用于三维试验的最适酶抑制剂浓度探讨

目的 筛选用于三维试验和鉴别ESBLs及AmpC两类 β 内酰胺酶的适宜酶抑制剂浓度。 方法 选择能抑制ESBLs的克拉维酸 (CA)和能抑制AmpC酶的邻氯西林 (CLO) ,稀释成不同浓度 ,对E .coliDH5αTEM 1、E .coliDH5αSHV 1、肺炎克雷伯菌(K .pne)ATCC70 0 6 0 3、阴沟肠杆菌 (E .clo) 0 2 9、E .clo 1 1 94E、E .clo 0 2 9M和E .coliDH5αACT 1等 7株已知菌进行单一抑制剂最佳浓度的选择 ,再据此进行两种抑制剂的联合抑酶作用检测。用耐药性较强的临床分离的 1 38株阴沟肠杆菌考察方法的可行性。结果 CA和CLO的最适浓度分别为 2 0mg/L和 2mol/L ,产AmpC酶的E .clo 0 2 9M和E .coliDH5αACT 1 ,以及产ESBLs的K .pneATCC70 0 6 0 3菌的酶活性均可被各自相应的酶抑制剂抑制 ,也可被两种酶抑制剂联合抑制 ,而不显现抑制剂自身对试验指示菌的抑制作用。临床分离株中同时产ESBLs和AmpC酶的菌株 ,不被单一的酶抑制剂抑制或只能部分抑制 ,需用CA和CLO联合才能抑制酶的全部活性。结论 所选择的两种抑制剂的浓度能对产单一ESBLs或AmpC酶的菌株 。

多重PCR技术检测肺炎克雷伯菌中质粒介导的AmpC酶基因

目的建立多重PCR技术检测肺炎克雷伯菌(K.pneu)中质粒型ampC基因。方法收集临床分离的表型可疑为产AmpC酶的24株K.pneu,用ampC基因的5群6个亚型的引物进行多重聚合酶链反应(mu l-PCR),用三维酶抑制试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶,结合mu l-PCR、三维酶抑制试验和表型试验进行基因和表型分析。同时选择4株菌(3株ampC基因阳性,1株阴性)进行转质粒试验,以证实质粒型基因的存在。结果在mu l-PCR试验中,有22株扩增出C-4族中长度405 bp的片段,1株扩增出C-1族中长度462 bp的片段;1株未扩增出目的条带。三维酶抑制试验中,24株菌中有19株菌未检出AmpC酶,但药物敏感试验中有诱导耐药现象,符合C-4(DHA)族基因诱导表达的特性。转质粒试验中,3株ampC基因阳性的供体菌均将其ampC基因转入受体菌。结论采用多重PCR技术可以简化质粒型ampC基因的检测方法。在我院临床分离的K.pneu中,出现质粒编码的AmpC酶,以C-4族基因为主要流行型。

尿路感染病原菌的分布、耐药趋势和用药对策

目的 :监测、分析尿路感染 (UTIs)病原菌的分布和耐药情况 ,为临床合理用药提供依据。 方法 :1998年～ 2 0 0 2年从UTIs病人中段尿细菌培养标本中分离出 798株感染菌 ,对其中的革兰阴性杆菌进行阿米卡星(AMK)、氨苄西林 (AMP)、头孢唑林 (CFZ)、头孢呋欣 (CXM)、头孢三嗪 (CRO) ,头孢噻肟 (CTX)、头孢他啶 (CAZ)、萘啶酸 (NAL)、环丙沙星 (CIP)、复方新诺明 (SXT)、呋喃妥因 (NIT)等 11种药物的敏感试验 ;对革兰阳性球菌进行苯唑西林 (OXA)、AMP、CFZ、CIP、庆大霉素 (GEN)、万古霉素 (VAN)、SXT、NIT等 8种药物的敏感试验 ;并根据美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)制定的规则进行超广谱 β 内酰胺酶 (ESBLs)或 β 内酰胺酶的检测。 结果 :肠杆菌科细菌仍是UTIs的主要分离菌。在所有的分离菌中 ,大肠埃希菌分离率最高 (6 6 .0 % ) ,其余依次为肠球菌(6 .5 % )、克雷伯菌属 (6 .0 % )、葡萄球菌 (5 .4 % )等。大肠埃希菌对CIP、SXT和AMP的耐药率分别为 5 6 .0 %、6 7.0 %和 78.9% ;对CIP的耐药呈逐年上升趋势 ,1998年为 4 6 .6 % ,2 0 0 2年为 5 9.4 % ,并表现了对NAL更高的耐药率。而大肠埃希菌对NIT和AMK的耐药率分别为 8.9%和 4 .9%。ESBLs的阳性率在大肠埃希菌和克雷伯菌属中分别为 12 .9%和

用Vitek-ESBL试验检测超广谱β-内酰胺酶的建议

目的 观察Vitek药敏试卡检测ESBL(超广谱 β 内酰胺酶 )的准确性 ,探讨能弥补其不足的检测方法。 方法 用Vitek GNS NT卡 (试卡法 )和纸片扩散法 (扩散法 ) ,对从临床标本中分离的 2 6 8株大肠埃希菌和 2 0 8株克雷伯菌属细菌进行ESBL检测 ,对结果存在差异的菌株再用琼脂稀释法 (稀释法 )检测 ,并增加 2种其他参考方法。结果 4 76株被检测菌中 ,有 18株菌试卡法与扩散法和稀释法有差异。其中有 15株菌试卡法检测ESBL阴性 ,扩散法和稀释法检测ESBL阳性 ,特点为 ,加棒酸 (CA)的复合药物比单药的MIC虽降低 3个以上对倍稀释度 ,但未降至 0 .5 μg/ml。有 2株菌试卡法和稀释法ESBL阴性 ,扩散法可疑阳性 ;有 1株菌试卡法ESBL阳性 ,扩散法和稀释法阴性。参考方法显示 ,除了试卡法单独阳性的那株菌外 ,其他 17株菌都为既产ESBL又产AmpC酶的菌株。结论 用试卡法检测ESBL ,可检出大多数产ESBL的细菌 ,但对同时产AmpC等其他高活性酶的菌株 ,会造成ESBL检测的假阴性。补救措施为 :试卡法结果中一代头孢耐药 ,而ESBL阴性的那部分菌 ,将Labreport(实验报告 )窗调至Rawdatereport(原始资料报告 )窗 ,观察CTX(头孢噻肟 )、CTX/CA和CAZ(头孢他啶 )、CAZ/CA孔的A值 ,只要其中有一对A值同时下降 4 0 %左右 ,宜采用纸?

E-test法用于100株革兰阴性菌的药敏结果评价

１００株临床分离的革兰阴性菌用Ｅ－ｔｅｓｔ、琼脂稀释法与Ｋ－Ｂ法等三种方法进行了五种抗菌药物的敏感试验。结果显示按等级资料处理三法无显著性差异，Ｅ－ｔｅｓｔ与琼脂稀释法的一致性为９０．０％，仅在头孢呋肟中出现了３例严重差异（Ｒ→Ｓ）；Ｋ－Ｂ法与琼脂稀释法一致性为８６．２％，在环丙沙星中出现９例严重差异，庆大霉素出现３例严重差异；Ｅ－ｔｅｓｔ与Ｋ－Ｂ法之间的一致为９０．２％。Ｅ－ｔｅｓｔ确为一种简便、易行、准确的抗菌药物敏感试验方法，但其价格较贵，只适于在某些情况下选择使用。

非PBP2a型苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌的研究

目的 :探讨从临床分离的表型为苯唑西林 (OXA)耐药 (OR)的金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )是否存在mecA基因以外的耐药机制。 方法 :表型为OXA耐药 (OR)的金葡菌 130株 ,其中五种非β 内酰胺类药物 (庆大霉素、环丙沙星、林可霉素、四环素、红霉素 )三种以上耐药 (OR R) 12 5株 ,三种以上敏感 (OR S) 5株 ;表型为OXA敏感 (OS)的金葡菌 ,五种非 β 内酰胺类药物 3种以上耐药 (OS R) 14株。采用OXA ,OXA/克拉维酸 (CA)双纸片扩散试验 ,青霉素和苯唑西林酶浸出三维试验和mecA基因聚合酶链反应 (PCR)三种试验 ,分别检测青霉素酶、苯唑西林酶和mecA基因。 结果 :130株OR和 14株OS双纸片试验均为阴性 ,三维试验中青霉素酶均阳性 ,苯唑西林酶均阴性。 12 5株OR R型菌均检出mecA基因 ;5株OR S菌中有 3株未检出mecA基因 ,2株检出mecA基因 ;14株OS R菌均未检出mecA基因。 结论 :表型为OXA耐药而非 β 内酰胺类药物以敏感为主的金葡菌中 ,存在mecA基因和苯唑西林酶均为阴性的耐药型菌株 ,占OXA耐药株中的 2 .3% (3/ 130 )。其耐药机制可能与青霉素结合蛋白(PBPs)

检测白色念珠菌p47抗原ELISA法的建立及临床应用价值

目的 :建立检测血清中白色念珠菌相对分子质量 470 0 0 (p47)抗原的实验室方法 ,并探讨其临床应用价值。 方法 :亲和层析纯化白色念珠菌 p47抗原 ,制备抗 p47单抗和多抗 ,建立 EL ISA法检测血清中 p47抗原 ,并以美国 Biom erica公司试剂盒对照 ,同时检测血液病患者和念珠菌培养阳性的患者。 结果 :血液病组 6 9例患者中 ,本法检测 10例阳性 ,Biomerica法 9例阳性 ;培养阳性组 12 6例患者 ,本法检测 8例阳性 ,Biom erica法 6例阳性。两种方法的阳性符合率为 40 %。 结论 :对怀疑侵袭性念珠菌感染的患者 ,检测血清中 p47抗原是一种有应用前景的诊断方法。

免疫转印法检测白色念珠菌菌丝组分蛋白抗体

目的 为了探讨血清中白色念珠菌菌丝相蛋白组分抗体的实验室诊断意义。方法 应用超声粉碎和ConA Sepharose4B亲和层析除去细胞壁甘露糖和甘露糖蛋白后 ,收集蛋白抗原 ,通过免疫转印技术 ,检测血清标本中相应抗原的抗体。结果 血库血清 40份中 ,1例阳性 ;白色念珠菌培养阳性的 90名患者 ,抗体阳性 5 8例 ;热带念珠菌培养阳性的 17名患者 ,10例抗体阳性。使用大量抗菌药物和 /或免疫抑制剂治疗而培养阴性的 14名患者中 ,抗体阳性 7例。抗体阳性的 75例结果中 ,15例出现 2 9ku和 47ku条带 ,5 1例单独出现 47ku条带 ,9例仅出现 2 9ku条带。结论 免疫转印法检测抗体可作为深部念珠菌感染的参考指标 ,并可提供抗体动态变化模式 ,为深入研究打下基础。

金黄色葡萄球菌对21种抗菌药物的耐药性比较

采用β—内酰胺酶试验和苯吐西林药敏试验，对临床分离的金黄色葡萄球菌（金葡菌）分类。根据21种抗生素的体外抗菌试验得出：产β—内酰胶酶的分离珠中耐甲氧西林（MRSA）的耐药性远较甲氧西林敏感株（MSSA）强，不产β—内酰胺酶的MSSA对大多数抗生素敏感．未分离到不产β—内酰胺酶的MRSA。此外三类金葡菌在各种感染部位的不同分离率亦可作为临床用药的参考。

用CLSI和EUCAST两种标准判定产ESBLs菌株药敏结果的差异

目的分析美国CLSI标准和欧洲EUCAST标准判读产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pneumoniae)对4种常用广谱头孢菌素药敏结果的差异。方法收集按CLSI标准因产ESBLs而将广谱头孢菌素药敏结果由敏感或中介改为耐药的E coli和K.pneumoniae,用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC),用CLSI标准和EUCAST标准进行敏感性界定。同时用PCR及Hodge-test检测4种ESBLs基因和高活性β-内酰胺酶。结果55株菌中53株扩增出介导ESBLs的相关基因,Hodge-test显示55株菌均产高活性β-内酰胺酶;用EUCAST标准界定,55株菌株对头孢三嗪和头孢噻肟均耐药,对头孢他啶和头孢吡肟敏感的菌株分别有5和7株。结论在目前的耐药现状中,用CLSI规则和用EUCAST折点判读E.coli和K.pneumoniae对4种常用第三代和第四代头孢菌素敏感性,对临床治疗结果进行预测的差异主要出现在产ESBLs且头孢他啶和头孢吡肟MICs值≤1μg/m1的菌株中。

增加头孢吡肟、头孢吡肟-克拉维酸的双纸片试验在肠杆菌科细菌中检测ESBLs的探讨

目的探讨在产 AmpC 酶细菌中检测 ESBLs 的方法。方法临床分离对头孢西丁和第三代头孢菌素耐药和(或)中介的111株细菌用于本研究,包括47株阴沟肠杆菌、24株肺炎克雷伯菌和40株大肠埃希菌。结合三维酶抑制试验,ESBLs基因和质粒型 ampC 基因 PCR 扩增试验结果对改进法,包括 CLSI 推荐的 ESBLs 确认法中的2对纸片(推荐法)和头孢吡肟、头孢毗肟克拉维酸纸片法进行评估。结果 47株阴沟肠杆菌中,推荐法22株 ESBLs 阳性,改进法32株阳性。24株肺炎克雷伯菌中,推荐法18株 ESBLs 阳性或可疑阳性,改进法11株阳性。40株大肠埃希菌中,推荐法26侏 ESBLs 阳性.改进法34株阳性。三维酶抑制试验、ESBL 和 ampC 基因的扩增试验结果证实 AmpC 酶的存在干扰了推荐法 ESBLs 的检出率。结论在 NCCLS 推荐的确认试验中增加头孢吡肟、头孢吡肟-克拉维酸纸片不仅可以提高 ESBLs 阳性检出率,而且是一种简易有效的方法,可以在临床微生物实验室的常规敏感试验中同时检测肠杆菌科细菌的 ESBLs,也可在一定程度上推测 AmpC 酶的存在。

大肠埃希菌中共存两种携带ampC和/或超广谱β-内酰胺酶基因的质粒

目的：探讨从临床分离的大肠埃希菌（E．coli）中，由质粒编码的ampC和／或超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因质粒携带方式。方法：三维实验证实产AmpC酶的42株E．coli，用E．coliC600作为接合受体菌，采用头孢曲松和头孢他啶／头孢噻肟／棒酸两步淘筛法，进行对第三代头孢菌素耐药性的传递实验：用PCR法扩增质粒编码的ampC和ESBLs基因、三维酶实验和抗生素敏感实验对供体菌和接合子进行对比。结果：接合实验显示，有37侏供体菌对第三代头孢菌素的耐药性可传递，传递频率为10^-7～10^-5。其中23株菌仅传递了ESBLs耐药性，3株菌仅传递AmpC耐药性，11株菌传递了AmpC／ESBLs两种耐药性11株菌中，7株菌的AmpC／ESBLs耐药性携带在同一质粒上；另有4株菌各得到两种接合子，其中2株均得到携带ESBL耐药性和AmpC／ESBLs耐药性的2类接合子，2株均得到携带AmpC耐药性和ESBL耐药性的2类接合子结论：在同时表达AmpC和ESBLs两种酶的E．coli中，有些菌不能通过接合传递实验将两种耐药性分开传递，有些可分开传递。当AmpC和／或ESBLs耐药性基因在同一细菌中南2个质粒携带时，可在接合实验中得到两种不同的接合子。

与护理部共同做好采集血培养标本的质量控制

血液感染危及生命，历来被临床和微生物实验室高度重视。对血液培养的质量控制不仅要提高血液培养的阳性率，还要提高检出感染菌的准确率，排除在整个血液培养过程中影响检测准确率的各种干扰因素。血液培养的全过程分为2个阶段，第一阶段血液标本的采集由临床完成，

合理选择抗菌药物进行淋病奈瑟菌药敏试验

目的 :对淋病奈瑟菌 (NG)药敏结果进行分析 ,探讨判定尺度可能造成的误差。 方法 :145株淋病奈瑟菌采用美国临床实验室标准化委员会 (NCCLS)规范的纸片扩散法进行药敏试验 ,抗菌药物选用NCCLS推荐的有NG敏感界点的药物 7种和无NG敏感界点的药物 7种。 结果 :有NG敏感界点的头孢三嗪 (CTR)和头孢噻肟 (CTX)敏感率分别为 5 2 .4%和 5 5 .1% ,头孢呋辛钠 (CFX)为 2 9.0 % ,环丙沙星 (CIP)和氧氟沙星 (OFX)均为 5 .5 % ,青霉素(PEN)和四环素均耐药 ;无NG敏感界点的头孢唑啉 (CFZ)敏感率 92 .0 % ,阿齐霉素 (AZM) 88.3 % ,红霉素 (ERY)71.0 % ,氨苄西林 (AMP) 6 2 .8% ,庆大霉素 (GEM) 5 4.5 % ,阿米卡星 (AMK) 30 .3% ,诺氟沙星 (NOR) 12 .4%。 结论 :NG主要侵犯生殖道粘膜上皮细胞 ,抗菌药物对NG判定敏感的抑菌圈直径比其他细菌大 ,可能与局部药物浓度较低有关 ,因而常规药敏试验应选有NG界点的抗菌药物 ,否则会误导临床用药。

高产AmpC酶大肠埃希菌ampC基因启动区突变的分析研究

目的分析临床分离的高产AmpC酶大肠埃希菌(E.coli)中染色体ampC基因启动区突变状况。方法选择三维酶试验产AmpC酶和/或产ESBLs以及头孢西丁耐药的40株E.coli,用聚合酶链反应(PCR)扩增质粒型ampC基因和ampC基因启动区的片段,启动区扩增产物用MaeⅢ内切酶酶切。参考以上结果,选择部分菌株的启动区扩增产物测序分析。结果40株菌中,12株MaeⅢ酶不能切开启动子的-35区。21株被测序菌中,5株酶切异常的菌株,在-35区均出现-32位上T→A突变;11株在衰减区出现突变,主要突变点分布在+22位、+26位、+27位和+32位;3株出现-42、-18、-1和+584个位点突变,-42位C→T突变形成了与-35区强启动子相同的6位体序列。结论-42位、-32位和衰减区茎环位点的突变增强ampC基因的转录,在大肠埃希菌对广谱头孢菌素类药物耐药中起重要作用。

1968株嗜血杆菌的分离及对抗生素的耐药性分析

目的 :检测和总结南京地区嗜血杆菌的分离率和耐药性。 方法 :按标准分离培养嗜血杆菌 ,并进行九种七类药物的敏感试验和 β-内酰胺酶的检测。 结果 :在呼吸道、宫颈拭子、眼鼻拭子等标本中均分离出嗜血杆菌。药敏结果显示 ,对氨苄西林的耐药率高达 6 5 % ,产酶率为 6 3.3% ,另有 3.5 %β-内酰胺酶阴性、氨苄西林耐药 (BL NAR)的耐药表型。对第二、三代头孢、新喹诺酮类、大环内酯类的耐药率约在 15 %～ 30 %。 结论 :嗜血杆菌在南京地区的人群呼吸道感染中占有重要比例。临床经验用药可首选口服的头孢呋辛钠和阿奇霉素 ,要注意 BL NAR型耐药的增高和传播。

抗ECA单抗—ELISA的应用研究

ECA(肠杆菌科细菌共同抗原)存在于几乎所有的肠杆菌科细菌表面,由线性的氨基糖多聚体和脂类组成。检测ECA在肠杆菌科细菌感染的快速诊断上有十分重要的意义。