LHCGR胞外结构域蛋白的生信分析、原核表达及纯化

目的为获得小鼠LHCGR胞外结构域蛋白(LHCGR-1),分析其结构及理化性质,为今后研究该蛋白功能及筛选与之相互作用的小分子化合物奠定基础。方法根据NCBI中小鼠LHCGR氨基酸序列合成目的基因Lhcgr-1,经生物信息学分析后,将该基因插入至表达载体pET-28a(+),并转化至BL21(DE3)感受态细胞中;经IPTG诱导,表达重组蛋白pET-28a-LHCGR-1,利用SDS-PAGE和Western Blot进行鉴定,之后对该蛋白进行纯化,并通过分子对接技术预测该蛋白与LH、CG的相互作用。结果预测LHCGR-1蛋白分子量为40749.08,由367个氨基酸组成,等电点理论值为5.47;氨基酸序列中有29个丝氨酸位点、10个苏氨酸位点和5个酪氨酸位点;成功构建了表达载体pET-28a-LHCGR-1并获得纯化的目的蛋白;分子对接结果表明目的蛋白可以与LH、CG通过多种相互作用,形成稳定的复合物,有利于其发挥原有的生物学功能。结论成功构建了小鼠胞外结构域蛋白LHCGR-1在大肠杆菌内的原核表达体系并获得了纯化蛋白,分子对接预测该蛋白具有生物学功能,提示该蛋白可以用于后续研究。

紫花地丁总黄酮的提取工艺及抗炎作用研究

【目的】利用响应面法优化紫花地丁总黄酮的提取工艺,采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)鉴定化合物组成,并研究其抗炎活性。【方法】用芦丁标准品测定510 nm处的吸光度,以吸光度(Y)为纵坐标,以样品浓度(X)为横坐标,建立黄酮标准曲线。紫花地丁打成粉末过100目筛网、乙醇浸泡12 h、利用超声波仪超声提取,以紫花地丁粉末与乙醇的比例(料液比)、超声提取的时间(超声时间)、所用乙醇的浓度(乙醇浓度)为考察因素,以总黄酮提取量综合评分为响应值,结合Box-Behnken响应面法优化紫花地丁总黄酮提取工艺。利用D101型大孔树脂对提取的紫花地丁总黄酮进行纯化,通过LC-MS/MS法鉴定其化合物组成。60只6周龄健康昆明种小鼠随机均分成空白组、模型组、低剂量组(150 mg/kg)、中剂量组(300 mg/kg)、高剂量组(600 mg/kg)、左氧氟沙星组(5 mg/kg),除空白组外其余各组小鼠鼻腔滴注LPS(1 g/L,50μL/只)建立急性肺损伤(ALI)模型,造模成功后用药干预1周(1次/d,连续7 d);末次给药1 h后采集血液,采血后进行麻醉、处死,采集肺脏;HE染色观察肺损伤程度,ELISA法检测小鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。【结果】料液比1∶20、提取时间22 min、乙醇浓度73%时紫花地丁总黄酮提取量最高,为25.134 mg/g。经鉴定,提取物中含37种黄酮(槲皮素、木犀草素、芹菜素等),少量异黄酮类、糖类、香豆素类、木脂素、单萜类、倍半萜类物质。病理切片显示,各给药组与模型组相比,肺组织出血点逐渐减少、面积缩小,有不同程度恢复:高剂量组与左氧氟沙星组的肺组织在颜色与形态上见轻微损伤:低、中剂量组小鼠肺组织相比模型组损伤程度减轻,但仍有一定程度水肿和部分出血点。ELISA结果表明,经给药后,低、中、高剂量组的TNF-α、IL-β、IL-6、IL-10水平相比模型组均有不同程度的降低,除低剂量组小鼠血清中TNF-α、IL-β水平相比于模型组无显著差异,其余各给药组均有明显降低(P<0.05);高剂量组小鼠血清中各炎症因子水平与左氧氟沙星组差异较小,均略高于空白组水平。【结论】利用响应面法有效提高了紫花地丁总黄酮的提取量,通过小鼠急性肺损伤模型证明了紫花地丁总黄酮能够改善小鼠急性肺损伤,降低血液中IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平,紫花地丁总黄酮具有良好的抗炎作用。

益母草碱对LPS诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用研究

【目的】探究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用。【方法】将60只6~8周龄雌性C57小鼠随机分为6组:空白对照组,模型组,益母草碱低、中、高剂量组及地塞米松阳性对照组,每组10只。空白对照组经阴道灌注50μL PBS缓冲液,其余组经阴道灌注50μL LPS(1 mg/mL)建立小鼠子宫内膜炎疾病模型。造模后,益母草碱低、中、高剂量组分别腹腔注射7.5、15.0、30.0 mg/kg益母草碱,阳性对照组腹腔注射5.0 mg/kg地塞米松,每6 h 1次,连续3次。造模24 h后处死小鼠,测定各组小鼠子宫指数;通过HE染色观察子宫组织病理变化;采用ELISA法检测子宫组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关炎症因子含量及髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】与空白对照组相比,模型组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性均极显著升高(P<0.01);与模型组相比,不同剂量益母草碱能不同程度降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠的子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性(P<0.01),并呈剂量依赖性;与模型组相比,阳性对照组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性极显著降低(P<0.01)。【结论】益母草碱可降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠子宫指数、TNF-α、IL-1β、IL-6炎性因子含量及MPO活性,减轻炎症症状,显示出良好的抗炎效果。

大型发电机定子绕组常见故障的分析及处理

根据多年处理定子绕组故障的经历,总结了一些常见的大型发电机定子绕组故障分析及处理方法。最常见故障的原因是定子线棒下线时没有按照安装工艺操作,在耐压试验时出现放电现象或在试运行试验时出现损伤线棒绝缘层的事故。其次是定子绕组击穿,机组的一些附属设备超过使用年限,运行过程中会引起绕组击穿事故;安装或大修时金属异物遗留机组内,也会导致出现定子绕组击穿的事故。最后介绍绕组内部故障原理,利用多回路理论结合有限元计算方法诊断单相接地故障位置;利用泄漏电流与端部绕组绝缘缺陷的关系,诊断绕组绝缘存在缺陷的部位。

中药复方总多糖及其含药血清对小白鼠免疫功能的影响

分别给小鼠灌服复方总多糖、复方水煎剂、黄芪多糖、生理盐水后制备含药血清,用MTT法测定小鼠淋巴细胞增殖程度,用酶法一氧化氮试剂盒测定腹腔巨噬细胞一氧化氮的生成量,同时与各种药物的体外实验相比较。结果显示,复方总多糖及其含药血清均能促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖和腹腔巨噬细胞一氧化氮的生成量,且效果优于复方水煎剂和黄芪多糖。

水轮发电机组振动分析及处理

机组运行的稳定性是水轮发电机组工作性能中的重要指标,克服机组运行的不稳定,就成了机组设计、制造、安装、运行和检修中突出要解决的问题之一。

试谈影响研究生学位论文质量的几个关键因素

学位论文是研究生教育的重要组成部分和总结性成果,其质量高低不仅反映了学位申请者本人的科研能力和学术水平,也是其培养单位学位与研究生教育质量的集中体现,影响学位论文质量的因素很多,文章就几个关键因素做一探讨。

博士研究生创新人才培育中的导师因素分析

博士研究生是我国经济建设、科技进步和社会发展的栋梁,在博士研究生培养阶段,加强创新能力的培养是博士研究生教育的根本任务。博士研究生导师在培育博士生的创新精神和创新能力等方面起着积极作用。

汽轮发电机用聚四氟乙烯滑套评定试验方法研究

为了改进国产聚四氟乙烯滑套的性能,笔者提出了一种切实可行有效的评定试验方法,采取轴向和径向压力变形试验与扫描电镜、能谱分析相结合的手段,对国产和进口的聚四氟乙烯滑套材料性能和产品性能进行综合评定,并对进口与国产滑套产品的细微差别进行了分析。其分析结果表明,该方法对了解和评价滑套材料的诸多性能,确保国产滑套材料的使用寿命具有重要意义。同时,该方法也为国产化聚四氟乙烯滑套的性能改进,提供了可靠的参考依据。

研究生综合素质全面发展的途径

研究生教育具有多样化和个性化的特点,并涉及高校多个管理与服务部门,是一个大的系统工程,因此要探讨研究生综合素质的全面发展,就必须系统思考研究生教育的各个环节,不断分析存在的问题与不足,同时还要努力寻找对策,不断提高研究生培养质量。

大型发电机F级定子线棒主绝缘性能分析

阐述了哈尔滨电机厂有限责任公司(哈电)制造的大型发电机F级定子线棒主绝缘各项性能检测分析结果。分析了定子线棒绝缘结构采取的角部场强优化和防晕结构优化处理措施,与定子线棒分别经过电老化试验、500周期冷热循环试验、耐环境因素(潮湿、粉尘和油污等试验)模拟试验等检测试验对线棒性能的影响,及F级定子线棒使用寿命情况。结果表明,哈电制造的F级定子线棒各项性能均达到国际先进水平。

羊湖电厂5号机组动平衡试验

用影响系数法完成了羊湖电厂5号水轮发电机组的转子动平衡,消除了机组的振动问题。提出对于高速水电机组的现场动平衡,需要采用类似火电机组转子动平衡的办法,由低速向高速,分几步来完成。

从中药方剂中提取的复合多糖对雏鸡免疫功能的影响

480只7日龄健康罗曼雏鸡随机分为4组,每组120只。分别于8日龄注射中药复合多糖加环磷酰胺、中药复合多糖、环磷酰胺、生理盐水。分别在试验前、试验后第8、13、21、29、37 天采血(每组15 只)并涂片,测定淋巴细胞百分率及ANAE+ 淋巴细胞百分率;分别在用药前和停药后采血(每组12 只)测定中性粒细胞吞噬力;分别在鸡18、25、32 日龄(每组12 只)测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能;分别在NDⅡ系疫苗首免后7、14、21 d,二免后7、14、28 d 采血(每组15 只)分离血清,测定ND-HI 抗体效价;分别在鸡4、6、9周龄(每组12 只)时,测定法氏囊、胸腺、脾的重量;分别在用药前和停药后第4、8 天采血(每组15 只)测定红细胞免疫功能。试验结果表明:中药复合多糖可使淋巴细胞百分率和ANAE+ 淋巴细胞百分率、外周血中性粒细胞吞噬率和吞噬指数、腹腔巨噬细胞吞噬率和吞噬指数、首免和二免后ND-HI 抗体效价、法氏囊和胸腺及脾重量、红细胞-C3b 花环率和红细胞-IC 花环率明显升高。环磷酰胺可使上述指标明显下降,中药复合多糖加环磷酰胺组与环磷酰胺组之间上述指标差异显著,中药复合多糖加环磷酰胺组,上述指标接近或略高于生理盐水对照组。

干部人事档案相关领域研究现状及趋势分析

对干部(人事)档案领域、人事档案收集利用领域、档案法规研究领域、人事档案系统领域的研究热点及趋势进行系统分析,从不同研究视角入手分析干部人事档案相关领域发展现状,从中发现干部人事档案相关领域研究特点,推进干部人事档案工作科学化、制度化、规范化。

紫花地丁总黄酮体外抗炎活性研究

试验研究了紫花地丁总黄酮(TFV)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞活力、细胞中炎症介质含量以及相关基因表达的影响,以期探讨其体外抗炎活性的作用。试验采用MTT法筛选出TFV对小鼠RAW264.7巨噬细胞活力具有促进作用的最佳添加浓度;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测了TFV对LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞释放到细胞培养液中NO、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)含量的影响;运用实时荧光定量PCR法检测了TFV对LPS诱导的炎性小鼠RAW264.7巨噬细胞TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶2(COX-2)相对表达水平的影响;研究并分析了TFV的体外抗炎活性。试验结果表明,TFV在5~50μg/mL浓度范围内能提高小鼠RAW264.7巨噬细胞的活力(P<0.05);与LPS模型组比较,TFV能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞产生NO、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量,并能显著降低LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞内TNF-α、COX-2等炎症因子的mRNA表达量(P<0.05)。综上,TFV能显著下调LPS诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞IL-1β、IL-6、TNF-α等细胞因子的释放量和下调TNF-α、COX-2 mRNA的表达量,说明抑制促炎性细胞因子基因的表达可能是实现其抗炎作用的原因之一。

不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫活性影响的研究

试验旨在观察不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫活性的影响。用环磷酰胺作免疫抑制剂建立免疫功能低下动物模型,测定了小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和免疫器官脏器指数。结果表明,多糖组分A2和中间纯度的多糖B2能够显著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬率、提高胸腺指数和脾脏指数,能够使环磷酰胺造成的免疫抑制逆转至正常水平,因此,具有合适分子质量的多糖组分和合适纯度的多糖能显著增强小鼠的免疫功能。

黄芪多糖对鸡免疫功能及禽流感-新城疫重组二联苗免疫效果的影响

黄芪多糖具有显著的免疫活性，在抗肿瘤、抗氧化、提高机体免疫功能方面发挥重要作用。近年来，很多试验证实黄芪多糖在抗菌、抗病毒方面有独特功效，对多种疫苗具有免疫辅助效果。试验在此基础上设计3个不同剂量的黄芪多糖配合禽流感一新城疫重组二联苗共同免疫7日龄雏鸡，探讨黄芪多糖的免疫调节功能及疫苗佐剂效果，从中筛选出适合本地区的免疫最佳剂量，为该制剂的临床应用打下基础。

淫羊藿多糖对鸡免疫功能及疫苗免疫效果的影响

为探讨淫羊藿多糖(EPS)对雏鸡免疫功能和禽流感-新城疫重组二联苗免疫效果的影响,将80只1日龄雏鸡随机分为4组,每组20只。分别于1日龄皮下注射生理盐水及12.5mg/mL、25mg/mL、50mg/mLEPS,连续7d,于7、14、21、28、35、42、49、56日龄采血,检测淋巴细胞转化率、中性粒细胞吞噬力、AI和ND抗体效价、红细胞免疫功能。结果表明:不同浓度EPS均能显著提高淋巴细胞转化率、中性粒细胞吞噬力、AI-HI和ND-HI抗体效价、红细胞-C3b花环率,降低红细胞-IC花环率,且中剂量效果较好。淫羊藿多糖作为免疫增强剂和疫苗佐剂,具有较好的研究价值与应用前景。

不同组分及不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫功能的影响

旨在观察不同组分、不同纯度中药复方多糖对小鼠免疫功能的影响。用环磷酰胺(60mg/kg)作免疫抑制剂建立免疫功能低下动物模型,进行小鼠EA花环形成率、T淋巴细胞酯酶染色率检测。结果表明,多糖组分A2(每只12.5mg)和中间纯度的多糖B2(每只12.5mg)能够显著提高正常小鼠和免疫抑制小鼠EA花环形成率和T淋巴细胞酯酶染色率,能够使环磷酰胺造成的免疫抑制逆转至正常水平。因此,具有合适分子质量的多糖组分和合适纯度的多糖能显著增强小鼠的免疫功能。

中药多糖及其含药血清对小鼠淋巴细胞增殖的影响

目的探讨中药复方多糖与各单味中药多糖及其含药血清对小鼠淋巴细胞增殖的影响。方法制备各中药多糖,并分离服用各多糖后的小鼠血清,分别加入到淋巴细胞悬液中,检测小鼠淋巴细胞增殖情况。结果各多糖组和含多糖血清组均能不同程度的促进淋巴细胞增殖,其中复方多糖和含复方多糖血清组最显著。结论血清药理学方法更能真实地反映药物的药理作用;各单味中药多糖对细胞免疫具有协同促进作用。