肺结核患者血清IL-2、IL-6、IFN-γ水平变化及其诊断效能

目的观察肺结核患者血清白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素6(IL-6)及γ-干扰素(IFN-γ)水平变化,并分析其单独及联合检测对肺结核的诊断效能。方法选取疑似肺结核患者211例,其中确诊肺结核65例作为结核组、非肺结核70例作为非结核组,剩余76例用于诊断效能的验证。采用流式细胞术检测所有受试者血清IL-2、IL-6、IFN-γ水平,PCR-荧光探针法检测用于诊断效能验证的76例疑似肺结核患者痰液结核分枝杆菌(MTB)核酸阳性情况。绘制血清IL-2、IL-6、IFN-γ单独及联合诊断肺结核的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其诊断效能;选择诊断效能较高的组合,分析其与76例疑似肺结核患者痰液MTB核酸检测结果的一致性。结果结核组血清IL-2、IL-6、IFN-γ水平均高于非结核组(P均<0.05)。血清IL-2、IL-6、IFN-γ单独诊断肺结核的cut-off分别为2.49、11.11、17.80 pg/mL,其单独及联合诊断肺结核的AUC均>0.70;血清IL-2、IL-6、IFN-γ联合诊断的AUC最高(0.91),此时敏感度为74.47%、特异度为91.38%;综合AUC、敏感度和特异度,血清IL-2和IFN-γ联合检测具有较高的诊断价值,其AUC为0.88、敏感度为80.85%、特异度为81.03%。76例疑似肺结核患者痰液MTB核酸阳性34例、阴性42例,血清IL-2联合IFN-γ检测阳性28例、阴性48例,两种检测方法具有较高的一致性(Kappa值为0.84,P<0.05)。结论肺结核患者血清IL-2、IL-6、IFN-γ水平均升高,三者单独检测均有助于肺结核的诊断,其中血清IL-2联合IFN-γ检测的诊断效能较高。

IFN-αIL-6和IL-17检测对结核病辅助诊断价值

目的:评价血清免疫细胞因子对结核分枝杆菌肺病(TB)的诊断价值。方法:回顾性选取2020年11月至2022年10月于河北省胸科医院就诊的139例疑似肺结核患者作为研究对象。按照2018年最新实施的肺结核诊断标准(WS288-2017),其中确诊结核病69例,纳入结核组,非结核病70例纳入非结核组。采用流式免疫荧光发光法检测血清中免疫相关细胞因子IL-6、IL-17和IFN-α水平,并分析三种因子检测对结核病的诊断效能。结果:结核组患者IL-6浓度和IL-17浓度显著高于非结核组,差异有统计学意义(P<0.05);结核组患者IFN-α浓度略高于非结核组,但差异无统计学意义(P>0.05);进行ROC曲线分析:IL-6检测AUC面积为0.658(P<0.001)、IL-17检测AUC面积为0.734(P<0.001)、IFN-α检测AUC面积为0.571(P<0.001)。结论:MTB感染者IL-6、IL-17水平增高,IL-6、IL-17对结核的诊断具有较好的灵敏度和特异度;IL-6、IL-17在临床辅助诊断结核病具有一定的价值。

多种呼吸道病原体的多重实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

目的建立多种呼吸道病原体的多重实时荧光定量聚合酶链反应（multiplex real-time-PCR,MRTPCR）检测方法。方法根据生物信息学分析结果选定各种呼吸道病原体的靶序列,建立MRT-PCR检测体系。构建质粒标准品,检测建立体系的敏感度、特异度和重复性,并运用MRT-PCR和单荧光定量PCR检测临床样本进行对比分析。结果成功建立了多种呼吸道病原体的MRT-PCR检测体系;该方法特异度较好,最低检测限为10copies/μL,重复性良好,变异系数为0.99%~2.50%,530例临床样本中,MRT-PCR检测的阳性率为59.2%（314/530）,单荧光定量PCR检测的阳性率为61.1%（324/530）,阳性检出率差异不大。结论建立快速、敏感、特异、稳定的MRT-PCR检测体系,具有良好的临床应用前景。

改良多重实时荧光定量PCR检测流感A型和B型病毒

目的：建立改良多重实时荧光定量PCR体系快速检测流感A型和B型病毒。方法根据生物信息学分析结果选定流感A型和B型病毒的靶序列，建立MRT－PCR检测体系。构建质粒标准品，评估所建立体系的灵敏度、特异性和重复性。结果成功建立了基于同源加尾系统和Taqman－分子灯标探针的改良多重实时荧光定量PCR检测体系；该方法最低检测限为102 copies／μl，特异性良好，重复性良好，变异系数（CV）为0．99％～2．50％。结论建立了快速、敏感、特异、稳定地改良多重实时荧光定量PCR（ MRT－PCR）检测体系，具有良好的临床应用前景。

呼吸道病原体分子诊断技术研究进展

呼吸系统是人体各个系统中与外环境接触最频繁的系统之一,在一些较差环境中很容易导致呼吸道感染,呼吸道感染也是临床上最常见的感染性疾病。呼吸道感染性病原体来源多样,包括病毒、细菌、衣原体和支原体等,并且传播迅速,临床表现相似,单从临床表现很难区分感染病原体,

多重PCR与恒温扩增芯片法在呼吸道病原体中的检测价值

目的评估多重荧光定量PCR法在呼吸道病原体(包括铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌、流感嗜血杆菌)检测中的价值。方法以恒温芯片法为参照检测方法,通过检测呼吸道病原体标准菌株以及临床样本,比较多重荧光定量PCR法和恒温芯片法的检出率。结果与恒温芯片法相比多重荧光定量PCR法具有很高的特异性与一致性且呼吸道病原体的检出率差异无统计学意义(χ^(2)=0.410,P=0.522)。同时对单一病原体的检出率显示,两种检测方法的检出率差异无统计学意义(P>0.05),一致性分析(Kappa值)显示两种检测方法具有高度一致性(Kappa>0.75)。结论多重荧光定量PCR法与恒温芯片法相比具有高度一致性,在呼吸道病原体检测中具有良好的应用价值。

早期排便干预对新生儿黄疸指数的影响分析

目的探讨早期人工促排便法对新生儿黄疸指数的影响。方法将足月出生的新生儿131例随机分为观察组66例和对照组65例,2组均行常规护理和按需母乳喂养。观察组行早期排便干预,即出生3 h后给予腹部按摩,采用温水加开塞露灌肠通便;对照组不予排便干预。观察并记录2组新生儿首次排便时间、胎便转黄时间、每日排便次数及胎便早排、迟排和胎便早变黄、迟变黄等例数,并测定出生后1~5 d经皮黄疸指数。结果观察组首次排胎便时间、胎便转黄时间均明显短于对照组（P均〈0.05）,每日排便次数多于对照组（P〈0.05）,出生后1~5 d经皮黄疸指数均低于对照组（P均〈0.05）。结论早期人工促排便可促进新生儿肠蠕动,加快肠道内胆红素的排出,减少胆红素的肠道重吸收,从而有效降低新生儿黄疸指数,避免病理性黄疸的发生。

脐血胆红素水平及排便干预对新生儿病理性黄疸的影响

目的探讨脐血胆红素水平测定对新生儿病理性黄疸的预测及早期排便干预效果。方法选取河北省胸科医院和河北医科大学第二医院2012年6月—2014年6月出生的足月新生儿196例,分为观察组92例和对照组104例,观察组给予排便干预,对照组未给予排便干预。观察病理性黄疸的发生情况及排便干预对病理性黄疸的效果。结果本组发生病理性黄疸79例(40.31%)。发生病理性黄疸者脐血胆红素水平高于未发生病理性黄疸者。观察组病理性黄疸的发生率低于对照组(P<0.05)。结论脐血胆红素水平可有效预测高胆红素血症的发生风险,排便干预可降低病理性黄疸的发生率。

河北地区汉族人TLR2基因多态性与结核易感性的相关性研究

目的探讨Toll样受体2(Toll-like receptor 2,TLR2)基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与结核病遗传易感性之间的关系。方法采用结核病例和正常对照研究方法进行实验设计,采用SNaPshot技术分析法检测河北地区205例正常人和214例肺结核患者(均为汉族人)TLR2基因的rs5743708与rs3804099位点的多态性,并进行基因型频率和等位基因频率的比较,通过Logistic分析这些基因的多态性与结核病的易感性之间的关系。结果选取的214例结核患者与205例正常人的年龄和性别差异无统计学意义,且年龄和性别因素对研究结果的影响差异无统计学意义(P>0.05)。经χ~2检验rs5743708和rs3804099位点的基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。与对照组相比,结核组的rs5743708位点基因型(χ~2=0.925,P=0.336)及等位基因(χ~2=0.921,P=0.337)、rs3804099位点的基因型(χ~2=3.388,P=0.184)及等位基因(χ~2=2.843,P=0.092)差异均无统计学意义(P>0.05),其中rs5743708位点的CT基因型相对于CC基因型患结核的风险有所增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TLR2的rs5743708和rs3804099位点多态性与河北地区汉族人的结核易感性没有显著的相关性。

胆固醇性肺炎中TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达及意义

目的检测Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)和核因子-κB p65(nuclearfactor-kappaB p65,NF-κB p65)在胆固醇性肺炎泡沫细胞中的表达水平,探讨三者在胆固醇性肺炎发生中的作用、相互关系及临床意义。方法选择手术切除标本经病理证实为胆固醇性肺炎45例,普通型肺炎(对照组)25例,采用免疫组织化学方法检测2组TLR4、MyD88和NF-κB p65的表达水平。结果胆固醇肺炎泡沫细胞中TLR4蛋白阳性表达率、MyD88蛋白和NF-κB p65蛋白强阳性表达率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。TLR4阳性表达率、MyD88和NF-κB强阳性表达率均与性别不相关(P>0.05)。年龄<50岁者胆固醇肺炎泡沫细胞中TLR4阳性表达率、MyD88和NF-κB p65强阳性表达率均明显高于年龄≥50岁者,差异有统计学意义(P<0.05)。TLR4与MyD88、TLR4与NF-κB p65、NF-κB p65与MyD88在胆固醇性肺炎的表达中均呈明显正相关(r=0.476、0.523、0.491,P<0.05)。结论 TLR4、MyD88和NF-κB p65的阳性表达可能与胆固醇性肺炎的发生发展有关,三者可能在胆固醇性肺炎的发病中起协同作用。随着年龄增长,三者表达的阳性率均降低。

2006～2009年住院肺结核耐药情况调查

目的统计并分析06～09年河北省胸科医院住院肺结核病人耐药情况。方法采用绝对浓度间接法进行结核分枝杆菌培养和7种药物敏感试验。结果四年间耐药率依次为23.3%、25.3%、31.1%、37.9%。各年龄组均出现耐药,以青年期发生率最高,男性比女性耐药率高,以农民为重。耐1～2种抗结核药多,但耐5种及以上者也很严重,单耐药发生率以S最高,其次为R、H,多耐药发生率以含S组合居高。结论结核病耐药呈逐年上升,复治耐药最为严重,以S组成的化疗方案耐药率最高应慎用。

BAP1、Ki⁃67表达与老年肺腺癌患者肿瘤侵袭及预后的关系

目的探究乳腺癌1号基因相关蛋白1(BAP1)、Ki⁃67表达与老年肺腺癌(LAC)患者肿瘤侵袭及预后的关系。方法选取本院2018年1月至2019年2月296例老年LAC患者作为研究组,另选取同期292例良性肺部肿瘤患者作为对照组。检测对比两组BAP1、Ki⁃67表达情况,探究BAP1、Ki⁃67与老年LAC发生及肿瘤侵袭的关系,并对比研究组不同预后患者BAP1、Ki⁃67表达情况,采用卡普兰⁃迈耶(KM)曲线进行生存分析。结果研究组BAP1阳性表达率低于对照组,Ki⁃67阳性表达率高于对照组(P<0.05);老年LAC发生与BAP1、Ki⁃67表达情况密切相关(P<0.05);BAP1及Ki⁃67均与老年LAC患者TNM分期、淋巴结转移、胸膜侵犯显著相关,且Ki⁃67与患者分化程度显著相关(P<0.05);随访1年,研究组死亡者BAP1阳性表达率低于生存者,Ki⁃67阳性表达率高于生存者(P<0.05);BAP1阳性表达者1年生存率高于阴性表达者,Ki⁃67阳性表达1年生存率低于阴性表达者(P<0.05)。结论老年LAC患者BAP1阳性表达率显著降低,Ki⁃67阳性表达率异常升高,与LAC的发生及肿瘤侵袭存在密切相关性,且在预测患者1年生存率方面具有一定价值,可为临床评估肿瘤侵袭及预后提供循证支持。

心室减负荷对缺血性心力衰竭MMPs/TIMPs的影响

目的通过大鼠缺血性心力衰竭心脏减负荷模型,探讨心室减负荷对缺血性心力衰竭心脏MMPs-TIMPs表达的影响。方法通过结扎冠状动脉前降支的方法,形成缺血性心力衰竭模型,随机分为两组,即减负荷组(n=14)与心力衰竭组(n=10),前者通过异位心脏移植的方法形成左心室减负荷模型;后者不进行心脏移植,另外8只大鼠作为空白对照组。2周后,测量左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)及最大压力上升及下降速度(±dP/dtmax)。用Western blot法、RT-PCR检测MMP-1、MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3,以及TIMP-1/MMP-1的比值和TIMP-3/MMP-9、TIMP-2/MMP-2比值和TIMP-3/MMP-9比值。结果与对照组比较,心力衰竭组中的MMP-1、MMP-2和MMP-9基因表达明显增加;与心力衰竭组比较,在减负荷后,减负荷组的MMP-2和MMP-9基因表达水平下降明显,差异有统计学意义(P<0.05),TIMP-2和TIMP-3的基因表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与心力衰竭组比较,TIMP-1/MMP-1的比值和TIMP-3/MMP-9均有明显升高(P<0.05);TIMP-2/MMP-2的比值升高更为明显(P<0.01)。与心力衰竭组比较,减负荷组的MMP-9和MMP-2的蛋白表达水平下降(P<0.05),TIMP-1和TIMP-3蛋白表达水平上升(P<0.05)。结论MMPs-TIMPs轴在心脏减负荷后心室重塑过程中发挥重要作用。对大鼠缺血性心肌病进行减负荷可以下调MMP-1、MMP-2和MMP-9,上调TIMP-1和TIMP-3,从而提高TIMPs与MMPs之比;在检测心脏细胞外基质方面,TIMPs/MMPs的比值较单个MMP或TIMP更加敏感。

重视结核分枝杆菌分子生物学诊断

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的慢性传染性疾病,是全世界十大死因之一,被列为我国重大传染病之一。2010年第五次全国结核病流行病学抽样调查报告显示,我国15岁及以上人群中,活动性肺结核患病率为459/10万,其中痰涂片阳性率为66/10万[1]。

荧光PCR探针熔解曲线法检测老年肺结核患者耐药性的价值

目的评价荧光PCR探针熔解曲线法(简称"探针熔解曲线法")检测老年肺结核患者MTB临床分离株对一线抗结核药品耐药性的应用价值。方法回顾性搜集2018年9月至2020年10月河北省胸科医院收治的159例年龄≥65岁的老年肺结核患者作为研究对象。所有患者肺结核诊断明确,具有影像学检查阳性体征、BACTEC MGIT 960(简称"MGIT 960")培养阳性、对硝基苯甲酸(PNB)鉴别培养基生长试验初步菌种鉴定为结核分枝杆菌(MTB)。采用MGIT 960药物敏感性试验(简称"药敏试验")和探针熔解曲线法检测MTB临床分离株对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的耐药及突变情况。以MGIT 960药敏试验结果为参照标准,评价探针熔解曲线法的检测效能,并对两种药敏试验检测结果不一致的菌株进行耐药基因突变位点测序。结果以MGIT 960药敏试验结果为标准,探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇及链霉素的敏感度分别为98.31%(58/59)、96.72%(59/61)、87.50%(35/40)及81.40%(35/43);特异度分别为97.00%(97/100)、95.92%(94/98)、81.51%(97/119)及80.17%(93/116);符合率分别为97.48%(155/159)、96.23%(153/159)、83.02%(132/159)及80.50%(128/159),Kappa值分别为0.973、0.974、0.751、0.785。两种检测方法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素耐药性不一致的菌株分别有4、6、27、31株,其中,探针熔解曲线法检测为耐药的菌株分别有3、4、22、23株,且经耐药基因测序均发现耐药突变位点。结论探针熔解曲线法可快速检测出MTB耐药突变,且敏感度高、特异度强,与MGIT 960药敏试验结果一致性良好,可作为老年肺结核患者早期制定抗结核方案的依据。

TIRAP基因多态性与河北地区肺结核易感性的相关性研究

目的探讨含Tou-白细胞介素1受体C(TIR)功能区的接头蛋白(TIR domain-containing adapter protein,TIRAP)基因的单核苷酸多态性(SNP)与肺结核遗传易感性之间的相关性。方法利用SNa Pshot技术分析法检测河北地区205例正常人(对照组)和214例肺结核患者(均为汉族人,结核组)TIRAP基因的rs595209,rs7932766,rs8177374和rs8177400位点的多态性,并进行基因型频率和等位基因频率的比较,通过统计学方法分析这些基因的多态性与肺结核易感性之间的相关性。结果选取的214例结核患者和205例正常人年龄、性别差异无统计学意义(P>0.05),rs595209,rs7932766,rs8177374和rs8177400位点的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律,结核组的rs595209位点的基因型及等位基因、rs7932766位点的基因型及等位基因、rs8177374位点的基因型及等位基因与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。对四个位点的等位基因和基因型的频率分布进行统计分析,发现在rs8177374位点等位基因A相对于等位基因G患结核的风险增加了10.9%(OR=1.109,95%CI:0.521~2.361,P=0.788)。进一步通过分析发现rs595209位点的GT基因型相对于GG基因型患结核的风险增加了31.4%(OR=1.314,95%CI:0.868~1.987),rs8177374位点的GA基因型相对于GG基因型患结核的风险增加了11.3%(OR=1.113,95%CI:0.516~2.401),但因为带有GT和GA基因型的人数较少,需要进一步通过加大样本量来进行验证。结论 TIRAP基因的rs595209,rs7932766,rs8177374和rs8177400位点多态性与河北地区汉族人的结核易感性没有显著的相关性。

诱导型一氧化氮合成酶在肺结核组织中的定量分析

目的探索诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在肺结核病变中的作用机制及临床意义。方法对46例肺结核组织和9例正常肺组织进行免疫组织化学染色,使用全自动数码显微镜系统进行图像积分光密度(iOD)定量分析,结合临床检验指标抗酸染色和结核菌素试验(PPD)结果进一步分析。结果在肺结核组织中均可见iNOS强阳性表达,iOD值(12±9)×104显著高于正常肺组织(3.4±2.6)×104(P<0.01),与PPD反应强度呈正相关(r=0.419,P<0.01),与抗酸染色不相关(P>0.05)。结论免疫细胞活化产生高水平的iNOS是结核菌感染人体的重要分子机制;全自动数码显微镜系统进行图像iOD定量分析/免疫组织化学染色能够更准确反应iNOS的客观含量。