猪伪狂犬病病毒gE蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了开发检测猪伪狂犬病病毒(PRV)的免疫诊断试剂,使用HEK293F细胞表达的gE重组蛋白免疫BALB/c小鼠。将免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法筛选阳性杂交瘤细胞株,以期获得对PRV反应性良好的抗gE重组蛋白单克隆抗体。结果显示,获得2株(2B5和8F7)稳定分泌抗PRV gE蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其腹水单克隆抗体的ELISA效价均为1∶1 000000;单克隆抗体亚型鉴定结果表明,2株单克隆抗体的重链均为IgG1亚型,轻链均为Kappa链。单克隆抗体特异性测定结果显示,2株单克隆抗体仅与PRV反应,不与其他常见病毒发生反应;SDS-PAGE结果显示,纯化后的单克隆抗体均在约50 ku和25 ku处有纯度较高的特异性条带;间接免疫荧光试验(IFA)结果表明,制备的2株单克隆抗体与转染gE质粒的293T细胞发生特异性反应。根据Western blot结果,筛选获得的2株单克隆抗体均在120 ku附近出现特异条带,表明这2株单克隆抗体均能特异性识别PRV。综上,成功制备了2株特异性强、效价高的抗gE蛋白单克隆抗体,为后期PRV诊断试剂盒的制备提供重要的生物材料。

加芯混凝土框架柱轴压比限值试验研究

为了解决高层结构设计中因轴压比限值影响使混凝土框架柱经常出现“胖柱少筋”等相关问题,通过6个加芯混凝土框架柱试件的低周反复伪静力试验,考察了试件的受力特性及破坏特征,分析了影响加芯混凝土框架柱延性的主要因素,并对各试件的V-Δ滞回曲线、位移延性比、极限位移转角等试验结果进行了研究。试验结果表明:轴压比、体积配箍率和芯柱纵筋配筋率对混凝土框架柱的延性及弹塑性变形性能均有较大的影响;在高轴压比下,采用较大的体积配箍率和芯柱纵筋配筋率是保证加芯混凝土框架柱抗震延性的重要措施。最后提出了加芯混凝土框架柱轴压比限值的新建议值。

鸡传染性法氏囊病单抗快速诊断试剂盒的研制及初步应用

以感染传染性法氏囊病病毒 ( IBDV)的鸡法氏囊组织制备免疫抗原 ,免疫 BALB/c系小鼠 ,取其脾细胞与 NS0浆细胞进行细胞融合 ;以 AC-ELISA筛选阳性细胞克隆 ,经 3次有限稀释克隆化及鉴定 ,获得 2株识别 IBDV不同抗原决定簇的高亲和力单克隆抗体株。以该 2株单克隆抗体制备快速诊断试剂 ,组装了鸡传染性法氏囊病快速诊断试剂盒。该试剂盒由若干 4 0孔酶标板 ,1号酶标液 ( HRP标记 IBDV单抗 )、2号洗涤液、3号显色液 ( TMD显色底物 )、4号显色液 (供氢体 )等反应液 ,0 .0 1 mol/L PBS( p H7.2 )阴性对照、IBDV阳性对照 (提取的 IBDV蛋白 )组成 ,并对试剂盒特异性、敏感性、重复性及稳定性等进行了鉴定。应用该快速诊断试剂盒对来源于不同地区的临床诊断疑似 IBD的法氏囊病料各 2 0份进行了检测 ,并与琼扩试验、常规ELISA检测结果作了比较 ,结果表明 ,该快速诊断试剂盒的检测结果与常规 ELISA的检测结果相似 ,操作程序简便 ,可在 1 0～ 1 5min内完成 。

混凝土对称配筋梁的抗弯承载力分析与计算

针对混凝土双筋矩形梁在承载能力极限状态下可能出现的受拉纵筋应变超限问题,重新界定了其截面受压区的最小高度;根据混凝土双筋矩形梁抗弯承载力的计算理论,建立了混凝土对称配筋梁抗弯承载力计算的基本公式;对混凝土对称配筋梁的抗弯承载力进行相关计算,并提出了相应的实用计算方法。工程算例表明:对于混凝土对称配筋梁的抗弯承载力设计问题,应采用给出的实用计算方法进行相关计算,以确保安全;若按一般"双筋梁法"计算,则多数情况下结果偏于不安全,且最大误差可达10%以上。

芯柱对混凝土框架柱轴压比限值的影响分析

在柱截面界限破坏条件下对芯柱可提高的轴压比进行了公式推导和计算。讨论了芯柱配筋率、混凝土强度等级和纵筋类别等因素的影响。对芯柱可提高的轴压比限值提出了设计建议值。

钢筋混凝土受弯构件受压区高度的限定条件

根据《混凝土结构设计规范》（ＧＢＪ１０－８９）对钢筋极限拉应变的限值和平截面假定，推导出受弯构件极限状态下截面受压区最小高度，以此作为新的限定条件将对正截面强度计算方法和结果产生一定的影响。算例表明，在工程设计中考虑这一限定条件是很有必要的。

在大肠杆菌中高效表达人Ⅰ型免疫缺陷病毒p24蛋白

为深入研究人Ⅰ型免疫缺陷病毒（ＨＩＶ—１）衣壳蛋白ｐ２４的结构与功能，制备抗Ｐ２４单克隆抗体及其诊断抗原，将编码ＨＩＶ－１ｐ２４蛋白的ｐ２４ｇａｇ基因片段，克隆到原核表达载体ｐＥＴ－１７ｂ的Ｔ７噬菌体启动子下游，构建成了重组表达质粒ｐＥＴ２４，并使ｐ２４ｇａｇ基因片段在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中高效表达，其产物为３０ｋＤａ的ｓ１０－ｐ２４融合蛋白，表达量占菌体总蛋白的３８．４％。重组Ｐ２４蛋白均抗ｐ２４单克隆抗体及ＨＩＶ—１阳性血清发生特异性反应，具有较好的抗原性，对研究开发ＡＩＤＳ诊断试剂和基因工程疫苗具有重要意义。

受压钢筋对RC梁正截面承载力影响的理论分析

从理论上分析了受压钢筋对 Ｒ Ｃ 梁正截面承载力的影响规律，并提出了 Ｒ Ｃ梁的钢筋压拉比及正截面极限承载力等概念，可供设计者参考使用。

矩形截面大偏压构件对称配筋的直接计算法

在钢筋混凝土矩形截面大偏压构件对称配筋计算理论的基础上，通过简化主要参数，推导出了简便实用的“直接计算法”，并将新参数列成表格，供计算时参考采用。

一、二级框架小偏压矩形柱配筋计算的简化方法

根据小偏压构件配筋计算的基本理论和现行规范对一、二级框架柱轴压比和配筋率的限值，通过引入新的计算参数和分析计算，推导出小偏压矩形柱相对受压区高度 ξ的简化计算式及适用条件，由于主要计算参数可查表直接取值，则使配筋计算得以简化。

一、二级框架梁纵筋配置的延性设计法

根据现行规范对一、二级框架梁纵筋配置的构造要求，通过对梁的截面延性与纵筋配置进行相关分析，提出一种可使梁的抗弯强度与抗震延性得以兼顾的纵筋配置方法——延性设计法。

猪圆环病毒Ⅱ型Rep基因在PK15细胞中的表达及特性

为研究猪圆环病毒型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性,通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945bp片段,与真核表达载体pCI-neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep。pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48h,通过RT-PCR可检测到PCV2RepmRNA的转录;用猪PCV2多抗血清作间接免疫荧光试验,可检测到Rep基因表达产物。在表达量低的细胞中,PCV2Rep蛋白主要位于PK15的细胞浆,在表达量高的细胞中,细胞浆和细胞核中均含有大量的Rep蛋白,表明Rep对PK15细胞的细胞浆和细胞核的亲嗜性没有明显差别。

IBDV VP3结构蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

应用RT-PCR技术从鸡IBDV总RNA中克隆出893bp的VP3基因,并将其进一步克隆于pET-28a载体T7启动子的下游,构建了pETVP3原核表达载体。经IPTG诱导,在其宿主菌BL21(DE3)中成功表达了35.5,33kDa的鸡IBDVVP3蛋白。经SDS-PAGE和Westernblotting分析,VP3表达产物以包涵体形式存在,并与鸡IBDV抗血清特异性反应。

动物疫病免疫试纸快速检测技术概述

概述了免疫试纸检测技术的原理,并分别从抗原和抗体2个方面简述免疫试纸检测技术的应用及在此方面取得的成就。

狂犬病病毒核蛋白基因在大肠杆菌中的高效表达

为获得狂犬病病毒(RV)核蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了RV核蛋白基因,分别亚克隆到原核表达载体pET-28a(+)和pET-32a(+)中,经PCR和双酶切鉴定以及序列测定,重组质粒构建成功。将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,表达的核蛋白再经Ni2+-NTA亲和层析纯化。结果显示,核蛋白在pET-32a(+)中的表达量(30.4%)高于在pET-28a(+)中的表达量(19.4%),培养物中的高纯度核蛋白产量分别为13.6和8.45 mg/L。经Western-blotting检测,不同载体表达的核蛋白均可被兔抗RV多克隆抗体特异识别,表明核蛋白具有良好的反应原性。

猪瘟强毒株与兔化弱毒疫苗株的LAMP鉴别检测

为了鉴别猪瘟病毒(CSFV)野毒感染和疫苗接种,系统比较分析CSFV标准强毒株、疫苗株、不同基因亚型的野毒株的全基因组序列差异,设计一套分别针对猪瘟强毒与弱毒NS5B基因的环介导等温扩增(LAMP)引物,建立特异性的猪瘟强毒株与疫苗株的LAMP检测方法.LAMP扩增产物用罗丹明B指示剂或者琼脂糖凝胶电泳进行检测.该方法特异性好,比RT-PCR灵敏度高出1 000倍,且重复性稳定性良好,为快速准确地鉴别CSFV野毒感染和疫苗接种提供了有效的方法.

胶体金免疫层析快速检测技术及其在水产养殖业中的应用前景

建立快速、准确、简便易行的病害早期快速检测技术,是从事动物疫病防控研究工作者和产业界人士的迫切愿望。自从开辟免疫分析技术以来,越来越多更灵敏、更便捷的免疫分析方法被开发出来,以胶体金免疫层析法为基础建立起来的快速检测试纸,被认为是当前最快捷、高敏感的一种免疫学检测技术。该项技术真正实现了快速简易检测靶目标,并已在畜牧业中得到普及应用,成为当前畜禽病害早期防控的最有效方法之一。本文就该项技术在畜牧兽医领域的研究进展、应用现状、发展前景进行了介绍、分析和讨论,旨在为水产养殖动物病害的早期诊断提供借鉴,以期获得一种适用于水产动物病害的、专用的快速检测新技术和新产品。

不同方法对鸡胚和法氏囊中囊病病毒抗原含量的检测比较

用单抗介导的抗原捕获_酶联免疫吸附试验 (AC_ELISA)、琼脂扩散试验 (AGP)快速诊断试纸条 (ISK)对感染同株强毒或弱毒囊病病毒 (IBDV)的鸡胚和鸡法氏囊中的病毒抗原效价进行了检测比较。结果表明 ,上述 3种方法测得法氏囊中强毒IBDV抗原效价分别为 10 -6 .0 (AC_ELISA)、2 -3.0 (AGP)和 10 -3.0 ;测得鸡胚中强毒IBDV抗原效价依次为 10 -1.0 、0和 0。强毒株接种鸡胚后 ,只有第 1代鸡胚组织可被AC_ELISA测到低效价的IBDV抗原 ,而第 2代以后则未能测到病毒抗原。弱毒疫苗株IBDV感染鸡后 ,法氏囊中可测到低效价抗原 。

猪圆环病毒2型荧光定量PCR检测方法的建立

根据PCV2 ORF1设计1对特异性引物,建立了SYBR GreenⅠReal-time PCR检测方法。该方法灵敏度可达10-100拷贝/μL,比常规PCR检测方法灵敏度高10倍,而与猪繁殖和呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪瘟病毒（CSFV）以及猪细小病毒（PPV）没有交叉反应,利用该方法从50份临床病料中检测出43份阳性PCV2病毒,阳性检出率为94%。与常规PCR比较结果显示,该方法具有较高的灵敏度和特异性,能够快速检测和监控PCV2的感染流行。