苦马豆素抗牛病毒性腹泻病毒的研究

【目的】疯草是中国西部影响草地生态和畜牧业健康发展的毒草之一。主要有豆科棘豆属和黄芪属有毒植物等,在冬季牧草严重缺乏的时节,牛羊等牲畜被迫采食后可引起中毒和生产性能下降,甚至死亡,每年给我国草地生态和畜牧业造成的直接经济损失达几十亿元,是危害最严重的毒草。目前,我国西部天然草地动物因疯草中毒死亡所造成的经济损失仍持续剧增。苦马豆素被认为是引起动物疯草中毒的主要毒性成分。由于疯草分布广泛,资源丰富,如何改善草地生态,合理开发利用疯草成为研究的课题和方向。近几十年来,随着对疯草研究的深入和扩展,人们发现苦马豆素不仅具有良好的抗肿瘤效果,还可作为免疫调节剂、抗HIV及扩散抑制剂、抗病毒和细胞保护剂等药物使用。目前,国内在对苦马豆素抗肿瘤、调节机体免疫方面研究较热,但是,对苦马豆素在抗病毒活性、作用机理方面的研究尚无相关报道。为了探讨茎直黄芪中生物碱苦马豆素(swainsonine,SW)抗牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)的作用机制,明确其体外抗病毒作用效果,为抗BVDV的药物筛选提供参考依据。【方法】利用细胞培养技术,采用CPE观察法和MTT比色法相结合的方法测定不同浓度SW对牛肾原代细胞(madin-darby bovine kidney cells,MDBK)的毒性作用,确定药物的安全浓度和TD50,并分别采用先加药后感染病毒、先感染病毒后加药、药毒作用2 h后加入、感染病毒同时给药后再加药四种作用方式,检测不同浓度SW对BVDV入侵的阻断作用、复制的抑制作用、直接杀伤作用和综合作用,并计算不同作用方式下的治疗指数。【结果】结果显示:SW浓度小于0.256μg·mL-1范围内对MBDK细胞无毒性作用,在大于0.512μg·mL-1浓度下MBDK细胞表现出一定程度的病变,TD50为2.512μg·mL-1,按Reed-Muench氏法计算BVDV TCID50为10-4.7/0.1mL;在体外随苦马豆素质量浓度的增加,其抗BVDV作用具有很好的量效关系,且与作用方式有关,比较四种作用方式下的治疗指数1.05、2.47、2.08和3.21,说明SW对BVDV的综合作用(65.29%,P<0.01)和复制(65.05%,P<0.01)的抑制作用较好,亦有一定的直接杀伤作用,但对其入侵的阻断作用不佳。【结论】SW在体外有良好抗BVDV活性作用,并推测苦马豆素(SW)抗病毒的主要效应可能是SW能进入细胞内抑制BVDV的复制增殖以及直接灭活游离BVDV而发挥作用。

山羊痘的流行及防治措施

山羊痘是由山羊痘病毒属的痘病毒引起的羊的一种急性、热性、接触性传染病。文章从山羊痘流行病学、症状、诊断和防治措施等方面对山羊痘进行综述。

猪戊型肝炎病毒分子生物学与流行病学研究进展

戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是20世纪80年代发现的又一新型肝炎病毒,近年来对戊型肝炎病毒病原学、流行病学、实验室诊断、基因结构等方面研究取得了重大进展,本文就HEV的形态、基因分型、分子生物学特性、戊型肝炎(Hepatitis E,HE)的流行病学特点作一简要概述。

苦马豆素提取工艺及检测方法研究进展

苦马豆素是疯草类植物的主要毒性成分,是危害草原畜牧业和草原生态健康发展的重要因素之一。而近年来最新研究发现,苦马豆素又是一种天然抗免疫抑制药物,被认为是最有前景的肿瘤候选药物之一,显示出其广阔的应用潜力。结合近年来现代检测技术在苦马豆素研究领域的最新研究成果,综述了苦马豆素的提取工艺、检测方法的最新研究成果,并重点从薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)、α-甘露糖苷酶活性抑制分析法(α-MIA)等几个方面介绍了苦马豆素定性、定量检测方法,并对各种检测方法的优缺点进行了比较。

“疯草”中苦马豆素解毒制剂及抗肿瘤应用研究进展

"疯草"中的主要毒性成分苦马豆素,属于一种多羟基取代吲哚兹定生物碱。其能抑制动物机体中的α-甘露糖苷酶,造成人和动物中毒;同时又具有极强的抗肿瘤活性,而对人有益。全文概述了苦马豆素的生化特性、中毒机理、解毒制剂研制以及抗肿瘤作用的研究进展,以期为预防治疗苦马豆素中毒以及合理开发利用苦马豆素提供参考。

猪戊型肝炎病毒双重RT-PCR检测诊断方法的建立及其应用

猪戊型肝炎（HE）是近年来颇受人们关注的一种人畜共患传染病。人普遍易感。急性戊型肝炎病情较重,病死率为2.5%,明显高于甲型（0.1%）和乙型（0.9%）肝炎,孕期妇女死亡率可高达15%~20%[1],尤其是怀孕最后3个月的孕妇病死率更高。

猪戊型肝炎病毒swCH-GS189株ORF2基因的克隆及序列分析

为进行猪戊型肝炎病毒(HEV)ORF2基因特征研究,参照GenBank中已发表的戊型肝炎病毒(HEV)核酸序列,设计了一对扩增HEVORF2基因的引物,利用RT-PCR等方法克隆出了一株猪戊型肝炎病毒甘肃分离株GS189的ORF2基因cDNA片段。序列测定结果表明,swCH-GS189株的ORF2基因长2 025 bp,编码674个氨基酸,与GenBank中公布的其它毒株间的核苷酸序列同源性为79.1%～91.8%,推导的氨基酸序列同源性为89.5%～98.8%。系统发育进化树结果表明,该分离株为基因Ⅳ型。

猪戊型肝炎病毒ORF2部分片段原核表达载体的构建

利用Protean软件对猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)swCH189株的ORF2进行潜在抗原位点分析,选取381aa-623aa段作为表达片段,运用PCR方法从ORF2全长质粒中扩增出目的片段cp239,经纯化、连接等,成功构建了表达载体pET32a(+)-cp239,为下一步进行基因原核表达及其生物学活性分析奠定了基础。

茎直黄芪中苦马豆素的提取工艺研究

以茎直黄芪(Astragalus strictus)为原料,通过单因素试验、正交试验和方差分析确定了苦马豆素的酶法提取工艺条件,并用气相色谱法测定了提取物中苦马豆素的含量。结果表明,优化后的茎直黄芪中苦马豆素最佳提取条件为,粉碎目数80目、料液比1∶40、纤维素酶添加量3.5%、酶解时间3.0 h。在此提取条件下,苦马豆素的提取率可达到39.41 mg/kg。该法快速、高效、方便、节能,有利于茎直黄芪中苦马豆素的提取。

牛病毒性腹泻病研究进展及防控建议

牛病毒性腹泻病由牛病毒性腹泻病毒引起,主要感染牛并引发疾病,呈世界性分布,可造成严重的经济损失。近年来,随着规模化养殖的发展,牛病毒性腹泻病对养殖业的危害日益显现。本文主要对牛病毒性腹泻病的病原特性、基因型分类、危害、诊断检测方法、国内流行情况和防控现状等进行综述,以期为国家尽快建立完善的防控体系和净化消除该病提供参考。

茎直黄芪人工中毒解毒实验家兔病理模型的建立及病理学观察

为对由茎直黄芪引起的牲畜中毒病理情况以及解毒治疗效果做进一步评价研究,以茎直黄芪人工饲喂2月龄实验家兔中毒,设置4个实验组,分别为空白对照组、攻毒组、解毒治疗a组、解毒治疗b组,建立中毒及解毒病理模型,并在28天(中毒死亡)、45天(中毒死亡)、49天(解毒a、b组及空白组处死),分别采取心、肝、脾、肺、肾和脑等进行病理组织学检查,利用常规病理学方法对比研究实验家兔体内的病理变化规律。结果表明,实验家兔均在18天左右出现中毒症状,28天左右出现中毒死亡,人工中毒解毒实验家兔病理模型成功建立。攻毒组试验家兔表现为大部分脏器均出现淤血、炎症、坏死等病理变化,解毒治疗a、b组,出现轻度淤血、轻度的细胞变性。

中兽药防治动物疫病研究现状

近年来,随着科学技术的进步和畜牧业水平的提高,我国传统的中兽医理论（正气存内,邪不可干）和中草药的物性（阴阳寒凉温热）、物味（酸苦甘辛咸）、物间关系及辅以现代技术和生产工艺生产的纯天然药物和纯天然中草药饲料添加剂，

速康解毒口服液对家兔茎直黄芪中毒的疗效研究

以茎直黄芪人工饲喂2月龄实验家兔中毒,设置对照组、攻毒组、攻毒解毒治疗组,每组实验家兔4只,建立中毒及解毒病理模型,在28d、45d(中毒死亡)、49d(解毒组及空白组处死),研究实验家兔体内的病理变化规律,并对速康解毒口服液治疗效果进行评估。实验结果表明,攻毒组、攻毒解毒解毒组实验家兔在18d左右出现中毒症状,攻毒组Ⅱ号在28d中毒死亡,在第29d时对解毒组利用速康口服液解毒治疗均成活。病理学切片观察表明,攻毒组试验家兔表现为大部分脏器均出现淤血、炎症、坏死等病理变化,解毒治疗组出现轻度淤血、轻度的细胞变性。研究表明速康解毒口服液能有效提高α-甘露糖甙酶活性,解毒组试验家兔病理组织学观察结果表现轻微,证实速康解毒口服液具有较好的解毒效果。

散养产蛋鸡群感染前殖吸虫的诊治

1发病情况 2010年4月，兰州市红古区某蛋鸡养殖户745只甘肃本地柴鸡中，有135只蛋鸡突然出现产薄壳蛋，并间隔伴有软壳蛋，产蛋率下降症状。养殖户疑为缺钙，及时用维生素D、钙制剂等药物添加到饲料中进行治疗。20d后，蛋鸡产蛋停止，出现不食，腹部膨大等症状，并间歇有11只鸡陆续死亡。经过临床观察、病理解剖、粪便检查，

一起小尾寒羊黄花棘豆中毒病例的诊断与治疗

本文报告了2014年10月3日甘肃省兰州市榆中县一羊养殖厂发生一起小尾寒羊集体疑似疯草中毒事件。疑似中毒羊为不同年龄、性别的多只小尾寒羊。经对询问饲养人员饲养情况,观察疑似中毒羊各种症状,如后肢无力、目光呆滞、不食、消瘦、犬坐式、头颈后仰、手提羊耳出现转圈运动,对放养草地采集植物观察、辨认、比较后,诊断为典型的小尾寒羊疯草中毒。

Cellulase Extraction and Gas Chromatography Detection Technology of Swainsonine from Astragalus strictusin in Tibet

Locoweed is a poisonous plant wildly distributed in most areas of the world,which causes livestock poisoning or death with serious economic loss.The Astragalus strictus belongs to a species of Iocoweed.It is mainly distributed in Tibet of China and is a serious hazard to the local livestock industry.The objective of this study is extracting and purifying condition of Swainsonine from Astragalus strictus with the cellulase extraction method.An optimum extracting technology of SW from Astragalus strictus was investigated through the orthogonal experiment under the cellulose assistance conditions,and then the content of swainsonine was analyzed with gas chromatography （GC） method.The optimized extraction conditions were as follow：The crushed mesh is 40; solid-liquid ratio is 1∶40 （g/ml）; enzyme dosage is 3.5％; enzymatic time is 3 h.Under the above conditions,the extraction percentage of the swainsonine was 0.003 941％.The conditions for extracting swainsonine with cellulase extraction method are mild,it is easy to utilize industrial production.It is benefit for producing swainsonine from Astragalus strictus.

疯草解毒复方中药制剂的药代动力学研究

本试验旨在探讨疯草解毒用复方中药制剂在大鼠体内的药代动力学特性。在确定制剂中有效成分的基础上,采用紫外分光光度法检测大鼠经口服药物制剂后体内有效成分的吸收情况,并计算相应的药代动力学参数。本试验建立了适用于检测8种成分的紫外光谱分析法;制剂经口服给药后能在胃肠道被快速吸收,1h左右大鼠体内各组分的血药浓度达到最大,药效发挥迅速;党参皂甙、多糖和阿魏酸代谢速度快,甘草酸、柴胡皂苷、黄芪甲苷、升麻素苷的代谢产物在体内作用时间较长。复方中药制剂在试验大鼠体内的药代动力学过程基本符合二室模型(陈皮苷除外)。所选用的测定方法简便、准确度和稳定性较高,适用于该制剂的药代动力学研究。

速康解毒口服溶液的稳定性研究

为了对速康解毒口服溶液整体稳定性进行评价以及计算速康解毒口服溶液贮存的有效期,试验采用温度湿度加速试验、光加速试验和长期稳定性试验对3批中试生产的速康解毒口服溶液中的4种药物成分硫酸镁、正磷酸钠、酵母甘露聚糖、L-鼠李糖的含量变化进行测定,并考察了速康解毒口服溶液形状、色泽、pH值、澄清度和各组分含量的变化。结果表明:3批供试品性状、微生物限度、相对密度、pH值和4种药物成分含量均未见明显变化,并最终根据鼠李糖的稳定性数据确定速康解毒口服溶液贮存有效期为15.67个月。说明速康解毒口服溶液在避光、密封、阴凉的环境中稳定性良好。

猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段原核表达条件的优化

为了提高猪戊型肝炎病毒swCH189株衣壳蛋白基因CP239片段在大肠杆菌中的表达量,研究了载体、温度、转速、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对衣壳蛋白基因CP239片段融合蛋白表达量的影响。结果表明,用LB培养基于37℃培养3.5 h后,采用终浓度为0.3 mmol/L的IPTG在37℃、200r/min诱导培养4 h,pET32a-CP239融合蛋白表达量最大;SDS-PAGE检测结果表明pET32a-CP239融合蛋白的分子质量与预期大小一致,约为45.3 ku;Western blotting结果表明,pET32a-CP239融合蛋白可以与抗-HEV阳性血清发生特异性反应,并具有良好的反应原性,说明衣壳蛋白基因CP239片段蛋白得到正确表达。