稀有鮈鲫MHCⅡβ基因克隆及鲁氏耶尔森菌感染后的表达分析

为探究稀有鮈鲫MHCⅡβ基因的分子特征及其表达特点,采用PCR扩增技术获得了稀有鮈鲫MHCⅡβcDNA序列810 bp,包括开放阅读框(ORF)759 bp,编码252个氨基酸。生物信息分析表明,MHCⅡβ氨基酸序列存在4个保守的半胱氨酸残基和GXXGXXXGXXXXXXG结构,与其他亲缘鱼类的一致性为51.78%~80.56%,其编码的蛋白质分子包括1个信号肽、1个MHCⅡβ(β-1)结构域、1个IGc1(β-2)结构域和1个跨膜螺旋区域。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,MHCⅡβ在脾脏表达量最高,头肾、鳃、皮肤表达量较高。人工感染鲁氏耶尔森菌后,6 h时在头肾表达呈显著上调,肝脏中在12 h开始出现极显著上调,皮肤中在24 h和48 h表达极显著,鳃中在6~24 h表达极显著,脾脏中则是在6 h出现极显著下调,于96 h接近对照组表达水平。初步研究表明,MHCⅡβ在鱼类抵御细菌感染的免疫反应中发挥着重要作用,为进一步揭示稀有鮈鲫MHC家族的功能提供了参考依据。

凝结芽孢杆菌对南美白对虾生长性能、体组成和免疫功能的影响

试验旨在研究添加凝结芽孢杆菌对南美白对虾生长性能、体组成、免疫功能的影响。选择规格一致、体重(1.05±0.05)g的对虾480尾,随机分为4组,每组4个重复,每个重复30尾。各组对虾分别投喂添加0、0.02%、0.04%、0.08%凝结芽孢杆菌的基础饲料。试验期42 d。结果显示,0.04%试验组对虾末重、增重率显著高于对照组(P<0.05),各试验组对虾的饲料系数均显著低于对照组(P<0.05),各试验组对虾的肝胰脏溶菌酶(LZM)活性均显著高于对照组(P<0.05),试验0.04%组和0.08%组对虾血清碱性磷酸酶(ALP)活性显著高于对照组和0.02%组(P<0.05)。研究表明,添加凝结芽孢杆菌可促进南美白对虾生长,提高免疫能力,以0.04%添加量较好。

RP-HPLC法测定中华绒螯蟹主要组织中的恩诺沙星及其代谢产物

建立了反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定中华绒螯蟹肌肉、肝胰腺、精巢和卵巢组织内的恩诺沙星、环丙沙星含量。结果表明,恩诺沙星和环丙沙星在四种组织中的平均回收率分别为70.5%±12.61%,70.25%±14.73%;日内精密度分别为3.27%±0.84%,2.14%±0.68%;日间精密度分别为5.38%±2.46%,3.48%±1.16%。恩诺沙星、环丙沙星的最低检测限分别为0.02μg/g和0.004μg/g。以10 mg/kg蟹体重剂量单次肌肉注射给药后,恩诺沙星在中华绒螯蟹肌肉、肝胰腺、精巢和卵巢内的Tmax,Cmax分别为:1 h,4.323±0.56μg/g;1 h,6.042±0.72μg/g;3 h,2.381±0.43μg/g;3 h,2.101±0.29μg/g,各组织的药物消除半衰期(t1/2β)分别为:45.186 h,73.93 h,45.577 h,38.081 h。各组织中均能检测到环丙沙星,但含量均处较低水平,且代谢和消除起伏波动较大。本方法快速、灵敏、准确,适合于中华绒螯蟹组织中恩诺沙星、环丙沙星含量分析。

恩诺沙星及其代谢产物在中华绒螯蟹血淋巴中的比较药代动力学

研究了不同水温(16℃、25℃)、不同给药剂量(10 mg/kg、20 mg/kg)和不同给药方式(肌注、口灌)等条件下,恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在中华绒螯蟹体内的药代动力学,比较了不同条件下药物在蟹血淋巴中的吸收、分布和代谢的差异。结果表明,恩诺沙星在蟹血淋巴中的药-时数据符合开放式二室模型。16℃时以10 mg/kg剂量肌注给药后,恩诺沙星在蟹血淋巴的主要药代动力学参数为:AUC96.818 mg/(L.h),Cmax6.54μg/mL,t1/2α0.851 h,t1/2β95.415 h;25℃时以10 mg/kg剂量肌注给药后,恩诺沙星的主要药代动力学参数为:AUC168.457 mg/(L.h),Cmax7.12μg/mL,t1/2α0.58h,t1/2β88.833 h;25℃时以20 mg/kg剂量肌注给药后,恩诺沙星的主要药代动力学参数为:AUC155.612 mg/(L.h),Cmax11.045μg/mL,t1/2α5.239h,t1/2β88.378 h;25℃时以10 mg/kg剂量口灌给药后,恩诺沙星的主要药代动力学参数为:AUC86.525 mg/(L.h),Cmax3.469μg/mL,t1/2α8.071h,t1/2β61.842 h。不同条件下,恩诺沙星在蟹血淋巴中的主要药代动力学参数差异较大。恩诺沙星的活性代谢产物环丙沙星在各种给药条件下的蟹血淋巴中均能检出,但含量均处于较低值,且药-时数据不能用房室模型拟合,表明恩诺沙星在蟹体内只有极少部分代谢为环丙沙星。

饲料中胆汁酸添加水平对齐口裂腹鱼幼鱼生长性能、形体指标及体成分的影响

本试验旨在探索饲料中胆汁酸添加水平对齐口裂腹鱼幼鱼生长性能、形体指标及体成分的影响。以360尾健康、平均体重为（12.74±0.14）g的齐口裂腹鱼幼鱼为试验对象,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30尾。4组试验鱼分别投喂添加0（对照组）、75、150、300 mg/kg胆汁酸的试验饲料,养殖时间为70 d。结果表明：随着胆汁酸添加水平的增加,齐口裂腹鱼幼鱼的增重率（WGR）、特定生长率（SGR）、饲料蛋白质效率（PER）均呈先升高后趋于稳定的变化趋势,饲料系数（FCR）则呈先降低后趋于稳定的变化趋势。各胆汁酸添加组的WGR、SGR、PER均显著高于对照组（P〈0.05）,而FCR则显著低于对照组（P〈0.05）。当胆汁酸添加水平为150 mg/kg时,WGR、SGR均达到最大值,分别为226.63%和1.69%/d;当胆汁酸添加水平为300 mg/kg时,PER达到最大值,为1.64%;FCR则在胆汁酸添加水平为75 mg/kg时有最小值,为1.56。通过二次回归分析可知,WGR、SGR、PER和FCR最佳时的胆汁酸添加水平分别为186.83、192.86、166.67和183.33 mg/kg。随着胆汁酸添加水平的增加,齐口裂腹鱼幼鱼的肥满度（CF）呈先升高后趋于稳定的变化趋势,脏体比（VSI）、肝体比（HSI）则呈先降低后趋于稳定的变化趋势。各胆汁酸添加组的CF显著高于对照组（P〈0.05）,而VSI、HSI则显著低于对照组（P〈0.05）。随着胆汁酸添加水平的增加,齐口裂腹鱼全鱼及肌肉粗蛋白质含量呈先升高后趋于稳定的变化趋势,全鱼、肌肉及肝胰脏中粗脂肪含量则呈先降低后趋于稳定的变化趋势,但全鱼及肌肉中水分、粗灰分含量则无显著变化（P〉0.05）。由此得出,饲料中添加胆汁酸能有效地提高齐口裂腹鱼幼鱼的饲料利用率,促进其生长,改善其形体指标,减少其肌肉及肝脏中脂肪的沉积。综合考虑,齐口裂腹鱼饲料中胆汁酸适宜的添加水平为166.67~192.86mg/kg。

中华绒螯蟹血淋巴内磺胺甲基异噁唑的测定及药代动力学研究

以反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定中华绒螯蟹血淋巴内磺胺甲基异唑含量。血淋巴从心区抽取,经甲醇去蛋白,3000r/min离心10min,取上清液进行HPLC检测。平均回收率,平均日间、日内精密度分别为97.5%、1.20%和2.1%。本方法测定磺胺甲基异唑的最低检测限为0.02μg/mL。研究了中华绒螯蟹单次口灌磺胺甲基异唑(100mg/kg蟹体重)后的药代动力学。中华绒螯蟹血淋巴中药-时曲线可用开放式二室模型拟合,其主要药动学参数中分布半衰期(t1/2α)、消除半衰期(t1/2β)分别为20.190h和79.586h;曲线下面积(AUC)、总体清除率(CLs)和表观分布容积(Vd)分别为431.268mg·h/L、0.277L/(kg·h)和26.082L/kg。本法适合于中华绒螯蟹血淋巴中磺胺甲基异唑含量分析。

复方新诺明在罗氏沼虾中的药代动力学和组织分布

研究了单剂量肌肉注射给药[甲氧苄氨嘧啶(SMZ)0 60 mg/kg]、口灌给药[磺胺甲基异噁唑(SMZ)100 mg/kg]和复方口灌给药(SMZ 100 mg/kg和TMP 20 mg/kg)三种给药方式下,SMZ和TMP在罗氏沼虾中的代谢动力学,分析了SMZ和TMP血淋巴、肌肉和肝胰腺中的分布特征。结果表明,SMZ以肌肉注射方式给药后的血淋巴中,药物经时浓度曲线符合二室开放房室模型,而SMZ&TMP口灌给药后却不能用房室模型拟合。肌注给药后,SMZ的消除半衰期(t1/2β)为24.92 h,单方和复方口灌给药后SMZ的消除半衰期(t1/2β)分别为40.70和47.197 h。复方口灌给药后TMP的消除半衰期(t1/2β)为28.77 h,TMP对SMZ的药代动力学并无显著影响。口灌给药后,SMZ和TMP在肝胰腺中的药物浓度高于同时间肌肉中的药物浓度,但肌肉和肝胰腺中的SMZ消除速度基本一致。

碳源对反硝化聚磷菌(RC11)磷酸盐代谢的影响

反硝化聚磷微菌由于具有同时脱氮和除磷的特点,能够最大程度的减少碳源需求,为解决生物脱氮除磷工艺的碳源竞争矛盾提供了新的思路和方法。以纯培养方式探讨了外源性碳源、硝酸盐对反硝化聚磷菌(RC11)磷酸盐代谢活动的影响。结果表明,好氧培养时,菌株RC11在外源碳源存在时发生了超量吸磷现象;缺氧培养时,菌株RC11可以利用硝酸盐而非亚硝酸盐作为电子受体进行反硝化聚磷。无外加碳源时,菌株RC11经历厌氧阶段后初期可以利用硝酸盐氧化到亚硝酸盐的过程中产生的能量进行摄磷;但当亚硝酸盐的积累达到高峰时,进入以亚硝酸盐为电子受体的反硝化阶段,由于亚硝酸盐氮不能作为氧分子的替代物进行反硝化除磷,菌株RC11实际上处于一个厌氧环境,会引发释磷;在厌氧条件下菌株RC11具有利用硝酸盐作为电子受体进行反硝化除磷的功能。

不同缓释处理氨基酸在草鱼鱼种饲料中的利用效率研究

研究在草鱼鱼种饲料中添加微囊或晶体赖氨酸,对其生长和血浆游离赖氨酸浓度的影响.结果表明:添加晶体赖氨酸的0.3%组、0.6%组与对照组相比,增重率均提高但差异不显著;特定生长率均提高,但0.3%组不显著,0.6%组显著;饵料系数均降低显著.添加微囊赖氨酸的0.15%组、0.30%组与对照组相比,增重率、特定生长率均提高显著,饵料系数却降低显著.停饲0.5～7.0 h后,添加微囊赖氨酸其达峰时间与血浆中其余游离氨基酸一致,而补充晶体赖氨酸后0.5 h血浆中赖氨酸即达峰浓度,与其余各游离氨基酸达峰时间有较大差异.补充单体氨基酸后,可一定程度降低肌肉水分含量,提高蛋白质等营养物质含量.草鱼鱼种血浆中AST和ALT活性各组间差异不显著.

电镀方法制备锡铅焊料凸点

介绍了利用甲磺酸锡铅合金镀液制备电镀凸点的工艺过程 ,讨论了影响电镀质量的工艺参数 :表面光亮度、分散及覆盖能力、沉积速率等 .研究发现 ,电流密度Dk 与最低搅拌转速密切相关 .在相同的时间里 ,Dk越大 ,镀液的分散能力越稳定 ,合金的沉积速率也越高 .在甲磺酸质量分数、Dk 一定的条件下 ,适当地提高搅拌转速有利于改善凸点的电镀质量 .对电镀凸点的剪切强度测试表明 。

嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因的原核表达及免疫保护性研究

为评价嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)PDK06株外膜蛋白A(omp A)的原核表达产物是否具有抗原性及其对斑点叉尾(Ictalurus punctatus)的免疫保护力,根据Gen Bank上嗜水气单胞菌外膜蛋白omp A基因序列(Gen Bank登录号:AF146597)设计去信号肽引物,扩增获得一段约1 000 bp的序列,经鉴定正确后,构建重组表达质粒p ET-32a(+)-pomp A;然后将该质粒转入BL21(DE3)后用IPTG诱导表达,经纯化后得到pomp A重组蛋白;最后将pomp Aomp A蛋白与弗氏不完全佐剂(FIA)混合免疫斑点叉尾,评价其免疫效果。结果显示:克隆的嗜水气单胞菌pomp A基因全长为960 bp,编码319个氨基酸,融合表达的重组蛋白相对分子质量约为53,670 k Da;FIA能够提高斑点叉尾的溶菌酶活性、ACH50活性、头肾巨噬细胞呼吸暴发活性;pomp A组抗体水平在第4周达到峰值,FIA免疫组抗体水平在第5周达到峰值,且FIA能够显著提高斑点叉尾的抗体水平;攻毒后各组累计死亡率分别为93.33%(PBS)、93.33%(FIA)、50.00%(pomp A)和13.33%(FIA+pomp A),pomp A和FIA+pomp A组相对保护率分别为46.43%和85.71%;免疫组靶器官中的细菌数量显著低于对照组,且FIA+pomp A细菌含量最低。说明pomp A可以作为一个亚单位疫苗候选疫苗,而FIA佐剂能较好的增强亚单位疫苗的免疫效果。

一株反硝化聚磷细菌的分离及鉴定

通过建立的一种简单的反硝化聚磷菌筛选方法,获得一株源自池塘底泥的反硝化聚磷菌RC11,利用细菌自动分析鉴定仪等方法对其进行种属鉴定,确定其分类地位。试验结果表明,菌株RC11具有合成聚β-羟基丁酸和多聚磷酸盐的能力,硝酸盐还原阳性;在好氧情况下,可以直接利用培养基中的有机物(如乙酸、蛋白胨)氧化产能,吸收培养基中的磷酸盐合成多聚磷酸盐;能够利用硝酸盐进行反硝化聚磷,但在高浓度亚硝酸盐存在时,则表现为释磷;硝酸盐和乙酸钠同时存在于培养基中时,也出现缓慢的吸磷现象。经鉴定,菌株RC11属假单胞菌属细菌。

乳化剂对吉富罗非鱼生长和肝肠脂肪酶活性的影响

近年来。鱼粉价格呈现快速上涨的趋势，为了控制饲料成本，饲料生产者尝试了各种方式，以期降低日粮中鱼粉的添加量。其中，增加油脂用量，节约蛋白质用于提供能量的部分损耗是有效途径之一，鱼类脂肪消化吸收的主要部位在肠道前部（胆管开口附近），但肠内的脂肪酶大多数并非由肠粘膜本身分泌，而是来自肝胰脏（胆管、胰管导入）。脂肪在脂肪酶的作用下分解为甘油和脂肪酸而被吸收。

河蚌对草鱼混养精养池塘中浮游植物群落结构的影响

试验池塘4口,每口面积0.8hm2,水深1.8m,放养体质量50g的草鱼12000尾,体质量24~100g的鲢鱼500尾,体质量150g的鳙鱼100尾,常规管理,其中2口池塘放养1龄河蚌两万只,2口对照塘不放河蚌,定期采集水样,测定水中浮游植物种类和数(生物)量。结果表明,鱼蚌混养塘中有浮游植物6门48属94种,而对照塘中仅有6门42属91种。混养塘与对照塘水体中均以绿藻门的种类为主,分别占总数的47.8%和41.8%。鱼蚌混养组中以绿藻为优势种群,出现频率较高的优势藻类为:硅藻门的小环藻、针杆藻,绿藻门的小球藻、栅藻、新月藻;而对照组中的优势种不仅有试验组中的优势种类,还包含了蓝藻门的平裂藻、螺旋藻、微囊藻以及硅藻门的直链藻、舟形藻、双壁藻,绿藻门的梭形藻等。鱼蚌混养组与对照组中浮游植物多样性指数分别为1.24~1.41和1.26~1.36,鱼蚌混养组中浮游植物多样性指数均略高于对照组。鱼蚌混养组浮游植物密度为539.23×104个/L^1289.53×104个/L,生物量为6.68~12.47mg/L;对照组浮游植物密度为669.57~1608.50×104个/L,生物量为8.40~18.62mg/L,鱼蚌混养组浮游植物的密度和生物量略低于对照塘,且差异显著(P<0.05)。结果表明,鱼蚌混养模式可有效控制塘中浮游植物的繁殖与生长,浮游植物的多样性指数提高,池塘生态系统更加稳定。

饲料中添加牛至精油对红罗非鱼货架期的影响

研究牛至精油对红罗非鱼品质和货架期的影响。以空白添加组为对照,分别在对照组饲料中添加250、500、1 000、2 000 mg/kg牛至精油,经过20周养殖实验,红罗非鱼在4℃条件下冷藏0、7、14、21 d,在每个冷藏时间点检测红罗非鱼物理化学特性、微生物定性定量分析和感官分析评估,以判定其腐败程度。结果表明,牛至精油添加对红罗非鱼体色、硫代巴比妥酸反应值和总挥发性盐基氮含量有显著的影响。1 000、2 000 mg/kg牛至精油可有效降低冷藏鱼片的肠杆菌和大肠菌群数量。感官分析表明,红罗非鱼体的质量指数与牛至精油的添加量没有显著相关,对照组的货架期为16 d,牛至精油组的货架期为18 d,但与添加量无显著相关。

水飞蓟素对黄曲霉毒素B_1致毒的红姑鱼幼鱼生长和毒素积累的影响

本文研究了水飞蓟素（Silymarm,SM）对黄曲霉毒素B_1（AFB_1）致毒的红姑鱼幼鱼（6.5±0.5）g生长性能、血清和肝脏生化指标及AFB_1在肝脏和肌肉中残留的影响。试验共分为7组,对照组（A0组）饲喂基础饲粮,A100和A500组在基础饲料中分别添加100、500μg/kg AFB_1,A100-S1、A100-S2、A500-S1、A500-S2组分别在A100和A500组饲料中分别补充0.25、0.5 g/kg SM。试验进行12周。结果表明：AFB_1造成红姑鱼成活率显著下降,而补充SM后成活率显著提高（P〈0.05）;各组红姑鱼形体指标及体组成无显著差异（P〈0.05）;AFB_1导致血清SOD、GPT和GOT活性显著提高（P〈0.05）,而肝脏T-AOC和SOD活性有明显提高,但仍显著低于A0组（P〈0.05）。结论,红姑鱼幼鱼摄食含AFB_1（100~500μg/kg）的饲料后,对其生长性能造成显著抑制,并引起肝脏抗氧化能力显著下降,引发肝损伤;补充SM使红姑鱼生长性能明显恢复,并可降低AFB_1在肝组织的残留。SM对红姑鱼幼鱼抗AFB_1的负面影响具有一定的缓解作用。

鱼类学教学改革与探索

针对鱼类学的课程教学现状,提出了相关的教学改革措施,强调改进教学模式,增强学习效能;改变实验依附理论的现状。同时分析了增强师资队伍力量和完善学生考核方式的重要意义,旨在提高学生的学习能力和课程教学质量。

二氧化氯对草鱼池塘环境异养菌数量及区系组成的影响

研究了在池塘中泼洒/挂袋消毒剂二氧化氯(ClO2,有效氯含量8%)对草鱼(Ctenopharynodon idellus)养殖池塘内水体、底泥中异养细菌总活菌数变化影响。试验分4组,1#为3 750g/hm2全池泼洒,2#为3 750g/hm2挂袋,3#为7 500g/hm2泼洒,4#为7 500g/hm2挂袋。结果表明,3#的水体溶氧显著高于其余各组(P<0.05)。在养殖水体和底泥中,2#异养菌数量最多。此外,1#、3#和4#中气单胞菌数量也低于2#,但彼此间差异不显著(P>0.05)。池塘水体中的细菌主要由假单胞菌属、气单胞菌属、黄单胞菌属、黄杆菌属、产碱杆菌属、肠杆菌属和变形菌属等组成。其中假单胞菌、气单胞菌是主要的优势菌。底泥中异养菌主要由芽胞杆菌属、黄杆菌属、假单胞菌属、变形杆菌属、色杆菌属和肠杆菌属组成,其中芽胞杆菌、肠杆菌和假单胞菌等属优势菌。水体中细菌和底泥中异养菌的多样性指数在2#最高(P<0.05)。本试验结果说明7 500g/hm2全池泼洒ClO2,可显著增加水体溶氧;3 750g/hm2全池泼洒ClO2,可降低水体和底泥中有害菌数量。

不同缓释处理氨基酸在异育银鲫饲料中的利用效率研究

鱼类对蛋白质的需求，实质上是对必需氨基酸和非必需氨基酸的需求。当鱼类摄取的饲料中各种氨基酸的组成比例和含量比较合理，其吸收到体内的各种氨基酸就能更有效地被合成新的蛋白质。在通常情况下，饲料的配方成本决定了主要蛋白源的结构组成，往往会导致必需氨基酸组成与鱼类的营养需求相差较大。因此，研究者们试图通过补充外源性氨基酸的方式，使饲料中的必需氨基酸组成更趋于满足鱼类的需求。