不同品系玉竹高效液相色谱指纹图谱研究

利用高效液相色谱技术对不同品系玉竹的化学成分进行研究,建立玉竹药材指纹图谱。色谱柱为ZORBAX EclipseXDB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相A为0.05%甲酸-乙腈,B为0.05%甲酸水溶液,梯度洗脱。体积流量1.0 mL/min;检测波长210 nm。试验结果显示,各品系玉竹化学组成稳定,品系内植株间相似度在0.9以上;2个玉竹品系化学组成类似,品系间平均相似度0.794。高效液相色谱指纹图谱可以用于玉竹品系鉴定与质量控制。

人参皂苷高效液相-质谱测试条件优化

通过对流动相和色谱柱的筛选,达到了人参皂苷高效液相-质谱测试条件优化。流动相组成醋酸铵(5mM)-氨水(1mM)-乙腈,梯度洗脱,色谱柱ZORBAX Eclipse XDB-C18。对人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rg3、Rh2和Ro进行了测试,质谱图中基峰是[M-H]-离子,几乎没有碎片离子,因此该条件适合人参皂苷的定性检测。

大豆组织培养再生植株研究

不同基因型的大豆子叶节在添加适宜 BA和 IBA的 1 / 2 MS培养基上经过二周的预培养和二周芽诱导培养 ,可获得高频率的丛生芽 ,及时将丛生芽从高浓度的 BA转至低浓度 BA培养时芽可长出植株 ,再转至添加 NAA的生根培养基上形成完整的植株。经过 40 - 6 0天的培养 ,每个外植体可得到 2 0 - 3 0个芽。芽增殖数和植株再生率因基因型、激素、切割位点、诱导时间等不同而有明显差异。初步确立了丛生芽发生和植株再生的适宜条件和程序 。

东北玉米自交系胚性愈伤组织的诱导

取授粉 10～ 15d的幼胚 ,经常规消毒灭菌 ,接种在诱导培养基上。 15d后愈伤诱导率可达 92 %以上 ,但胚性愈伤诱导率因幼胚基因型、幼胚放置方向、大小、培养基成分及激素种类、配比等不同而有明显差异 ,2 4_D是诱导愈伤组织必不可少的。

饲粮脂肪源对育成期水貂生长性能和营养物质消化代谢的影响

本试验旨在研究饲粮脂肪源对育成期水貂生长性能和营养物质消化代谢的影响。试验选取120只70日龄、体重[公貂(1.08±0.08)kg、母貂(0.77±0.04)kg]相近、健康的水貂随机分成4组,每组30只(公母各占1/2),分别饲喂以豆油(Ⅰ组)、鸡油(Ⅱ组)、鱼油(Ⅲ组)、猪油(Ⅳ组)为脂肪源,代谢能为15.5 MJ/kg(粗脂肪含量为22%)的试验饲粮,试验期60 d。结果表明:1)饲粮脂肪源对试验结束时水貂的体重无显著影响(P>0.05)。2)公貂Ⅳ组粗蛋白质消化率显著高于Ⅰ组(P<0.05);母貂Ⅱ组粗蛋白质消化率显著高于Ⅰ组(P<0.05)。3)公貂Ⅰ组、Ⅲ组粗脂肪消化率显著高于Ⅳ组(P<0.05);母貂Ⅳ组粗脂肪消化率显著低于其他各组(P<0.05)。4)公貂Ⅰ组氮沉积显著低于Ⅳ组(P<0.05);母貂Ⅰ组氮沉积显著低于其他各组(P<0.05);母貂净蛋白质利用率、蛋白质生物学价值组间差异显著(P<0.05),公貂组间没有显著差异(P>0.05),但公貂、母貂均以Ⅳ组最高。5)公貂Ⅳ组总能、消化能、代谢能均显著高于Ⅰ组和Ⅲ组(P<0.05);母貂Ⅰ组总能、消化能、代谢能均显著低于其他3组(P<0.05)。由以上可以得出,以鱼油为饲粮脂肪源,育成期公貂具有较高的脂肪消化率;以鸡油为饲粮脂肪源,母貂的营养物质消化率较高;育成期水貂鱼油脂肪消化率虽较高,但猪油可以提高净蛋白质利用率及氮沉积;综合考虑饲料成本和营养物质消化与利用,建议在实际生产中应用鱼油和猪油的混合油脂作为育成期水貂饲粮的脂肪源。

导入外源DNA大豆后代的抗虫性鉴定与筛选

大豆食心虫 (Leguwinivoraglycinivorella )和大豆蚜虫 (Aphidglycines)是东北大豆生产的主要虫害。为拓宽资源的利用 ,创造抗虫大豆种质 ,用花粉管通道技术向大豆品种吉 2 0、吉 2 5、吉 2 7、吉 30等导入皂角 (Gleditisiajaponica )、鹰嘴豆 (Cicerarietinum )和农家早期品种DNA ,对从后代中选出的变异系进行了多年抗虫性鉴定和筛选 ,得到了抗虫品系 4个。本文报告了抗虫鉴定筛选结果。

多壁碳纳米管QuEChERS/气相色谱-质谱联用法快速检测黄芪中16种农药

建立了QuEChERS/气相色谱-质谱联用法(GC-MS)同时测定黄芪中α-六六六、β+γ-六六六、δ-六六六、五氯硝基苯、p,p′-滴滴伊、o,p′-滴滴涕、p,p′-滴滴滴、p,p′-滴滴涕、甲霜灵、二嗪磷、七氯、嘧菌环胺、腐霉利、顺式氯丹、反式氯丹、咯菌腈16种农药残留的分析方法。样品前处理采用改进的QuEChERS方法,黄芪粉加水浸润后,乙腈涡旋振荡提取,多壁碳纳米管(MWCNTs)、正丙基乙二胺(PSA)、MgSO4净化,结合GC-MS检测系统,电子轰击源(EI),HP-5ms毛细管柱分离,程序升温,离子扫描模式(SIM)检测。在优化条件下,16种农药在0.01~5.0 mg/L质量浓度范围内线性关系良好,相关系数不低于0.974,方法的定量下限(S/N=10)为0.002~0.035 mg/kg,平均回收率为71.9%~115%,相对标准偏差(RSD)为1.2%~14%。该方法具有操作简单快捷、灵敏度高等优点。

齐墩果酸型皂苷药理活性研究

齐墩果酸型皂苷是以齐墩果酸为苷元的五环三萜类皂苷,广泛存在于自然界中,天然的齐墩果酸型皂苷从结构上分为三个系列:3-单糖链齐墩果酸型皂苷,28-单糖链齐墩果酸型皂苷,3,28-双糖链齐墩果酸型皂苷。齐墩果酸型皂苷糖链结构和连接位置的不同与其药理活性有着密切联系,齐墩果酸型皂苷具有多种显著的药理活性,如在抗肿瘤、降血糖、保肝活性等方面比游离的苷元齐墩果酸更为明显。因此综述近年来国内外对齐墩果酸型皂苷药理活性的研究进展,并对其中可能的作用机制进行了阐述。

卡那霉素对大豆生长的抑制及筛选试验研究

用 3个大豆品种作为研究材料 ,研究了卡那霉素对种子萌发、子叶节培养、茎尖和组培苗生根的抑制效应。结果表明不同的外植体对卡那霉素的反应存在较大的差异 ,用卡那霉素浸泡种子 ,浓度最好是 10 0 0ppm ,而种子在含卡那霉素培养基上萌发 ,一般为 10 0 - 2 0 0ppm效果较好 ,子叶节在生长培养时卡那霉素可采用 5 0 - 10 0ppm。而茎尖、子叶节组培苗 ,一旦放入含有卡那霉素培养基内 ,不论浓度多少 ,无一生根。不同的基因型亦稍有差异。所以在筛选转化子之前一定要进行临界浓度的筛选试验。

大豆花粉管通道技术转化雪花莲凝集素(GNA)基因

采用花粉管通道技术,用雪花莲凝集素基因(Galanthusnivalisagglutinin,GNA)转化吉林省主推品种吉林20号、吉林30号、吉林45号品种大豆。通过接蚜鉴定和PCR鉴定,从所获得的种子苗中筛选出转基因植株。对转基因植株的后代进行分子生物学鉴定:(1)PCR分析,转基因植株97TGR1和97TGR2的T2代表现阳性,第5代表现阳性纯合;97TGR1、97TGR2和98FD1￣98FD20的T3代Westernblotting检测结果证明,GNA基因在蛋白质水平有表达,最高表达量占总可溶性蛋白的0.7%;97TGR1、98TGR2和99JI45TGR2的Southernblotting检测结果显示,GNA基因已插入大豆基因组;(2)遗传学分析,97TRG1的T2代呈孟德尔3:1分离,97TGR2的T3代出现种皮颜色不规则分离。经过抗蚜性鉴定和连续的筛选,获得抗性纯系;(3)抗蚜性鉴定,转基因株的T1、T2世代转基因植株可抑制蚜虫繁殖量50%￣90%;(4)品系鉴定,转基因大豆的抗蚜性达到农学标准抗(R)和高抗(HR)水平;大面积环境释放试验自然感蚜鉴定,转基因系蚜虫发生的高峰比对照延迟,高峰期过后群体蚜量的下降速度也比对照快。本研究认为,大豆花粉管通道技术可以利用于大豆的转基因研究和应用中,GNA基因在改良大豆的抗蚜性上是可取的。

炮制对北五味子木脂素类成分的影响

目的:研究炮制对北五味子木脂素类成分的影响。方法:采用高效液相色谱法,比较不同炮制方法对北五味子果和北五味子种子中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素含量和溶出率的影响。结果:北五味子经过不同方法炮制后,并没有新成分的生成,只是蜜炙和酒炙五味子的木脂素类成分含量和溶出率有不同程度的提高。醋五味子只有五味子乙素含量增加,其余木脂素含量均减少。结论:蜜炙和酒炙五味子能增加滋补作用。

响应面试验优化超临界CO_2萃取人参挥发油的工艺

以生晒参为原料,响应面分析法优化超临界CO_2提取挥发油的工艺。采用自动质谱退卷积定性系统和保留指数方法对挥发油化学成分定性。结果表明:最佳工艺条件为萃取压力38 MPa、萃取温度55℃、静态萃取时间2h、动态萃取时间1h,此条件下挥发油提取率达1.12%。气相色谱-质谱法结果显示分离出35个色谱峰,鉴定出29种化学成分,相对含量占挥发性物质的96.69%。

不同生长模式下人参土壤养分状况与人参皂苷含量的关系

为了评价3种生长模式人参土壤养分供应能力及影响人参皂苷积累的主要养分因子,运用常规农化分析方法和超声提取-高效液相法分别测定土壤养分含量和人参中9种单体皂苷含量。结果表明,人参土壤有机质和速效氮磷钾含量为野山参>林下参>园参,土壤有机质含量变异系数为85.6%,属中等变异,土壤全量氮、磷、钾变异系数大于100%,为强变异,结合国家第2次土壤普查养分分级标准可知,人参土壤碱解氮含量为国家5级水平,速效磷为国家2级水平,有效钾含量为641.4 mg/kg,远大于国家1级水平(200mg/kg);野山参和林下参中9种单体皂苷中以单体皂苷Rb1、Rc、Rb2、Rd和Rg1含量较高,5种单体皂苷显著高于园参(P<0.05),林下参中单体皂苷含量以15a生含量最高,其中Rb1、Rc、Rb2、Rd和Rg1分别为20.207、22.865、12.435、17.201和7.770mg/g,为制定林下参适宜采收参龄提供参考;土壤中有机质、全氮和全磷含量直接影响人参皂苷的积累。不同生长模式下人参土壤养分含量差异较大,以野山参和林下参土壤为参考,科学施加氮、磷肥有助于提高园参品质。

用基因枪将GUS基因导入玉米自交系的瞬时表达

用基因枪法将带有GUS报告基因的PDM803转化接种3～5d的东北常用自交系幼胚和已稳定的胚性愈伤组织。经过3～5d恢复培养将转化的受体材料浸于GUS检测液中,结果均检测到蓝色斑点。同时研究了几个影响基因枪转化GUS基因的瞬时表达因素。在其它参数不变的情况下,受体材料预处理的与否、基因枪的射程和氦气压力等都能影响基因枪转化GUS的瞬时表达量。

鲜人参·红参·蒸参水醚溶性成分的GC-MS分析

[目的]对鲜人参、红参和蒸参水中醚溶性成分进行分析,以期为人参及其副产物产品的开发利用提供参考。[方法]采用GC-MS分离测定样品成分。[结果]从鲜人参中分离了94个化合物,鉴定了31个化合物;从红参中分离出95个化合物,鉴定了33个化合物;从蒸参水中分离了24个化合物,鉴定了10个化合物;从鲜人参和红参中鉴定了15种相同的化合物;首次从鲜人参和红参中分离鉴定了具有抗癌活性的镰叶芹醇和具有免疫活性的角鲨烯。[结论]该试验对鲜人参、红参和蒸参水中醚溶性成分进行了比较分析,为人参及其副产物产品的开发利用提供了参考。

不同产地人参种质资源RAPD和SSR分析

以15个产地人参种质资源为试材,采用RAPD和SSR分子标记技术对其遗传多样性进行分析。结果表明：2种分子标记均能揭示不同地区人参种质间的遗传多样性。共筛选出11条RAPD随机引物,平均每条引物可扩增出3~17条DNA片段,共扩增出104条清晰条带,多态性条带100条,多态性百分率为96.15%,揭示供试材料间遗传相似系数（GS）为0.505 3~0.989 5,平均值为0.760 4。筛选出5对SSR引物,平均每对引物可扩增出1~8条DNA片段,共扩增出38条清晰条带,多态性条带35条,多态性百分率为92.11%,揭示供试材料间遗传相似系数（GS）为0.400 0~0.960 0,平均值为0.742 1。RAPD和SSR标记的聚类分析在分类上稍有差异,但总体趋势一致,RAPD、SSR及RAPD＋SSR均将样品聚为三大类,均能揭示它们之间的亲缘关系,为人参种质资源的收集与利用奠定了基础。

人参、西洋参不同部位中齐墩果酸型皂苷含量的对比分析

通过对比分析人参和西洋参根、茎、叶中齐墩果酸型皂苷种类及人参皂苷Ro含量的差异,观察齐墩果酸型皂苷的分布特征。采用高效液相色谱质谱联用技术对齐墩果酸型皂苷进行鉴定及Ro含量测定。色谱柱:Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈、2.5mmol/L乙酸铵(w/v)及0.05‰氨水(v/v)水溶液;梯度洗脱;流速:1m L/min;检测波长:203nm。共鉴定了6种齐墩果酸型皂苷,分别为人参皂苷Ro(1)、竹节参皂苷Iva(2)、姜状三七皂苷R1(3)、Stipulenaoside R2(4)、Armatoside(5)和Elatoside K(6)。人参根、茎和叶中均含有化合物1、2和3;西洋参茎中含有化合物1、3和4,叶中含有化合物1和4,根中含有上述6种化合物。对含量较高的人参皂苷Ro进行分析发现,根部为人参皂苷Ro的主要积累部位,且西洋参根部含量(0.576%)高于人参根部(0.214%);两者不同部位人参皂苷Ro含量差异较一致,皆为根>茎>叶。人参和西洋参不同部位齐墩果酸型皂苷的种类存在差异,人参皂苷Ro在二者不同部位的分布特征较为相似,根部为齐墩果酸型皂苷的主要积累部位。

利用HPLC/MS对野山参和林下参皂苷的分析

为了明确野山参和林下参中人参皂苷的组成特征及差异所在,利用高效液相色谱-质谱联用仪对野山参和林下参中皂苷进行分析测定。结果表明:野山参和林下参中均含有常见的9种人参皂苷(Re、Rg1、Ro、Rf、Rg2、Rb1、Rc、Rb2、Rd),野山参中还检测到三七皂苷R1、R2和R3以及丙二酰基人参皂苷Rb1和Rc,林下参仅检测到了丙二酰基人参皂苷Rb1、Rc和Rd,没有检测到三七皂苷R1和R3;林下参中Re含量显著高于野山参,平均含量为5.042g/mg,二者达到极显著差异(P<0.01),野山参和林下参中其它8种人参皂苷含量差别不大。

炮制对五味子挥发油成分的影响

利用气相色谱-质谱联用技术对五味子不同炮制品的挥发油进行分析,研究炮制对五味子挥发油成分和含量的影响。五味子生品、醋五味子、酒五味子和蜜炒五味子的挥发油得率分别是1.66%、1.50%、1.40%和1.34%;从各挥发油中分别检出46种、49种、48种和50种成分;对其中34种成分进行了鉴定。本研究为五味子炮制的质量控制提供了科学依据。

人参中人参总皂苷测定方法研究

建立了一种人参中人参总皂苷的测定方法。采用氨水将丙二酰基人参皂苷转化为相应的中性皂苷,超高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1、Re、Rf、Ro、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd的量,9种人参皂苷总量可代表人参中主要皂苷含量。生晒参片中人参总皂苷含量较低,生晒参须中人参总皂苷含量较高,光支生晒参和全须生晒参总人参皂苷含量在2.11%～6.01%之间。该方法准确,重复性好,完善了人参质量评价体系。