烧伤小鼠的葡萄糖耐受性长期评估和靶向代谢组学分析

背景烧伤患者预后与健康人群相比具有较高的糖尿病风险。既往研究多聚焦于短期内患者的血糖以及免疫功能的改变。目的观察烧伤小鼠长期的血糖调控和脾T细胞靶向代谢水平,为探讨烧伤患者长期免疫力低下的代谢机制提供初步依据。方法将雄性Balb/c小鼠随机分为对照组(n=7)、假伤组(n=44)和烧伤组(n=46),烧伤组建立小鼠15%全身体表面积(total body surface area,TBSA)烧伤模型,另取7只健康雄性Balb/c小鼠作为对照组。造模24 d时,随机选取对照组2只、假伤组4只、烧伤组6只处死,磁珠分选脾CD3+T细胞,高压液相色谱结合质谱仪检测T细胞靶向代谢产物果糖1,6-二磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸、顺乌头酸、异柠檬酸、琥珀酸、乳酸和腺苷酸荷能。造模3个月时,比较各组小鼠血糖和血浆胰岛素的水平以及对葡萄糖耐受性和对胰岛素的敏感性。结果烧伤后24 d的小鼠脾T细胞的靶向代谢组学的结果显示,与对照组及假伤组相比,烧伤组小鼠T细胞糖酵解途径中的果糖1,6-二磷酸、磷酸烯醇式丙酮酸、丙酮酸、琥珀酸、乳酸和腺苷酸荷能无统计学差异(P>0.05),但三羧酸循环的中间产物顺乌头酸和异柠檬酸减少(P<0.05)。烧伤后3个月烧伤组小鼠的血糖水平高于假伤组小鼠(P=0.022),但血浆胰岛素水平与假伤组小鼠比较无统计学差异(P=0.173)。萄糖耐受性试验中烧伤模型对于烧伤组血糖的影响高于假伤组(P<0.001),但是在胰岛素敏感实验中两组无统计学差异(P=0.683)。结论小鼠烧伤后血糖在较长期处于升高水平,且存在T细胞葡萄糖代谢缺陷的可能。

脓毒症小鼠脾脏树突状细胞焦亡及其对炎症反应和免疫功能的影响

目的 初步观察脓毒症小鼠脾脏树突状细胞(DC)焦亡情况及其与炎性因子水平、DC免疫功能的相关性。方法 70只BALB/c小鼠随机分为假手术组(n=20)、脓毒症模型组(CLP组,n=30)与胱天蛋白酶(CASP)-1抑制剂干预组(CLP+YVAD组,n=20),CLP组和CLP+YVAD组按术后不同时间点分为CLP 12 h组、CLP 24 h组、CLP 48 h组、CLP72 h组及CLP+YVAD24 h组、CLP+YVAD72 h组。所有小鼠于术后预定时间眼眶取血、处死并取脾脏组织。流式细胞仪测定脾脏DC焦亡率及表面标志物(CD80、CD86、MHC-Ⅱ)表达水平,激光共聚焦显微镜观察CASP-1在小鼠脾脏DC中的活化情况,Western blotting检测DC中CASP-1的表达情况,ELISA法检测血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-12、IL-1β、IL-6浓度;观察CLP术后小鼠死亡情况。提取BALB/c小鼠T细胞与各组小鼠脾脏DC共培养,采用流式细胞仪测定T细胞增殖率,ELISA法检测共培养上清中γ干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-10浓度。结果 与假手术组比较,DC焦亡率在CLP术后12 h升高(P<0.05),于24 h达高峰(P<0.01),随后呈下降趋势,至72 h仍高于假手术组(P<0.01)。激光共聚焦显微镜观察显示,CLP术后小鼠脾脏DC CASP-1活化明显。Western blotting检测结果显示,DC中焦亡蛋白CASP-1表达在脓毒症早期(12 h和24 h)较假手术组明显上调(P<0.01)。而给予CASP-1特异性抑制剂Ac-YVAD-cmk后,CLP+YVAD 24 h组DC焦亡率较CLP 24 h组下降(P<0.01),CLP+YVAD 72 h组DC表面标志物CD80、MHC-Ⅱ表达水平较CLP 72 h组上调(P<0.01),术后7 d小鼠生存率提高(P<0.01)。ELISA法检测结果显示,CLP小鼠血清TNF-α、IL-12、IL-1β和IL-6浓度在脓毒症早期(24 h)和后期(72 h)均较假手术组明显升高(P<0.01),而CLP+YVAD组血清内上述因子浓度明显下降(P<0.01)。共培养实验结果显示,与DC-CLP 24 h组比较,DC-CLP+YVAD 24 h组T细胞增殖率明显增高(P<0.01),共培养上清中IFN-γ水平下降,而IL-4、IL-10水平上升(P<0.01)。结论 DC焦亡在脓毒症早期启动并持续存在,可能是脓毒症状态下炎性因子水平异常增高和DC免疫功能抑制的病理生理机制之一,且与脓毒症预后不良相关。

运动对异氟烷处理大鼠成年后物体识别的影响

目的探讨运动对发育期多次异氟烷处理大鼠成年后物体识别能力的影响。方法选取生后7d(P7)的SD大鼠110只,随机分为正常对照组(Naive),运动组(Naive+PE;P21开始,跑台30min/d,5次/周,连续6周),异氟烷组(Iso;P7、P9、P11吸入异氟烷2h,共3次)和异氟烷运动组(Iso+PE)。P67(运动结束即刻)对4组大鼠进行旷场和物体识别行为学测试,P95(运动结束后4周)再次进行物体识别实验,记录大鼠的旷场及新旧物体识别行为学表现。结果运动对各组大鼠成年后旷场试验的影响差异无统计学意义(P>0.05)。与Naive相比,P67时Iso组雌性大鼠辨别指数(DR)明显增强,差异有统计学意义(P=0.034),而Iso组雄性大鼠P67和P95时两次测试DR均有增强趋势,但差异无统计学意义(P=0.341、P=0.052)。与非运动组相比,无论是否经过异氟烷处理,运动组雄鼠DR均明显增强(与Naive组及Iso组比较,P67时P=0.050、P=0.017,P95时P=0.037、P=0.019);与Naive组相比,运动组雌鼠P67时DR无明显差异,但到P95时明显增强(P=0.004);与Iso组相比,P67时运动组DR显著下降(P=0.036),而P95时有增强趋势(P=0.095)。与雄鼠相比,P67时非运动组雌鼠DR明显增强(Naive组,P=0.022;Iso组,P=0.011),到P95时,仅没有经过异氟烷处理的两组雌鼠DR高于雄鼠(Naive组,P=0.008;Naive+PE组,P=0.017)。结论发育期多次异氟烷处理对大鼠成年后非空间记忆的物体识别能力无明显损害;发育期接受规律运动能够促进大鼠成年后的物体识别能力,雄鼠的运动获益较大,而雌鼠的运动获益仅体现在远期效果上。

生后不同间隔时间异氟烷处理对大鼠成年后认知功能的影响

目的探讨生后发育期不同间隔时间异氟烷处理对大鼠成年后认知功能的影响。方法选取生后7d的SD大鼠48只,随机分为正常对照组(Naive组),异氟烷处理6h组(G6h组),异氟烷处理3次、每次2h、间隔1d组(G2h-1d组),异氟烷处理3次、每次2h、间隔3d组(G2h-3d组)。处理后幼鼠饲养至成年(>60d),进行旷场实验、八臂迷宫及Morris水迷宫测试并进行组间比较,评价生后发育期异氟烷处理对大鼠成年后空间认知能力的影响。结果与Naive组比较,各处理组大鼠在旷场实验中的表现均无差异(P>0.05)。雄鼠八臂迷宫测试结果显示,G6h组和G2h-1d组错误次数>3的百分比明显高于Naive组(P<0.05),G2h-3d组重复错误次数少于G6h组和G2h-1d组(P<0.001),入臂总次数明显低于G6h组和G2h-1d组(P=0.003、P=0.008),入臂总耗时明显低于其余3组(P<0.005)。雌鼠八臂迷宫测试结果显示,G6h组错误次数>3的百分比、重复错误次数、入臂总次数及入臂总耗时均低于Naive、G2h-1d和G2h-3d组(P<0.005),且G6h组和G2h-3d组重复错误次数低于G2h-1d组(P<0.001、P=0.024)。Naive组和G2h-3d组雌鼠错误次数>3的百分比和入臂总次数明显高于雄鼠(P<0.05,P<0.01),而G6h组雌鼠错误次数>3的百分比和入臂总次数明显低于雄鼠(P=0.016,P=0.041)。Morris水迷宫测试结果显示,与其他3组雄鼠比较,G2h-1d组雄鼠在相反象限耗时最长、潜伏期最长、穿梭平台次数最少,但差异无统计学意义(P>0.05);与G2h-3d组雌鼠比较,G2h-1d组雌鼠在相反象限耗时增多、穿梭平台次数减少,差异有统计学意义(P=0.033,P=0.040)。结论在生后发育期异氟烷处理总时间一致(6h)的前提下,单次或多次处理对大鼠成年后空间认知行为有一定影响。间隔时间较短的多次异氟烷处理可影响其成年后认知功能;延长处理间隔时间可减弱或消除对认知行为的影响,且具有性别差异。

免疫对神经行为学的影响及机制的最新进展

在生理或病理状态下,免疫系统与中枢神经系统之间都存在着密切的交流。多种免疫细胞及其相关细胞因子可通过某些途径进入大脑,对神经细胞产生多种神经生物学作用,进而引起认知、情感、社会行为等多个方面的神经行为学改变。本文回顾了几种重要的免疫细胞及细胞因子对神经行为学的影响,阐明其神经免疫学机制,为预防急慢性炎症性疾病导致的神经行为学异常提供预警。

胰高血糖素样肽-1的免疫调节作用及机制

肠促胰素是一种肠道分泌的降血糖激素,可作用于胰岛β细胞促进胰岛素分泌,降低血糖。胰高血糖素样肽-1（Glucagon-like peptide-1,GLP-1）是首先在小肠黏膜L细胞发现的一种肠促胰素,在进食等血糖升高情况下其释放增加。由于GLP-1的血糖依赖性降血糖特性,糖尿病患者服用后不易发生低血糖事件,因此作为一种新型降血糖药物GLP-1类胰泌素在临床得到广泛应用[1]。天然GLP-1在体内极易被二肽基肽酶Ⅳ（Dipeptidyl peptidaseⅣ,DPP-Ⅳ）广泛快速降解.

胰高血糖素样肽-1的神经内分泌效应研究进展

胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)是肠黏膜L细胞分泌的肠促胰素,可血糖依赖性地促进胰岛素分泌,从而减少低血糖的发生。作为一种脑肠肽,GLP-1的神经内分泌作用越来越受到关注。外周或中枢给予GLP-1可激活下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)、交感和副交感神经系统,进而广泛参与神经内分泌调节,包括应激反应、物质和能量代谢,甚至神经、心理等脑的高级功能。本文拟阐述GLP-1的神经内分泌效应和作用机制,旨在为临床肠促胰素类药物的应用提供理论指导。

七氟烷对不同性别新生大鼠认知功能影响的差异分析

目的探讨七氟烷对不同性别新生大鼠认知功能影响的差异。方法82只出生后7 d(P7)SD大鼠,随机分为对照组与七氟烷处理组,然后按照性别分为以下亚组:雌性对照组、雄性对照组、雌性七氟烷处理组、雄性七氟烷处理组,每组19~22只。各组大鼠分别吸入空气或4%七氟烷4 h后,应用ELISA法检测外周血血清皮质酮、雌二醇(E2)水平,采用免疫组化法检测海马Ki-67和神经元核心抗原(NeuN)的表达。各组大鼠于P21行旷场实验,P35行Morris水迷宫实验。结果ELISA检测结果显示,与对照组相比,七氟烷处理组大鼠外周血血清皮质酮水平明显升高[(7.93±1.58)ng/ml vs.(11.60±1.41)ng/ml,P<0.05],E2水平差异无统计学意义[(35.0±8.25)pmol/L vs.(34.2±9.73)pmol/L,P>0.05];不同性别各亚组间皮质酮、E2水平差异无统计学意义(P>0.05)。免疫组化检测结果显示,与对照组相比,七氟烷处理组大鼠海马CA1区和齿状回区Ki-67、NeuN阳性细胞数均明显减少(P<0.05);不同性别各亚组大鼠海马CA1区和齿状回区Ki-67、NeuN阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。Morris水迷宫实验结果显示,获得性训练第4、5天,与雄性对照组相比,雄性七氟烷处理组大鼠平台潜伏期和移动距离均明显延长(P<0.01或P<0.05),雌性对照组与雌性七氟烷处理组大鼠平台潜伏期、移动距离差异无统计学意义(P>0.05);对位训练第2天,与雄性对照组相比,雄性七氟烷处理组大鼠平台潜伏期和移动距离明显延长(P<0.05),雌性对照组与雌性七氟烷处理组大鼠平台潜伏期、移动距离差异无统计学意义(P>0.05);对位探查训练中,各处理组及不同性别大鼠游泳速度、目标象限次数比较,差异均无统计学意义(P>0.05),但与雄性对照组相比,雄性七氟烷处理组大鼠平台潜伏期明显延长(P<0.01),目标象限耗时明显缩短(P=0.031)。结论七氟烷处理对新生大鼠血清皮质酮水平影响较大,可抑制海马神经干细胞增殖及神经元发生,成年后雄性大鼠学习能力有所减退,但对雌性大鼠无明显影响。

中度烧伤小鼠大脑免疫细胞的浸润及神经细胞凋亡

目的 观察中度烧伤小鼠大脑免疫细胞的浸润情况以及神经细胞凋亡.方法 BALB/C雄性小鼠随机分为烫伤组（n=15）和假伤组（n=15）,其中烫伤组按照15%总体表面积（total body surface area,TBSA）浸于94℃热水中8 s造成深Ⅱ度烫伤,假伤组动物浸于37℃水中.烫伤后24 h经心脏对各组中12只小鼠大脑进行生理盐水灌注,冲去脑血管内血液,Percoll梯度离心法分离脑内单个核细胞,以CD3＋CD45 high标记T细胞,CD11b＋CD45 high标记单核细胞,CD11b＋CD45int为激活的小胶质细胞,进行流式细胞染色和分析.每组剩余3只小鼠,大脑经4%多聚甲醛固定和蔗糖脱水后进行冰冻切片,免疫荧光法标记脑内免疫细胞,TUNEL法检测细胞凋亡.用含DAPI的抗荧光淬灭剂封片,共聚焦显微镜拍照.结果 烧伤组小鼠脑组织中CD45＋CD3＋T细胞所占比例较假伤组明显增高[（1.103 ±0.674）% vs.（0.385 ± 0.109）%,P〈0.05].烧伤组CD45int CD11b＋较假伤组比例增高[（1.017±0.35）% vs.（0.502±0.358）%,P〈0.05],提示烧伤组大脑中小胶质细胞激活程度较假伤组增高.免疫荧光染色可见烫伤组血管周围及脉络丛处有免疫反应阳性的T细胞、CD45high细胞,假伤组未见阳性.此外,烧伤小鼠与假伤组相比,在大脑皮层和脑室周围的脑实质中可见到明显增多的凋亡细胞.结论 中度烧伤后24 h大脑即可出现免疫细胞的浸润及神经细胞凋亡,可能和此后出现的神经精神障碍有关.

Exendin-4调控烧伤小鼠炎性反应及多器官损害的交感神经机制

目的探讨胰高血糖素样肽(GLP-1)的长效类似物Exendin-4(Ex-4)对烫伤小鼠生存率、炎性反应和器官损伤的影响及其交感神经调控机制。方法 BALB/C小鼠随机分为烫伤组和假伤组,分别行93℃15%总体表面积(TBSA)的Ⅲ度烫伤和37℃假伤。烫伤前30min腹腔注射β2肾上腺素能受体阻断剂普萘诺尔(prop,30mg/kg),伤后30min立即腹腔注射Ex-4(2.4nmol/kg)。24h后处死动物留取肺脏和血清,生化法检测肝肾功能,ELISA法检测外周血及肺部炎性因子TNF-α、MCP-1和IL-10水平;分离脾脏单个核细胞,观察核蛋白NF-κB p65蛋白表达;此外,烫伤小鼠随机分组观察Ex-4对动物72h存活情况的影响。结果 Ex-4处理的烫伤小鼠病死率有增加趋势。Ex-4对假伤组肺组织炎性细胞因子没有显著影响,但可显著增加烫伤动物肺脏TNF-α、MCP-1和IL-10水平,且此效应可被prop阻断。Ex-4可抑制假伤小鼠血清TNF-α、IL-10水平,而促进烫伤组血清TNF-α、MCP-1、IL-10水平(P<0.05),且烫伤组prop干预后,反而增强了Ex-4的促细胞因子分泌作用。Ex-4可显著增加烫伤小鼠肝肾功能损伤指标AST/ALT和UR/Cr(P<0.05),并能被prop阻断;而对假伤组无明显影响。Ex-4能显著上调烫伤小鼠脾脏细胞核NF-κB p65蛋白表达(P<0.05),且此效应可被prop阻断。结论 Ex-4可通过交感神经机制促进局部组织器官的炎性反应以及器官损伤,Ex-4和激活的肾上腺素能受体共同激活c AMP-PKA-NF-κB信号转导途径,进而调节全身炎性反应。

Exendin-4对烧伤小鼠脾脏单核细胞免疫反应的影响及其调控机制

目的阐明肠促胰岛素长效类似物Exendin-4（Ex-4）对烧伤小鼠脾脏单核细胞免疫调节功能的影响，并探讨其可能信号转导机制。方法BALB／C／Ix鼠随机（随机数字法）分为烫伤组（n=30）和假伤组（n=10），其中烫伤组动物背部按照15％总体表面积（TBSA）浸于94℃热水中8s造成烫伤，而假伤组动物背部皮肤则浸于37℃水中8s。伤后24h取假伤组和烫伤组脾脏分离单核细胞进行培养，分别分为空白组（LPS-0）、脂多糖（LPS）组、LPS加低Ex-4组、LPS加中Ex-4组、LPs加高Ex-4组，均培养24h。用酶标仪检测吸光度值测定细胞活性。用ELISA法检测培养上清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、IL-10、转化生长因子-β（TGF-β）水平。采用Western印迹法检测单核细胞胰高血糖素样肽1受体（GLP-1R）、GPCR调节激酶2（GRK-2）、刺激性G蛋白亚基Ⅸ（Gcts）和抑制性G蛋白亚基α（Gαi）的表达。使用cAMP和PKA活性试剂盒检测细胞内cAMP和cAMP依赖蛋白激酶（PKA）活性。结果LPS加中、高剂量Ex-4假伤组单核细胞活性显著低于假伤LPS组（均P〈O．05），而烫伤组细胞增殖活性变化不明显。Ex-4作用后，烫伤组单核细胞分泌TNF-α增加（P〈0．05），而假伤组没有显著改变。两组内单核细胞IL-6的分泌均呈现剂量依赖性增加，但两组之间差异无统计学意义。两组IL-10的分泌均呈剂量依赖性增加，假伤组中浓度Ex-4促进效应已很明显，但烫伤组仅高浓度Ex-4具有促进作用，Ex-4对两组TGF—β分泌均起显著抑制作用，在假伤组呈显著的剂量依赖性（P〈0．05），但是在烫伤组不同浓度Ex-4的抑制效应差异无统计学意义。烫伤后脾脏单核细胞Ex-4信号转导通路分子包括GLP-1R、GRK-2和G仅s含量均下降（均P〈0．05），而Gcd含量升高（P〈0．05）。高剂量Ex-4对烫伤组单核细胞cAMP的促进作用显著低于假伤组（P〈0．05），但是烫伤组PKA水平高于假伤组（P〈0．05），结论严重烫伤后Ex-4信号转导通路发牛显著改变，导致Ex-4对单核细胞功能的调控发生部分抵抗甚至异常，Ex-4对烧伤小鼠单核细胞抗炎与抑炎反应均具有明显调节作用。

运动对出生后多次异氟烷处理不同性别大鼠空间认知功能的影响及其分子学机制

目的探讨运动对出生后多次异氟烷处理不同性别大鼠空间认知功能的影响及其分子学机制。方法出生后7 d SD大鼠110只,按随机数字表法将大鼠分为正常对照组(n=28)、运动组(n=30)、异氟烷组(n=26)和异氟烷运动组(n=26)。新生大鼠和母鼠单笼饲养,21 d后按雌雄分笼。异氟烷组和异氟烷运动组在生后7、9、11 d进行异氟烷处理。运动组和异氟烷运动组从21 d开始进行规律运动。规律运动6周后,测试雌雄大鼠在八臂迷宮、Morris水迷宫中的表现,随后取大鼠海马组织行免疫组织化学染色及Western Blot分析,测定脑源性神经营养因子(BDNF),Ki-67的阳性表达。结果各组大鼠在八臂迷宫训练阶段,各组大鼠的总耗时随训练次数增多呈下降趋势,且差异具有统计学意义(P<0.05);组间比较发现:与正常对照组相比,异氟烷组训练次数与总耗时降低趋势的稳定性较差;与非运动组相比,运动两组的下降趋势稳定,总耗时逐渐减少。在八臂迷宫测试阶段,与正常对照组相比,异氟烷组大鼠的参考记忆错误次数增多,总耗时延长,以雌鼠更为明显,差异具有统计学意义(P<0.05);与非运动组雄鼠相比,运动组雄鼠参考记忆错误明显降低(P<0.05);与正常对照组及异氟烷组雄鼠比较:P<0.01,雄鼠运动组总耗时也相应减少,具有显著统计学差异(P<0.05);与异氟烷组雌鼠比较,异氟烷运动雌鼠组总耗时明显缩短(P<0.01)。水迷宫实验中,与正常对照组雌鼠相比,异氟烷组雌鼠目标象限耗时明显减少(P<0.05)。免疫组化结果:与正常对照组相比,异氟烷组大鼠海马组织中BDNF,Ki-67阳性表达明显减少;运动组雄鼠Ki-67阳性表达增多;相比异氟烷组,异氟烷运动组大鼠BDNF阳性表达增多,以雌鼠较为显著(P<0.05)。结论多次异氟烷处理对大鼠成年后空间认知功能有一定影响,且存在性别差异;雄鼠在长期记忆,而雌鼠在工作记忆方面有一定损害。同时发现,运动促进大鼠空间认知功能的发育,且雄鼠的运动获益更为明显。

异氟烷不同间隔时间麻醉对发育期大鼠脑神经功能的急性损伤作用

目的：探讨在异氟烷麻醉总时间一致的前提下，不同麻醉时间间隔对发育期大鼠急性脑损伤后认知行为的影响。方法选用生后7d的SD大鼠，按随机数字表法分为正常对照组（呼吸空气）、连续麻醉组（异氟烷持续给药6h）、间隔麻醉1d和3d组（异氟烷给药2h＆#215;3次，间隔1d或3d），每组12只，雌雄比为5：7。生后21d进行八臂迷宫行为测试，每日2次，连测4d。根据大鼠进入八臂迷宫的错误次数、重复错误次数、入臂总次数和总耗时，评价异氟烷麻醉对发育期大鼠认知行为的影响。结果①与正常对照组相比，间隔麻醉3d组错误次数＞3次的百分比明显减少（33.3%比46.9%，P＜0.05），重复错误次数＞0次的百分比和入臂总次数＞8次的百分比明显增多（33.3%比18.8%，27.1%比13.5%，均P＜0.05）；连续麻醉组、间隔麻醉1d组错误次数＞3次的百分比与正常对照组比较差异无统计学意义（44.8%、44.8%比46.9%），重复错误次数＞0次和入臂总次数＞8次的百分比均较正常对照组略有增加（27.1%、22.9%比18.8%，20.8%、21.9%比13.5%，均P＞0.05）。正常对照组、连续麻醉组、间隔麻醉1d和3d组入臂总耗时差异均无统计学意义（min：1.32±0.91、1.54±1.05、1.46±0.86、1.38±0.79，均P＞0.05）。②性别分析发现，仅正常对照组雌鼠重复错误次数＞0次的百分比及入臂总次数＞8次的百分比明显低于雄鼠（5.0%比28.6%，P＜0.01；5.0%比19.6%，P＜0.05），其余各组内雌、雄鼠之间各指标均无明显差异。③组间比较显示，连续麻醉组、间隔麻醉1d和3d组雌鼠重复错误次数＞0次的百分比均较正常对照组雌鼠明显增高（25.0%、25.0%、30.0%比5.0%，P＜0.05或P＜0.01），间隔麻醉1d和3d组雌鼠入臂总次数＞8次的百分比均较正常对照组雌鼠明显增高（22.5%、25.0%比5.0%，均P＜0.05）；而各处理组雄鼠在八臂迷宫认知测试中与正常对照组雄鼠相比差异均无统计学意义。结论异氟烷不同间隔时间给药麻醉可以造成发育期大鼠一定程度的急性脑损伤，表现为认知障碍，延长麻醉间隔时间可明显增强长期记忆能力，多次麻醉处理比单次对认知的影响更大，雌性较雄性更易发生麻醉后认知功能的改变。

Exendin-4调控烫伤小鼠T淋巴细胞免疫功能的交感神经机制

目的探讨胰高血糖素样肽（GLP-1）的长效类似物Exendin-4（Ex-4）对烫伤小鼠T淋巴细胞免疫功能的影响以及神经内分泌调控机制。方法BALB/C小鼠随机（随机数方法）分为烫伤组（n＝100）和假伤组（n＝64），行15%总体表面积（TBSA）的Ⅲ度烫伤。磁珠分离CD4＋ T淋巴细胞，采用细胞免疫荧光方法检测GLP-1受体（GLP-1R）表达。（1）体外实验：24 h后分离脾脏单个核细胞，加Ex-4和β儿茶酚胺受体（β-AR）阻断剂普萘洛尔（propranolol，prop），ConA（5 μg/mL）刺激下培养48 h，观察T淋巴细胞功能和分化。（2）体内实验：烫伤前30 min腹腔注射prop（30 mg/kg），伤后立即注射Ex-4（2.4 nmol/kg）。分别在6 h和24 h处死动物留取血清，分离脾脏单个核细胞，观察T淋巴细胞功能改变。结果正常小鼠T淋巴细胞上存在GLP-1R表达。采用单因素方差分析组内差异，体外实验证实，Ex-4对T淋巴细胞功能无明显作用，并不受prop影响。在体内实验中，Ex-4可显著降低烫伤小鼠T淋巴细胞的增殖活性、IL-2分泌水平（P〈0.05），但可被prop恢复。体外及体内实验显示，Ex-4均可促进T淋巴细胞向Th2分化（P〈0.05），而在烫伤组prop体内干预后反而增强了Ex-4的Th2促分化作用。此外，烫伤组动物Ex-4增加去甲肾上腺素的分泌增加，抑制肾上腺素的分泌，prop干预后两种激素的分泌与单独Ex-4处理组相比急剧增加。结论Ex-4可通过交感神经机制抑制脾脏T淋巴细胞的增殖和IL-2分泌，并经由GLP-1R直接作用于T淋巴细胞使其向Th2漂移。