基于网络药理学分析银黄可溶性粉治疗猪喘气病的活性成分及作用机制

为了解银黄可溶性粉治疗猪喘气病的活性成分及作用机制,本试验采用网络药理学的方法进行探索,利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取银黄可溶性粉的活性成分及对应的靶点,将靶点导入Uniprot数据库,利用Cytoscape 3.5.0软件构建药物-活性成分-靶点网络图,在Genecards数据库和人类孟德尔遗传数据库(OMIM)获取猪喘气病的靶点,将靶点导入Uniprot数据库,通过STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络图,在生物学信息注释数据库(DAVID)进行基因本体(GO)富集分析和基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。结果显示,银黄可溶性粉筛选出48个活性成分,155个靶点;猪喘气病有关的靶点有3154个;PPI网络有51个靶点,关键靶点有血管内皮生长因子A(VEGFA)和肿瘤坏死因子(TNF)等;GO功能注释得到98个条目(P<0.05);KEGG信号通路富集分析得到42条通路(P<0.05)。结果表明,银黄可溶性粉中槲皮素、木犀草素、山奈酚和汉黄芩素可能是治疗猪喘气病的活性成分,通过作用于VEGFA、TNF等靶点,调控结核通路和哮喘通路以治疗猪喘气病。本试验结果为猪喘气病的银黄可溶性粉治疗提供了理论依据。

板芪益肺散药效学试验

为了研究自拟中药方剂板芪益肺散的止咳、平喘、祛痰和抗炎效果,本试验选用清肺散为对照中药,采用浓氨水引咳法、组织胺和乙酰胆碱引喘法、小鼠气管酚红排泌法和二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型法,检测了高、中、低剂量板芪益肺散[35.00、17.50、8.75 g/(kg·bw)]的药效。结果显示,板芪益肺散与清肺散的止咳作用相近(P>0.05),但2种中药方剂的止咳效果均明显低于阳性对照枸橼酸喷托维林(P<0.01);板芪益肺散具有良好的平喘效果,且其高剂量组平喘效果优于阳性对照氨茶碱与清肺散(P<0.01);板芪益肺散祛痰效果极显著优于阳性对照盐酸溴己新(P<0.01),但与清肺散作用相近(P>0.05);板芪益肺散具有一定的抗炎效果,抗炎效果极显著优于清肺散(P<0.01),但极显著低于阳性对照氢化可的松(P<0.01)。结果表明,自拟方剂板芪益肺散较传统方剂清肺散具有更为良好的平喘功效,止咳、祛痰作用明显,同时还有一定的抗炎活性,为该方剂的临床应用提供了数据支持。

清肺颗粒质量标准的研究

为开展对清肺颗粒进行质量标准研究。采用薄层色谱法(TLC)对清肺颗粒中板蓝根、贝母、桔梗、甘草定性鉴别研究,采用高效液相色谱法(HPLC)对清肺颗粒中槲皮素-3-o-β-D-葡萄糖-7-o-β-D-龙胆双糖苷进行含量测定。结果显示,TLC鉴别各组分条带斑点清晰,具有专属性,阴性对照无干扰。建立HPLC含量测定方法,槲皮素-3-o-β-D-葡萄糖-7-o-β-D-龙胆双糖苷在1~12.5μg/mL范围内与峰面积呈线性关系良好(R2=0.9998),平均回收率为98.6%,RSD为0.44%。该方法操作简单、灵敏度高、重复性好,可作用于清肺颗粒的质量控制。

板蓝根超微粉对大鼠免疫功能调节作用的研究

为研究板蓝根经超微粉碎后对大鼠免疫功能调节的作用影响,利用环磷酰胺构建大鼠免疫低下模型,将80只SD大鼠随机分为4组,即模型组、普通粉组、超微粉组及空白对照组,每组20只。40mg/kg环磷酰胺腹腔注射5d制造免疫抑制大鼠模型,第6天开始给药,除空白组、模型组灌服生理盐水外,其他组给药5g/kg。第7、14天采集血样及大鼠肝脏、脾脏、胸腺组织,测定免疫器官指数、白细胞数量、C3b受体花环形成率(C3b-R)、红细胞免疫复合物花环形成率(ICR)、吞噬百分率、吞噬指数等指标,实时荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素2(IL-2)mRNA转录水平,Westernblotting法检测TNF-ɑ和IL-2蛋白表达水平。结果显示,模型组大鼠白细胞数量、体重、胸腺和脾脏免疫器官指数较空白对照组均显著降低(P<0.05)。第14天时,超微粉组巨噬细胞吞噬百分率达到54.75%,吞噬指数为0.58;C3b-R为9.44%,显著高于普通粉组(8.97%)(P<0.05),超微粉组ICR为6.09%,低于普通粉组(6.33%)(P>0.05)。与普通粉组相比,第14天板蓝根超微粉组肝脏中TNF-α、IL-2mRNA转录水平和蛋白水平的表达提高。综上所述,板蓝根超微粉和普通粉均可显著增强大鼠非特异性免疫功能,但超微粉效果优于普通粉。

复方诃子口服液抗犊牛大肠杆菌性腹泻的药理作用研究

试验旨在研究抗犊牛大肠杆菌性腹泻的复方诃子口服液的药理作用,采用中和毒素试验、抗渗出试验、解热试验、镇痛试验、肠蠕动试验及免疫调节试验的方法,验证复方诃子口服液的药理作用。结果显示,抗毒素中和试验中,复方诃子口服液组与阴性对照组差异极显著(P<0.01)。抗渗出试验中,各药物组均能不同程度地减少伊文思蓝的渗出,阿司匹林组及复方诃子口服液高、中、低剂量组的抑制率分别为58.1%、42.8%、31.6%和14.9%,其中复方诃子口服液低剂量组与空白组相比差异显著(P<0.05),其余各组与空白组相比均差异极显著(P<0.01);复方诃子口服液各剂量组与阿司匹林组相比,高剂量组差异不显著(P>0.05),中、低剂量组差异极显著(P<0.01)。解热试验中,复方诃子口服液高剂量组给药后1h快速抑制体温升高,中剂量组给药后2h抑制体温升高;给药后3h,与模型组相比,复方诃子口服液高、中剂量组体温均明显降低,低剂量组与模型组差异不明显。镇痛试验中,与空白组相比,阿司匹林组、复方诃子口服液高、中剂量组镇痛效果差异极显著(P<0.01),扭体抑制率分别为64.55%、52.73%和32.73%,疼痛潜伏期分别为9.59、6.33和5.74min;而复方诃子口服液低剂量组差异不显著(P>0.05)。肠蠕动试验中,与空白组相比,硫酸阿托品组及复方诃子口服液高剂量组对肠蠕动抑制作用差异极显著(P<0.01),推进率分别为44.18%和52.55%,复方诃子口服液中剂量组差异显著(P<0.05),低剂量组差异不显著(P>0.05)。免疫调节试验中,与空白组相比,模型组白细胞数、脾脏指数及胸腺指数均显著降低(P<0.05);而与模型组相比,第14天复方诃子口服液组白细胞数、脾脏指数及胸腺指数均显著提高(P<0.05)。综上所述,复方诃子口服液对犊牛大肠杆菌性腹泻具有抑制肠蠕动、解热、抗疼痛和组织液渗出、中和肠毒素及增强免疫功能等药理作用。

板蓝根超微粉粉体特性及水溶性成分溶出研究

通过对板蓝根超微粉碎粉体特性研究,为中药超微粉推广应用提供依据。试验通过扫描电镜、激光粒度分析仪及高效液相色谱对板蓝根超微粉、板蓝根普通粉的粒度及水溶性活性成分溶出进行检测,探讨超微粉碎对中药粉碎粒度、活性成分溶出影响。试验结果显示板蓝根超微粉和普通粉D50分别为5.6、171.058μm;比表面积分别为1.551、0.225 cm2/g;休止角分别为47.43°、42.95°;松密度分别为0.39、0.48 g/cm3。电镜观察超微粉看不到完整细胞结构,多为细胞碎片,而普通粉可以看到完整的细胞。板蓝根超微粉和普通粉水溶性浸出物的溶出量大约为50%和42%。板蓝根超微粉和普通粉多糖提取率分别为9.34%和8.36%。板蓝根超微粉和普通粉中(R,S)-告依春的含量分别为1.068、0.784 mg/g。板蓝根经过超微粉碎后,中直粒径可达5.6μm,细胞破壁率可达100%,而普通粉破壁率仅为31.74%;板蓝根经超微粉碎对多糖的溶出显示为超微粉大于普通粉,板蓝根超微粉水溶性活性成分告依春溶出率优于普通粉。

板蓝根微粉对雏鸡大肠杆菌病的防治试验

为了研究板蓝根超微粉对雏鸡大肠杆菌病的临床疗效,试验以板蓝根普通粉做对照。利用50℃温水提取板蓝根超微粉和普通粉活性成分,水溶性活性成分告依春的高效液相检测,并将水提取物进行体外抑菌试验和体内防治试验。试验将9日龄雄性雏鸡270只,随机分为9组,每组30只。分为2个预防组、5个治疗组、模型组及空白组。试验结果:板蓝根超微粉和普通粉中告依春含量分别为1.681mg/g,1.067mg/g;板蓝根超微粉对大肠杆菌的抑菌效果高度敏感,其抑菌效果大于普通粉,抑菌环分别为16 mm和13 mm。体内试验结果显示,板蓝根超微粉预防有效率90%,普通粉预防有效率73.33%;板蓝根超微粉治愈率为83.33%,普通粉治愈率为70%,氧氟沙星治愈率为86.7%。结论:板蓝根超微粉水溶性活性成分告依春溶出率优于普通粉,超微粉体外抑菌和体内对雏鸡大肠杆菌病的防治均优于板蓝根普通粉。

宣白承气散和鱼腥草对后备母猪肺热腑实证的效果评价

肺热腑实证引起的疾病已经成为猪场的常见病,尤其易发于秋冬、初春气温骤变的季节变换时期,因此本试验以中兽医理论为指导,通过向后备母猪饲料中添加宣白承气散和鱼腥草,研究其对后备母猪肺热腑实证的效果。结果显示,宣白承气散、鱼腥草均可以改善肺热腑实证后备母猪的整体状态、降低料重比和增强免疫力,而宣白承气散在提高机体抗氧化能力方面较鱼腥草更强,能有效地预防肺热咳喘。

清肺颗粒的急性毒性和亚慢性毒性试验

通过小鼠急性毒性试验和大鼠亚慢性毒性试验对清肺颗粒进行安全性评价,为临床安全用药提供理论依据。给82只昆明小鼠灌胃给药进行半数致死量试验和最大给药量试验;将40只大鼠分为高、中、低剂量中药组和对照组进行灌胃给药,每天给药1次,连续给药35 d,灌胃结束后测定大鼠的一般情况、血液指标、生化指标、脏器系数和病理组织学变化。试验显示,小鼠急性毒性试验中未能测出半数致死量,最大给药剂量为每千克体重75 g时小鼠未出现死亡情况;大鼠亚慢性毒性试验中各剂量组清肺颗粒对大鼠的一般情况无影响,血液检查、生化指标和脏器系数也均在正常范围内,与对照组差异不显著(P>0.05),病理组织学检查显示试验组和对照组也未见显著差异。研究表明,清肺颗粒的安全性高,无毒性作用,合理使用时可应用于兽医临床。

板蓝根内生产纤维素酶细菌的分离鉴定

从板蓝根等中药材中分离内生细菌,考察其生物学特性和产纤维素酶性质。依据筛选菌发酵中草药能力及产酶特性,从众多菌株中筛选出产纤维素能力强的菌株,明确其形态及生化特性、适宜生长温度、适宜生长酸碱度、生长曲线、产芽孢能力、药物敏感性和产纤维素能力及适宜条件。结果表明:分离菌为革兰氏阳性芽孢杆菌,经序列测定和同源性分析确定为贝莱斯芽孢杆菌,菌株的最适生长温度为35~40℃,最适生长pH为5.0~8.0,菌株的对数生长期为4~12 h、生长稳定期为12~30 h,72 h时菌株的芽孢形成率为82.1%,菌株的药物敏感性好,培养至36 h时菌株的的纤维素酶活力达31.97 U/mL,温度低于60℃、pH为7.0时菌株的纤维素酶活力比较稳定。分离的贝莱斯芽孢杆菌具有良好的产纤维素酶能力,适宜作为中草药发酵菌种。

改良清肺颗粒的稳定性研究

为研究改良清肺颗粒的稳定性,试验采用高效液相色谱法(HPLC)定量检测清肺颗粒中葶苈子中槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量并使用薄层色谱法(TLC)鉴别。分别通过影响因素试验、加速试验、长期稳定性试验来考察清肺颗粒在光照、高温及高湿条件下的稳定性。试验结果表明:湿度是影响改良清肺颗粒的主要因素,高湿度环境导致改良清肺颗粒颜色加深,放置10 d后水分提高19.37%(P <0.01),粒度降低9.3%(P <0.05),槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量降低3%(P <0.05)。在加速试验与长期稳定性试验中,改良清肺颗粒的性状、水分含量、粒度、溶化性和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量变化不显著。综上所述,改良清肺颗粒稳定性良好,于室温保存12个月各项指标均符合《中国兽药典》稳定性规定。

生物酶法提取中草药活性成分研究进展

对酶提方法的原理、酶类选择依据、酶提工艺,以及酶提法应用现状进行了综述,旨在为同类研究提供技术参考。中草药具有广泛的应用前景和开发潜力,为提高中药疗效,方便临床用药,生产中常需要对中草药进行提取,然而传统的提取方法较为繁杂。随着科技进步,一些现代中药提取方法不断涌现。酶提方法是一种应用酶工程技术提取中药的现代中药提取方法,该方法具有高效、无毒、反应条件温和等优点,是一种发展潜力较大的中药提取方法。

清肺颗粒固态发酵培养基成分研究

【目的】筛选最佳的清肺颗粒固态发酵培养基碳源、氮源、无机盐种类,优化清肺颗粒发酵培养基组成,提高组方中(R,S)-告依春的含量。【方法】建立发酵物中(R,S)-告依春含量的高效液相色谱法(HPLC)检测方法;单因素试验筛选清肺颗粒固态发酵培养基的碳源(葡萄糖、蔗糖、甘露醇、麦芽糖、玉米面、可溶性淀粉和清肺组方中药)、氮源(蛋白胨、黄豆粉、麸皮、酵母浸膏、硫酸铵、氯化铵和尿素)和无机盐(碳酸钙、磷酸二氢钾、硫酸镁、硫酸锰和氯化钠)成分,HPLC测定每克固态发酵培养物中(R,S)-告依春含量;4因素(碳源、氮源、无机盐和水)3水平响应面分析优化各培养基成分比例,用筛选出的最适培养基成分替代基础培养基中相应物质,接种解淀粉芽孢杆菌,于37℃、130 r/min振荡培养22 h,再以每克固态发酵培养物中(R,S)-告依春含量为评价指标,以响应面分析筛选培养基各组分含量。【结果】清肺颗粒最适固态发酵培养基碳源为组方中药粉,无机盐为CaCO_(3),氮源为黄豆粉以及水;响应面分析优化的各培养基成分含量为:中药粉30%、黄豆粉10%、CaCO_(3)0.2%和水59.8%,此时固态发酵物中(R,S)-告依春含量达0.0184 mg/g,而未优化前清肺颗粒组方中(R,S)-告依春含量为0.0150 mg/g,二者差异极显著(P<0.01),说明解淀粉芽孢杆菌的发酵工艺更有利于清肺颗粒组方有效成分的释放。【结论】优化的固态发酵培养基易于解淀粉芽孢杆菌生长。

响应面法优化畜禽清肺颗粒制备工艺

为了解决传统中药提取效率低的技术问题,采用单因素试验结合响应面法对畜禽清肺颗粒制备工艺进行改良,包括发酵提取、浸膏提取、醇沉、颗粒处方、制粒、烘干和整粒等,并测定改良畜禽清肺颗粒的药物有效成分含量。结果表明,畜禽清肺颗粒最佳制备工艺为发酵中药加8倍水提取2次,1.5 h/次;所得浸膏用70%乙醇于相对密度1.35条件下静置24 h;将浸膏、辅料以1∶7.6配比,辅料为乳糖与糊精1∶2配比,并以80%乙醇作为湿润剂湿混30 min,过1.40 mm孔径筛,总混30 min,制备颗粒;湿颗粒于70℃烘干4 h,用1.40 mm孔径漩振筛整粒,粗颗粒用摇摆颗粒机1.40 mm孔径筛继续整粒即可。与传统畜禽清肺颗粒相比,改良畜禽清肺颗粒中(R,S)-告依春和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷含量分别提高22.67%和25.39%,甘草苷和甘草酸铵含量均提高1倍以上。

发酵清肺颗粒对免疫抑制小鼠免疫调节作用研究

为了探究发酵清肺颗粒对免疫抑制小鼠的免疫调节作用,建立环磷酰胺免疫抑制小鼠模型,对其灌胃不同剂量发酵清肺颗粒。灌胃后记录小鼠的生长性能、器官指数,测定巨噬细胞吞噬能力、淋巴细胞增殖能力以及细胞因子含量。结果显示,发酵清肺颗粒能显著改善免疫抑制小鼠的体重下降情况,显著上调脾脏指数、胸腺指数,显著提升巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞增殖能力,提高Th1/Th2比值。表明发酵清肺颗粒能通过提升脾脏指数、胸腺指数,增强巨噬细胞吞噬能力、脾淋巴细胞增殖能力,加强特异性细胞免疫及体液免疫,调节免疫抑制小鼠的免疫功能。

现代中药提取技术研究进展

中药成分复杂,含有多种有效成分,如何找到一种行之有效的提取方法将中药中的有效成分进行分离、纯化,最终得到有效的单体是中药研究领域中一项重要的内容。传统的提取方法如浸渍法、煎煮法、渗流法、回流提取法等,由于选择性差、提取范围广、容易浸出大量杂质且有效成分易分解,直接影响到药品的质量、生产效率和经济效益,所以传统的提取工艺己经不能够满足现代化药品生产的需求。现对新型中药提取技术进行综述,为临床的中药提取提供思路。

不同提取工艺对清肺散有效成分提取效率的影响

为筛选清肺散的理想提取方法,试验采用生物发酵法、酶提法和水煎法三种中药提取工艺,以(R,S)-告依春、甘草苷、甘草酸铵和槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龙胆双糖苷为考核指标,应用液相色谱法测定不同方法提取清肺散有效活性成分的效果。结果显示,在相同物理条件下,生物发酵法对清肺散有效成分提取量分别均高于纤维素酶提取法和水煎提取法,3种方法之间清肺散有效成分含量提取率存在着极显著差异(P<0.01)。试验表明,生物发酵法中药有效成分的提取效果最优,其次是纤维素酶提取法和水煎法,研究结果为清肺散活性成分的提取提供了技术参考。

清肺颗粒HPLC指纹图谱建立及(R,S)-告依春含量测定

为了建立中兽药清肺颗粒(板蓝根、葶苈子、桔梗等)HPLC指纹图谱,同时测定其中(R,S)-告依春的含量。将该复方药的提取液进行分析,采用Inert SustainC18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-5 mL/L甲酸溶液,梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温30℃,检测波长254 nm,进行HPLC指纹图谱的建立并测定颗粒中(R,S)-告依春的含量。结果显示10批样品指纹图谱中有12个共有峰,相似度大于0.9。(R,S)-告依春标准曲线在0.8μg/mL~24μg/mL范围内线性关系良好,在清肺颗粒中加样回收率为98.63%,RSD为1.56%。(R,S)-告依春在10批颗粒样品中平均含量为0.0161 mg/g。研究结果表明该指纹图谱建立的方法具有良好的系统性以及稳定性,可用于清肺颗粒的质量控制。

兽用清肺颗粒处方药材研究进展

中药对于畜禽呼吸道疾病治疗上有着特殊的疗效,清肺颗粒具有良好的清肺平喘,化痰止咳功效,主治动物咽喉肿痛、清热咳嗽之症,是一种治疗畜禽常见呼吸道疾病的高效中药产品。通过查阅典籍与文献对清肺颗粒处方中药材的主要成分、药理作用和提取工艺研究进行综述,为清肺颗粒制备工艺改良提供参考依据。

基于抗菌及抗炎作用探究板蓝根微粉对雏鸡沙门菌病的防治效果

采用板蓝根微粉(300目)和普通粉(80目)进行对比试验,通过抗菌、抗炎及对雏鸡白痢沙门菌病的临床疗效观察,评价板蓝根微粉对雏鸡白痢沙门菌病的防治效果。结果显示,板蓝根微粉的最小抑菌质量浓度(MIC)为0.125 kg/L,最小杀菌质量浓度(MBC)为0.250 kg/L,板蓝根普通粉的MIC为0.250 kg/L,MBC为0.500 kg/L。扫描电镜和透视电镜下观察到板蓝根微粉可使菌体出现溢缩、弯曲、凹陷。板蓝根微粉高剂量组的肿胀度低于普通粉高剂量。板蓝根微粉高剂量在给药1 h后,可显著抑制体温上升,达到解热效果。板蓝根微粉高剂量组大鼠血清中的cAMP和PGE2与模型组相比差异显著(P<0.05)。板蓝根微粉和普通粉对雏鸡沙门菌病均具有一定的预防效果,能降低雏鸡的死亡率,降低AST、ALT、TNF-α、IL-1含量,以板蓝根微粉防治效果最佳。结果表明,板蓝根微粉和普通粉均对鸡白痢沙门菌有一定的抑制作用,且能减轻炎症反应,可以预防和治疗雏鸡沙门菌病,但板蓝根微粉效果优于普通粉。