猪细小病毒病研究进展

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是一种无囊膜DNA病毒,主要引起母猪繁殖障碍。该病毒在全世界广泛流行,我国猪场PPV感染率高达90%以上,给养猪业带来巨大经济损失。PPV经口、鼻传播,主要侵染猪的生殖器官,引起母猪的死胎、木乃伊胎和公猪的精液质量下降。临床采用接种疫苗的方式进行防控,起到了一定的效果。论文对病毒的基因组和蛋白特征、流行病学和疫苗研究进行综述,以期为PPV的基础研究和疫苗开发提供参考。

伪狂犬病病毒研究进展

伪狂犬病是由伪狂犬病病毒(pesudorabies virus,PRV)感染引起的一种严重的传染性病毒病,主要引起猪的繁殖失败、生长停滞和呼吸系统障碍,2周龄以下仔猪死亡率高达100%。伪狂犬病属于多种动物共患传染病,主要经口、鼻感染,通过在上呼吸道上皮细胞中的复制,进一步感染神经系统和内脏器官。PRV有11种糖蛋白分子,在病毒的毒力、感染入侵和致病过程中发挥重要作用。临床上采用疫苗免疫和鉴别诊断相结合的方式进行PRV的防控,起到了一定的效果,但是仍然给养猪业造成巨大损失。因此,本文综述和讨论了猪伪狂犬病的临床症状以及病原的分子特征、致病机制和疫苗研究的最新进展,以期为该病疫苗研究和诊断试剂开发提供参考。

卡格列净对老年2型糖尿病合并心力衰竭患者心功能和预后的影响

目的探讨卡格列净对老年2型糖尿病(T2DM)合并心力衰竭患者心功能及预后的影响。方法入选我院2018年1~12月收治的T2DM合并心力衰竭患者128例,随机分为治疗组(卡格列净)64例和对照组64例,随访1年,比较2组患者血糖控制情况(空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白)、心功能(B型钠尿肽、LVEF、左心室舒张末压、6min步行距离)、炎性因子及不良预后差异。结果治疗1年后,治疗组空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、B型钠尿肽、炎性因子、左心室舒张末压低于对照组,而LVEF、6min步行距离高于对照组高(P<0.05,P<0.01)。治疗组不良预后事件发生率低于对照组(7.8%vs 21.9%,P<0.05)。结论卡格列净对T2DM合并心力衰竭患者血糖、心功能及预后均有一定的改善作用,作用机制可能与其降糖及抗炎性反应作用有关。

细粒棘球蚴内蒙株FABP基因cDNA的克隆与核酸疫苗的构建

根据GenBank中细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白(FABP)基因cDNA序列设计引物,并在起始密码子前加上Kozak序列(CCACC),提取细粒棘球蚴(内蒙株)的原头蚴总RNA,RT-PCR扩增目的基因。回收其纯化的产物克隆到pMD19-T载体后进行序列分析。克隆到的FABP基因cDNA序列长402bp,开放阅读框(ORF)编码133个氨基酸。FABP基因cDNA亚克隆到pcDNA3.1(+)中,构建核酸疫苗pcDNA3.1-FABP-NM,经测序验证,结果正确。

慢性肾脏病中高钾血症的治疗进展

高钾血症是临床常见的电解质紊乱,尤其多见于慢性肾脏病(CKD)患者,是CKD的主要并发症之一,严重时可危及患者生命。随着CKD患病率的升高,高钾血症的有效防治越来越重要。目前治疗高钾血症的药物多用于急性高钾血症的短期控制,不适用于长期维持治疗,而新型降钾药物(如环硅酸锆钠)可以安全有效地防治高钾血症。肾素-血管紧张素-醛固酮系统抑制剂对心、肾均有有益作用,但常因导致高钾血症而停用,与新型降钾药物联用可减少高钾血症发生。新型降钾药物为肾素-血管紧张素-醛固酮系统抑制剂在CKD患者中继续应用提供了可能。

细粒棘球蚴内蒙株疫苗侯选基因克隆及分析

目的为确定细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白(FABP)基因的特性并为研究其免疫功能奠定基础。方法根据已报道的细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白的基因序列(AY024340和AF321119)设计引物,进行FABP基因扩增。结果成功克隆到细粒棘球蚴内蒙株FABP基因,扩增片段为482bp;序列比对结果显示,细粒棘球蚴内蒙株FABP基因与国内株FABP基因(GenBank登录号为AY024340)序列完全一致,同源性为100%;与国外株FABP基因(GenBank登录号为AF32I119)的同源性为99%。结论细粒棘球蚴脂肪酸结合蛋白有潜在的抗原表位位点,为研究该蛋白的免疫功能及构建FABP核酸疫苗奠定了基础。

脂肪细胞膜免疫对动物体脂含量的调控

降低动物体内脂肪含量,改善畜产品质量一直是动物研究人员研究的重点。近年发展起来的脂肪细胞膜免疫为降低动物体脂含量提供了一种安全而有效的方法。本文简要介绍了脂肪细胞膜免疫的两种免疫方法,并对其发展前景进行了展望。

从《论语》看孔子的教学方法

本文在简论孔子教育思想的基础上,从注重言传身教、因材施教、提倡启发式教学、善于培养学生兴趣、认真听取教育对象的意见等五个方面论述了教师教的方法;从提倡学而不厌、注重实事求是、主张学思并重、鼓励择善从之、提倡不耻下问等五个角度分析了学生学的方法。

金水宝胶囊治疗慢性肾功能衰竭疗效观察

目的:观察金水宝胶囊治疗慢性肾功能衰竭疗效及对生化指标的影响。方法:选择收治的100例慢性肾功能衰竭患者,随机分成观察组与对照组,每组各50例。对照组采用常规西医治疗,观察组则在对照组的基础上加用金水宝胶囊治疗,比较分析2组治疗效果及C反应蛋白(CRP)、肌酐清除率(Ccr)、血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)指标变化。结果:治疗总有效率观察组为96%,高于对照组68%(P<0.05)。干预前,2组患者CRP,Ccr,Scr,BUN,UA比较差异无统计学意义(P>0.05);干预后,观察组患者CRP,Scr,BUN,UA等指标下降幅度优于对照组(P<0.05),观察组患者Ccr改善程度优于对照组对照组(P<0.05)。结论:金水宝胶囊治疗慢性肾功能衰竭,可有效改善CRP,Scr,BUN,UA等生化指标,延缓病情发展。

张家山汉简用字与《说文解字》义证

《说文解字》中部分字的释义有很多不见于后世文献,或者在文献中的用例非常少。出土于张家山的西汉竹简,为《说文解字》的某些释义提供了新的文献用例,对于了解汉字的发展变化具有积极的意义。

细粒棘球蚴FABP基因的原核表达及蛋白鉴定

构建原核表达载体pET-FABP,优化表达条件,采用免疫学方法鉴定纯化的FABP融合蛋白。载体pMD19-T-FABP和pET-44a(+)经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切,将回收的FABP片段与pET-44a(+)连接,构建原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,优化表达条件,纯化FABP融合蛋白,Western blotting鉴定。成功构建了原核表达载体pET-FABP并在大肠杆菌中高效表达。纯化后的蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确。构建的表达载体pET-FABP可以在大肠杆菌中大量表达Nus-FABP融合蛋白,为进一步研制FABP亚单位疫苗奠定了基础。

张家山汉代医简古《脉书》中的异体字考

在汉字发展史上,西汉文字处于从古文字到今文字的过渡完成阶段,具体的用字现象在实物文字材料中体现得尤为真切。通过调查考释张家山汉简《脉书》中出现的异体字的使用情况及成因和沿革,来反映西汉早期用字的一个侧面。

转录因子HIF-1α及其信号通路在疾病发生中的作用研究进展

缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子,是应答缺氧应激的关键因子。HIF-1α是缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)的一个亚单位,受缺氧调控并调节HIF-1的活性。在缺氧条件下,HIF-1α转移到细胞核内结合HIF-1β形成有活性的HIF-1,通过与靶基因上的缺氧反应元件结合调节多种基因的转录。HIF-1α可以与上下游多种蛋白组成不同的信号通路,介导低氧信号,调控细胞产生一系列对缺氧的代偿反应,在机体的生长发育及生理和病理过程中发挥重要作用,是生物医学研究的一个焦点。对转录因子HIF-1α及其信号通路在疾病发生中的作用进行了综述,介绍了HIF-1α在动物生长发育、炎症和肿瘤中的研究概况,并进行了展望,以便更好地应用于生物医学。

噬菌体抗体库的构建及抗猪脂肪细胞膜单抗的筛选

用猪脂肪细胞以免疫删减法免疫小鼠,取其脾细胞,RT-PCR扩增抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,克隆入噬菌粒表达载体pCANTAB5E中,构建单链抗体(ScFv)文库。用猪脂肪细胞,对其进行3轮吸附-洗脱-富集,筛选抗猪脂肪细胞膜单抗。经ELISA检测,51/96克隆具有与猪脂肪细胞结合活性,阳性率为53%,与猪肝细胞则成阴性反应,初步证明了单抗的特异性,为猪脂肪细胞膜单抗的制备提供了一种新的方法。

克隆猪主要组织相容性复合体Ⅱ类DR基因座α链和β链及其体外复合体的构建

为推动猪主要组织相容性复合体(MHC)空间构象的研究,体外构建了猪的MHC-Ⅱ类蛋白复合体(SLA-Ⅱ)。首先克隆长白-达兰杂交商品猪DRA和DRB基因,用富含甘氨酸-丝氨酸的Linker(G4S)3连接DRA和DRB的胞外区,用SOE-PCR得到复合体基因DRA-linker-DRB,插入原核表达载体进行表达;对表达的融合蛋白进行Western-blot鉴定、纯化、蛋白酶切割并对切割后的蛋白进行分离和纯化。对分离的目的蛋白、融合蛋白及麦芽糖结合蛋白(MBP)进行二级结构测定。得到83.4 ku的可溶性融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DRB,其Western杂交带与表达条带大小一致。切割分离后的目的蛋白大小为40.9 ku。目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB二级图谱显示该蛋白呈典型α-螺旋结构,各二级结构元件α螺旋、β折叠、转角和随机卷曲的氨基酸数目分别为80、121、101和80,融合蛋白MBP-DRA-(G4S)3-DR与目的蛋白DRA-(G4S)3-DRB的二级结构各元件的符合率分别达到了95%、96.7%、91.1%和93.0%。结果分析表明得到的复合体构象正确,可用于进一步的B细胞抗原表位的筛选等结构和功能研究。

抗猪脂肪细胞膜单链抗体基因的构建及鉴定

应用噬菌体展示技术,从猪脂肪细胞免疫的小鼠脾细胞mRNA中构建出单链抗体(scFv)cDNA文库。cDNA文库克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E,转化E.coliTG1。通过噬菌体表面展示,用猪脂肪细胞对表达的重组噬菌体单链抗体文库进行3轮亲和富集,筛选出了猪脂肪细胞膜scFv,为今后的应用奠定了基础。

巴马小型猪SLA-2和β_2m复合体蛋白的构建及二级结构测定分析

以巴马小型猪为研究材料,克隆SLA-2和β2m基因。然后采用剪接重叠延伸PCR(Splicing overlap exten-tion PCR,SOE PCR)法,将SLA-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的Linker(G4S)3连接,形成SLA-2-Linker-β2m。将SLA-2-Linker-β2m在pMAL-p2X系统上表达,其融合表达蛋白分别经过West-ern-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(Circular dichroism spectrum,CD)测定蛋白的二级结构。结果显示,重构表达的复合体融合蛋白MBP-SLA-2-(G4S)3-β2m大小为84.1 ku。切割后去除MBP的单体蛋白大小为41.6 ku。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、97.3%、97.1%和97.9%,揭示重构的复合体具有正确的二级结构,可以用于体外多肽结合等研究。

H5N1亚型禽流感病毒核衣壳蛋白(NP)基因的进化及原核表达

参考GenBank上H5N1亚型禽流感病毒(AIV)的核衣壳蛋白(NP)基因序列设计引物,PCR扩增NP基因,对其进行序列分析并构建分子进化树。将克隆的NP基因插入原核表达载体pET32a,在大肠杆菌中进行诱导表达,对诱导表达的NP重组蛋白进行纯化、Western-Blot鉴定及免疫原性分析。结果表明,克隆的NP基因与GenBank上发表的另外2个河南AIV毒株亲缘关系较近,诱导表达的NP重组蛋白主要以可溶性形式存在,分子量约为70 kDa,并且能够与H5亚型AIV阳性血清发生特异性反应,具有良好的抗原性。

新城疫病毒作为疫苗载体的研究进展

在综述新城疫病毒(NDV) 的分子生物学特征、致病本质、复制机理以及利用反向遗传操作技术获得NDV的感染性克隆的基础上,着重介绍了以NDV作载体,将报告基因、功能基因包括鸡传染性法氏囊病毒VP2基因及流感病毒HA基因等插入NDV基因组的不同位置构建重组新城疫病毒,并对外源基因进行成功表达的研究进展。同时对DNV作为新的疫苗载体表达外源基因的可行性及未来应用前景进行了初探。

企业集团财务内部控制在超高压公司运用的思考

本文首先阐明我国企业集团开展财务内部控制的必要性,进而分析和讨论企业集团财务内部控制的主要方法,并以湖北超高压公司为例,实证分析该企业集团在进行财务内部控制实践中取得的成绩和存在的不足。笔者提出,企业集团只有有效运用财务内部控制方法,才能有助于管理层决策的实施,有助于企业战略目标的顺利实现,使企业集团价值最大化。