阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)分离鉴定及其对蔬菜中甲萘威农药降解作用的研究

目的从寒地黑土中筛选甲萘威降解菌,并对筛选得到的菌株进行形态学及16S rDNA分子鉴定,将该菌株用于蔬菜样品中甲萘威农药残留降解规律的研究。方法从土壤样品中用含甲萘威农药的培养基进行平板稀释法初筛、96孔板法复筛,分别在37℃(1 d)、4℃(6 d)下进行培养。筛选在OD_(600nm)处吸光值高的菌株,即为可利用甲萘威生长的菌株。获得OD_(600nm)为0.906的菌株D7,并对该菌株进行形态学以及分子生物学鉴定。结果菌株D7经鉴定为阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai);菌株D7对所选5种叶菜和5种果菜中残留的甲萘威均有一定降解作用,且对生菜中甲萘威的降解率最高,为58.7%。结论筛选出的阿氏芽孢杆菌D7在低温条件生长良好。本研究为微生物法降解甲萘威提供优良降解菌株,解决蔬菜中甲萘威残留的问题。

野生牛肝菌内生真菌分离鉴定及其生物学特性

采用组织分离法从黄皮疣柄牛肝菌、小美牛肝菌、双色牛肝菌的子实体中,分离纯化获得4株内生真菌,经菌落、菌丝、孢子形态学观察及rDNA ITS分子生物学鉴定,结果显示:菌株LCTG-12为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)、LCCK-6为克鲁伊假丝酵母(Candida kruisii)、BSHC-18为黄瘤孢菌(Hypomyces chrysospermus)、BBFO-10为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysprum)。对4株内生真菌生物学特性进行研究,其中盖姆斯木霉菌丝生长速度较快,在CPDA培养基上,25℃培养5 d菌丝长满平板;液态培养时,该菌株在25℃、摇床转速160 r/min、pH5.5、8 d,可获得菌丝干基生物量4.13 g/L。平板对峙实验结果:盖姆斯木霉LCTG-12对黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10菌丝生长均有拮抗作用,并且,黄瘤孢菌BSHC-18和尖孢镰刀菌BBFO-10两者之间也具有拮抗作用,表明牛肝菌内生真菌中盖姆斯木霉对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防腐提供优良的菌株。

禾草丹降解菌分离筛选及其对秸秆饲料残留降解率的影响

试验以黑龙江省不同地区的玉米根际寒地黑土为供试土壤,从长期施用禾草丹玉米田土样中,通过微生物富集培养,采用平板涂布法进行禾草丹降解菌的初步分离,利用96孔板法对其进行进一步筛选,纯化出2株能够以禾草丹(0.1 mg/L)为唯一碳源生长的降解菌株C6和F6。根据形态特征及16S rDNA基因序列相似性分析,分别鉴定为C6阿氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)和F6苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)。采用L^(9)(3_(4))正交试验设计,研究阿氏芽孢杆菌培养基初始pH值、接种量、250 mL锥形瓶装液量3因素对禾草丹农药降解效率的影响。研究表明,阿氏芽孢杆菌的pH值为6.5、接种量为4%、装液量为90 m L时,禾草丹降解率达到96.5%,为降解玉米秸秆饲料中禾草丹农药的残留提供优良菌种。

盖姆斯木霉分离鉴定及菌丝体发酵条件的研究

在对野生牛肝菌分离母种菌丝的过程中获得1株内生真菌(Trg-12),经对其菌落、菌丝、孢子形态显微镜观察及rDNA内转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分子生物学鉴定,明确其为盖姆斯木霉(Trichoderma gamsii)。进一步对菌株在综合马铃薯液态培养基中的菌丝量进行研究,采用L9(34)正交试验设计,接种量5%,发酵时间8 d时,对装液量、摇床转速、初始p H值及培养温度进行优化,结果显示:250 m L三角瓶装液量100 mL,摇床转速160 r/min,初始p H6,培养温度29℃,菌丝量为4.43 g/L。用平板对峙培养法测定该菌株与牛肝菌常见腐败菌尖孢镰刀菌和黄瘤孢菌的抑制率分别为(53.7±1.9)%和(74.7±1.6)%,表明牛肝菌内生真菌盖姆斯木霉Trg-12对腐败菌具有拮抗作用,可为生物防治提供优良的菌株。

基于HPLC-MS/MS对枇杷叶水提组分分析及萜类物质的结构鉴定

利用高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)技术,对枇杷叶水提组分进行分析,并且对萜类物质进行解析。采用C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以水+0.1%甲酸溶液为流动相梯度洗脱,使用ESI离子源,在正、负离子模式下采集质谱数据,共检测到120个化合物;包括18种萜类化合物,总相对含量1452.693μg/mL;24种黄酮类化合物,总相对含量10378.081μg/mL;18种酚类化合物、总相对含量36967.955μg/mL;5种香豆素类化合物,总相对含量214.778μg/mL;进一步鉴定出18种萜类化合物的结构,主要包括乌苏烷型6种、齐墩果烷型7种、3种倍半萜、1种二萜类物质和1种特殊的环烯醚萜苷类物质;其中栎瘿酸、银杏内酯B、Prespatane、山栀苷甲酯、Icariside B5、皂皮酸、积雪草酸、18β-甘草次酸在以往的枇杷叶活性物质中未见报道。本文为枇杷叶水提成分的研究提供参考。