2021-2022年广东省5岁以下婴幼儿腹泻病例中A组轮状病毒分子流行病学分析

目的了解2021-2022年广东省病毒性腹泻监测哨点医院5岁以下腹泻患儿A组轮状病毒(group A rotavirus,RVA)的流行病学和基因型别特征,为RVA疫苗研发提供依据。方法收集2021-2022年5岁以下儿童腹泻患者的粪便标本共1858份,采用ELISA方法检测轮状病毒抗原,对阳性样本进一步测序分型。结果1858份样本中检出RVA阳性样本156例,阳性率8.4%;其中男女患儿的阳性率分别为8.76%、7.87%,男女性别阳性检出率差异无统计学意义;RVA感染在各年龄组检出率差异有统计学意义;RVA感染率从12月逐渐增高,次年1-4月达到高峰;2021年广东地区RVA主要流行株以G9P[8]亚型为主,国内少见的G8P[8]亚型呈上升趋势,2022年G8P[8]亚型检出率首次超越G9P[8]亚型。结论2021-2022年广东省5岁以下婴幼儿腹泻病例中RVA基因型别多样,G8P[8]亚型已成为主要流行基因型之一,仍需持续开展RVA基因型别监测以评估RVA相关疾病的风险。

三种IgM酶联免疫试剂盒在麻疹病例实验室诊断中的应用比较

目的对三种抗麻疹病毒IgM酶联免疫试剂盒(海泰快速法、海泰普通法和德国试剂A)在麻疹病例早期诊断的应用进行比较。方法采用双盲法,用三种试剂盒对麻疹疑似病例急性期血清样品平行检测。结果海泰快速法、海泰普通法和德国进口试剂A等三种抗麻疹病毒IgM酶联免疫试剂对170份麻疹疑似病例急性期血清样品的阳性检出率分别为67.65%、64.71%和62.35%;灵敏度分别为100%、99.1%和94.4%;特异度分别为88.7%、95.2%和93.5%;调整一致性分别为95.7%、97.5%和93.7%;约登指数分别为0.887、0.942和0.880。结论三种试剂盒检测结果符合率较高,另外海泰快速法的灵敏度最高,海泰快速法和海泰普通法在敏感性及特异性上都有较为理想的结果,而且海泰快速法试剂操作更为简便、快速,更适合于基层疾病控制部门快速诊断麻疹病例,采取措施,控制疫情。

Hep-2细胞在严重急性呼吸综合征病原学检测中的应用研究

目的 应用人咽喉上皮癌细胞 (Hep 2 )对严重急性呼吸综合征 (SARS)病例标本进行病原体检测与研究 ,为该病的预防与控制提供依据。方法 采用Hep 2细胞培养法 ,对 2 0 0 3年 1～ 2月广东省收集的SARS病例的咽拭子等标本分离致病病原体 ,并应用电镜形态学、逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)扩增部分基因进行序列分析 ,并对分离的病原体进行研究。结果 132例SARS病例的 31份咽拭子、10 0份痰液和 1份尸检肺组织标本中有 73份标本致单层细胞出现“蚀斑病变” ,细胞病变阳性率为 5 5 .3% ,其中 4 8h阳性率为 36 .4 %。采用巢式PCR(Nested PCR)对其中 2 5份出现“蚀斑病变”细胞培养物进行检测 ,能扩增出冠状病毒的特异片段 ;对中 2 18、中 2 19等 6份Nested PCR产物进行基因序列分析 ,结果显示其核苷酸序列与国内外公布的结果一致 ,氨基酸序列与已知的人或动物冠状病毒的同源性在 5 8%～ 76 %之间。通过电镜在SARS病例标本 (中 2 10 )病变细胞及 1份尸检肺组织标本中观察到衣原体样颗粒和病毒样颗粒。结论 从接种SARS病例标本的Hep 2细胞病变培养物中证实有冠状病毒。

广东省脊髓灰质炎Ⅰ型病毒抗原分析的初步研究

本文报告利用6个中和性单克隆抗体对广东省1985～1988年的59株PolioⅠ型病毒进行抗原分析。结果59株病毒共有5种不同的排列,其中以P_I—3、P_I—4和P_I—5排列的毒株占多数,分别为近年本省大陆地区和海南儋县脊髓灰质炎流行的流行株,它们之间的抗原性差异较大。

广东省2001年急性弛缓性麻痹病例病原流行病学分析

目的对广东省2001年急性弛缓性麻痹(AFP)病例进行病原流行病学分析。方法收集2001年AFP病例粪便标本,采用RDa和L20B细胞对标本进行病毒分离与鉴定,并对AFP病例的免疫史、性别、年龄、60d随访结果与病原学结果之间的关系进行了分析。结果 288例AFP病例均采集了粪便标本,分离到脊髓灰质炎病毒(PV)28株,阳性率为9.7％,均为疫苗株,其中Ⅱ型病毒(PVⅡ)15株,为优势株;分离到非脊灰肠道病毒(NPEV)21株,阳性率为7.3％。脊灰减毒口服活疫苗(OPC)“零”剂次免疫的AFP病例的PV分离率依次高于1-2次和完成3次以上(≥3)全程免疫者,达50.0％(9/18);22例无明确诊断的残留麻痹病例的PV分离率为27.3％,远高于其他病例,其中PVⅡ分离率最高,占22.7％(5/22)。结论2001年广东省未发现由脊灰野病毒引起的病例;PVⅡ可能是部分未完成全程免疫的AFP病例的致麻痹病因。

脊髓灰质炎减毒活疫苗普服血清学效果检测

为提高易感人群对脊灰炎病毒的抵抗力,进一步降低发病率,我省从1988年冬起在全省范围内对7岁以下儿童进行了一次性的三价脊灰炎口服活疫苗(TOPV)普服。为了解此次普服的效果,我们于1989年8、9月在茂名市于普服前后分别采集血样进行血清学检测。现将结果报告如下: 材料与方法 1.TOPV:由中国医学科学院医学生物学研究所生产,批号是89—81—3和88—101—3,经回苗滴定,服前效价分别是6.51ogTCID50/粒和6.11ogTCID50/粒,均符合现行规程要求。

1985～1991年广东省脊髓灰质炎病原学分析

本文报道了1985～1991年广东省脊髓灰质炎疑似患者粪便病毒分离结果,并分析了七年来病毒型别构成比及病毒分离率与取样时间和免疫史的关系。七年共收318份粪便标本致细胞病变者170份,阳性率53.46％,其中脊灰病毒145株,以脊灰炎Ⅰ型病毒为多数,共112株;其它肠道病毒25株。结果还表明,病毒型别逐年增加,混合型增多,但仍以脊灰炎Ⅰ型占优势,发病后7天内取材阳性率较高,未服疫苗者阳性率较高。另本文还报道了32株脊灰炎Ⅰ型病毒抗原性分析结果。

1991年广东省脊髓灰质炎三价口服减毒活疫苗效价监测

１９９１年广东省脊髓灰质炎三价口服减毒活疫苗效价监测郑焕英，何由成，柯昌文，郭永文，郦其昌，林协勤为了解脊髓灰质炎三价口服减毒活疫苗（ＴＯＰＶ）在冷链运转过程中效价的变化情况，及时解决冷链工作中出现的问题，我们于１９９１年对全省各级的ＴＯＰＶ进行了抽...

SARS灭活病毒免疫兔后IgG特异抗体应答

将灭活的SARS冠状病毒抗原每隔两周多点注射免疫兔,共免疫3次,以观察SARS灭活病毒免疫兔后兔血清中IgG特异性抗体的应答变化。免疫前及第一次免疫后第8、14、21、28、35天耳静脉取血,分离血清。间接ELISA法测得血清中特异性IgG抗体持续升高,并表现出一定的剂量依赖性。第35天G1、G2、G3组血清IgG抗体滴度分别为1∶51200、1∶49600、1∶25600;中和试验测得G1组第28天血清样品中和抗体效价为1∶2560;蛋白芯片测得M、N、3CL、S1、S2、S3、S4等病毒蛋白抗原都可特异性结合抗血清中的IgG抗体,但是不同蛋白抗原结合能力有差别。因此可认为SARS灭活病毒经皮下注射免疫兔后,可诱导全身性IgG抗体应答,产生SARS冠状病毒特异性抗体。

BALB/C小鼠对不同佐剂SARS灭活疫苗的早期免疫反应

目的 :研究含不同佐剂的SARS灭活疫苗免疫小鼠后 ,小鼠的早期细胞免疫和体液免疫反应。方法 :灭活的SARS冠状病毒F6 9株分别与弗氏佐剂、氢氧化铝、CpG佐剂配伍 ,制备灭活疫苗。接种 6周龄SPF级BALB C小鼠。定时采血 ,分析小鼠外周血中CD4 + 、CD8+ T细胞亚群动态变化 ,同时测定鼠血清中特异性IgG抗体及抗体的病毒中和活性。结果 :由3种佐剂制备的SARS灭活疫苗免疫小鼠后 ,CD4 + 、CD8+ T细胞百分比升高或无明显改变 ,CD4 CD8比值无显著性改变。其中 ,弗氏佐剂疫苗免疫小鼠的CD4 + T细胞百分比升高较明显 ,且在一段时间内 ,维持在一个较高的水平 ;铝佐剂疫苗免疫小鼠后 ,未观察到明显T细胞亚群改变 ;而CpG佐剂疫苗免疫小鼠的CD8+ T细胞百分比改变较其它佐剂疫苗改变更明显。与此相异的是 ,3种疫苗均可诱导小鼠产生较高滴度特异性IgG抗体 ,并且所产生的抗体具有中和活性。在初免后第 34天 ,3种佐剂组的IgG抗体滴度分别为 1∶1 2 80 0、1∶32 0 0和 1∶1 6 0 0 ,中和效价分别为 1∶2 5 6 0、1∶96 0和 1∶32 0。结论 :SARS灭活疫苗接种小鼠后 ,可诱导较强的体液免疫反应 ,同时轻度上调CD4 + 、CD8+ T细胞活性 ,程度因佐剂而异。

在我国流行的脊髓灰质炎中发现脊灰病毒Ⅰ型自然重组株

脊髓灰质炎病毒(PV)是引起脊髓灰质炎的最主要的病毒。我们在研究PV1野毒株的分子流行病学时,发现了一株PV1自然重组病毒。用Sabin 1特异PCR检定该毒株基因组2505～2601区段,或用两个Sabin 1特异RNA探针分别打点杂交检定641～740和2502～2575区段时,推断它可能为野毒株;而测定VP1/2A连接区段3296～3445序列时,又表明它为疫苗株。向5′端扩大测序,从3262起的5′侧有与我国PV1野毒株相同的许多核苷酸取代,证明它为野毒株和疫苗株的重组病毒,重组位点为3262/3263。实验中建立了检测该重组病毒的特异的PCR方法。检测我国10个省市、自治区47份PV1分离株中,5个省区14份麻痹病例由重组病毒感染引起。这些重组株在我们测序的3155～3445区段序列彼此几乎相同(同源性≥96.7％),推断它们可能是某病儿受野毒株、疫苗株双重感染产生重组病毒后的子代病毒。有关该重组病毒的毒力、免疫原性、传播性等正在进一步研究中。

广东省1999年急性迟缓性麻痹相关肠道病毒的分型鉴定分析

目的运用分子生物学检测方法对从广东省1999年AFP(Acute Flaccid Paralysis)病例中分离到的28株非脊灰肠道病毒进行分型鉴定。方法采用简并引物RT-PCR对分离到的28株非脊灰肠道病毒进行目的基因片段扩增,然后序列测定,将测定结果与GenBank数据库进行BLAST比较分析,运用CLUSTALW进行同源性分析,并构建基因树。结果序列分析的结果表明,在AFP病例中除脊髓灰质炎病毒外,也分离到多种其它型别的肠道病毒,包括CA21、CA24、E7、E13、E11、E29、E25等15个型别,其中E13有5株,E7有4株,E21、E25、E27、E19、、E11、E14各2株,CA21、CA24、E2、E3、E20、E29、E30各1株。结论运用分子生物学检测方法可以对传统方法无法确定的肠道病毒进行分型鉴定,弄清非脊灰肠道病毒的血清型别,了解其流行规律。

广东省农村地区水痘-带状疱疹病毒感染状况及抗体水平调查

目的：了解农村地区健康儿童水痘-带状疱疹病毒（VZV）的自然免疫状况。方法：采集2～13岁儿童血清标本共计418份，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测水痘一带状疱疹病毒IgG抗体。结果：418份血清标本中，水痘-带状疱疹病毒抗体阳性194人，抗体阳性率为46．41％，抗体含量均值为366mIU／ml。各年龄组抗体阳性率差异有统计学意义（P〈0．01），其中2岁年龄组的阳性率（12．86％）最低，10～13岁年龄组的阳性率（90．00％）最高。结论：建议农村地区6岁以下儿童应在经济条件许可的情况下接种水痘疫苗。

广东省1999年177例发热出疹性疾病的实验室监测

对全省 1999年 177例RFIs病例进行麻疹IgM抗体测定 ,结果阳性率为 59 30 % ;对麻疹抗体阴性的样本补做风疹IgM抗体测定 ,结果风疹抗体阳性率达 4 5 80 %。结果分析表明 ,麻疹病例主要集中在 4～ 14岁儿童 ,占 89 2 0 % ,阳性病例中无免疫史或免疫史不详的占多数 (73 33% ) ;流动人口占病例的相当比例 (2 0 90 % ) ,其中麻疹IgM抗体阳性病例 2 0例 ,大多为无免疫史或免疫史不详者 (17例 ,占 85 0 0 % )。以上结果表明 ,我省应加强麻疹疫苗的补种复种工作 ,并应加强对流动人口的免疫接种。另外 ,由于风疹的普遍流行 ,我们在做好麻疹监测的同时 ,应该注意风疹的监测工作。

广东省传染性非典型肺炎病例的SARS冠状病毒分离株的分子生物学鉴定

目的 对广东省部分传染性非典型肺炎 (SARS)病例的SARS冠状病毒分离株进行鉴定 ,并初步建立SARS冠状病毒PCR检测方法。方法 采集临床诊断为SARS病例的咽漱液标本 ,进行多种细胞分离培养 ,对出现病变的细胞分离物采用冠状病毒特异引物通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)及巢式聚合酶链反应 (Nested PCR)进行扩增 ,并对部分扩增片段进行序列测定 ,应用DNASTAR软件分析比较。同时采用间接免疫荧光 (IFA)和ELISA法检测上述患者血清中SARS冠状病毒IgG抗体。结果 对 2 1例SARS患者的细胞分离物进行PCR扩增 ,结果均阳性 ,其中 1 2份患者咽漱液标本PCR扩增结果也阳性 ,序列测定及基因分析表明 ,广东省SARS病例的病毒分离株为冠状病毒 ,其基因序列与WHO公布的SARS基因序列一致 ,氨基酸序列与目前已知的冠状病毒同源性为 5 8%～ 76 %。同时对 2 1例患者进行血清学检测 ,其中IFA检测有 9例阳性 ,ELISA检测有 1 2例阳性。结论 从广东省部分SARS病例标本中分离的病毒株是一种新的冠状病毒 ,PCR检测具有早期。

不同温度对SARS冠状病毒抗原性灭活效果的研究

目的 探讨用温度灭活的SARS冠状病毒作为免疫用抗原的可行性。方法 采用细胞培养、酶联免疫吸附试验 (ELISA)对灭活前后SARS冠状病毒感染性和抗原性进行检测。结果 5 6℃、30min对SARS冠状病毒感染性的灭活率为 99 99% ;5 6℃、6 0min对SARS冠状病毒感染性的灭活率为 1 0 0 .0 0 % ;检测病毒灭活前、灭活 30min、灭活 6 0min抗原性P/N值分别为 5 4 4、3 0 2、2 72。结论 随着灭活时间的延长 ,病毒的抗原性降低 ,5 6℃、6

广东省翁源县一起麻疹暴发的血清学和分子生物学研究

目的 分析广东省翁源县一起麻疹暴发的原因。方法 收集 2 0 0 1年 12月广东省翁源县暴发麻疹流行资料 ,并从中收集病例急性期血清和咽拭子各 6份 ,进行血清学检测 ,病毒分离和中和实验 ;通过RT PCR扩增麻疹N基因碳末端 5 89个核苷酸 ,并进行测序和种系分析。结果 麻疹暴发流行累计发病 2 2例 ,6份病例血清的麻疹IgM抗体阳性率 83 3% ,6份咽拭子仅分离出一株麻疹病毒 (韶关株 ) ,该麻疹流行株不同于中国疫苗株 (S 191) ,鉴定为H1基因型 ;和目前国外流行株相比在核苷酸水平变异最大可达 12 4% ,和目前国内H1流行株相比在核苷酸水平变异在 1 1%～ 2 7% ;中和实验表明麻疹疫苗免疫后血清能够中和该野病毒 ,但其中和的滴度比中和疫苗株低 2至 4倍。结论 麻疹基因变异不会引起新的流行 。