B6-Co与B6小鼠眼睑胚胎发育的形态观察

目的:探讨遗传性角膜混浊突变系小鼠(B6-Co)胚胎期眼睑发育形态学差异。方法:将B6-Co小鼠与B6小鼠对照,取胚胎期16.5天(E16.5)的胚胎,切取整个头部固定、脱水,冷冻切片。采用HE染色观察胚胎期眼睑闭合状况;FITC-鬼笔环肽染色眼睑部位的细胞骨架;Hoechst染色眼睑部位细胞核。结果:B6小鼠在E16.5天眼睑完成闭合,而B6-Co小鼠眼睑不能闭合,眼睑细胞骨架异常,无微丝束形成,不利于细胞迁移。结论:B6-Co小鼠由于眼睑边缘部位细胞迁移障碍引起的眼睑发育缺陷,造成出生时眼睑开放。

MEKK1在B6-Co小鼠胚胎发育过程中的表达

为了检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达,探讨其在该突变系小鼠EOB(出生时眼睛睁开)表型形成过程中的作用,试验剖取E16.5和E18.5小鼠,剪取整个头部,用4%多聚甲醛固定脱水,制作冰冻切片,通过免疫荧光技术检测MEKK1在小鼠胚胎眼睑部位的表达;剪取胎鼠皮肤,提取蛋白,以GAPDH为内参,通过Western-blot检测MEKK1在B6-Co小鼠胚胎中的表达情况。结果表明:与B6小鼠相比较,MEKK1在B6-Co小鼠胚胎眼睑发育关键时期的表达差异不显著;但游离C端在E16.5小鼠的表达明显要高于E18.5的表达,差异显著。说明MEKK1对促进小鼠眼睑融合起到了重要作用。

B6-Co与B6小鼠眼睑角质形成细胞的原代无血清培养及比较研究

为进一步研究B6-Co小鼠眼睑发育缺陷机制,首次培养了小鼠眼睑角质形成细胞,并对B6-Co和B6小鼠眼睑角质形成细胞的迁移能力进行划痕实验分析,FITC-phalloidin染色比较B6-Co和B6小鼠肌动蛋白细胞骨架。结果表明,B6-Co小鼠眼睑角质形成细胞迁移的数目和距离明显少于B6小鼠,细胞骨架异常,B6-Co小鼠眼睑闭合不全(EOB)是由小鼠眼睑角质形成细胞迁移缺陷造成的。

硫氧还蛋白还原酶活性检测在食管癌60例临床诊断中的应用

目的 探究硫氧还蛋白还原酶(TR)活性检测在食管癌临床诊断中的应用。方法 2019年1月至2020年7月海安市人民医院收治的食管癌病人、食管良性病灶病人及同期于该院进行体检的健康者,即分为食管癌组、良性组和对照组,各60例。分别检测食管癌组、良性组和对照组病人血浆中TR活性;检测食管癌组织病人化疗前、化疗时和化疗后血浆中TR活性;比较食管癌组病人TR活性在不同分期、转移方面的差异;评估食管癌组病人手术预后,随访2年评估远期预后情况;确定TR活性检测对食管癌病人的诊断价值。结果 与对照组(3.16±0.79)U/mL相比,良性组(6.34±0.96)U/mL和食管癌组(8.12±1.25)U/mL病人血浆中TR活性均明显升高(P<0.05);且食管癌病人血浆中TR活性明显高于良性组(P<0.05)。与化疗前(8.12±1.25)U/mL相比,化疗时(4.65±0.87)U/mL和化疗后(3.37±0.62)U/mL食管癌病人血浆中TR活性均明显降低(P<0.05);且化疗后食管癌组病人血浆中TR活性明显低于化疗时(P<0.05)。TR活性表达和食管癌病人性别、年龄、肿瘤长径和肿瘤位置均无相关性(P>0.05),与病人淋巴结转移和TNM分期密切相关(P<0.05)。和Ⅰ&Ⅱ期食管癌病人相比,Ⅲ&Ⅳ期食管癌病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05);和未转移食管癌病人相比,食管癌转移病人血浆中TR活性明显升高(P<0.05)。食管癌病人化疗后有39例病人得到了完全或部分缓解,病人总有效率为65%。对食管癌病人随访2年统计显示,食管癌病人2年生存率为75.0%(45例),TR高表达(>4 U/mL)2年生存人数为31(31/41)例,生存率为75.6%;TR低表达(<4 U/mL)2年生存率为14(14/19)例,生存率为73.7%;log-rank检验TR高表达和低表达病人生存率比较差异有统计学意义(P<0.05)。受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析TR检测曲线下面积(AUC)值为0.92,特异度为83.2%,灵敏度为93.6%。结论 TR高表达于食管癌病人血浆中,其可用于食管癌的早期检测,提示病情的进展情况,对病人的治疗预后能有效评价。

B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4突变候选基因克隆及测序

目的对B6-Co小鼠Ankrd55和Ddx4基因进行克隆测序分析，寻找是否存在突变位点。方法以小鼠Ankrd55和Ddx4基因的mRNA序列设计引物，以mRNA为模板，采用RT-PCR和PCR技术分段进行目的基因扩增，将目的片段连接在T载体上，转化至感受态细胞，筛选阳性克隆，提取质粒DNA分子，电泳检测，EcoRE酶切释放目的片段，测序、分析、比对。结果Ddx4基因位于小鼠13号染色体第113412349的碱基由c转换成A，导致编码氨基酸的密码子改变，产物脯氨酸（P）变成谷氨酰胺（Q）。结论Ddx4基因发生单碱基突变，表明该突变可能与B6－co小鼠的EOB表型相关，但是有待于进一步研究。

circ_0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制

目的 探讨环状RNA(circRNA)circ_0014130在缺氧诱导肺腺癌侵袭转移中的作用机制。方法 收集2018年1月至2021年4月见未出现转移的肺腺癌患者46例、出现转移的肺腺癌患者42例和健康者50例。通过RT-qPCR检测缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和circ_0014130的水平。通过Pearson检测二者的相关性。肺腺癌细胞分为对照组、缺氧组、si-circ_0014130组、缺氧+si-circ_0014130组。通过转染抑制circ_0014130,通过降低氧气浓度(10%)构建体外缺氧环境。比较各组细胞的迁移和侵袭能力。结果 肺腺癌组患者血清中的HIF-1α mRNA(2.14±0.27)和circ_0014130(2.59±0.23)水平均显著高于健康组(分别为1.00±0.16、1.00±0.14)(P<0.01);肺腺癌转移组的HIF-1α mRNA(3.85±0.42)和circ_0014130(4.36±0.44)水平均显著高于健康组和肺腺癌组(P<0.01);HIF-1α mRNA和circ_0014130的表达水平正相关(P<0.01);缺氧组的circ_0014130水平、增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组(P<0.01);si-circ_0014130组的circ_0014130水平、增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.01);缺氧+si-circ_0014130组的circ_0014130水平、增殖、迁移和侵袭能力显著低于缺氧组且显著高于si-circ_0014130组(P<0.05)。结论 缺氧可能通过促进circ_0014130促进肺腺癌的转移。

B6-Co小鼠感染角膜中TLR4/9的表达及意义

目的:研究TLR4和TLR9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达水平及意义。方法:采用Trizol法提取小鼠角膜RNA,实时荧光PCR检测目的基因mRNA表达水平;取小鼠眼球作冰冻切片,进行TLR4/9免疫荧光染色。结果:B6-Co小鼠角膜组织中TLR4/9 mRNA的表达在不同周龄阶段均高于B6小鼠,随着小鼠周龄的增加呈上升趋势,第4周和第8周TLR4表达、第8周和第16周TLR9表达与B6小鼠的差异,均有统计学意义(P<0.05)。免疫荧光显示B6-Co小鼠角膜上皮层中TLR4/9蛋白表达高于B6小鼠,在第8周荧光信号最强。结论:TLR4/9在B6-Co小鼠感染角膜中的表达上调,提示TLR4/9在角膜感染免疫应答中发挥作用。

不同化疗方案治疗多发性骨髓瘤患者的前瞻性随机对照研究

目的探讨不同化疗方案治疗多发性骨髓瘤(MM)患者对其血清血管细胞黏附因子-1(sVCAM-1)、可溶性内皮细胞间黏附因子-1(sICAM-1)、血管内皮生长因子(VEGF)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)水平,以及T淋巴细胞亚群的影响。方法根据随机数字表法将南通大学附属海安医院2016年3月至2021年8月收治的100例MM患者分为对照组和观察组,各50例。两组患者入院后均给予MM规范化常规治疗,在此基础上,给予对照组患者长春新碱+多柔比星+地塞米松(VAD化疗方案)化疗,给予观察组患者硼替佐米+环磷酰胺+地塞米松(PCD化疗方案)化疗,均以21 d为1个疗程,两组患者均治疗3个疗程。比较两组患者的临床疗效,治疗前后血清sVCAM-1、sICAM-1、VEGF、β_(2)-MG水平,全血T淋巴细胞亚群水平,以及治疗期间不良反应发生情况。结果观察组患者总有效率显著高于对照组;与治疗前比,治疗后,两组患者血清sVCAM-1、sICAM-1、VEGF、β_(2)-MG水平,以及CD4^(+)CD25^(+)T细胞百分比、CD4^(+)CD25^(+)/CD4^(+)比值均显著降低,且观察组显著低于对照组(均P<0.05);两组患者不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论与VAD化疗方案相比,PCD化疗方案的临床疗效显著,更有利于改善MM患者的免疫功能,减轻对其肾功能的损害,抑制癌组织新生血管生成,阻止疾病的持续进展,但两种化疗方案均有一定程度的不良反应,治疗时需注意严格控制药物剂量。

中性粒细胞淋巴细胞比值、脂蛋白相关磷脂酶A2与2型糖尿病伴冠心病的相关性研究

目的:探讨中性粒细胞淋巴细胞比值(neutrophil-lymphocyte ratio, NLR)、脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein associated phospholipase A2,Lp-PLA2)与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus, T2DM)伴冠心病(coronary artery disease, CAD)的相关性。方法:前瞻性选取2020年01月20日至2021年6月18日在海安市人民医院接受治疗的70例T2DM患者作为研究对象,根据是否合并CAD分为T2DM组和T2DM+CAD组,再选取同期接受体检的35例健康体检者作为对照观察(Control组)。收集研究对象的一般资料及实验室指标,采用多因素Logistic回归分析T2DM并发CAD的危险因素,并采用ROC曲线分析NLR和Lp-PLA2的预测价值。结果多因素Logistic回归分析显示,CHR(OR=1.028)、NLR(OR=9.263)、Lp-PLA2(OR=4.152)是T2DM伴CAD的独立危险因素(均P<0.05);ROC曲线显示,NLR、Lp-PLA2联合预测的诊断效能较高,其AUC为0.950,敏感性为85.26%,特异性为89.06%。结论:NLR、Lp-PLA2可能是T2DM伴CAD的预测指标,可能可用于鉴别诊断合并CAD的T2DM患者。

TK1联合“TrxR活性检测”在食管癌临床诊断中的应用研究

探究胸苷激酶1(TK1)联合硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性检测在食管癌临床诊断中的应用价值。方法:2020年4月至2021年6月期间分别收集我院50例食管炎症性疾病(设为炎症组)、食管癌(设为癌症组)患者的血样本,并另选择同期50例健康体检者设为对照组。采用NRM411全自动化学发光测定仪检测血清TK1水平;采用KEA-TR100检测仪测定血浆TrxR活性,比较各组血清TK1值、血浆TrxR活性水平的差异,并应用ROC曲线分析TK1、TrxR活性水平单独、联合检测对食管癌的诊断效能。结果:三组血清TK1水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。而癌症组的血浆TrxR活性水平显著高于炎症组、对照组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,TK1、TrxR活性水平联合检测的灵敏度、曲线下面积高于单一检测。结论:血清TK1检测特异性较高,血浆TrxR活性检测灵敏度较高,两者联合检测优势互补,应用于食管癌诊断中能够提高诊断准确性,具有较高的临床价值。

海安市人民医院活动性肺结核患者利福平耐药现状及流行病学特征

目的调查海安市人民医院活动性肺结核住院患者利福平耐药现状及流行情况,为活动性肺结核的防治提供理论依据。方法收集2021—2022年海安市人民医院收治入院的活动性肺结核患者病历资料,对患者进行胸部影像学和病原学检查及结核感染T细胞检测,通过比例法药物敏感性试验检测利福平敏感患者。结果共收集到活动性肺结核患者235例,男性占80.85%;26~59岁患者占62.13%;农民患者占59.57%,已婚患者占69.79%。病原学阳性199例,占84.68%,2021年出现利福平耐药患者1例(0.89%),2022年2例(1.63%),总利福平耐药率为1.28%,病原学阳性肺结核患者利福平耐药率则为1.51%。新发病原学阳性患者利福平耐药率(0.00%)低于复治病原学阳性患者(2.52%),但差异无统计学意义(χ^(2)=2.0477,P=0.1524)。结论本地区复治病原学阳性肺结核患者及26~59岁病原学阳性肺结核患者的利福平耐药率更高,应将防治重点放在青壮年人群。

群文阅读在小学语文阅读教学中的运用探析

对于群文阅读教学而言,它就是在规定时间内,教师引导学生们对多篇文章进行阅读的教学过程。通过将群文阅读教学积极地运用到小学语文阅读教学活动中,可以使原有传统的教学模式所展现出的缺陷以及不足得以有效解决。在学生阅读过程中,学生阅读量的多少以及阅读速度的快慢是非常重要的,同时,学生们要对自身原有的知识进行重新架构,横向对比所阅读的多篇文章,从而使学生们的语文素养得以全方位培养,其具有十分积极的现实意义。

饱和氢盐水对短暂性脑缺血再灌注损伤小鼠海马PERK/eIF2α/ATF4信号通路的影响

目的探讨饱和氢盐水对短暂性脑缺血再灌注损伤小鼠海马PERK/eIF2α/ATF4信号通路的影响。方法选择SPF级健康♂C57BL/6小鼠150只,采用随机数字表法将其分为5组(n=30):对照组、假手术组、脑缺血再灌注组、饱和氢盐水治疗组和生理盐水治疗组。于再灌注12,24 h行神经行为学评分,然后处死小鼠取海马组织,采用TUNEL法测定海马CA1区细胞凋亡指数,分别采用Western blotting和Real-time PCR法测定海马PERK、eIF2α、ATF4、CHOP和caspase-3及其mRNA的表达水平。结果与对照组、假手术组相比,脑缺血再灌注组、饱和氢盐水治疗组和生理盐水治疗组小鼠神经行为学评分升高,海马CA1区神经细胞凋亡指数升高,海马PERK、eIF2α、ATF4、CHOP和caspase-3及其mRNA的表达上调(P均<0.05);与脑缺血再灌注组、生理盐水治疗组相比,饱和氢盐水治疗组小鼠神经行为学评分降低,海马CA1区神经细胞凋亡指数降低,PERK、eIF2α、ATF4、CHOP和caspase-3及其mRNA的表达下调(P均<0.05)。结论饱和氢盐水可改善小鼠短暂性脑缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制海马PERK/eIF2α/ATF4信号通路有关。

TIM-3靶向NF-κB调控急性髓系白血病的机制

[目的]研究细胞T细胞免疫球蛋白及粘蛋白-3(TIM-3)靶向核因子κB(NF-κB)调控急性髓系白血病增殖途径。[方法]选取收治的42例急性骨髓系白血病患者为研究对象,收集患者新鲜骨髓标本,培养THP-1细胞T细胞免疫球蛋白、粘蛋白-3(TIM-3),转染阴性对照(NC)模拟物、TIM-3模拟物、NC抑制物、TIM-3抑制物后以荧光定量PCR法对TIM-3、NF-κB表达量进行测定,以四氮唑蓝盐化合物(MTS)法对细胞增殖活力OD_(540)值进行测定;以末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末端标记测定法对细胞凋亡率进行检测。采用荧光素酶报告基因验证TIM-3与NF-κB基因的靶向结合。[结果]TIM-3模拟物组TIM-3表达量和OD_(540)水平均显著高于NC模拟物组,细胞凋亡率显著低于NC模拟组(P<0.05);TIM-3抑制物组TIM-3表达量和OD_(540)水平均显著低于NC抑制物组,细胞凋亡率显著高于NC抑制物组(P<0.05);TIM-3模拟物组NF-κB表达量显著高于NC模拟物组(P<0.05);TIM-3抑制物组NF-κB表达量显著高于NC抑制物组(P<0.05);TIM-3模拟物组细胞内NF-κB荧光素酶报告基因荧光活性显著高于NC模拟物组(P<0.05)。[结论]TIM-3可促进急性髓系白血病细胞增殖活力OD_(540)值升高,降低细胞凋亡率以及NF-κB表达量。