝,而感病品系皆不含此序列,由此看来,OPV—390可作为橡胶树抗白粉病基因紧密连锁的RAPD标记。这为今后钓取橡胶树抗白粉病基因的工作打下了基础。

家蚕微孢子虫PCR检测的研究

根据家蚕微孢子虫（Nosemebombycis,N．b）孢子的DNA序列，设计合成一对引物，对家蚕微孢子虫孢子及其近缘种孢子的DNA进行PCR检测。结果表明只有家蚕微孢子虫孢子DNA获得特异性扩增区带，大小为317bp，可以区别于Nosemasp.MG1和MG2、柞蚕微孢子虫、Vairimorphanecatrix及Pleistophoraanguillarum等。对N.b孢子DNA检测灵敏度达1ng水平。

烟草Ⅰ类几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶cDNA在大肠杆菌中的表达

对经过修饰的烟草Ⅰ类几丁质酶（Ⅰｃｈｉｔｉｎａｓｅ，ⅠＣｈｉ）和β１，３葡聚糖酶（Ⅰｇｌｕｃａｎａｓｅ，ⅠＧｌｕ）ｃＤＮＡ分别构建了原核表达载体，并转化大肠杆菌ＢＬ２１。经ＩＰＴＧ诱导表达，ＳＤＳＰＡＧＥ法证明表达产物ⅠＣｈｉ和ⅠＧｌｕ的分子量分别约为３０ｋＤａ和３１ｋＤａ，在菌内以包涵体形式存在。经包涵体的收集、洗涤、裂解和复性，两种表达产物在体外均表现出较强的抑病原真菌活性，且ⅠＣｈｉ的抑菌活力大于ⅠＧｌｕ。

香蕉ACC合成酶cDNA的PCR扩增及序列测定

从香蕉果实中提取总RNA，经反转录成cDNA第一链，根据已知植物ACC合成酶的cDNA及其所编码的氨基酸序列合成引物，经PCR扩增香蕉cDNA得到一长约1．1Kb的产物，对该序列测定结果表明，该cDNA所编码的氨基酸序列包括了ACC合成酶8个高度保守区中的7个，并且包括该酶的活性中心。

烟草Ⅰ类几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶cDNA植物双价表达载体的构建及转化番茄的研究

将烟草中经修饰的Ⅰ类几了质酶和β－1，3-葡聚糖酶cDNA分别加上CaMV35S启动子和NOS终止子，依次插入到同一植物表达载体pBin19上，获得植物双价表达载体pCG－Ⅱ。然后载体pCG－Ⅱ以土壤农杆菌LBA4404介导转化番茄，再生植株的点杂交及PCR扩增证明两种cDNA已随T－DNA同时导入番茄植株中。

齿兰环斑病毒外壳蛋白基因克隆及序列分析

齿兰环斑病毒外壳蛋白基因克隆及序列分析刘志昕潘俊松邵寒霜郑学勤（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室，海南儋州５７１７３７）关键词齿兰环斑病毒，外壳蛋白基因，序列分析兰花受病毒危害相当严重，齿兰环斑病毒（Ｏｄｏｎｔｏｇｌｏｓｕｍｒｉｎｇｓ...

利用RAPD技术快速鉴定番茄体细胞无性系变异

从以镰刀菌酸为选择剂筛选的番茄再生植株和未经筛选的植株叶片中提取ＤＮＡ，建立了适合番茄ＲＡＰＤ分析的ＰＣＲ条件，进一步在６０个随机引物中找到了４个可用于鉴定四个番茄品种体细胞无性系变异的引物。利用该法鉴定体细胞无性系变异不仅简单、迅速、可靠，而且因ＤＮＡ的用量少，不影响被检植株的后期生长，可尽早淘汰那些生理适应性而非分子水平发生变异的再生植株。

甘薯叶片超氧化物歧化酶基因克隆及测序

以甘薯（Ｉｐｏｍｏｅａｂａｔａｔａｓ（Ｌ．）Ｐｏｉｒ）叶为材料提取植物总ＲＮＡ，经反转录后，利用多聚酶链式反应技术，扩增并克隆超氧化物歧化酶基因的ｃＤＮＡ，并进行测序分析。该序列全长４８２ｂｐ，其读码框编码１５２个氨基酸，与国外文献报道的甘薯块根ＳＯＤ基因的ｃＤＮＡ序列相比，具有９９％的同源性。

橡胶转移酶活性与橡胶树产胶能力关系的研究

确定了橡胶树（Ｈｅｖｅａｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ）橡胶转移酶（Ｒｕｂｂｅｒ，Ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ）是处于橡胶粒子上的膜蛋白而不是处于乳精中的水溶性蛋白。对橡胶树热研４号、ＰＲ１０７和热研３５号开割后的植株的橡胶转移酶于不同温度下测定其活性，发现在４—５０℃范围内，酶于２５℃时表现出较高的活性，且在任何温度下，酶活性与各品系的橡胶产量呈正相关。对橡胶树热研７—３３—９７、ＲＲＩＭ６００、海垦１号、ＰＢ８６和天任３１４５一年生幼苗的转移酶活性测定结果也表明，酶活性与各品系的产胶量也呈显著的正相关。这些事实说明，橡胶转移酶是橡胶生物合成的关键酶，因此，克隆、转化橡胶转移酶基因以期创造高产抗逆橡胶树新品系就存在可能性。橡胶转移酶有可能成为早期预测的可靠指标而用于橡胶树的选育种工作。

香蕉ACC合成酶cDNA5’末端的快速扩增

采用cDNA末端快速扩增(RapidamplificationofcDNAends,RACE)的方法对香蕉ACC合成酶的cDNA5’末端进行了扩增,获得677bp的产物,序列测定的结果表明,其中一个连续编码区编码149个氨基酸,其序列含有ACC合成酶的第一和第二保守区和一段长230bp的非翻译区。

利用橡胶树橡胶转移酶活性早期预测橡胶树产胶能力的研究

对热研７—３３—９７、ＲＲＩＭ６０＇、ＰＢ８６、海垦１号。天任３１４５等５个品系的一年生幼苗的橡胶转移酶活性于不同月份进行测定，其结果基本一致，与橡胶产量呈正相关。对热研４３—（８—７９）、ＲＲＩＭ７１２、合口３—１１。南强１—９７等１３个品系的橡胶树幼苗的橡胶转移酶活性的测定结果表明，橡胶转移酶可以作为橡胶树产胶能力的重要指标，对橡胶树产量进行早期预测。为了适应早期预测工作，建立了简便快速的全胶乳橡胶转移酶活性的测定方法。

耐多药结核杆菌分离林KatG及inhA基因变异的研究

目的用直接测序法研究临床分离的多耐药结核杆菌的katG和inhA的基因变异机理。方法用未见报还katG和inhA基因中的片须为引物，PCR法扩增产物，克隆后大量制备质粒，经全自动测序系统测定其DNA序列。结果15株耐INH≥1ug/ml的细菌均有katG突变，主要为点突变。其中14株有463位和315位AA密码子改变。13个变异位点中，9个未见文献报告。关于inhA变异，在18个耐INH≥1ug/ml的菌株中，全部出现inhA基因变异，主要为点突变和缺失，其中又以单个位点变异为主。各菌株之间变异不同。耐式菌株中，katG和inhA同时出现变异的比例较大。结论结核杆菌耐药基因变异机理复杂，我国分离的多耐药结核菌株与国外的菌株上述二基因变异特点不同。

香蕉花叶病毒外壳蛋白基因的分离测序和比较

从海南大田感染花叶病毒的香蕉叶片中分离病毒及其ＲＮＡ，在ＡＭＶ逆转录酶作用下以ＲＮＡ为模板反转录合成ｃＤＮＡ第一链，并在此基础上进行ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｃｒａｓｃＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增，得一１ｋｂ左右片段。补平后克隆到ｐＢＳ质粒的ＥｃｏＲＶ位点，测得该片段长９８６ｂｎ。分析表明它包含有完整的香蕉花叶病毒外壳蛋白基因，其编码区的核苷酸序列与ＣＭＶ－Ｃ株系的同源率为８８；６％，ＣＭＶ－Ｑ株系为７５．０％；氨基酸残基序列与ＣＭＴ－Ｃ株系同源率为８５．８％，ＣＭＶ－Ｑ株系为６４．４％。

结核分支杆菌耐利福平基因rpoB变异机理及其检测的研究

目的研究耐利福平株结核分支杆菌rpoB基因变异及其PCR－SSCP检测方法。方法PCR法扩增rpoB基因．纯化克隆．大量质粒制备．经ABI377系统直接测序。结果17株多耐药结核菌，14株检测出rpoB基因变异。496（Arg），507（Gly→Asp），579（Ala→Gly）和583（Pro→Leu）密码子变异未见报道。全部为点突变，主要是错义突变。在511－533密码子区域变异只占66.7％。地区及耐药谱与rpoB变异无明显规律性。SSCP法检测rpoB的结果与之间测序法一致。结论在511－533之间的23个密码子外的变异比例高．结核菌耐RFP变异与此片断外的基因或其他基因突变有关。SSCP可用于结核菌耐RFP基因的检测。

结核分支杆菌耐异烟肼基因inhA突变的测序研究

目的 :对多耐药株结核分支杆菌的inhA基因进行测序分析。方法 :inhA片段为引物 ,聚合酶链反应扩增产物 ,克隆后制备质粒 ,直接测定DNA序列。结果 :在17个耐异烟肼菌株中 ,11株出现inhA基因变异 ,突变率为64.7%。主要为碱基置换和缺失 ,各菌株变异不同。katG和inhA同时出现变异的比例高。结论 :结核菌的耐异烟肼 (INH)和乙胺丁醇 (EMB)变异与inhA突变有关 。