孟鲁司特治疗儿童支气管哮喘的临床疗效及肺功能和细胞因子变化研究

目的探讨孟鲁司特治疗儿童支气管哮喘的临床疗效及其与肺功能、核因子（NF）-κB、白介素（IL）-6、IL-8水平的关系。方法选取2012年7月—2013年7月广东医学院附属医院儿童医学中心就诊的8-14岁支气管哮喘患儿82例,采用随机数字表法分为对照组40例,治疗组42例。两组患儿均给予布地奈德雾化、辅以化痰止咳治疗,喘息加重时加以β-受体激动药雾化,有细菌感染时加用抗菌药物;治疗组在此基础上,加用孟鲁司特钠咀嚼片5 mg/d,连续服药12周。观察两组患儿临床疗效,检测肺功能,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测NF-κB、IL-6、IL-8水平。结果治疗后,对照组支气管哮喘未控制10例、部分控制10例、控制20例,治疗组未控制4例、部分控制5例、控制33例,两组临床疗效比较,差异有统计学意义（u=-2.680,P=0.007）。治疗前,两组患儿第1秒用力呼气末容积（FEV1）、用力呼气流量（PEF）、NF-κB、IL-6、IL-8水平比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;治疗后,治疗组患儿FEV1、PEF较对照组升高（P〈0.05）,治疗组患儿NF-κB、IL-6、IL-8水平较对照组降低（P〈0.05）。结论孟鲁司特明显改善支气管哮喘患儿症状与体征,提高肺功能,同时可以降低NF-κB、IL-6、IL-8水平。

PM2.5通过线粒体介导的大鼠心肌细胞损伤作用机制的初步研究

目的 初步探讨PM2.5对大鼠心肌细胞的损害及线粒体介导的相关作用机制.方法 培养大鼠心肌细胞株H9C2细胞,给予PM2.5刺激,24 h后检查肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）,比色法检测线粒体的活性氧（ROS）和ATP酶的活性,流式细胞仪检测线粒体肿胀度及膜电位.结果 PM2.5组心肌细胞CK和LDH明显升高[（702±80）U/ml比（987±92）U/ml,（339±72）U/L比（485±84）U/L）],ATP酶活性下降明显[（34.2±5.2）U/mgprot比（54.1±6.9） U/mgprot],细胞内ROS明显增多[（67.2±8.2）U/well比（25.4±7.3） U/well],差异均有统计学意义（P＜0.05）.同时PM2.5组心肌细胞线粒体明显肿胀,线粒体膜电位明显下降（0.3476±0.1232比0.6476±0.1021）,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 PM2.5可以导致心肌细胞损伤,其机制可能与PM2.5损害线粒体的结构与功能相关.

解偶联蛋白2在PM2.5所致的氧化应激损伤心肌细胞中的作用机制探讨

目的:初步探讨解偶联蛋白2(UCP2)在PM2.5致心肌细胞氧化应激损伤中的作用。方法:培养大鼠心肌细胞株H9C2细胞,分为NC组、PM2.5组、PM2.5+si RNA组三组,分别给予常规的培养基、PM2.5培养基、si RNA+PM2.5培养基刺激,48 h后比色法检测线粒体的活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽(GSH)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:PM2.5组心肌细胞内ROS、MDA含量、GSH含量、SOD活性分别为(69.2±6.3)U/Well、(68.33±1.96)nmol/mgprot、(533.05±10.83)mg/gprot、(50.37±1.98)U/mgprot,PM2.5+si RNA组心肌细胞内ROS(90.2±6.2)U/Well明显增多、MDA含量(88.44±1.27)nmol/mgprot明显升高,GSH含量(421.17±16.90mg/gprot)明显减少,SOD活性(30.09±2.02)U/mgprot明显降低。三组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:PM2.5可以通过氧化应激途径损伤心肌细胞,RNA干扰UCP2基因表达后,PM2.5致氧化应激增强所介导的心肌细胞损伤加剧,这提示UCP2在PM2.5致氧化应激心肌损伤过程中可能起着保护性作用。

解偶联蛋白2在PM2.5致心肌细胞损伤中作用机制的初步探讨

目的初步探讨解偶联蛋白2(UCP2)在PM2.5致心肌细胞损伤中的作用。方法培养大鼠心肌细胞株H9C2细胞,给予si RNA和(或)PM2.5刺激,48h后检查肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH),RTPCR及Western Blot检测UCP2基因转录及蛋白水平,比色法检测线粒体的活性氧(ROS)和ATP酶的活性。结果与PM2.5组相比,PM2.5+si RNA组心肌细胞CK和LDH明显升高(969±21 vs 747±29U/m L,1071±59 vs 877±47U/L),ATP酶活性下降明显(24.7±4.7 vs 40.2±4.9U/mgprot),细胞内ROS明显增多(90.2±6.2 vs 69.2±6.3U/Well),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 PM2.5可以导致UCP2基因表达代偿性增多及心肌细胞损伤;RNA干扰沉默UCP2基因,会导致心肌损伤进一步加重;提示UCP2在PM2.5致心肌损伤过程中可能起着保护作用。

IL-17与IL-4基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和IgE的关系

目的探讨白细胞介素-17(L-17)与白细胞介素-4(IL-4)基因遗传多态性与儿童哮喘易感性及外周血IL-17、IL-4和Ig E的关系。方法通过采用PCR-RFLP技术检测分析60例哮喘儿童(哮喘组)和72例体检正常儿童(对照组)的IL-17以及IL-4基因的多态性,以及采用免疫组化ELISA方法检测血清中IL-17、IL-4以及总Ig E的含量,对两组患儿的检测数据进行统计比较。结果在单个基因位点多态性分析时,发现两组儿童的IL-17基因rs763780(TT,TC,cc)位点以及IL-4基因-33C/T位点的基因型和等位基因频率分布,差异有统计学意义(P<0.05);哮喘组患儿血清中IL-17含量为(3576.00±271.38)ng/L,IL-4含量为(4923.00±328.70)ng/L,总Ig E含量为(159.32±19.49)μg/m L,对照组IL-17含量为(1045.31±73.35)ng/L;IL-4含量为(897.62±51.39)ng/L;总Ig E含量为(42.16±7.45)μg/m L,哮喘组3组数据均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-4基因-33C/T基因型可能是儿童容易发生哮喘的基因型,而且IL-17F基因的突变可能在哮喘的发生发展中也起着重要的作用,-33位点多态性与IL-4表达水平相关。

解偶联蛋白2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用

目的:探讨解偶联蛋白2(UCP2)过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用,阐明其作用机制。方法:构建UCP2过表达的H9C2心肌细胞。H9C2心肌细胞随机分为正常对照组、脂多糖/聚糖肽(LPS/PepG)刺激组、空病毒组和过表达组,除正常对照组外其余各组予LPS/PepG刺激。采用RT-PCR和Western blotting法检测各组心肌细胞中UCP2mRNA和蛋白表达水平,采用分光光度计法和ELISA法检测脓毒症心肌细胞模型建立指标肌酸激酶(CK)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,采用电镜观察各组心肌细胞线粒体形态表现,采用流式细胞术检测各组心肌细胞线粒体膜电位(MMP)水平,采用多功能酶标仪检测各组心肌细胞线粒体活性氧(ROS)和三磷酸腺苷(ATP)水平。结果:与正常对照组比较,LPS/PepG刺激组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显升高(P<0.05),且线粒体形态明显损害,MMP水平明显降低(P<0.05),线粒体ROS水平明显升高(P<0.05),ATP水平明显降低(P<0.05);与LPS/PepG刺激组比较,过表达组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显降低(P<0.05),且线粒体形态结构明显好转,MMP水平明显升高(P<0.05),线粒体ROS水平明显降低(P<0.05),ATP水平明显升高(P<0.05);与LPS/PepG刺激组比较,空病毒组心肌细胞中CK、TNF-α、MMP、ROS和ATP水平差异均无统计学意义(P>0.05),线粒体肿胀度无明显改变。结论:UCP2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体有保护作用,其机制可能与UCP2通过解偶联作用调控膜电位,进而影响ROS和ATP的合成有关。

移动体外膜肺氧合在小儿急性呼吸窘迫综合征院际转运中的应用:7例回顾性病例研究

目的探讨移动体外膜肺氧合(ECMO)在小儿急性呼吸窘迫综合征(pARDS)院际转运中的应用情况及其安全性。方法回顾性分析2019年1月1日-11月25日广东省人民医院通过移动ECMO转运的pARDS患儿。所有患儿均为严重的ARDS,在当地医院治疗效果欠佳,经机械通气、小潮气量保护性通气、俯卧位通气、限制液体等传统的非手术治疗方案处理,病情仍然进展,病变严重程度达到适用ECMO的指征。收集并分析所有患儿的年龄、性别、临床表现、ECMO转运时间、ECMO转运距离、ECMO支持时间、机械通气时间、住院时间、预后及并发症发生情况等指标。结果共7例患儿纳入研究,男6例,女1例,年龄(43.3±42.9)个月,体重(18.4±17.7)kg,ECMO转运距离为(9.4±8.9)km,ECMO转运时间为(35.7±17.2)min。抵达广东省人民医院后,目前4例治愈出院,1例还在继续治疗中,2例死亡。机械通气时间为(17±11)d,ECMO支持时间为(307.4±233.6)h,住院时间为(23±15)d。pARDS患儿中4例为腺病毒感染,3例病原菌不明确。2例死亡患儿中,1例死亡原因为严重脓毒症休克合并严重心功能障碍,1例死亡原因为严重肺出血。结论在具备技术娴熟的ECMO团队的条件下,pARDS患儿的移动ECMO院际转运是安全有效的。移动ECMO为救治儿童呼吸危重症提供了很好的手段。

单纯疱疹病毒脑炎继发抗N-甲基-D-天冬氨酸受体脑炎患儿3例临床分析

目的分析儿童单纯疱疹病毒脑炎继发抗N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)脑炎的临床特点、治疗及转归情况。方法收集我科收治的3例单纯疱疹病毒脑炎继发抗NMDAR脑炎患儿临床资料,其中男2例、女1例,年龄分别为1岁9个月、10岁和4岁。结果3例患儿均表现为抽搐起病,伴意识改变、行为异常,脑脊液单纯疱疹病毒Ⅰ型均为阳性。3例患儿予抗病毒及对症处理后病情均有好转,但分别于病程1周至1个月后病情再次加重,脑脊液NMDAR抗体均呈阳性。经积极对症治疗后,2例患儿恢复较好,1例放弃治疗后死亡。结论单纯疱疹病毒脑炎可发展至抗NMDAR脑炎,动态检测NMDAR抗体有助于早期识别单纯疱疹病毒脑炎后自身免疫性脑炎的发生,从而进行早期干预。

儿童先天性心脏病术后静脉-动脉体外膜肺氧合治疗期间营养干预策略探讨

目的探讨不同营养干预策略对先天性心脏病术后行静脉-动脉体外膜肺氧合(VA-ECMO)治疗患儿临床结局的影响。方法回顾性分析2015年1月至2021年1月在广东省人民医院行先天性心脏病手术并接受VA-ECMO治疗的58例患儿的临床资料。根据营养干预策略将患儿分为肠内营养(EN)组15例,肠外营养(PN)组33例和混合营养(EN+PN)组10例;根据EN干预时机分为早期EN组9例和晚期EN组16例。主要结局为住院死亡率,次要结局为住ICU时间、总住院时间、新发感染及消化道并发症发生率。比较不同营养干预策略及EN干预时机的临床结局。结果EN组、EN+PN组和PN组的住院死亡率、住ICU时间、总住院时间、新发感染率比较差异均无统计学意义(P>0.05),三组消化道并发症发生率比较差异有统计学意义(P<0.05)。早期EN组和晚期EN组的住院死亡率、住ICU时间、总住院时间、新发感染率以及消化道并发症发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论EN或EN+PN增加消化道并发症,不增加住院死亡率、住ICU时间、总住院时间及新发感染率。EN启动时机对临床结局无影响。

先天性心脏病患者术后血流感染病原菌分布及耐药性分析

目的了解先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)患者术后血流感染(blood stream infections,BSIs)病原菌分布及其耐药性,为合理选用抗菌素提供参考。方法回顾性分析2012年1月至2021年12月广东省人民医院CHD术后BSIs患者微生物学和药敏资料。结果76例患者共检出77株病原菌,其中革兰阳性(G+)菌44株(57.14%),革兰阴性(G-)菌25株(32.47%),真菌8株(10.39%);男女比例为1.81∶1,男49例(64.47%),女27例(35.53%);1~6个月龄59例(77.63%),7~12个月龄9例(11.84%),>1岁8例(10.53%),年龄中位数3.0(1.0~6.0)个月;简单型CHD 42例(55.26%),复杂型CHD34例(44.74%);术后<7 d发生BSIs 37例(48.68%),7~14 d 22例(28.95%),>14 d 17例(22.37%);主要病原菌为凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative Staphylococci,CoNS)(24株,31.17%)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)(11株,14.29%)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN)(11株,14.29%)、鲍曼氏不动杆菌(4株,5.19%)、粪肠球菌(4株,5.19%)、白色念珠菌(3株,3.90%)和产气肠杆菌(3株,3.90%);其中简单型CHD以CoNS及SA为主,复杂型CHD以CoNS、KPN为主;革兰阳性菌以Co NS为主,万古霉素100%敏感;革兰阴性菌以KPN为主,产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrumβ-lactamase,ESBLs)占63.64%,碳青霉烯类抗生素敏感率最高,真菌主要为白色念珠菌,氟康唑、两性霉素B、5-氟胞嘧啶、伏立康唑、伊曲康唑100%敏感。存活出院74例(97.37%),院内死亡2例(2.63%)。结论CHD术后BSIs主要病原菌为CoNS、KPN和白色念珠菌;近10年,耐甲氧西林的(methicillin-resistant,MR)CoNS、MRSA对万古霉素保持高度敏感,ESBLs-KPN对碳青霉烯类抗生素敏感性有下降趋势;糖肽类、碳青霉烯类抗生素和三唑类抗真菌药物分别为革兰阳性菌、革兰阴性菌和真菌BSIs经验治疗的首选。

儿童院内心脏骤停预后预测模型的建立及评价

目的 分析住院儿童发生心脏骤停预后的相关危险因素,构建并评价预测儿童院内心脏骤停预后的列线图模型。方法 纳入2009年1月至2020年12月广东省人民医院发生院内心脏骤停患儿,根据出院结局分为存活组和死亡组,比较两组患儿的相关临床资料,采用多因素Logistic回归分析儿童院内心脏骤停预后的独立危险因素,应用R软件构建预测儿童院内心脏骤停预后的列线图模型,采用Bootstrap法进行模型内部验证,通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC)、校正曲线评估模型效能。结果 75例患儿中存活29例(38.7%),死亡46例(61.3%)。单因素分析结果显示,两组患儿年龄、合并心力衰竭、肝功能不全、儿童序贯器官衰竭评分(pediatric sequential organ failure assessment,p SOFA)、血管活性药物评分(vasoactive-inotropic score,VIS)、心肺复苏持续时间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,pSOFA(OR=1.268,95%CI:1.005~1.601)、心肺复苏持续时间10~30 min(OR=8.032,95%CI:1.487~43.378)、心肺复苏持续时间>30 min(OR=46.263,95%CI:7.588~282.074)是儿童院内心脏骤停死亡的独立危险因素(P<0.05)。基于影响儿童院内心脏骤停预后的独立危险因素建立列线图模型,列线图模型的ROC曲线下面积为0.881(95%CI:0.803~0.959),内部验证得到校正曲线趋近于理想曲线,Hosmer-Lemeshow拟合优度检验结果示列线图模型的一致性良好(χ;=4.805,P=0.684)。结论 基于pSOFA及心肺复苏持续时间的独立危险因素构建预测儿童院内心脏骤停预后的列线图模型,具有良好的区分度与校准度。

以肺动脉高压为首发表现的先天性中枢性低通气综合征临床特征和基因分析

目的探讨先天性中枢性低通气综合征(CCHS)的临床和基因变异特征。方法分析1例首发表现为不明原因肺动脉高压的CCHS患儿的临床资料,并总结国内外文献中CCHS病例的临床特点、致病机制和基因变异情况。结果11月龄女婴,主要表现为浮肿、尿少、低血压、嗜睡、发绀、抽搐及颅内压增高。B型脑利钠肽、丙氨酸氨基转移酶升高,凝血酶原时间延长。颅脑磁共振示右侧额叶出血;超声心动图示中重度肺动脉高压。靶向捕获二代测序未发现可能的致病基因。采用Sanger法验证示患儿PHOX 2 B基因第3外显子存在多聚丙氨酸重复扩展变异,基因型为20/25。患儿入院后采用无创通气,睡眠时呼吸浅慢、微弱,伴血氧下降;血气分析提示二氧化碳潴留。随后改用夜间无创通气、降肺压药物治疗。复查肺动脉压力明显下降,生命体征稳定。随访至24月龄,夜间只需较低压力水平的无创通气,生长发育无异常。结论对于不明原因的肺动脉高压伴撤机困难患儿,需警惕CCHS。疑诊者应尽早针对CCHS相关基因进行靶向捕获二代测序及PHOX 2 B基因Sanger法验证。早期给予无创通气有望改善预后。

体外膜氧合治疗儿童急性暴发性心肌炎的临床观察

目的探讨体外膜氧合(ECMO)在儿童急性暴发性心肌炎中的临床应用。方法回顾性分析2015年7月至2020年2月在本院儿童ICU因急性暴发性心肌炎接受ECMO治疗的重症患儿的临床资料,包括临床表现、心电图、超声心动图、心肌生化标志物、ECMO的应用、治疗效果及预后。结果共4例患儿男1例,女3例;年龄1.8~9岁;体质量10.8~45 kg;ECMO治疗前血管活性药物评分20~70分;入院至ECMO启动时间0~19 h,ECMO运行时间86~222 h;起病至入ICU时间2~4d;住ICU时间15~37 d;住院时间22~45 d。4例患儿均为恶性心律失常,其中心搏骤停3例,难治性休克1例。ECMO均采用静脉-动脉模式,2例为长时间在ECMO辅助下行CPR(120 min、144 min),2例行连续性肾脏替代治疗时间分别为305 h、498 h;4例ECMO治疗后心功能、心肌损伤及心衰标志物、肝肾功能等指标均较前有明显改善。4例均未发生机械相关并发症,机体相关并发症主要为出血3例,感染3例(泌尿道、菌血症、肺炎),多器官功能障碍2例,急性肾损伤Ⅲ期2例,溶血1例。4例均成功脱离ECMO并存活出院,撤机成功率100%,生存出院率100%。随访2月~4年,4例心功能全部正常,儿童脑功能分类量表评分均为1级,正常。结论ECMO能明显提高急性暴发性心肌炎患儿生存率;把握合适的ECMO介入时机是提高院内心搏骤停患儿治疗成功率及改善预后的关键。

先天性心脏病术后人细小病毒B19感染患儿的临床特征分析

目的总结小儿先天性心脏病(congenital heart disease,CHD)术后人细小病毒B19(human parvovirus B19,HPV-B19)感染患儿的临床特点、治疗及转归。方法回顾性分析2019年6月至2021年6月广东省人民医院儿科重症监护室(pediatric intensive care unit,PICU)确诊的CHD术后HPV-B19感染患儿的临床表现、诊断及治疗。结果10例HPV-B19感染患儿中,男4例,女6例;年龄为0.84(0.3~9.0)岁;体质量为9.0(3.5~14.5)kg。10例患儿均出现发热,高热为主,无伴有明显中毒症状,同时伴发贫血突然加重。2例躯干弥漫充血性皮疹;4例轻度贫血,6例中度贫血;4例白细胞减少,2例粒细胞缺乏,1例粒细胞减少;5例血小板减少;1例血细胞三系减少;3例骨髓增生减低;3例单纯红系增生减低。于术后第12.8(7~23.0)天分别行定量聚合酶链反应(qPCR)检测呈阳性。9例给予静脉输注丙种球蛋白(intravenous injection of gamma globulin,IVIG)治疗,输注量466.7(300~700)mg·kg^(-1)·d^(-1),疗程2~5 d,另外1例仅需输注浓缩红细胞及对症治疗;8例应用IVIG后于第4.4(2~9)天(内热退,3例第4.3(2~7)天血小板恢复正常,4例第5.3(3~8)天白细胞恢复正常,4例第12.5(5~17)天血红蛋白逐渐恢复,5例应用IVIG前输注了浓缩红细胞血红蛋白无继续下降;8例第13.0(7~23)天动态检测HPV-B19病毒载量,7例应用IVIG后定量聚合酶链反应检测提示HPV-B19拷贝数下降,1例拷贝数降为0 copies/mL,1例应用IVIG前检测提示拷贝数仍升高。治愈出院9例,1例死于心源性休克。结论小儿CHD术后早期不明原因发热伴白细胞减少、贫血加重者,应警惕感染HPV-B19;确诊后尽早使用IVIG有助于促进康复。

红-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉压力和内源性腺苷的影响

目的观察红-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤(EHNA)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠肺动脉压力和内源性腺苷水平的影响,了解HPH与内源性腺苷水平的关系。方法 24只SD大鼠随机分为常氧组、低氧组和低氧+EHNA组,每组8只。低氧组和低氧+EHNA组大鼠每天置于含氧体积分数为(100±5)mL.L-1、二氧化碳体积分数<1mL.L-1的大型玻璃箱中,在缺氧3d后分别腹腔注射等量9g.L-1盐水和EHNA(30mg.kg-1.d-1)连续4d。常氧组大鼠在自然空气条件下饲养。于实验第8天将大鼠麻醉,右颈外静脉插管,利用四道生理记录仪测定每只大鼠的平均肺动脉压(mPAP);完成压力测量后,左心室取血,采用高效液相色谱仪检测其血浆中腺苷水平。结果低氧组mPAP水平[(16.50±2.43)mmHg,1mmHg=0.133kPa]及内源性腺苷水平[(24.75±3.08)mg.L-1]均显著高于常氧组[(11.25±1.75)mmHg,(11.50±2.05)mg.L-1](Pa<0.01);低氧+EHNA组内源性腺苷水平[(8.58±1.90)mg.L-1]低于低氧组,而mPAP[(19.64±3.44)mmHg]显著高于低氧组(Pa<0.01)。结论 EHNA导致HPH大鼠肺动脉压力进一步升高,可能与其降低血浆内源性腺苷水平有关。

脓毒症相关性脑病远期脑线粒体损伤与氧化应激的关系

目的探讨脓毒症相关性脑病（SAE）远期脑线粒体损伤与氧化应激的关系。方法通过腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS）建立脓毒症模型。出现SAE症状的大鼠（SAE组）及对照组大鼠分别在相应时间点进行神经反射评估后处死，取脑组织提取线粒体。通过流式细胞仪检测线粒体膜电位（MMP）及活性氧（ROS），通过酶标仪检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和一氧化氮（NO）水平。结果神经反射评估在12h已经开始下降，并缓慢恢复。MMP在腹腔注射LPS后明显下降，48h降至最低，差异有统计学意义（F=75．785，P〈0．05），72h部分恢复；ROS48h明显升高伴随SOD的明显下降，差异均有统计学意义（F=111．274，21．808，P均〈0．05），72h部分恢复；MDA、iNOS和NO48h增加达到峰值，差异均有统计学意义（F=21．955、61．076、21．184，P均〈0．05），72h部分恢复。脓毒症大鼠脑组织线粒体SOD活性与MMP呈强正相关关系（r=0．856，P〈0．05）；脓毒症大鼠脑组织线粒体ROS水平、MDA水平、iNOS活性和NO水平与MMP呈强负相关关系（r=-0．852、-0．890、-0．940、-0．794，P均〈0．05）。结论在SAE模型中，脑线粒体损伤的高峰可能发生在48h左右，氧化应激的明显增强可能是导致远期线粒体功能障碍的原因之一。

微小RNA-30e在脓毒症急性肺损伤大鼠中的表达及其与炎性因子水平的相关性

目的从体内和体外实验2个方面探讨微小RNA-30e（miR-30e）在脓毒症诱导急性肺损伤（ALI）发生时的差异表达及其与炎性因子IL-1β、TNF—α表达的相关性。方法30只雄性SD大鼠随机等量分为5组：正常对照组，脓毒症3、6、12、24h组，腹腔注射脂多糖（LPS）10mg／kg构建脓毒症大鼠ALI模型。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383，分为空白对照组和以终质量浓度1mg／LLPS刺激3、6、12及24h组，采用反转录聚合酶链反应检测IL-1β、TNF-α及miR-30e表达水平，并观察大鼠肺组织病理改变。结果脓毒症组大鼠肺组织中IL-1β、TNF-α水平均较正常对照组明显上调，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；HE染色示脓毒症组大鼠肺组织呈ALl改变；脓毒症组大鼠3、6、12、24h肺组织miR-30e表达水平分别为0．26±0．02、0．41±0．08、0．29±0．05和0．18±0．05，均明显低于正常对照组（1．23±0．24），差异均有统计学意义（P均〈0．01）；NR8383细胞中，与空白对照相比，LPS刺激不同时间点炎性因子IL-1β、TNF—α水平均明显上调，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；LPS刺激3、6、12、24h时间点细胞中miR-30e表达水平分别为0．27±0．04、0．55±0．05、0．65±0．02、0．41±0．10，均明显低于空白对照组（1．17±0．21），差异均有统计学意义（P均〈0．01）；各实验组大鼠肺组织中miR-30e的表达与IL-1β、TNF-α水平均呈负相关（IL-1B：r=-0．417，P=0．022；TNF．Or．：r=-0．437，P=0．016）；LPS刺激NR8383细胞后不同时间点细胞中miR-30e的表达与IL-1β、TNF-α水平亦均呈负相关（IL-1β：r=-0．713，P=0．003；TNF-α：r=-0．712，P=0．002）。结论miR-30e在脓毒症大鼠诱导ALI发生时的表达量显著下调，并与炎性因子IL-1β、TNF-α表达水平呈负相关，有望成为脓毒症ALl早期诊断、治疗、预后评估新的生物学标志。

脂多糖诱导脓毒症大鼠远期脑线粒体损伤的初步研究

目的初步探讨脓毒症大鼠远期脑线粒体结构和功能损伤。方法将Wistar大鼠随机分为对照组和脓毒症组,通过腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS,10 mg/kg）建立脓毒症大鼠模型并进行生存率实验。脓毒症组大鼠分别在腹腔注射革兰阴性菌LPS后12、24、48和72 h各处死8只,对照组大鼠（n=8）在给予等量生理盐水腹腔注射后处死,取脑组织提取线粒体。通过流式细胞仪检测线粒体膜电位（MMP）及线粒体肿胀度,使用试剂盒检测呼吸链复合物酶（Ⅰ~Ⅴ）活性。通过苏木精-伊红（HE）染色及电镜观察脑组织和线粒体形态学变化。结果脓毒症组较对照组生存率明显下降（P〈0.01）。脓毒症组MMP和呼吸链复合物酶（Ⅰ~Ⅴ）活性较对照组明显下降（P〈0.05）,48 h降至最低,72 h部分恢复;脓毒症组线粒体肿胀度较对照组明显升高（P〈0.05）,48 h达到峰值,72 h部分恢复;HE染色可见脑组织结构明显破坏,同时电镜结果观察到线粒体肿胀,少量线粒体出现＂空泡样变＂。结论在LPS诱导脓毒症大鼠模型中,脑线粒体结构和功能均受损,损伤高峰可能发生在48 h左右。

酪氨酸激酶Src和酪氨酸磷酸酶SHP-2在脓毒症相关性脑病中的变化及其意义

目的研究酪氨酸激酶Src和酪氨酸磷酸酶SHP．2在脓毒症相关性脑病中的变化及其意义。方法Wistar大鼠88只按照随机数字表法分为脓毒症组m=80）和对照组（n=8）。脓毒症组大鼠通过腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS）10mg／kg建立脓毒症相关性脑病模型（32只大鼠成功建模），并分别在建模后6h、12h、24h和48h处死大鼠并取脑组织。对照组大鼠给予腹腔注射10mg／kg0．9％生理盐水后即刻处死，取脑组织作为对照组标本。通过Westernblotting、实时定量PCR（RT．PCRl和免疫荧光染色法观察Src和SHP．2蛋白及mRNA的变化。比较给予活性Src和SHP-2蛋白与线粒体蛋白反应前后呼吸链复合物酶活性的变化情况。结果Westernblotting、RT-PCR结果显示脓毒症组大鼠Src在6h出现明显的下降，持续至48h；同时间段SHP-2则出现明显的上升，与对照组比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光染色结果也显示48h脓毒症组大鼠Src表达较对照组明显下降，而SHP-2表达则明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与活性Src蛋白反应后．48h脓毒症组大鼠呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ酶活性明显升高，与活性SHP-2蛋白反应后呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ酶活性明显下降，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论脓毒症相关性脑病模型中，酪氨酸激酶Src和酪氨酸磷酸酶SHP-2可能是通过下调线粒体蛋白磷酸化降低了线粒体呼吸锛复合物酶活性．从而导致线粒体功能障碍。

持续输注异丙肾上腺素对早期脓毒症大鼠心肌线粒体的保护作用及其机制

目的探讨持续输注不同剂量异丙肾上腺素（ISO）对早期脓毒症大鼠心肌线粒体的保护作用及其机制。方法30只SD雄性大鼠按随机数字表法分为5组（每组各6只）：对照组，内毒素组和ISO低、中、高剂量组。内毒素组腹腔注射脂多糖（LPS）10mg／kg同时持续输注9g／L盐水1mL／h；ISO低、中、高剂量组腹腔注射LPS10mg／kg同时分别持续输注IS00．06、0．30和0．60μg／（kg·min）；对照组腹腔注射同时持续输注与其他组等体积的9g／L盐水。腹腔注射9g／L盐水或LPS后24h检测血清肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌线粒体氧化氮化应激水平和线粒体肿胀度，并观察心肌组织病理改变（HE染色）和线粒体形态学改变。结果与对照组比较，内毒素组CK、CK-MB、一氧化氮（NO）含量、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活力和丙二醛（MDA）含量均升高（P均〈0．05），超氧化物歧化酶（SOD）活力降低[（11．543±1．080）U／mgprot比（9．892±0．815）U／mgprot，P〈0．05]；HE染色示心肌组织呈炎症改变；线粒体超微结构异常（线粒体肿胀等）。ISO干预使CK和CK—MB水平及心肌线粒体肿胀度降低（P均〈0．05），SOD活力升高（P均〈0．05）；低剂量组NO含量、iNOS活力和MDA含量降低[（10．823±2．240）μmol／gprot比（7．917±2．203）μmol／gprot，（0．045±0．008）U／mgprot比（0．033±0．003）U／ragprot，（1．663±0．618）mmol／mgprot比（0．768±0．312）mmol／mgprot，P均〈0．05]，中、高剂量组iNOS活力和MDA含量升高（P均〈0．05）；与中剂量组相比，高剂量组肿胀度升高（1．160±0．186比1．393±0．128，P〈0．05）。结论脓毒症早期大鼠心肌和心肌线粒体受损，持续低剂量ISO输注对心肌线粒体具有保护作用，其机制可能与氧化氮化应激水平降低有关。