多重PCR法区分枣园两种菱纹叶蝉及检测其体内枣疯病植原体

【目的】目前发现,北京枣园中的凹缘菱纹叶蝉Hishimonus sellatus(Uhler)和片突菱纹叶蝉Hishimonus lamellatus Cai混同发生。已知凹缘菱纹叶蝉可以传播枣疯病,而片突菱纹叶蝉是否携带枣疯病植原体尚待证明。正确鉴别区分枣园中菱纹叶蝉的种类并测定其体内感染枣疯病植原体情况有助于阐明田间枣疯病的流行规律,从而提出有效的预防枣疯病及其媒介昆虫措施显得十分重要。传统形态学鉴定两种菱纹叶蝉种类的方法局限于雄性成虫外生殖器,本研究目的在于建立一种快速的分子生物学方法,在区分枣园中两种枣菱纹叶蝉的同时,可检测虫体内的枣疯病植原体。【方法】以凹缘菱纹叶蝉和片突菱纹叶蝉的COI基因以及枣疯病植原体的16S r DNA为扩增目标,分别设计引物,建立一种包含3对引物的多重PCR体系。测试该多重PCR体系对叶蝉总DNA的灵敏度、准确性,以及当两种叶蝉DNA同时存在时的辨别能力和对枣疯病植原体16S r DNA的灵敏度。【结果】该多重PCR可以准确区分凹缘菱纹叶蝉和片突菱纹叶蝉,并对虫体内枣疯病植原体实现检测,其对昆虫总DNA的灵敏度达到0.012 ng,对枣疯病植原体16S r DNA模板的灵敏度达到900拷贝。【结论】该方法极大方便了对枣菱纹叶蝉的田间种群发生动态及虫体中枣疯病植原体感染的监测。

课程思政融入留学生中医脾胃病教学的研究与实践

目的 将课程思政融入留学生中医脾胃病教学与实践,并对其实施评价。方法 选择2022年1—10月北京中医药大学51名2020级本科留学生为教学对象,通过深入挖掘中医脾胃病思政点,并应用问卷星对留学生进行思政点兴趣调研,根据调研结果,将课程思政融入留学生中医脾胃病课堂教学之中,最后通过调查问卷了解学生对课程思政满意度,并评价其效果。结果 51名留学生均完成调查,回收有效问卷率100%,教学满意度90.20%,学习积极性满意度94.12%,提高职业素养满意度92.16%;96.08%的学生进行思政教育,66.67%的学生喜好思政素材,88.24%的学生可以提高个人素养。分数排名前7位的思政点分别为:历史人物诸葛亮[(8.17±0.21)分]、半夏泻心汤“排兵布阵”[(8.10±1.03)分]、中国饮食及传统节日[(7.33±0.61)分]、中医内外治法演变[(7.17±0.84)分]、胃镜的发展史[(6.92±1.07)分]、中国太极等体育运动文化[(6.87±0.77)分]、《伤寒论》中的人文关怀[(6.69±0.65)分]。5大思政切入点分数排名如下:中国文化[(7.57±0.34)分]、中西方名人医案[(7.32±0.27)分]、自我修养[(6.33±0.58)分]、生命教育[(6.21±0.44)分]、爱国教育[(5.58±0.36)分]。结论 可以将所挖掘的思政点融入留学生脾胃病教学中,并侧重中国文化等思政元素。思政点融入形式侧重于结合案例及网络教学形式。

枣疯病植原体越冬后向枣树不同类型新生组织转移特性研究

为明确枣疯病植原体越冬后向新生组织的转移扩散特点,从而指导枣疯病预防和控制,本研究采用PCR和DAPI荧光显微技术,比较枣疯病植原体向枣树不同类型新生组织的转移情况。结果表明:室内水培的疯枣枝在萌芽30d后,新生叶片可以检测到植原体;自然栽培枣树的枣股新生叶片生长发育至24d出现植原体;枣树根蘖在萌芽后12d即可检测到植原体。嫁接试验表明,嫁接于染病冬枣砧木上的易感品种接穗‘唐星’,‘阜星’,其萌发的新生幼叶在第34天即可检测到植原体,而抗病品种‘星光’接穗在第119天才检测到植原体。由此可见,枣疯病植原体在地上和地下部分均可以越冬,越冬的植原体向枣树不同类型和不同品种新生组织中的转移扩散速度存在差异,由快到慢为根蘖>自然生枝条>离体水培枝条>嫁接接穗。

斑蝥素对草地贪夜蛾卵巢细胞凋亡基因PP2A表达的影响

用实时荧光定量PCR技术对草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda卵巢组织细胞蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A,PP2A)基因表达进行分析以研究斑蝥素对其表达的影响。结果表明,PP2A相对表达量与斑蝥素浓度存在不显著的负相关性,斑蝥素各浓度下PP2A相对表达量差异都不显著(P<0.05),处理24h后对照的极显著高于用斑蝥素处理的(P<0.01)。在相同斑蝥素浓度下,除25μg/mL外其他浓度处理24 h后PP2A相对定量显著高于6 h的(P<0.05)。研究结果说明,斑蝥素处理对卵巢细胞内的PP2A基因相对表达量有一定的影响,且与斑蝥素的浓度和处理时间有一定关系。

桃蛀螟性信息素结合蛋白Cpun-PBP1的cDNA克隆、表达谱及其与配体化合物的结合特性分析

【目的】为了更好地了解性信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)在桃蛀螟Conogethes punctiferalis(Guenée)嗅觉识别过程中的作用,明确其与配体化合物的结合特性。【方法】本研究利用RT-PCR结合RACE方法克隆了桃蛀螟一个性信息素结合蛋白基因;采用Real-time PCR方法分析了该蛋白在桃蛀螟不同发育阶段及雌雄蛾间的表达差异;利用荧光竞争结合实验对Cpun-PBP1蛋白与16种配基化合物的结合特性进行了分析。【结果】克隆了一个桃蛀螟性信息素结合蛋白基因,命名为Cpun-PBP1(Gen Bank登录号:KP027486)。Cpun-PBP1开放阅读框全长510 bp,编码169个氨基酸,预测分子量为19.12 k Da,等电点为5.09,N-末端包括由起始位置开始的30个氨基酸组成的信号肽。蛋白特征分析显示,该氨基酸序列具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即含有6个保守的半胱氨酸残基。Cpun-PBP1在桃蛀螟成虫阶段表达量最高,且几乎全部在触角中表达,卵期微量表达,幼虫期和蛹期均不表达。通过构建Cpun-PBP1原核表达载体,诱导并获得Cpun-PBP1重组蛋白。荧光竞争结合实验对2种性信息素组分和14种寄主植物挥发物的结合力发现,Cpun-PBP1不但能有效地与桃蛀螟性信息素组分(顺-10-十六碳烯醛和十六醛)结合,结合常数分别为7.32和9.39μmol/L;还能与8种寄主植物挥发物有效结合;其中,与莰烯的结合能力最强,结合常数为3.76μmol/L。【结论】根据这些结果,我们推测Cpun-PBP1在桃蛀螟感受性信息素和寄主植物挥发物的过程中发挥着双重作用。

异色瓢虫对豆蚜的捕食功能反应

试验开展了异色瓢虫Harmonia axyridis Pallas对豆蚜Aphis craccivora Koch的捕食功能反应研究。结果表明,异色瓢虫各虫态的功能反应类型均属于HollingⅡ型。随着豆蚜数量的上升,异色瓢虫对豆蚜的捕食增加量逐渐减小直至趋于稳定。异色瓢虫各龄幼虫、成虫对豆蚜的寻找效应均随豆蚜数量的增加而减小。异色瓢虫4龄幼虫的a/Th值最大,为2255.67,捕食功能最强,其后为成虫、3龄、2龄、1龄幼虫。

胰瘅膏对急性胰腺炎大鼠肠道菌群及功能的影响

目的研究胰瘅膏对急性胰腺炎大鼠肠道菌群的影响。方法45只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、胰瘅膏组,采用腹腔注射雨蛙素法制备急性胰腺炎(AP)模型,使用胰瘅膏外敷进行干预,采用16S rRNA高通量测序技术对肠道菌群进行测序。结果各组大鼠肠道菌群Beta多样性存在差异,AP大鼠肠道中变形杆菌属和苏黎世杆菌属等菌属增多,胰瘅膏能提高脱硫弧菌属、弓形菌属等菌属的丰度。结论胰瘅膏能调节肠道菌群等机制发挥治疗AP的作用。

菜蛾斑蝥素受体PP2A催化亚基基因的原核表达与纯化

为获得菜蛾斑蝥素受体PP2Ac蛋白,支持斑蝥素受体结合机理等相关研究,本试验以菜蛾cDNA为模板,利用PCR方法扩增得到菜蛾PP2Ac基因,将PP2Ac基因连接至经HindⅢ与BamH I双酶切处理的pET-30a原核表达栽体中,获得重组质粒并将其命名为pET30a-PX-PP2Ac。将pET30a-PX-PP2Ac转化至大肠杆茵BL21中进行诱导表达获得目的蛋白后,使用Ni-琼脂糖柱对重组蛋白进行纯化。结果表明,菜蛾PP2Ac基因可以在大肠杆菌中表达,目的蛋白在不同的温度下均以包涵体形式存在。优化后的诱导表达条件是IPTG浓度0.2 mM和温度30℃,目的蛋白大小约38 KD。

豇豆荚螟在北京地区红小豆田为害消长规律及药剂防治

采用田间普查、定点调查和灯光诱集的方法明确了北京地区豇豆荚螟Marucavitrata发生特点及其在红小豆田的种群消长规律,采用田间药效试验筛选出防治该虫的有效药剂.结果表明,豇豆螟幼虫共有5个龄期,低龄幼虫喜食红小豆细嫩的花蕊,造成落花、落蕾.幼虫钻入豆荚时取食红小豆种子,有转荚为害习性.成虫对黑光灯和高压汞灯趋性不明显.北京地区豇豆荚螟发生为害开始于红小豆的始花期,集中在红小豆盛花期,豆花、豆荚上的幼虫数量在8月末达到高峰.田间药效筛选试验结果表明,当红小豆田中的豇豆荚螟幼虫数在防治指标（百花/荚虫数5～6头）以上时,稀释1000倍液的5％氯虫苯甲酰胺防治红小豆田豇豆荚螟幼虫效果明显优于常规药剂高氯甲维盐和阿维菌素,而且持效期在20d以上,具有明显的保花护荚作用.

超速离心结合Real-time PCR分离纯化枣疯病植原体DNA

分离纯化枣疯病植原体基因组DNA,有助于进一步开展对此病原全基因组测序的研究,CTAB法提取枣疯病叶片的总DNA后,采用氯化铯双苯酰亚胺密度梯度离心法从枣树总DNA中富集纯化枣疯病植原体DNA,并通过Real-time PCR方法对分离纯化效果进行定量检测。在此基础上,探索了不同CsCl初始密度对DNA分离效果的影响。在20℃,初始密度为1.650 0g/cm3,经206 000×g下离心23h后,感染枣疯病样品(IS)的离心管中出现2条DNA亮带,正常枣树样品(NS)离心管中只有1条。Real-time PCR检测结果表明NS管中的条带为枣树基因组DNA;IS管中与NS管中相同位置的条带为枣树基因组DNA,另1条带为枣疯病植原体基因组DNA。在保留其他试验条件下,不同CsCl初始密度,会影响DNA条带的位置,也会影响枣疯病植原体DNA与枣树DNA的分离效果,在1.562 2g/cm3的初始浓度下分离效果最好。采用超速离心法可以有效地从感染枣疯病的枣树中分离得到纯的枣疯病植原体DNA,同时利用Real-time PCR法可以实现分离效果的评价,利用此方法分离得到的DNA可用于枣疯病植原体的全基因组测序。

南海北部温跃层逐月变化特征分析

本文利用Levitus逐月再分析海温资料,通过对南海北部沿几个主要经、纬线剖面的温跃层特征逐月变化进行分析,研究了南海北部海域温跃层的逐月变化特征,并简要分析了其原因。结果发现,该海域跃层深度逐月变化显著,但厚度和强度变化不大;跃层深度、厚度和强度的变化不同步。另外,与外海相比,近岸跃层期短,且跃层较浅、较薄、较强,但逐月变化较为显著。

基于数据挖掘的中药专利复方治疗胆结石的用药规律分析

[目的]基于古今医案云平台软件,应用关联规则、聚类分析等数据挖掘方法分析和总结中药专利复方治疗胆结石的用药及配伍规律。[方法]使用中国知网专利数据库检索治疗胆结石的中药复方,排除单味药物、中药提取物、中西药物联用等情况,对中药专利复方进行筛选处理并建立Excel数据表,应用古今医案云平台软件(V2.2.1)对数据进行中药属性和频次统计、关联规则和聚类分析。[结果]筛选治疗胆结石的复方274个,用药以寒性、苦味为主,归经以肝经为主,功效以清热利湿退黄、疏肝理气为主。频次较高的中药为金钱草、郁金、柴胡、鸡内金、茵陈、大黄等;关联规则提示治疗胆结石药物中海金沙-金钱草、鸡内金-金钱草、虎杖-金钱草、柴胡-金钱草、茵陈-金钱草的置信度较高;聚类分析得到治疗胆结石药物5类;核心药物网络由24味中药组成。[结论]治疗胆结石的中药专利复方药物的功效以清热利湿、利胆退黄、疏肝理气、通腑泻下为主,药物配伍以清热利湿、利胆退黄、疏肝理气为主,体现了胆结石的治疗原则,为胆结石的临床治疗和中药组方开发提供了参考依据。

肝星状细胞活化相关信号通路在肝纤维化中的研究进展

肝纤维化是多种慢性肝损伤造成的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)过度累积及降解不足的病理结果,如不加以干预会逐渐进展为肝硬化,甚至肝细胞癌。肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)是ECM的主要来源,并且HSC在肝纤维化的起始、发展和消退过程中发挥关键作用。近年来,HSC活化涉及的信号传导通路成为研究热点,本文总结了HSC活化过程中的重要信号通路。

国家专利复方治疗功能性消化不良的用药规律分析

目的:基于数据挖掘软件,应用频繁项集、关联规则、层次聚类、复杂网络等数据挖掘方法,分析中药专利复方治疗功能性消化不良的用药情况及配伍规律。方法:使用中国专利数据库检索治疗功能性消化不良的复方,排除中药提取物、单味药物、中西药物联用等情况,对中药专利复方进行筛选处理,建立Excel数据表,应用数据挖掘软件对数据进行频次统计、关联规则、聚类分析和复杂网络分析。结果:筛选治疗功能性消化不良的复方238个,药物四气以温、平为主,五味以甘、辛为主,归经以脾、胃经为主。频次较高的前10味中药分别为山楂、陈皮、甘草、麦芽、鸡内金、茯苓、白术、神曲、厚朴、半夏;频繁项集显示药物以益气健脾、理气消食配伍为主;关联规则分析显示治疗功能性消化不良常见药对包括陈皮-山楂、麦芽-山楂、鸡内金-山楂等;聚类分析发现治疗功能性消化不良药物4类,主要包括理气和胃类、疏肝行气类、消食化积类、益气健脾类;核心药物网络由22味中药组成,核心配伍以消食化积、理气健脾为主。结论:数据挖掘研究为功能性消化不良的临床治疗和中药组方开发提供了参考依据;临床治疗功能性消化不良时应把握扶正祛邪的基本治则,以益气健脾、消食化积为基本治法,兼顾理气和胃、疏肝解郁、化湿燥湿等方法,结合患者具体情况辨证论治。

从幽门螺杆菌感染视角新解“邪之所凑,其气必虚”

以幽门螺杆菌(Hp)感染为例,从Hp感染的因-机-证-治-防角度对《黄帝内经》中“邪之所凑,其气必虚”的理论进行新的阐述。Hp属中医“邪气”范畴,Hp感染病因病机有两个方面:一是脏腑功能失调,脾胃受损,正气亏虚则易感染Hp,此即“正虚”为因,“邪凑”为果。二是Hp感染日久导致脾胃受损,脏腑功能失常,造成正气亏虚,进而使病情发展,此即“邪凑”为因,“正虚”为果。“邪凑”与“正虚”不能单纯强调“正虚”为因,“邪凑”为果,需要全面理解其因果关系。防治Hp相关疾病应扶正与祛邪并举。

衬层料浆无桨混合工艺

已定型LN106衬层手工混合工艺质量一致性差、料浆粘度高、使用量少,一般的机械搅拌设备难以满足要求。为提高产品质量可靠性,通过调研相关混合方法,结合产品特点,拟针对声共振工艺替代现用的手工混合工艺的可行性进行研究。通过对投料量、加料顺序、混合加速度、混合时间等工艺参数进行单因素实验,借助元素分析与胶片力学性能测试结果比对。实验结果表明,声共振混合工艺可有效地混匀衬层料浆,力学性能亦满足指标要求,混合工艺的边界条件为投料量100～1000 g,加速度为80g～90g,混合时间8～12 min。确定的工艺参数为:手工预混60～80 s(与原工艺相同),混合时间10 min,混合加速度80g。

基于数据挖掘探索中成药复方治疗消化系统肿瘤的用药规律

目的:基于数据挖掘方法分析中成药复方治疗消化系统肿瘤的用药规律。方法:基于药智网数据库中的“中成药处方数据库”,收集治疗消化系统肿瘤的中成药,建立Excel表,应用古今医案云平台(V2.2.1)对数据进行频次统计、关联分析、药物聚类和复杂网络分析。结果:筛选出36个治疗消化系统肿瘤的中成药复方,药性以温、寒性为主,药味以苦、甘味为主,归经以肝、脾经为主。高频中药有黄芪、半枝莲、人参、莪术、三棱、白术、白花蛇舌草等。关联分析得到17个药物组合,高频药对有半枝莲-黄芪、人参-黄芪、莪术-黄芪、半枝莲-莪术等。聚类分析得到3类药物。核心用药网络由27味中药组成,核心配伍网络由3组药物构成。结论:治疗消化系统肿瘤的中成药复方药物具有寒温并用、补泻兼施、肝脾同治的特点,用药及配伍以益气健脾药、活血化瘀药、清热解毒药为主,药对以补气、养阴、活血、解毒相互配伍为主,反映出消化系统肿瘤“虚、瘀、毒”夹杂的病机特点。数据挖掘可以为中成药的用药及配伍规律提供参考。

让环保教育走进中学化学课堂

寓环保教育于中学化学教学之中,是每一个中学化学教师义不容辞的责任,也是新课程教育理念的体现,更是树立环保意识、体现绿色化学的现实需要。因此,需要在化学教学中构建新的、多元的教学平台,对学生进行环保教育。

李月廷教授防治保胆取石术后结石复发的临床经验

微创保胆取石术后存在一定的结石复发率。李月廷教授认为术后结石复发,病位主要在肝胆,与脾、胃、肠等脏腑相关,病机与肝胆疏泄失司、脾胃升降失调、胆肠腑气失通相关。临床诊治以疏肝利胆、行气通腑为本,辅以调和脾胃,活血化瘀。遣方用药时,既注重“肝”治疗疏肝为先之法的运用,又注重“胆”的治疗,从胆论治以护胆,还注重“肠”的治疗,即认为“泄肠亦利胆”,意在疏通胆汁排泄,获得临床疗效。

从崔某案探析二倍工资计算基数

为明确劳动关系中用人单位与劳动者双方的权利义务,使劳动关系处于和谐稳定的状态,《劳动合同法》第八十二条的规定,确立了二倍工资罚则制度.但其中对二倍工资的计算基数,并未作出明确规定,因此二倍工资计算基数往往成了适用二倍工资条款时争议的焦点.本文以具体案例为基础,对二倍工资的计算基数进行了探讨,以期为解决二倍工资争议提供有益的借鉴.