抗CD44单抗A3D8对HL-60细胞Cyclin D1 CDK4 p21cip1表达的影响

目的:探讨CD44单克隆抗体A3D8对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖分化影响的分子作用机制。方法:采用FCM、RT-PCR及Westernblot方法检测A3D8作用前后HL-60细胞CyclinD1、CDK4、p21cip1表达的变化。结果:A3D8作用使HL-60细胞发生G0/G1期阻滞。A3D8下调HL-60细胞CyclinD1及CDK4的表达,上调HL-60细胞p21cip1mRNA及P21蛋白表达。结论:A3D8抑制HL-60细胞增殖、诱导其分化的分子机制可能与p21cip1表达上调及CyclinD1、CDK4表达下调有关。

抗CD44单克隆抗体A3D8对人白血病细胞系HL-60细胞增殖及分化的影响

目的 探讨抗CD4 4单克隆抗体A3D8对HL 6 0细胞增殖及分化的影响 ,寻找急性髓系白血病(AML)治疗的新靶点。方法 以AML细胞株HL 6 0为模型 ,通过观察细胞生长、形态学、表面分化抗原、细胞周期和细胞因子表达 ,以及应用硝基四氮唑蓝 (NBT)还原实验来研究抗CD4 4单克隆抗体A3D8对细胞增殖及分化的影响。结果 HL 6 0细胞高表达CD4 4 ;A3D8以浓度和时间依赖性方式抑制HL 6 0细胞生长。A3D8使HL 6 0细胞周期阻滞在G0 /G1期 ,CD11b、CD14表面抗原阳性率明显增高 ,细胞体积增大 ,核 /浆比例减小 ,核染色质聚集 ,NBT还原实验阴性 ,细胞表达粒细胞集落刺激因子mRNA ,呈现向单核细胞系方向分化。结论 A3D8可抑制HL 6 0细胞增殖 ,并诱导其向单核系细胞分化 ,CD4 4有可能成为AML治疗的新途径。

PCR法在白血病微小残留病变检测中的应用

随着化疗、骨髓移植等治疗学的进展,使得白血病完全缓解率有了很大提高,生存期也明显延长,但仍有众多病例在数年内复发而死亡。复发的主要原因是完全缓解期间体内仍残存有白血病细胞,这种状态称MRD、因此,MRD 的检测对于白血病的治疗及预后均具有重要意义。近年来MRD 检测技术有了很大进展,尤其是PCR 技术的建立,使检测敏感度大幅度提高,本文以PCR 法为中心,就常见MRD检测方法的应用价值做一简要综述。

CD44在信号转导及白血病分化诱导中的作用

CD44介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质间的信号转导,调节多种细胞的生物学行为,包括粘附、迁移、增殖、分化及凋亡等。CD44在造血细胞生成、白血病的病程进展及治疗、预后中的作用日益受到重视。

三七总甙对NB4细胞促凝活性及诱导分化的影响

目的 :研究三七总甙对NB4细胞促凝活性和组织因子表达及诱导分化作用的影响。方法 :用三七总甙处理NB4细胞 ,测定复钙时间观察NB4细胞的促凝活性 (procoagulantactivity ,PCA) ,RT PCR检测TF mRNA的表达 ;采用四唑蓝 (MTT)法检测三七总甙对NB4细胞增殖抑制作用 ;以NBT还原实验、细胞形态学观察及流式细胞术分析研究三七总甙对NB4细胞诱导分化的影响。结果 :(1)不同浓度三七总甙均可显著延长NB4细胞的复钙时间 ,降低NB4细胞的PCA水平 ,呈时间浓度依赖性 ,同时下调组织因子TF mRNA的表达 ;(2 )三七总甙可部分抑制NB4细胞的增殖 ;(3)三七总甙可提高NB4细胞NBT还原能力(P <0 0 5 ) ,细胞形态方面显示单核 /巨噬细胞分化趋势。结论 :三七总甙可降低NB4细胞的促凝活性及TF mRNA的表达 ,诱导NB4细胞部分分化 ,有望作为新的抗凝药物。

三氧化二砷对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的:研究三氧化二砷(ATO)抑制K562细胞增殖的机制,探索慢性髓系白血病(CML)治疗的新靶点。方法:体外培养人CML细胞株K562细胞,采用不同浓度ATO处理K562细胞;MTT法检测经ATO处理24、48和72 h后细胞的增殖状况;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡、细胞周期变化、K562细胞表面分子CD44的表达水平;RT-PCR分析K562细胞β-catenin和cyclinD1基因的改变。结果:2μmol/L ATO处理的细胞即出现显著的细胞增殖抑制效应,且抑制率呈时间和剂量依赖性(r=0.997,r=0.813),随着药物浓度的增加及作用时间的延长,CD44的表达率逐渐下降。AnnexinV/PI双染FCM显示,2.5-10μmol/L的ATO作用48 h均可诱导K562细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.985)。不同浓度ATO作用细胞48 h后,G_0/G_1期的细胞比例随药物浓度的增加逐渐增高(r=0.813),S期细胞比例逐渐降低(r=-0.800)。RT-PCR结果显示,随着ATO浓度的增加K562细胞β-catenin及CylinD1的表达水平逐渐下降(r=-0.924)。结论:在一定的浓度范围内ATO能够抑制K562细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能是通过下调CD44影响Wnt/β-catenin通路的传导,使细胞周期停滞在G0/G1期,影响基因转录,从而抑制K562细胞的增殖。

沙利度胺联合VAD方案治疗多发性骨髓瘤患者的临床评价

目的探讨不同方案的沙利度胺对多发性骨髓瘤患者在治疗过程中的临床疗效以及相关不良反应。方法以确诊为多发性骨髓瘤的患者100例为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组50例。对照组应用低剂量沙利度胺进行治疗,观察组患者应用高剂量沙利度胺联合VAD化疗方案,2组患者在不同的治疗方案治疗后,比较患者的疗效、并发症的发生情况、观察指标的动态变化及患者对治疗的满意度情况,同时对2组患者出现的相关不良反应进行分析。结果 2组患者经过两种不同组合的治疗方案后,病情不同程度的得到的控制,观察组患者的治疗总有效率高于对照组(P<0.05),对照组患者的并发症发生率明显高于观察组(P<0.05),观察组患者的满意程度评分优于对照组患者的满意程度评分(P<0.05)。观察组的患者经过治疗后β微球蛋白、尿素氮水平及骨髓浆细胞计数均低于对照组(P<0.05),血红蛋白水平高于对照组(P<0.05)。结论作为一种治疗多发性骨髓瘤的有效药物,沙利度胺能够在实际的对多发性骨髓瘤患者进行治疗,但在实际的治疗过程中,使用低剂量沙利度胺对患者进行治疗的效果往往不佳,通过使用高剂量沙利度胺联合VAD化疗的方式能够显著提高疗效,同时能够降低患者的并发症,在临床治疗多发性骨髓瘤患者的过程中值得推广应用。

三七总甙对NB4细胞核转录因子-κB及组织因子表达的影响

目的 通过核转录因子NFκB及其抑制因子IκB的表达探讨三七总甙 (PanaxnotoginsengsaponinsPNS)对NB4细胞组织因子的调控机制。方法 用三七总甙处理NB4细胞 ,分别于处理后 2 4h、4 8h、72h、96h、12 0h收获细胞 ,半定量逆转录PCR检测TF mRNA的表达 ;Western蛋白印迹检测细胞内NFκB的亚单位 p6 5及IκBα的蛋白 ,以及核蛋白p6 5的表达。 结果 三七总甙处理NB4细胞 2 4h ,TF mRNA表达开始下降 ,12 0h完全抑制。Westernblot显示三七总甙抑制细胞内IκBα及核蛋白 p6 5的表达。结论 三七总甙抑制组织因子的表达 ,可能是通过抑制NFκB的活化起作用。

细胞肿瘤高危遗传学异常在多发性骨髓瘤危险度分层中的应用

目的在对多发性骨髓瘤危险度进行分层的过程中进行细胞肿瘤高危遗传学异常分析,以更好地进行临床分层。方法利用荧光原位杂交法对初治多发性骨髓瘤及人多发性骨髓瘤细胞系的分子遗传学异常进行检测和比较。结果细胞遗传学总体检出率为85.54%(71/83),在分子遗传学异常方面,大部分初治多发性骨髓瘤、全部人多发性骨髓瘤细胞系均存在,但分子遗传学异常无统计学差异(P>0.05)。1例为人多发性骨髓瘤细胞系伴有IGH/CCND1,且IGH/FGFR3阳性检出率显著高于初治多发性骨髓瘤(P<0.05)。6例人多发性骨髓瘤细胞系具有1q21的扩增,但与初治多发性骨髓瘤无统计学差异(P>0.05)。在RB-1缺失方面,人多发性骨髓瘤细胞系与初治多发性骨髓瘤差异不显著(P>0.05);P53缺失存在统计学差异(P<0.05),IGH/MAF阳性有统计学差异(P<0.05);在1q21扩增和IGH异常、IGH/CCND1阳性差异均不显著(P>0.05)。结论浆细胞肿瘤恶性程度的最高形式是人多发性骨髓瘤细胞系,人多发性骨髓瘤细胞系积累了大量的遗传学异常,可为多发性骨髓瘤危险度分层提供一定的依据。

青蒿琥酯引起骨髓瘤细胞RPMI8226 G_2/M期阻滞

目的研究青蒿琥酯对人多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞周期的影响及可能机制。方法分别以浓度为0、25、50μg/mL的青蒿琥酯作用于RPMI8226细胞,用透射电镜观察细胞变化,流式细胞术检测细胞周期分布,蛋白质印迹法检测细胞周期相关蛋白cyclin B1和p34cdc2的变化。结果 50μg/mL青蒿琥酯处理48h后,多数细胞显示出凋亡细胞的特征性形态。随着青蒿琥酯浓度增加,G0/G1期细胞的比例逐渐下降(P<0.05),G2/M期细胞的比例逐渐上升(P<0.05),细胞明显阻滞于G2/M期。细胞周期蛋白cyclin B1表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而增加,p34cdc2表达水平随青蒿琥酯浓度的增加而降低。结论青蒿琥酯能将RPMI8226细胞阻滞于G2/M期,其机制可能与cyclin B1的升高及p34cdc2的降低有关。

塞来昔布对NB4细胞增殖、凋亡及VEGF表达的影响

目的探讨塞来昔布对急性早幼粒细胞白血病细胞的抑制作用及可能机制。方法不同浓度塞来昔布处理急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4,MTT法检测塞来昔布作用后细胞的增殖情况。采用流式细胞术测定NB4细胞周期分布及凋亡;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达以及RT-PCR检测塞来昔布作用对VEGF、HIF-1α在mRNA水平的表达。结果 MTT显示塞来昔布对NB4细胞生长有明显抑制作用。20～80μmol/L塞来昔布作用24h,NB4细胞G0/G1期比例明显升高,而S期细胞比例下降(P<0.05);塞来昔布处理组细胞凋亡率明显高于对照组,Western blot显示Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05);RT-PCR显示塞来昔布可抑制VEGF及HIF-1α的mRNA表达。结论塞来昔布在体外可抑制急性早幼粒细胞白血病细胞增殖并诱导凋亡。

可溶性CD44s、SF、LDH在鉴别巨幼细胞贫血和骨髓增生异常综合征中的意义

目的测定巨幼细胞贫血(MA)和骨髓增生异常综合征(MDS)患者的血清可溶性CD44s(sol CD44s)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清铁蛋白(SF)水平,来探讨此三项指标在MDS与MA的鉴别诊断中的意义。方法 112例初诊患者为研究对象,其中MDS患者58例(MDS组),MA患者39例(MA组),健康成年人15例作为对照(对照组)。留取血清标本,采用ELISA法检测血清sol CD44s,速率法测定LDH水平及电化学发光免疫分析法(ECLIA)测定SF水平。结果 MDS组血清sol CD44s水平明显高于对照组与MA组(P<0.05),MA组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。MDS组与MA组血清LDH水平均明显高于对照组,两两比较MDS组LDH水平低于MA组(P<0.05)。MDS组与MA组血清SF水平均明显高于对照组,两两比较MDS组SF水平高于MA组(P<0.05)。结论MDS患者血清可溶性CD44s、SF水平较MA患者明显升高,MDS患者LDH水平低于MA患者。血清可溶性CD44s、LDH、SF可作为MA与MDS鉴别诊断的参考指标。

MiR-424-5p调控PD-1/PD-L1信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞耐药性的影响

目的:探讨微小RNA-424-5p(mi R-424-5p)调控程序性死亡受体-1(PD-1)/程序性死亡配体-1(PD-L1)信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞耐药性的影响。方法:诱导人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系CRL2631细胞构建CRL2631-CHOP耐药细胞株。RT-q PCR和Western blot分别检测CRL2631细胞和CRL2631-CHOP细胞中mi R-424-5p、PD-L1 m RNA和蛋白及多元药物抗性基因-1(MDR-1)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证mi R-424-5p的靶标基因。使用mi RNA模拟/干扰技术和噻唑蓝法检测CRL2631细胞和CRL2631-CHOP细胞对CHOP方案化疗药物的耐药性。结果:与CRL2631细胞相比,CRL2631-CHOP细胞对CHOP方案化疗药物的耐药性显著增高,细胞中MDR-1蛋白水平(P<0.05)、PD-L1 m RNA和蛋白水平显著增高(均P<0.001),而mi R-424-5p相对水平显著降低(P<0.001)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,PD-L1是mi R-424-5p下游直接靶标基因(P<0.001)。转染mi R-424-5p inhibitor后,CRL2631细胞对CHOP方案化疗药物的耐药性增高,且MDR-1蛋白水平(P<0.01)、PD-L1 m RNA和蛋白水平显著增高(均P<0.01);转染mi R-424-5p mimics后,CRL2631-CHOP细胞对CHOP药物的耐药性降低,且MDR-1蛋白水平(P<0.001)、PD-L1 m RNA和蛋白水平显著降低(均P<0.001);过表达PD-L1可逆转上调mi R-424-5p对PD-L1的抑制作用(P<0.001)。结论:下调mi R-424-5p通过调控PD-1/PD-L1信号通路增强了弥漫大B细胞淋巴瘤细胞的耐药性。

同源盒基因在裸鼠多发性骨髓瘤中的作用

目的探讨同源盒基因(HOX)B在多发性骨髓瘤(MM)中的作用。方法用免疫组化法、实时RT-PCR技术、TUNEL法对裸鼠组织细胞中的HOXB基因表达水平进行检测,检测结果经过内参基因β-actin校正后,按2-ΔΔCt法进行计算。得到各组HOXB相对表达量F值,以对照组为参照,HOXB mRNA相对表达率(%)=100%×(其他组mRNA相对表达量F值/对照组mRNA相对表达量F值),计算各组HOXB3 mRNA、HOXB4 mRNA和HOXB7 mRNA相对表达水平。结果在造模实验中,30只大鼠中死亡1只,造模失败2只,27只纳入观察组。观察组HOXB3、HOXB4、HOXB7 mRNA相对表达水平均高于对照组(P<0.05)。而免疫组化法则发现观察组的阳性率远远高于对照组。结论 HOXB基因参与MM形成和发展,在其中扮演了较为重要的角色。

移植物抗宿主病的防治研究进展

异基因造血干细胞移植是根治恶性血液病的最有效方法,移植物抗宿主病(GVHD)是影响其疗效的主要并发症之一。通过降低预处理强度、细胞因子屏蔽、阻断协同刺激信号、诱导嵌合状态等手段可改善GVHD,但如何同时保留移植物抗白血病/肿瘤效应仍有待完善。本文就GVHD的发病机制及近年的防治进展作一综述。

急性白血病细胞造血细胞磷酸酶基因的突变分析(英文)

造血细胞磷酸酶 (HCP)在造血细胞发育、增殖及受体介导的有丝分裂信号传导通路中发挥关键的负调节作用 ,在motheaten小鼠中其突变可导致粒 单核细胞严重的过度聚积和功能紊乱。本研究旨在评价HCP基因突变在急性白血病发病中的作用。利用RT PCR ,SSCP及DNA序列分析技术检测了 4 1例急性白血病、8株白血病细胞系及 5 0例正常对照骨髓或外周血标本中HCP基因表达及突变情况。RT PCR显示所有标本中都有HCP基因表达 ,仅在 1例急性淋巴细胞性白血病细胞中发现一错义突变 ,发生在HCP基因氨基末端的SH2结构域 ;此外 ,分别在HCP基因的 6 9,85 ,86和 2 6 6密码子存在多态性。结论 :HCP基因突变在急性白血病中较少见 ,在白血病发病中可能起较小作用 ,需进一步研究澄清。

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布(celecoxib)对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24 h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT-PCR的方法检测细胞周期蛋白D1、E1及COX-2 mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24 h后,细胞增殖明显受抑,且呈一定的浓度依赖性(r=0.955),24 h的IC50值为63.037μmol/L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性(r=0.988)。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0/G1期,可下调cyclin D1、cyclin E1 mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2 mRNA表达水平降低。结论:塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclin E1的表达引起细胞G0/G1期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。

CALR突变在骨髓增殖性肿瘤中的研究进展

BCR-ABL融合基因阴性的慢性骨髓增殖性肿瘤(MPN)在目前尚无诊断的金标准,需要综合骨髓细胞形态学、骨髓病理学、基因突变、流式细胞学、免疫组织化学等多种检测手段予以确诊。JAK2相关突变已可作为真性红细胞增多症(PV)的特异性诊断标准,但JAK2相关突变阴性的MPN尚无特异、敏感的检测指标。CALR突变的发现在一定程度上填补了这项空白。本文就CALR突变的发现、检测手段、与疾病诊断及预后的相关性等内容作一综述。

线粒体神经酰胺酶通过其下游代谢产物1-磷酸鞘氨醇,上调K562细胞Bcl-2蛋白表达水平

目的:将线粒体神经酰胺酶(mtCDase)转染到K562细胞,观察线粒体神经酰胺酶的细胞生物学效应。方法:以脂质体介导将含有mtCDase cDNA的pCDNA3·1/His-CDase质粒转染到K562细胞,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达mtCDase的K562TC细胞株。AnnexinⅤ/PI法、FCM及Western印迹法分别检测K562与K562TC细胞在无血清培养耐受性及Bcl-2蛋白表达水平方面的差异。结果:稳定表达mtCDase的K562TC细胞Bcl-2蛋白水平明显升高,抗血清剥夺能力明显增强。以硫代反义寡核苷酸特异性封闭K562TC细胞mtCDase,Bcl-2蛋白表达水平下调;二甲基鞘氨醇(DMS,鞘氨醇激酶抑制剂,降低细胞内1-磷酸鞘氨醇水平)同样下调K562TC细胞Bcl-2蛋白表达水平,而外源性1-磷酸鞘氨醇(SPP)显著上调K562细胞Bcl-2表达水平。结论:mtCDase转染K562细胞导致Bcl-2蛋白表达水平升高及无血清培养耐受能力增强。这种效应是通过mtCDase的下游代谢产物-SPP产生的。本研究证实mtCDase通过其下游代谢产物代谢SPP,上调K562细胞Bcl-2蛋白表达水平。

急性白血病细胞HCP基因的突变分析

目的 :造血细胞磷酸酶 (Hematopoieticcellphosphatase ,HCP)在造血细胞发育、增殖及受体介导的有丝分裂信号传导通路中发挥关键的负调节作用 ,在motheaten小鼠中其突变可导致粒 单核细胞严重的过度聚积和功能紊乱。本研究旨在评价HCP基因突变在急性白血病发病中的作用。方法 :利用RT PCR、SSCP及DNA序列分析技术检测了 4 1例急性白血病、8株白血病细胞系及 5 0例正常对照骨髓或外周血标本中HCP基因表达及突变情况。结果 :RT PCR显示所有标本中都有HCP基因表达 ,仅在 1例急性淋巴细胞白血病细胞中发现错义突变 ,发生在HCP基因氨基末端的SH2结构域 ;此外 ,分别在HCP基因的 6 9、85、86和 2 6 6密码子存在多态性。结论 :HCP基因突变在急性白血病中较少见 。