几种肿瘤免疫抑制因子作用的研究

通过体外细胞培养，采用ＭＴＴ法和ＮＯ测定法，观察了淋巴瘤（Ｒａｊｉ）、实体瘤（Ｓ_（１８０））、艾氏腹水瘤（ＥＡＣ）、肝癌（ＨＣ）４种肿瘤细胞产生的肿瘤免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）对小鼠腹腔巨噬细胞产生ＮＯ和Ｔ淋巴细胞激活的影响。结果发现Ｒａｊｉ－ＴＤＳＦ和Ｓ_（１８０）－ＴＤＳＦ对巨噬细胞产生ＮＯ均有明显的促进作用（Ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５）．而ＥＡＣ－ＴＤＳＦ和ＨＣ－ＴＤＳＦ则否（Ｐ＞０．０５），它们对Ｔ淋巴细胞激活的抑制作用Ｓ_（１８０）－ＴＤＳＦ和ＥＡＣ－ＴＤＳＦ可被大蒜素（ＤＡＴＳ）所拮抗，与无ＤＡＴＳ组比较抑制率明显下降（Ｐ＜０．０１）；而ＤＡＴＳ却不能拮抗Ｒａｊｉ－ＴＤＳＦ和ＨＣ－ＴＤＳＦ的抑制作用（Ｐ＞０．０５）。结果表明，不同肿瘤细胞产生的ＴＤＳＦ的作用及其机制可能是多样的。

异搏定对缺氧和缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响

采用~３Ｈ－ＴｄＲ掺入、结晶紫染色以及ＰＣＮＡ免疫细胞化学方法观察异搏定对缺氧和４种缩血管物质促肺动脉平滑肌细胞增生的影响。结果发现：①４种缩血管物质（ＥＴ－１、ＡＴⅡ、Ａ_（２３１７８）、ＫＣｌ）均有不同程度的促肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）ＤＮＡ合成的作用，其作用可被Ｃａ^（２＋）通道阻滞剂异搏定阻断；②缺氧所致ＰＡＳＭＣ增殖的３项指标变化同样可被异搏定阻断。表明［Ｃａ^（２＋）］ｉ升高可能为缺氧和缩血管物质引起肺血管ＳＭＣ收缩和增生的信息传递的共同途径。

3,4-二羟基苯乙酮对缺氧所致猪肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

用结晶紫染色法＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入，增殖细胞核抗原免疫化学法检测３，４－二羟基苯乙酮对缺氧所致独肺动脉平滑肌增殖的影响。结果发现缺氧条件下培养的ＰＡＳＭＣ用以上３种方法测得结果分别为常氧组的。

青心酮对猪肺动脉平滑肌细胞增生的抑制作用

在培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）内加入青心酮（３．４－ＤＨＡＰ）（６．２５×１０－５Ｍ－１０－３Ｍ／Ｌ）注射液，用结晶紫染色法，３Ｈ－ＴｄＲ掺入以及用ＳＰ免疫细胞化学检测ＰＣＮＡ表达，观察对肺动脉平滑肌细胞增殖的影响，结果表明青心酮对１０％小牛血清引起的ＰＡＳＭＣ增生的作用与异搏定（６．２５×１０－６－１０－４Ｍ／Ｌ）相似，呈剂量依赖性抑制细胞增殖。提示青心酮可用于慢性肺动脉高压肺血管改建的防治。

蛋白磷酸酯酶-2A和-1抑制剂对成神经瘤细胞的影响

蛋白磷酸酯酶（PP）－2A和一1的缺陷参与Alzheimer病（AD）微管相关蛋白tau的异常磷酸化，继而导致神经细胞退化死亡。本研究采用不同剂量PP－2A和PP－1的抑制剂Okadaicacid（以下简称OA）与成神经瘤细胞株（SH－SYSY）共培养，实验结果显示：OA导致细胞代谢明显降低，突起消失，微管受损，死亡加速。OA的上述细胞毒性在PP－2A和PP－1均被抑制时显著增强。该研究进一步为PP－2A和PP－1与神经细胞活性的关系提供了实验依据，也为建立AD蛋自磷酸酯酶缺陷实验模型奠定了基础。

热毒清抗矽尘毒性效应的细胞化学定量观察

为进一步探讨中药热毒清抗矽尘毒性效应,对不同培养阶段的5组小鼠腹腔巨噬细胞用形态学和细胞化学方法,对巨噬细胞的形态及ACP活性,用显微镜及显微分光光度计进行了定性、定量动态观察。结果:吞噬矽尘后的SiO_2组巨噬细胞远较中药、P_(204)及联合用药组迅速死亡,崩解。细胞内ACF活性也大大低于其他组(P<0.01),但中药与P_(204)组间差异无显著性(P>0.05)。认为,热毒清有明显的抗矽尘毒性效应。

大蒜素对巨噬细胞介导的细胞毒作用的影响

大蒜素单独或与其他激活剂协同作用时，具有增强巨噬细胞的抗肿瘤作用。同时可增强某些瘤细胞对巨噬细胞介导的细胞毒作用的敏感性。

大蒜素对T细胞激活的影响

大蒜素在高浓度（５０ｕｇ／ｍｌ）时对Ｔ细胞激活有抑制作用。但在适当浓度（３．１２５～１２．５ｕｇ／ｍｌ）时则对Ｔ细胞激活有促进作用，这种促进作用与大蒜素抑制巨噬细胞产生ＮＯ的能力有关。大蒜素能够对抗Ｓ１８０细胞和艾氏腹水癌细胞产生的肿瘤免疫抑制因子对Ｔ细胞激活的抑制作用。提示大蒜素在肿瘤治疗中可能有较大的应用价值。

红细胞生成素3'-增强子片段对内皮细胞缺氧时环加氧酶-2基因表达的影响

目的和方法：体外合成红细胞生成素（Ｅｐｏ）３′－增强子野生型及突变型片段，借助脂质体，转入内皮细胞，用半定量ＲＴ－ＰＣＲ方法测定分离细胞在常氧或缺氧条件下培养４ｈ的环加氧酶２（ＣＯＸ－２）ｍＲＮＡ。结果：（１）大鼠主动脉内皮细胞、肺微血管内皮细胞在常氧下培养，有ＣＯＸ－２基因表达；（２）缺氧能诱导这两种细胞ＣＯＸ－２基因表达增加；（３）野生型Ｅｐｏ３′－增强子片段能阻断缺氧对内皮细胞ＣＯＸ－２基因表达的诱导作用，而突变片段则无此作用。结论：在ＣＯＸ－２基因序列中，可能存在Ｅｐｏ３′－端增强子片段。

大蒜素抑制人急性早幼粒白血病细胞生长的体外实验

本实验采用体外直接杀伤测定法，荧光偏振技术，ＭＴＴ比色分析法，ＤＮＡ合成的［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入法，微量量热法五种测定技术从细胞膜流动性改变、线粒体功能，ＤＮＡ合成速率、细胞总代谢率变化等细胞和分子生物学方面的变化研究大蒜素对ＨＬ－６０细胞的作用，结果表明，大蒜对对ＨＬ－６０细胞的增殖有抑制作用，高浓度（＞３０ｍｇ／Ｌ）时还有较明显的直接杀伤作用。

缺氧诱导因子-1和红细胞生成素3′-增强子调节内皮细胞环氧合酶和血栓素合酶基因转录

目的和方法 :将红细胞生成素 (EPO) 3′ 增强子野生片断及点突变片断借脂质体转入人脐静脉内皮细胞株ECV 30 4,用半定量RT PCR测定正常与缺氧诱导因子 1 (HIF 1 )诱导剂氯化钴 (CoCl2 )作用下培养 6h的细胞环氧合酶 2 (COX 2 )和血栓素合酶 (TXS)的mRNA。结果 :HIF 1诱导剂CoCl2 可诱导ECV 30 4的COX 2和TXS基因转录明显增强 ;向细胞导入野生EPO3′增强子片断可阻断CoCl2 诱导的COX 2和TXS基因转录增强 ,而点突变片断无此作用。结论 :在COX 2和TXS基因序列中 ,可能存在EPO3′ 增强子类似片断中的HIF 1的结合序列 ,HIF 1诱导COX 2和TXS基因表达增强可能主要通过HIF 1与该序列结合实现的。

正常和恶性淋巴细胞膜的流动性及其对PHA、ConA刺激的反应性

本实验采用疏水性荧光探针DPH(1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene,1,6-二苯基-1,3,5-己三烯)标记小鼠的淋巴细胞膜,根据荧光偏振值的变化比较正常细胞膜和癌变细胞膜流动性及对外界刺激反应性的差别。实验结果表明癌变淋巴细胞膜的流动性明显增高(P<0.001)。用同样浓度的ConA 10mg/L,PHA 40mg/L刺激后,荧光偏振值的变化幅度和方向也不同于正常细胞。本文还对以细胞膜流动性变化作为癌变指标的可能性作了补充说明。

Epo 3'-端增强子对内皮细胞缺氧时血管内皮生长因子基因转录的影响

体外合成红细胞生成素(Epo)3'-端增强子野生型及突变型片段,借助脂质体转入培养的大鼠肺微血管内皮细胞,用半定量RT-PCR方法测定内皮生长因子(VEGF)mRNA。结果发现:①内皮细胞在常氧下培养有VEGF基因转录,mRNA量吸光度(A)值为2.32±0.36;②缺氧4h时VEGF基因转录增加,mRNA量(A)值为4.71±0.52,与常氧组比较P<O.05;③野生型Epo 3'-端增强子片段能阻断缺氧对VEGF基因转录的诱导作用,mRNA量(A)值为2.29±0.41,与缺氧组比较P<0.05;而突变片段则无此作用,VEGF mRNA量(A)值为4.57±0.57,与缺氧组比较P>O.05。结果提示:在VEGF基因序列中可能存在Epo 3'-端增强子片段,它参与了内皮细胞的缺氧反应。

IL-1β和TNF-α对培养的气道上皮细胞E钙粘着蛋白表达的影响

应用酶消化法体外培养猪气道上皮细胞 (AEC) ,加入一定浓度梯度的白细胞介素 - 1β (IL - 1β)和肿瘤坏死因子α (TNF-α) ,应用免疫细胞化学染色和原位杂交方法观测 AEC中 E钙粘着蛋白 (ECD)表达的变化。结果发现 :正常 AEC中 ECD表达于相邻上皮细胞间的胞膜上 ,其 m RNA也有一定含量。一定浓度梯度的 IL - 1β和 TNF-α作用 2 4h后 ,胞膜上 ECD表达减弱 ,而胞浆内 ECD表达在低浓度时升高 ,高浓度时降低 (P<0 .0 1) ,同时 ECD m RNA含量在低浓度时增多 ,而在高浓度时维持正常水平 (P>0 .0 5 )。结果提示 ,IL - 1β和 TNF-α在翻译或翻译后水平使膜上 ECD表达下调 ,参与了

红细胞生成素3’端增强子在肺动脉平滑肌细胞低氧性增殖调控中的作用

用噻唑蓝比色法 (MTT法 )、H3 胸腺嘧啶核苷 (H3 TdR)掺入法和流式细胞术 ,观察红细胞生成素 (EPO)3’端增强子片段对培养的猪肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)的内皮依赖性和非内皮依赖性低氧性增殖的影响。结果为 :(1)低氧 2 4h后PASMCs明显增殖 ,转入野生型EPO3’端增强子片段可被抑制 ,而转入突变型片段无此作用 ;(2 )肺动脉内皮细胞 (PAECs)低氧 2 4h ,其条件培养液有明显的促PASMCs增殖作用 ,将野生型EPO3’端增强子片段先转入PAECs,此作用明显减弱 ,而转入突变型片段则无明显影响。提示 :(1)PAECs低氧条件培养液可促进PASMCs增殖 ,PASMCs也可直接感受低氧而增殖 ,PAECs和PASMCs的低氧反应均被外源性EPO3’增强子片段抑制 ;(2 )由于EPO3’增强子上有低氧诱导因子 1(HIF 1)结合位点 ,PAEC和PASMC低氧反应可能是通过HIF

香烟烟雾提取物对小鼠气管环上皮钙粘附素表达的影响

体外进行器官培养 ,通过免疫组织化学和原位杂交方法检测香烟烟雾提取物 (CSE)作用 48、 72 h,小鼠气管上皮细胞上皮钙粘附素 (E- cd)表达的变化。结果表明 ,正常对照组 E- cd分布于气管假复层纤毛柱状上皮细胞连接处的胞膜上 ,5 0 % CSE作用后 ,膜上 E- cd表达减少 ,随着作用时间延长 ,胞浆内 E- cd表达明显增加 (P<0 .0 5 ) ,而细胞内 E- cd m RNA含量无明显变化。提示 ,CSE对小鼠气管上皮细胞 E- cd表达的调控在翻译后水平 ,胞膜上 E- cd表达的下调与吸烟所致气道上皮细胞的损伤修复过程相关。

二烯丙基三硫对巨噬细胞抗癌活性的调节

二烯丙基三硫对巨噬细胞抗癌活性的调节张桂梅，冯作化，郝天玲，张慧，姜志尧同济医科大学实验医学研究中心医学分子生物学研究室，武汉４３００１０关键词二烯丙基三硫；巨噬细胞；细胞毒性；免疫中图法分类号Ｒ３２９．２．Ｒ４４６．６３二烯丙基三硫（ＤＡＴＳ）是大...

健胎液对人脐静脉内皮细胞分泌血管活性物质的影响

目的：探讨健胎液防治胎儿宫内生长迟缓的机理，应用血清药理学方法研究健胎液对缺氧人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）分泌血管活性物质内皮素（ＥＴ）、前列环素（ＰＧＩ_２）、一氧化氮（ＮＯ）的影响，以及该方药对缺氧ＨＵＶＥＣ形态结构上的保护作用。方法：将ＨＵＶＥＣ随机分成四组：正常组、缺氧组、血清组、健胎液组，观察细胞形态的改变；检测内皮素（ＥＴ）、前列环素（ＰＧＩ_２）和一氧化氮（ＮＯ），进行统计学处理。结果：健胎液可显著提高缺氧ＨＵＪＶＥＣ合成分泌ＰＧＩ_２、ＮＯ（Ｐ ＜ ０．０５～０．０１），同时，ＥＴ的释放显著降低（Ｐ_４ｈ＜ ０．０５）。从超微结构上观察，健胎液能明显减轻缺氧对ＨＵＶＥＣ的细胞器和细胞核的损伤，尤以保护线粒体免受缺氧损伤的作用更显著。结论；通过增强血管内皮细胞对缺氧的耐受性，调节血管性物质的分泌是健胎液防治胎儿宫内生长迟缓的机制之一。

缺氧对冠状动脉内皮及平滑肌细胞环氧合酶和血栓素A_2合成酶基因表达的影响

用放免及斑点杂交法研究缺氧对培养的冠状动脉内皮细胞（CAEC）和平滑肌细胞（CASMC）的环氧合酶（COX）和血栓素A2合成酶（TxS）基因表达的影响。实验表明在缺氧时，CAEC和CASMC中COX-1表达增加，总光密度比常氧对照组分别高3倍和1．8倍；COX-2及TXS表达无明显变化。CAEC及CASMC条件培养液中6-ketc-PGF1a含量明显升高，而TxB2与对照组无明显差异。结果提示，缺氧致冠状动脉舒张反应中可能有内皮和平滑肌细胞COX-1基因表达及PGI2生成增多的作用。

中药“热毒清”对矽肺治疗作用的实验研究—对染矽尘巨噬细胞保护作用的细胞化学及扫描电镜研究

为探讨中药“热毒清”对矽肺的治疗作用,用提纯及培养的5组巨噬细胞,以细胞学、细胞化学及扫描电镜法进行了动态观察。结果证实,SiO_2组细胞吞噬SiO_2粉尘后出现多种形态和一系列表面超微结构变化的特征,并远较中药组细胞迅速死亡和崩解。细胞内ACP和SDH活性等著低于中药组。本文认为,中药“热毒清”对矽尘致巨噬细胞毒性有明显的拮抗作用。