脂肪组织干细胞分化为神经元样细胞研究

目的 :探索脂肪组织提取物 (PLA)细胞分化为神经元样细胞的可能性 ,为PLA细胞分化潜能的研究及其在神经科学领域的应用提供依据。方法 :以大鼠的PLA细胞为实验对象 ,利用 β 巯基乙醇 (β BME)、丁酸酯羟基茴香醚 (BHA)等作为分化诱导因子 ,对各阶段细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果 :诱导培养 2h后 ,大多数存活的细胞转变为类似于神经元的形态 ,分化培养基诱导 5h后 ,从简单的双极细胞到复杂的多极细胞均有出现 ,并可见部分神经元样细胞拉成网状 ,大多数存活细胞表现为NSE染色阳性。结论 :PLA细胞在体外培养条件下 ,可以向神经元样细胞分化。提示PLA细胞可能作为一种新的成体多能干细胞在神经科学领域加以利用。

微量去甲肾上腺素预处理对大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用

目的：观察比较去甲肾上腺素预处理与经典缺血预处理对大鼠缺血／ 再灌注心脏的保护作用。方法：将实验动物分为对照组、缺血／ 再灌注组、经典缺血预处理和去甲肾上腺素预处理４ 组，在相应时点分别测定心肌梗塞面积、心功能，观察心肌超微结构、线粒体内膜标志酶损伤性反应及热休克蛋白７０－ ｍ ＲＮＡ 表达的变化。结果：与经典缺血预处理相似，去甲肾上腺素预处理也能减少心肌梗塞面积、改善左心功能、保护心肌超微结构、增强热休克蛋白７０－ｍ ＲＮＡ。结论：去甲肾上腺素预处理与经典缺血预处理对大鼠缺血／ 再灌注心脏有相似的保护作用。鉴于前者方法简便且无明显创伤性。

去甲肾上腺素预处理对缺血/再灌注大鼠心脏超微结构、心功能的保护作用

目的 观察比较外源性微量去甲肾上腺素预处理及经典缺血预处理对在体大鼠缺血 /再灌注心脏损伤的保护效应。方法 将实验动物分为假手术组、缺血 /再灌注组、经典缺血预处理和去甲肾上腺素预处理等 4组。再灌结束后 ,分别测定心功能、心肌丙二醛含量 ,观察心肌超微结构、过氧化氢酶损伤性反应。结果 经典缺血预处理和去甲肾上腺素预处理均能改善心功能、保护心肌超微结构、保护心肌过氧化氢酶活性。结论 外源性去甲肾上腺素预处理是一种无明显创伤性的对缺血 /再灌注大鼠心脏具保护作用的预处理方法 ,能模拟经典缺血预处理心脏保护效应。

血管紧张素Ⅱ2型受体对大鼠血管平滑肌增殖的影响及其机制

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)2型受体(AT2R)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法将AT2RcDNA转染到培养的大鼠VSMC中,分别观察AngⅡ、AngⅡ+losartan、AngⅡ+PD123319等不同处理因素处理对VSMC的细胞数目以及PCNA、NOS表达的影响。结果losartan处理组细胞数目和PCNA表达量少于AngⅡ处理组,NOS表达量高于AngⅡ处理组,而PD123319处理组细胞数目和PCNA表达量显著高于AngⅡ处理,NOS表达量较之为少。结论激活AT2R能拮抗AngⅡ的由AT1R介导的促细胞增殖作用,这种作用可能与激活AT2R后NOS表达增多使NO合成增多有关。

血管紧张素Ⅱ受体拮抗药对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :利用血管紧张素Ⅱ受体拮抗药洛沙坦、PD12 3319研究血管紧张素Ⅱ 2型受体对培养的大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法 :将含有血管紧张素Ⅱ 2型受体cDNA的质粒转染入培养的大鼠主动脉平滑肌细胞后 ,实验组分为血管紧张素Ⅱ处理组 (组 1)、血管紧张素Ⅱ和洛沙坦处理组 (组 2 )、血管紧张素Ⅱ和PD12 3319处理组 (组 3)。检测核增殖抗原表达、细胞数目及一氧化氮合酶含量的变化。结果 :组 2细胞数目为 ( 4 .17± 0 .15 )× 10 5个 ,核增殖抗原平均光密度为 0 .2 0 2 6± 0 .0 0 76 ,较组 3细胞明显减少 (P <0 .0 1) ;而组 2细胞一氧化氮合酶平均光密度为 0 .0 2 75±0 .0 0 2 1,明显高于组 3细胞 ( 0 .0 16 9± 0 .0 0 2 0 ) (P <0 .0 1)。结论 :血管紧张素Ⅱ可能通过其 2型受体表现为抑制血管平滑肌细胞增殖、拮抗 1型受体的作用 ,血管紧张素Ⅱ 2型受体的这种作用可能与增强一氧化氮合酶活性 ,使细胞合成、释放一氧化氮增多有关。

AT_2受体cDNA重组质粒转染入培养的大鼠VSMC

目的 :将构建的AT2 RcDNA重组质粒转染到培养的大鼠血管平滑肌细胞 ,为研究AT2 R对血管平滑肌细胞生长的影响提供实验基础。方法 :扩增、纯化重组质粒后 ,用脂质体介导法将重组质粒转染入培养的大鼠血管平滑肌细胞 ,分别用AT2 RmRNA原位杂交、AT2 R抗体免疫组化的方法从RNA和蛋白水平检测转染效果。结果 :原位杂交显示部分细胞浆棕黄色阳性反应 ,显示转染率为 9% ,免疫组化结果显示部分血管平滑肌细胞膜上有AT2 R蛋白存在。结论 :成功将AT2 RcDNA重组质粒转染到培养的大鼠血管平滑肌细胞中。转染后AT2 R能在大鼠主动脉平滑肌细胞表达的现象为进一步研究AT2 R对成年大鼠血管平滑肌细胞生长。

基因技术对人类生活的影响

基因技术的发展使人类生活环境发生很大变化 ,同时 ,基因技术的发展尚存在许多问题和困惑。本文在分析基因技术发展现况的基础上 ,探讨了基因技术发展中需要注意的问题。

苦参碱对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究苦参碱 (matrine)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardialfibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响 ,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法 :建立AngⅡ诱导新生大鼠CFb纤维化模型 ,采用MTT法检测Mat对CFb增殖的影响 ;羟脯氨酸测定检测CFB胶原合成量 ;RT PCR检测Mat作用下CFb的Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP 13)、组织金属白酶抑制因子 1(TIMP 1)、TGFβ 1的基因表达情况。结果 :①在一定范围内 ,苦参碱以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFb的增殖和胶原合成 (P <0 .0 1) ,②苦参碱可以降低Ⅰ型胶原和TGFβ 1基因mRNA表达 ,③苦参碱可以提高MMP 13基因mRNA表达。结论 :苦参碱通过抑制AngⅡ诱导的CFb增殖和胶原合成增加 。

当归抗家兔主动脉粥样硬化形成的作用

为观察中药当归注射液对家兔实验性主动脉粥样硬化形成的影响并探讨其可能的作用机制。将 18只家兔随机分为正常对照组、模型组和当归组 3组 ;分别给予普通饲料 (正常对照组 )和高脂饲料 (其它两组 )喂养 ;当归组动物在喂高脂饲料的同时 ,加当归注射液。喂养第 10周末颈动脉放血取血样后 ,处死动物 ,检测血脂、主动脉粥样硬化斑块面积和血清丙二醛含量。结果发现 ,当归组动物血中甘油三酯水平显著降低 (P <0 .0 1) ,但总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇均无变化。同时当归组动物主动脉斑块面积显著小于模型组 (P <0 .0 1)。当归组动物血清丙二醛含量也显著低于模型组 ,但仍比对照组高 (P <0 .0 1)。实验结果提示 :当归注射液具有抗家兔主动脉粥样硬化形成的作用 ;这种作用与它降低血清甘油三酯水平、抗脂质过氧化有关。

甲状腺素对大鼠心脏细胞蛋白激酶C信号途径的影响

目的 :探讨甲状腺素对新生大鼠心脏细胞中蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)信号途径的影响。 方法 :培养新生大鼠心肌细胞及成纤维细胞 ,用 1%血清培养基或血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ ,AngⅡ)处理细胞 2 4h后 ,加入甲状腺素(三碘甲状腺素原氨酸 ,triiodothyronine,T3 )继续培养 4 8h后 ,用PKC活性检测试剂盒检测细胞中PKC活性 ,用West ernblot的方法检测细胞中PKCα及PKCε的表达。结果 :在 1%血清培养基中 ,T3 能明显抑制心肌细胞中PKC活性 ,使心肌细胞中PKCε表达下降 ,对PKCα的表达却没有显著的影响 ;在心肌成纤维细胞中 ,无论是PKC活性还是PKCα及PKCε的表达均未观察到T3 的调控作用。预先用AngⅡ处理 2 4h后 ,心肌细胞及心肌成纤维细胞中PKC活性明显增加 ,PKCε的表达显著增加 ,随后用T3 处理后 ,心肌细胞中PKC活性及PKCε的表达明显降低 ;而心肌成纤维细胞中PKC活性没有发生显著性的变化。结论 :甲状腺素能明显抑制心肌细胞中PKC活性及PKCε亚型的表达 ,其对心肌细胞中PKC信号途径的调控作用可能在心肌的多种病理生理过程中起着重要的作用。

当归及阿魏酸钠对内皮细胞中TGFβ_(1)及bFGF表达的影响

检测高脂血清 (HL S)对内皮细胞 TGFβ1 、b FGF表达的影响 ,并观察当归、阿魏酸钠的作用。采用培养人脐静脉内皮细胞 (ECV30 4) ,以高脂血清损伤 ,扫描电镜观察内皮细胞形态变化 ,免疫细胞化学方法观测 TGFβ1 及b FGF的表达。结果 ,高脂血清明显损害内皮细胞的超微结构 ,TGFβ1 的表达明显降低 ,b FGF的表达明显增高 ;这种作用可以被当归、阿魏酸钠所逆转。当归及其有效成份阿魏酸钠对内皮细胞 TGFβ1 、b FGF表达的影响可能为其抗动脉粥样硬化的机理之一。

阿魏酸钠对VEC中Bcl-2和Bax表达的影响

探讨阿魏酸钠对TNF α致血管内皮细胞 (VEC)中Bcl 2和Bax表达改变的影响及其细胞保护作用。以人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)为实验模型 ,采用细胞培养、电镜、免疫组化等技术观察TNF α对VEC的形态以及内皮细胞中Bcl 2和Bax表达的影响 ,并研究阿魏酸钠的保护机理。结果 ,TNF α能明显损伤VEC的超微结构 ,可见较多凋亡细胞 ,细胞中Bcl 2表达明显减少 ,Bax表达明显增多。将阿魏酸钠与TNF α共同作用于VEC ,可见内皮细胞的超微结构与正常细胞形态相似 ,Bcl 2表达增多 ,Bax表达减少。阿魏酸钠可减少TNF α导致内皮细胞的损伤和凋亡 ,其机理可能是通过减少Bax表达 ,提高Bcl

非创伤缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌的作用

目的：确定非创伤性缺血预处理对大鼠缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）心肌损伤是否具有对抗作用，以扩展缺血预处理的实际应用。方法：采用非创伤性下肢缺血预处理及经典缺血预处理的动物模型，比较两种处理方法对Ｉ／Ｒ心肌损伤的效应。实验动物分４组：正常对照组（ＮＣ，ｎ＝８），开胸旷置５０ｍｉｎ；缺血／再灌注组（Ｉ／Ｒ，ｎ＝１２），结扎冠脉３０ｍｉｎ，再灌注２０、１８０ｍｉｎ；经典缺血预处理组（Ｃ－ＩＰＣ，ｎ＝１２），按经典Ｍｕｒｙ法复制；非创伤性下肢缺血预处理组（Ｎ－ＷＩＰＣ，ｎ＝１２），捆绑双下肢５ｍｉｎ，松开５ｍｉｎ，反复４次后，阻断冠脉３０ｍｉｎ，再灌２０、１８０ｍｉｎ。以左室功能，心肌梗塞范围，血清肌酸激酶（ＣＫ）及心肌组织丙二醛（ＭＤＡ）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性为观察指标。结果：与Ｉ／Ｒ组相比，Ｎ－ＷＩＰＣ组与Ｃ－ＩＰＣ组均显著缩小Ｉ／Ｒ后的心肌梗塞范围（Ｐ＜００１）；明显恢复Ｉ／Ｒ后的左室功能（Ｐ＜００５，００１）；减轻自由基对心肌的损害：血清ＣＫ，心肌ＭＤＡ含量显著降低（Ｐ＜００１）。Ｎ－ＷＩＰＣ组还使心肌ＳＯＤ活性增高（Ｐ＜００５）。结论：非创伤性下肢缺血预处理与经典缺血预处理可诱发同等强度的?

大鼠硫酸腺嘌呤预处理心肌酶活性及SDH的电镜细胞化学观察

本实验用硫酸腺嘌呤预处理方法与经典缺血预处理方法对比分析大鼠心肌酶活性及 SDH的电镜细胞化学结构。雄性 SD大鼠 2 4只 ,分 4组 ,即 组 :正常对照组 ; 组 :缺血再灌注组 ; 组 :经典缺血预处理组 ; 组 :硫酸腺嘌呤预处理组。检测肌酸激酶 (CK)、细胞色素氧化酶 (CCO)及琥珀酸脱氢酶 (SDH)的活性。结果显示 :与 组比 , 组、 组 CK漏出减少 ,CCO、 SDH活性增强 ,细胞超微结构保存良好。结果表明 :硫酸腺嘌呤预处理方法具有类似经典缺血预处理效应。

甲状腺素对Ang Ⅱ所致心肌细胞肌球蛋白重链基因表达改变的影响及其机制

目的 :观察甲状腺素对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )所致心肌细胞中DNA和蛋白质合成速率及肌球蛋白重链 (MHC)基因表达改变的影响 ,并探讨其可能机制。方法 :以AngⅡ及三碘甲状腺素原氨酸 (triiodothyronine ,T3 )分别或同时作用于培养的细胞。通过测定 [3 H]-TdR和 [3 H]-Leu掺入来了解细胞中DNA及蛋白质的合速成率 ;用RT -PCR的方法检测细胞中α和β -MHCmRNA的表达 ;PepTag 非放射性的PKC活性检测试剂盒对细胞中PKC活性进行检测。结果 :AngⅡ处理使心肌细胞中 [3 H]-Leu掺入增加 ,[3 H]-TdR的掺入率保持不变 ;α -MHCmRNA的表达显著低于正常 ,而 β -MHCmRNA的含量明显高于正常 ;同时细胞中PKC活性亦显著高于正常。当T3 与AngⅡ组共同作用于培养的心肌细胞时 ,与AngⅡ组相比 ,[3 H]-Leu的掺入增加并没有发生改变 ,但是 ,心肌细胞中α -MHCmRNA的表达明显增高 ,而 β -MHCmRNA的含量却显著降低 ;同时细胞中PKC的活性也显著降低。 结论 :T3能抑制AngⅡ所致的心肌细胞中肌球蛋白基因的转换 ,其机制可能与T3 对细胞中PKC活性的影响有关。

甲状腺素对血管紧张素Ⅱ所致心肌成纤维细胞胶原合成改变的影响

目的 :以AngⅡ处理培养的心肌成纤维细胞 ,促使细胞中胶原的合成发生改变 ,观测T3对AngⅡ所致细胞胶原合成改变的影响。方法 :以AngⅡ及T3分别或同时作用于培养的大鼠心肌成纤维细胞 ,通过测定3H TdR和3H Leu掺入来了解成纤维细胞增殖率和蛋白质合成率 ,同时用免疫细胞化学方法检测成纤维细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达。结果 :AngⅡ使成纤维细胞3H TdR和3H Leu掺入增加 ,同时细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达也显著增加。T3组成纤维细胞3H TdR和3H Leu掺入虽然也增加 ,但T3组细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达却呈显著性降低。当T3与AngⅡ共同作用于成纤维细胞时 ,与T3组和AngⅡ组比较 ,3H TdR和3H Leu的掺入率没有发生显著性的变化 ;与AngⅡ组比较 ,细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达显著性降低 ,与对照组的表达一致。结论 :T3能降低AngⅡ所致的心肌成纤维细胞中Ⅰ。

2,3-丁二酮单肟对冷停搏心脏的保护作用

目的 :观察心肌兴奋收缩脱敏剂 2 ,3-丁二酮单肟 (BDM)对冷停搏心脏的保护作用。方法 :本实验采用SD大鼠 48只 ,高K+ 组 (n =2 4)取心脏用StThomas液 4℃保存 ;BDM组 (n =2 4)用BDM -K -H液保存心脏。分别保存 8h ,18h ,2 4h后悬挂于Langendorff灌流装置 ,再灌注 40min。结果 :18h后 ,高K+ 组 6 0 %不复跳 ,心率和冠脉流量都显著低于BDM组 (P <0 0 5 ) ,心肌质膜和线粒体Na+ -K+ -ATPase活性也显著低于BDM组 (P <0 0 1) ;保存 2 4h后 ,高K+ 组心脏 10 0 %不复跳 ,BDM组全部复跳。结论 :BDM可以节省能量 。

p62^(dok)蛋白氨基酸和cDNA序列测定和分析

目的 :分析p6 2 dok氨基酸和cDNA序列 ,探讨p6 2 dok酪氨酸磷酸化及其与p2 1ras鸟苷三磷酸酶激活蛋白(p2 1rasGAP)的关系。方法 :从过渡表达人类胰岛素受体的中国仓鼠卵巢细胞 (CHO/IR细胞 )中提取、纯化p6 2 dok,进行微肽序列分析 ,设计相应引物PCR、克隆cDNA并测序。利用免疫沉淀和蛋白免疫印迹检测p6 2 dok是否存在酪氨酸磷酸化及与p2 1rasGAP的关系。结果 :p6 2 dokcDNA由 186 3bp组成 ,编码 481个氨基酸 ,含 15个酪氨酸残基 ,富PXXP基序 ,并有一个pleckstrin同源区。当p6 2 dok酪氨酸磷酸化后 ,可与p2 1rasGAP相结合。结论 :p6 2 dok可能是一种新的信息分子 ,并通过p2 1rasGAP参与胰岛素信号转导系统中RAS/MAPK径路的调节。

大鼠心脏腺苷预处理琥珀酸脱氢酶电镜细胞化学的变化

目的以外源性腺苷前质——硫酸腺嘌呤注入大鼠，通过琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）电镜细胞化学的变化，探讨预处理效应。方法实验采用体重为２００～３００ｇ雄性ＳＤ大鼠２４只，分４组，每组６只，即正常对照组（Ⅰ组）；缺血再灌组（Ⅱ组）；缺血预处理组（Ⅲ组，按经典的Ｍｕｒｒｙ法）；硫酸腺嘌呤预处理组（Ⅳ组）。按Ｎｉｔｒｏ－ＢＴ法显色制作ＳＤＨ光镜标本，按小川的亚铁氰化铜法制作电镜标本。光镜观察ＳＤＨ活性参照Ｎｉｌｅｓ法分为４级。结果Ⅰ组ＳＤＨ活性和心肌结构相对正常；Ⅱ组ＳＤＨ活性降低明显，线粒体损伤严重；Ⅳ组近于Ⅰ组；Ⅲ组界于Ⅰ、Ⅳ组之间。