不同剂量他汀类药物对急性心肌梗死早期治疗效果的影响

目的研究不同剂量他汀类药物的早期应用对首发急性前壁伴ST段抬高的心肌梗死患者治疗效果的影响。方法选择2011年2月至2013年2月唐山市第二医院南堡开发区分院收集的ST段抬高的急性前壁心肌梗死患者138例,采用随机数字表法分为3组,试验组A、B、C从治疗开始即使用阿托伐他汀,对应的药物剂量分别为20、40、80 mg/d,并继续使用30 d。整个试验过程中监测C反应蛋白(CRP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、低密度脂蛋白(LDL)水平变化情况。结果试验第1周内,随着用药剂量的增大,CRP值逐渐降低。用药30 d时,随着治疗时间的增加,CRP水平无明显变化。治疗1周,各组CK-MB差异无统计学意义,但30 d LDL水平降低,与其他剂量有统计学意义。结论在心肌梗死发生后,早期应用较大剂量的阿托伐他汀,可降低CRP,但对LDL降低有意义,对CK-MB影响不明显。

BNP检测在老年呼吸困难鉴别诊断中的临床意义

目的探讨老年呼吸困难患者血浆脑钠肽(BNP)水平及在鉴别诊断中的价值。方法选择我院老年出现呼吸困难的患者,通过各项检查明确为心源性呼吸困难组及非心源性呼吸困难组,检测血浆BNP和心脏超声。心源性呼吸困难组根据心脏超声LVEF分为心源性呼吸困1难组和心源性呼吸困难2组。结果心源性呼吸困难组血浆BNP浓度较非心源性呼吸困难组显著升高(P<0.01),心源性呼吸困难LVEF的各亚组患者BNP水平间差异均有统计学意义(P<0.05),且与LVEF负相关(r=-0.34,P<0.001)。结论血浆BNP测定是老年呼吸困难患者鉴别诊断标志物。

农杆菌介导向玉米茎尖导入HAL1基因的初步研究

选用玉米优良自交系郑58的茎尖为受体,研究以玉米茎尖为受体进行农杆菌转化体系的可行性。用农杆菌介导法将耐盐碱基因HAL1转入玉米中,获得70株转化苗,经过300 mg/L的除草剂(Basta)筛选,共获得9株转基因植株。进一步进行PCR检测,其中6株表现阳性,转化率达8.57%。初步证明外源基因已经整合到玉米基因组中,以玉米茎尖作为受体孢子体的转化系统可用于基因转化。

吉林省26份主推玉米杂交种的苗期耐盐碱性分析

以吉林省26个主推玉米杂交种为材料,在适宜耐盐碱筛选的2个浓度水平(25mmol/L的Na2CO3、100mmol/L的NaCl)下,利用沙培法进行种子萌发和幼苗胁迫试验,分别测定发芽率、相对电导率、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、脯氨酸(Pro)含量等适宜耐盐碱筛选的5项生理生化指标,比较上述杂交种的耐盐碱能力。结果表明:①不同材料间耐盐碱能力差异显著;②在28个玉米杂交种(包括2个对照品种郑单958和先玉335)中,耐盐碱性前五位依次为郑单958、先玉335、吉单35、四单19、吉单27;研究结果将为玉米杂交种的区域布局提供参考。

玉米杂交种郑单958及其双亲自交系耐盐碱性分析

以玉米杂交种郑单958及其双亲自交系为材料,在4个浓度水平的Na2CO3溶液(12.5、25、37.5、50mmol/L)和4个浓度水平的NaCl溶液(50、100、150、200 mmol/L)胁迫下,利用沙培法进行种子萌发和幼苗胁迫试验,分别测定发芽率、相对电导率等生理指标及脯氨酸(Pro)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量等生化指标,比较杂交种与双亲自交系之间的耐盐碱差异。结果表明:郑单958及双亲自交系耐盐碱筛选最宜浓度为25mmol/L Na2CO3和100 mmol/L NaCl溶液,且Na2CO3对于质膜透性的伤害程度大于NaCl;玉米耐盐碱筛选适宜生化指标为SOD活性、MDA含量以及Pro含量,其中Pro含量是玉米耐盐碱筛选的重要指标,其含量随Na2CO3浓度的升高显著提高;郑单958杂交种的耐盐碱性优于自交系。

无花果叶超氧化物歧化酶的分离、纯化及性质研究

以我国山东无花果树(Brunswike,原产法国Ficus carica)树叶为原料,采用缓冲液抽提、硫酸铵分级、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Sephacryl S-100HR分子筛层析分离纯化得到电泳纯CuZn-SOD,并对其酶学性质进行研究.

高分辨率溶解曲线分析技术在大豆Ecotilling中的应用

将高分辨率溶解曲线(High Resolution Melting,HRM)技术运用在大豆Ecotilling中,对256份栽培大豆的大豆异黄酮合酶基因(IFS1)的外显子区域进行SNP筛查,并采用直接测序的方法对HRM检测结果进行验证。结果表明:模板均一化后的检测效果较未均一化的检测效果差异显著,野生型样本与待测样本按1∶1及1∶4比例混样溶解曲线阈值较高,其中1∶4混样适合高通量检测。HRM对IFS1基因外显子区域的检测结果与PCR产物测序的结果比对显示,对IFS1第5段外显子和第7段外显子检测的准确率分别达到91.2%和100%,表明该研究利用HRM技术建立的栽培大豆的Ecotilling技术体系是一种高灵敏度、高通量和低成本检测SNP的新方法。

无花果蛋白酶与木瓜蛋白酶酶学性质的比较

比较了无花果蛋白酶和木瓜蛋白酶的部分酶学性质,二者均为巯基蛋白酶类,且水解底物相似.实验结果表明,无花果蛋白酶比木瓜蛋白酶的适用性更广,两者在反应温度范围上各有优点,无花果蛋白酶的适宜pH值范围大于木瓜蛋白酶的适宜pH值范围;在对底物的亲合性上,无花果蛋白酶明显高于木瓜蛋白酶.

地下水中锰离子氧化细菌的分离与筛选鉴定

从沈阳张士经济开发区净水厂的成熟生物滤池中,分离筛选得到了3株具有较强Mn2+氧化能力的革兰氏阴性细菌,分别命名为Mn1、Mn2和Mn3。经3个菌株的16S rDNA鉴定及其系统发育学分析表明,菌株Mn1和Mn2为Delftia属,菌株Mn3为Klebsiella属。进一步考察了3株菌对地下水中浓度为2 mg/L的Mn2+氧化及发酵能力。结果表明,3株菌均可在12 h内达到使1 m3生物滤料成熟时所需的最少生物量;且Mn1、Mn2和Mn3对Mn2+的相对氧化能力分别为96%、94%和85%,为生物滤池法去除地下水中铁锰的快速启动提供了菌种基础。

哮喘大鼠淋巴细胞蛋白质组的分析

通过建立卵蛋白(Ovalbumin,OVA)致敏的Wistar大鼠哮喘动物模型,利用二维凝胶电泳及MALDI-TOF-MS分析技术,对哮喘大鼠与正常大鼠脾脏淋巴细胞差异表达蛋白质进行鉴定和分析.结果显示,在哮喘组中呈现高表达的蛋白质,包括胶原蛋白调控蛋白质(hnRNP)以及细胞结构蛋白(Fibrinogen).而与代谢相关的蛋白质(CoQ10)和线粒体内膜蛋白,在哮喘组中呈低表达.研究结果表明,这些蛋白质与哮喘气道慢性炎症、气道高反应性和气道的重构有关.

烟草去甲基尼古丁产生的机理

烟叶的采收后处理和加工过程中,大量的尼古丁经去甲基化作用生成了去甲基尼古丁,后者是烟草特有的亚硝胺类(tobacco-specific nitrosamines,TSNAs)致癌物——亚硝基去甲基尼古丁(nitrosonornicotine,NNN)的前体,与人类健康息息相关。由于尼古丁去甲基化反应在基础理论研究和商业上的重要价值,长期以来关于这个反应的机制研究一直是学术界的热点。本文讨论了尼古丁去甲基化反应研究的历史概况、反应机制假说的演变及影响该反应的因素,期望通过对烟草尼古丁去甲基化反应研究的总结,为烟草品质提高和低毒害烟草制品的研究与开发提供一定的参考。

拟南芥全细胞蛋白质样品制备及其双向电泳条件的优化

对双向电泳方法进行了改进,包括对样品的制备、双向电泳参数的选择等关键步骤进行优化.实验发现,采用乙酸铵-甲醇沉淀拟南芥全细胞蛋白质,同时结合高伏时、长时间的等电聚焦可以获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱.银染后,经Phoretix 2D v2004软件分析可分辨出1 000以上蛋白点.

特异性抗人cyclin D1人源单链抗体的筛选

目的从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定。方法以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过“吸附-洗脱-扩增”淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通过ELISA方法对获得抗体的特异性和结合活性进行分析鉴定。结果经过4轮筛选,获得7株能与人cyclinD1蛋白结合的阳性克隆,其中3株噬菌体的可溶性表达单链抗体能与人cyclinD1蛋白有特异性结合活性。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出特异性的人源性抗人cyclinD1抗体。

人CuZn-SOD的分子改造及在毕赤酵母中的表达

为了改善人CuZn-SOD的酶学性质,在借鉴人细胞外超氧化物歧化酶的特性基础上,利用分子生物学技术,在人CuZn-SOD的C末端加入肝素亲和肽构建了人CuZn-SOD工程酶,并在毕赤酵母中获得表达,经纯化的工程酶具有较强的肝素亲和性.

玉米淀粉分支酶基因SBEⅡ b高效沉默表达载体的构建及转化表达

淀粉分支酶(starch branching enzyme,SBE)是淀粉合成的限速酶。为了进一步研究SBEⅡb沉默对玉米生长及直链淀粉合成的影响,克隆了玉米(Zea mays)淀粉分支酶SBEⅡb基因片段,构建了SBEⅡb的发卡结构表达载体p TFU-SBEⅡb hairpin,用农杆菌介导法将其导入玉米HiⅡ幼胚中,经除草剂筛选获得了194株转化再生植株,其中4株结实,获得转基因种子35粒。T1代植株经PCR及试纸条检测获得3株阳性材料,半定量RT-PCR结果得出SBEⅡb的表达量降低,推断出基因表达水平降低对直链淀粉的合成具有正效应。

转基因作物的食用与环境安全性问题及其对策

自转基因技术研发和商业化生产以来,针对转基因作物的食用安全性和环境安全性问题一直是公众争论的焦点。面对全球粮食安全形势的严峻压力,如何使公众对转基因技术及其产品的客观性保持一种科学性的认识,是摆在各国(特别是发展中国家)政府和科学家面前不可忽视的课题。本文从食品和环境两个方面简要介绍了转基因作物的安全性问题,旨在还原转基因技术的科学真实性,并简要提出转基因作物的安全性对策。

ER-Ⅱ期乳腺浸润性导管癌的差异表达蛋白质分析

目的:探索雌激素受体阴性(ER-)Ⅱ期乳腺浸润性导管癌的蛋白标志物,阐述获得蛋白在肿瘤浸润、转移方面的意义。方法:利用二维凝胶电泳(2-DE)、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF-MS)及在线数据库检索,对5例Ⅱ期乳腺浸润性导管癌ER-癌组织及癌旁组织的差异表达蛋白质进行鉴定分析。结果:5例癌旁正常乳腺组织中检测出的蛋白点数从779到1328不等,实体瘤组织中检测出的蛋白点数从988到1453不等,两者间的匹配点从310到774不等。5例患者乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织的全蛋白差异表达凝胶图谱上确定3个差异蛋白质点S1、S2和S3,鉴定出3个候选蛋白:免疫球蛋白λ链可变区(S1)、胶原蛋白Ⅵ-3链前体(S2)及S100A11钙结合蛋白(S3)。其中S2和S3在5例癌组织中表达均上调(丰度差异2倍以上)。结论:优化的实体瘤组织二维电泳实验条件能够从实体瘤组织中更有效地提取蛋白质;胶原蛋白Ⅵ-3链前体及S100A11钙结合蛋白可能与ER-Ⅱ期乳腺浸润性导管癌的浸润及转移有关。

乳腺癌组织蛋白质样品制备及双向电泳条件的改进

目的:采用合适的裂解液和沉淀方法提取乳腺癌组织蛋白质,获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。方法:通过不同全细胞蛋白质裂解液和不同沉淀方法提取组织全蛋白的效果比较,设计了不同的蛋白质样品制备的方法,并对2-DE的条件进行优化。结果:确定了适合乳腺癌实体瘤组织的裂解液配方(LS IV),PEG沉淀的蛋白分布较完整,沉淀效率相对较高。结论:本方法可以应用到乳腺癌组织的蛋白提取,也可对其它组织蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴。

Bar+CP4EPSPS基因转化紫花苜蓿的研究及抗性鉴定

为了提高苜蓿抗除草剂的能力,以'公农1号'紫花苜蓿为试验材料,采用农杆菌介导的方法将Bar基因和CP4EPSPS基因转入紫花苜蓿中,研究了优化影响转化的5个主要因子(分别为外植体、农杆菌种类、侵染浓度、共培养时间、筛选浓度),建立了农杆菌介导的'公农1号'紫花苜蓿高效转化体系,获得转基因植株。结果表明:选择再生苗叶片作为外植体、EHA105农杆菌侵染、菌液浓度OD600值为0.8、共培养3 d、转化过程中草铵膦筛选浓度选择2 mg·L-1为宜,是最佳转化方案。试验结合分子检测和试纸条检测初步证明目的基因已经整合到紫花苜蓿中,最终喷施草甘膦确定12株为转基因植株。

施氏假单胞菌在玉米根际的固氮效率和促生效果研究

非豆科植物根际联合固氮作用广泛存在于水稻、玉米等根际,在农作物节肥增产方面具有巨大的应用潜力。施氏假单胞菌A1501是一株分离自水稻根际的模式联合固氮菌,接种该菌对水稻和玉米均具有良好的促生效果。为了进一步研究根际固氮与促生效果的关系,利用突变型泌铵固氮菌株(1568/pVA3)和转基因氮高效利用玉米品系共同构建高效固氮体系,并在温室条件下进行促生及生物固氮量评价。播种60 d后对玉米生长量和微生物固氮量进行分析,结果表明:固氮施氏假单胞菌接种后氮高效利用和对照玉米品系的地上和地下部生物量都显著高于不接种对照,但是固氮菌接种对氮高效利用玉米和对照玉米的总生物量没有显著影响。氮高效利用玉米接种1568/pVA3菌株后,植株生物量较施肥处理提高25.5%,全氮含量较不接种对照增加39%,15N同位素稀释法测定生物固氮量为0.8 g·株^(-1);接种野生型后植株生物量较施肥处理提高24.8%,生物固氮量为0.64 g·株^(-1)。研究结果表明,通过将固氮菌尤其是泌铵工程菌与氮高效利用玉米建立联合固氮体系可以显著提高根际固氮量和植株生物量,据估算每公顷可节省化肥约23%,而对照体系为7.5%。