防己诺林碱抑制黑色素瘤的增殖转移

目的观察防己诺林碱对黑色素瘤细胞生长转移的影响。方法通过MTT实验,观察不同浓度防己诺林碱对A375细胞增殖的影响;利用Transwell实验,检测不同浓度防己诺林碱对A375细胞转移功能的影响。通过Western blot和RT-PCR,检测防己诺林碱对A375生长转移相关蛋白的影响。结果防己诺林碱可以抑制黑色素瘤细胞A375的增殖转移。10、20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞后,对其增殖的抑制率分别为43.81%±1.53%、48.64%±4.65%、50.69%±4.99%。20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞作用24 h后,对其转移的抑制率分别为14.95%±4.31%、33.03%±5.46%。防己诺林碱显著抑制细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、CDK4、CDK6、基质金属蛋白酶-2(MMP2)的表达(P<0.05)。结论防己诺林碱能显著抑制A375细胞的增殖转移,可作为治疗黑色素瘤的潜在化疗药物进行深入研究。

芹菜素通过抑制Src通路抑制黑色素瘤细胞增殖

目的探讨芹菜素如何通过调节Src通路来抑制黑色素瘤细胞增殖。方法采用不同浓度的芹菜素处理黑色素瘤细胞系A375,使用HEK293细胞系(正常细胞系)作为对照,通过MTT实验观察芹菜素是否可以特异性抑制肿瘤细胞的增殖。进一步通过Western blot以及实时PCR检测芹菜素对A375细胞中Src通路增殖相关蛋白CDK4和CDK6的影响。结果 MTT检测结果发现芹菜素对HEK293细胞的增殖抑制作用不明显,但是10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L与80μmol/L的芹菜素分别作用于A375细胞后对细胞增殖的抑制率分别为(22.12±7.20)%、(27.08±4.37)%、(37.39±2.72)%和(39.00±1.57)%,而且随着药物的浓度增加对A375细胞增殖的抑制率增加。Western blot和实时PCR检测发现,20μmol/L、40μmol/L与80μmol/L的芹菜素均可以抑制A375细胞中Src通路下游CDK4和CDK6蛋白的表达。结论芹菜素可以通过抑制Src通路显著抑制黑色素瘤细胞系A375的增殖,对正常细胞作用较小,可以作为潜在的化疗药物应用于黑色素瘤的化疗。

氧化苦参碱与奈达铂联用对人胶质母细胞瘤U87MG细胞增殖的影响

目的观察氧化苦参碱与奈达铂联用抑制人胶质母细胞瘤U87 MG细胞增殖的效果。方法将传代的U87 MG细胞分为对照组、奈达铂单药处理组(NDP组)、氧化苦参碱单药处理组(OXY组)和两种药物联合处理组(联合组),分别在不同时间点,使用不同浓度的药物,用MTT方法检测U87 MG细胞光密度值(OD490),观察细胞增殖情况;用流式细胞仪检测不同处理对各组细胞周期的作用。结果对细胞处理48 h后,OXY组、NDP组及联合组U87 MG细胞的增殖抑制率分别为18.74%±2.66%、27.66%±0.87%、75.87%±1.19%。两种药物联合使用对U87 M G细胞的抑制作用显著高于各单药组相同剂量药物对细胞的抑制率,各组抑制率比较差异有统计学意义(P<0.01)。对照组、OXY组、NDP组、联合组细胞周期G1期的百分比分别为67.81%±0.55%、71.87%±1.64%、78.01%±2.06%、84.75%±0.72%。两药联合应用对细胞G1期的阻滞作用增强,组间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论氧化苦参碱与奈达铂联合使用对抑制胶质母细胞瘤细胞增殖有协同效果,可以降低奈达铂的使用浓度,进而减轻治疗时化疗药物的毒副作用。

青藤碱增强表柔比星对黑色素瘤细胞侵袭的抑制作用

目的初探青藤碱如何增强表柔比星对黑色素瘤细胞侵袭的抑制作用。方法应用Transwell方法检测不同处理因素对A375细胞侵袭的影响。处理因素分为4组,分别为:生理盐水组(对照),表柔比星处理组、青藤碱处理组和两种药物联合处理组。通过Western blot及Real-time PCR检测不同因素作用下侵袭相关蛋白的变化。结果 5μg/mL表柔比星、10μg/mL青藤碱以及两种药物联合处理组24 h后对A375细胞侵袭的抑制率分别为20.40%±4.63%、14.40%±2.67%和50.32%±3.02%。药物联用后对A375细胞侵袭的抑制作用显著高于各单药组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。青藤碱可以增强表柔比星对侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的抑制作用。结论低浓度青藤碱(10μg/mL)可以显著增强低浓度表柔比星(0.1×PPC)对黑色素瘤细胞A375细胞侵袭的抑制作用,青藤碱可以作为化疗过程中的辅助用药,起到优化治疗效果的作用。

旅游型传统村落用地与空间格局演变微尺度分析——以陕西省礼泉县袁家村为例

以陕西省礼泉县袁家村为例,基于Google Earth高精度遥感图像,运用参与式乡村评估、ArcGIS空间分析、空间句法等方法分析乡村旅游发展中村庄用地功能及村庄空间格局的演变,探讨旅游干预对村庄空间格局的影响。结果表明:(1)2002—2022年袁家村空间格局发生明显变化,表现为土地利用类型由村民生活生产主导转变为旅游发展所需,致使村庄空间结构由村民居住空间为中心的单核心放射状转向旅游空间为主的多核心密集型;(2)乡村旅游促使空间关系网络趋向复杂化,同时在土地功能细碎化过程中村庄交通空间的稳定性和空间结构主导性凸显;(3)袁家村空间格局演变受市场需求和政府调控等多方面因素推动,村民的积极响应和空间功能的理性更新是其中关键作用力。

miR-489通过打靶PAK5抑制黑色素瘤的迁移

目的 探讨miR-489对黑色素瘤迁移的抑制作用。方法 通过Transwell实验检测miR-489对黑色素瘤迁移的影响;荧光素酶报告基因实验检测A375细胞中miR-489对PAK5的靶向作用;进一步通过Western blotting以及实时PCR检测miR-489对于A375细胞中PAK5的影响。结果 Transwell实验发现miR-489过表达后可以显著抑制A375细胞的迁移,当miR-489受到抑制后,A375细胞的迁移受到促进。荧光素酶报告基因实验证明,miR-489可以直接作用于PAK5。Western blotting和实时PCR检测发现,过表达miR-489可以抑制A375细胞中PAK5蛋白的表达;当miR-489受到抑制后蛋白表达有所增加。结论 miR-489可以通过打靶PAK5抑制黑色素瘤细胞的迁移。

miR-489抑制黑色素瘤细胞的增殖

目的检测miR-489对黑色素瘤细胞增殖的影响。方法在黑色素瘤细胞A375中分别过表达或沉默miR-489后,通过MTT实验观察miR-489对细胞增殖的影响。进一步通过Western blotting和实时PCR检测miR-489对A375细胞中增殖相关蛋白CDK2和cyclin E的影响。结果 MTT检测发现,miR-489过表达后可以显著抑制A375细胞增殖,miR-489受到抑制后A375细胞的增殖受到促进。Western blotting和实时PCR检测发现,过表达miR-489可以抑制A375细胞中增殖相关蛋白CDK2和cyclin E蛋白的表达;miR-489受到抑制后蛋白表达增加。结论 miR-489对黑色素瘤细胞的增殖有一定的抑制作用,可能作为黑色素瘤诊疗的新靶点。

防己诺林碱增强吉西他滨诱导的黑色素瘤细胞凋亡

目的观察防己诺林碱对吉西他滨导致的细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法将人黑色素瘤细胞A375分为4组,分别用生理盐水(对照),吉西他滨、防己诺林碱以及两种药物联合处理,通过MTT的方法检测不同时间不同处理因素作用下细胞的光密度值(OD490),确定药物对细胞增殖的作用;用AV-PI染色的方法用流式细胞仪检测不同组凋亡细胞比例;Hoechest 33258染色的方法观察不同组别下细胞的凋亡情况;通过Western Blot以及Realtime PCR检测不同因素作用下凋亡相关蛋白的变化。结果对细胞作用24 h时,10μg/ml防己诺林碱,1μg/ml吉西他滨,以及两种药物联合处理组A375细胞增殖的抑制率分别为4.07%±1.95%,45.22%±2.25%和75.71%±1.01%。两种药物联用A375细胞增殖的抑制作用显著强于各单药组作用,各组数据间差异显著(P<0.05)。对细胞作用24 h时,不同处理组细胞凋亡的百分比分别为2.07%±0.27%,3.35%±0.20%,4.15%±0.07%和6.12%±0.51%。药物联用作用下细胞凋亡率增加。各组数据之间有显著差异(P<0.05)。防己诺林碱也可以显著增强吉西他滨对凋亡相关蛋白Bcl-2、BAX和Caspase 3的调控。结论低浓度防己诺林碱(10μg/ml)可以显著增强极低浓度的吉西他滨(0.01×PPC)对抑制黑色素瘤细胞A375细胞凋亡的促进作用,联合应用可达到更好的治疗效果。

hFAK基因重组质粒的构建及蛋白表达

目的构建hFAK原核、真核表达载体,证实融合蛋白在原核细胞的诱导表达以及在胃癌细胞内的表达、定位。方法提取人胃癌细胞SGC-7901的总mRNA并进行反转。以反转录的cDNA为模板PCR扩增hFAK全长编码基因,分别克隆至pCDNA3.1-Flag以及pGEX-4T-2表达载体中。原核重组质粒鉴定后转入BL21细胞中并经过诱导表达及纯化,真核表达质粒转入胃癌SGC-7901细胞中,分别利用Western blot和激光共焦扫描显微技术检测重组质粒的表达以及在胃癌细胞中的定位。结果 hFAK全长基因序列克隆到原核、真核表达载体中,酶切鉴定片段为3200bp。原核诱导出GST-hFAK并进行纯化;Western blot检测到真核转染的Flag-hFAK表达,条带为130kD,免疫荧光显示蛋白定位于细胞质,并在细胞膜上有定位。结论成功构建了hFAK原核、真核表达载体,并验证了其表达。

黄铜着粉红色新工艺

介绍了一种黄铜着粉红色的新工艺。研究了时间、温度、硫酸铜和氯化铵对着色效果的影响。得出最佳的工艺配方为:硫酸铜100g/L,氯化钠25g/L,氯化铵200g/L,酒石酸25g/L,60℃,2min。最后用电化学工作站检测了着色黄铜的耐蚀性。

苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长的抑制作用实验研究

目的:研究苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其相关作用机制。方法:通过收集手术切除的瘢痕疙瘩进行体外培养成纤维细胞,将细胞分为3组,分别加入10μmol/L,20μmol/L的苦参碱以及对照组(0.9%NaCl)进行实验。MTT实验检测细胞增殖情况;流式细胞技术进行细胞周期分析;Hoechest33258染色检测细胞凋亡情况;Westernblot实验检测苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡和自噬相关调控蛋白表达的影响。结果:通过不同浓度的苦参碱处理细胞后,MTT结果发现成纤维细胞的增殖受到抑制,抑制作用具有剂量依赖性;细胞周期分析发现,苦参碱作用后细胞的G1-S期转化受到了不同程度的抑制;Hoechest 33258染色发现苦参碱可以促进凋亡细胞的增加;Western blot实验结果发现苦参碱可以抑制CDK4、CDK6、Bcl-2和LC3-I蛋白的表达,促进Bax、LC3-Ⅱ和Beclin-1的表达。结论:苦参碱对瘢痕疙瘩成纤维细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用,能够影响细胞增殖、凋亡和自噬相关调控蛋白的表达。

三种抗氧化剂对斑马鱼卵母细胞冷冻保存效果比较

为研究抗氧化剂对斑马鱼卵母细胞冷冻保存效果的影响,在基础冷冻保护液配方中分别添加褪黑素、谷胱甘肽和甜菜碱等3种抗氧化剂进行了冷冻保存试验,比较冷冻后卵母细胞的活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、凋亡基因表达水平和存活率。试验结果显示:经过筛选,3种抗氧化剂的最优添加浓度分别为褪黑素1×10^(-3) mol/L、谷胱甘肽5×10^(-4) mol/L、甜菜碱1×10^(-3) mol/L。与对照组相比,添加最优浓度抗氧化剂的3个试验组(褪黑素组、谷胱甘肽组和甜菜碱组)的ROS含量均显著降低,ATP含量和SDH活性均显著提高,褪黑素组和甜菜碱组的T-AOC水平显著提高(P<0.05);褪黑素组卵母细胞的caspase3、caspase9和bax基因表达量显著降低,bcl-2基因表达量则显著升高(P<0.05);谷胱甘肽组卵母细胞的caspase3基因表达量显著下降,bcl-2基因表达量显著上升(P<0.05);甜菜碱组卵母细胞的caspase9和bax基因表达量显著降低(P<0.05)。复苏后的卵母细胞在体外培育120 min,褪黑素组、谷胱甘肽组、甜菜碱组卵母细胞的存活率分别比对照组提高10.13%、14.20%和15.99%;冷冻保存1、7、30、60、90 d,3个试验组卵母细胞的存活率均显著高于对照组(P<0.05);冷冻保存90 d,褪黑素组、谷胱甘肽组、甜菜碱组的存活率分别提高了9.05%、7.34%、6.68%。试验结果说明,在斑马鱼卵母细胞冷冻保存过程中添加1×10^(-3) mol/L褪黑素或5×10^(-4) mol/L谷胱甘肽或1×10^(-3) mol/L甜菜碱,均能够增强冷冻保存后卵母细胞的线粒体功能,降低细胞氧化应激水平,减少细胞凋亡,从而提高斑马鱼卵母细胞冷冻效率。

熊果酸对蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤的影响

目的探讨熊果酸对蛛网膜下腔出血(Subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期脑损伤的保护作用。方法 48只成年雄性SD大鼠分成4组(假手术组、模型组、低剂量给药组、高剂量给药组),每组12只。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模后24 h进行神经功能缺陷评分;造模后72 h检测脑含水量、脑血管通透性;造模后72 h检测血清中丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物岐化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性。结果熊果酸给药可有效改善SAH大鼠的神经功能缺损(P<0.05);降低脑含水量和脑血管通透性(P<0.05);降低血清MDA含量(P<0.05);增强SOD和GSH-Px活性(P<0.05)。结论熊果酸对SAH后早期脑损伤有显著保护作用,其机制可能与提高脑组织抗氧化能力有关。

从脑髓-脑神-脑气多角度探讨帕金森病

帕金森病,临床表现为静止性震颤、运动障碍、姿势不稳及肌肉僵直等,其病位在脑,多因肾虚、血瘀、痰浊所致,究其根源,脑髓损伤是发病的基础,肾虚是源头,但不应完全责之肾、髓。脑髓为阴,脑气为阳,脑神为用,脑髓为病,脑神无以统帅,脑气逆乱无章,影响五脏六腑、五官九窍而发病,是故帕金森病非一元一体所能述清,当从脑髓、脑神、脑气多角度论治,相互依存,共为一体。

基于仿生学理念的生境修复与景观重塑--以三峡大坝鱼类洄游鱼道设计为例

要生物生境是维持生态平衡的基本前提,鱼道不仅是鱼类洄游产卵的通道,更是生物群落繁育的重要栖息地。以三峡大坝坛子岭南岛为例展开设计研究探索,针对该区域鱼类丰富、过鱼量大却仅依靠升船机的定时升降连通水流,从而导致因过鱼率低造成鱼种灭绝、鱼量减少、近亲交配的有害基因凸显等现象。通过自上而下和自下而上的设计策略融贯仿生设计与风景园林的目标与方法,挖掘自然鱼道的关键部位和空间原型,基于仿生学理念采用生物生境仿生和自然景观仿生设计手法,塑造了满足鱼道功能和生态景观的空间概念模型,结合场地条件模拟大自然有效运行的机制和规律构建了“生态自愈式鱼道”,最终达到生境修复和景观重塑的目的。

基于CiteSpace的我国乡村聚落水域空间研究综述

自国家开展改善农村人居环境整治相关工作以来,乡村人居环境优化升级成为重要议题,随着《农村人居环境整治提升五年行动方案(2021—2025年)》等相关文件印发,表明对乡村聚落空间环境的研究仍是学界亟须关注的焦点。文章立足建筑科学工程学科视角,聚焦乡村聚落水域空间这一重要乡村聚落空间要素,借助CNKI数据库,整理2010—2021年相关文献,运用CiteSpace软件分析得出近年相关研究的热门研究地区、关注焦点及研究脉络。同时,对该领域研究趋向进行了分析与展望。

针灸对慢性失眠病人睡眠进程、睡眠结构及N2期睡眠梭形波的影响

目的观察针灸对慢性失眠病人睡眠进程、睡眠结构及N2期睡眠梭形波(spindle)的影响。方法选取2018年5月—2019年4月就诊于北京中医药大学东方医院门诊的慢性失眠病人41例,分别于针灸治疗前后采用多导睡眠图(PSG)检测睡眠进程、睡眠结构及N2期spindle。结果针灸治疗后,失眠病人睡眠总时间(TST)、睡眠效率、N3期占TST的百分比、N2期spindle个数及密度较较针灸前明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01);睡眠潜伏期、觉醒次数、N1期占TST的百分比较针灸前减少,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。针灸前后卧床时间无明显变化。针灸治疗后快速动眼期占TST的百分比较针灸前减少,N2期占TST的百分比较针灸前增加,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论针灸治疗能一定程度改善失眠病人睡眠质量,增加N2期spindle个数及密度,可作为针灸治疗失眠的客观疗效评价依据。

血管性帕金森综合征的中西医研究进展

血管性帕金森综合征(vascular parkinsonism,VP)是由脑血管疾病引起的继发性帕金森综合征,近年来发病率呈明显上升趋势。VP属中医学老年颤证范畴,近年来中西医学均对其发病机制及治疗进行了大量的研究,并取得了一定成果。现分别从中、西医的角度出发,对有关VP的中西医研究进展进行综述。

针刺太溪穴的脑功能成像研究进展

普通的磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)不能显示联动的功能图像,无法用来研究大脑的活动过程。功能磁共振成像(fMRI)的出现为获得脑功能的活动信息及早期诊断提供了技术支持。最常见的分析方法是基于血氧水平依赖(blood oxygenation level dependent,BOLD)的功能磁共振技术,脑内的神经元活动可影响相应脑区局部血流中氧合及脱氧血红蛋白的相对浓度,从而可反映出静息状态下神经元的功能活动[1]。

伴有脑白质高信号的多系统萎缩患者临床特征分析

目的探讨脑白质高信号(white matter hyperintensity,WMH)与多系统萎缩(multiple system atrophy,MSA)患者临床症状相关性,以及MSA患者出现WMH的危险因素。方法共纳入88例MSA患者,依据MRI检查及Fazekas量表进行脑室周围WMH(PVH)和深部白质WMH(DWMH)评分。根据PVH、DWMH的严重程度将患者分组,比较各组间基线资料、运动、认知及二便症状评分的差异,并用Logistic回归法分析MSA患者出现WMH的危险因素。结果PVH不同等级患者入组年龄、发病年龄、高血压史、冠心病史、UMSARS总分、UMSARSⅡ及UMSARSⅣ比较,差异有统计学意义(P<0.05)。DWMH不同等级患者入组年龄、发病年龄、高血压史、冠心病史、UMSARS总分、UMSARSⅠ、UMSARSⅡ、UMSARSⅣ比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析发现,入组年龄、高血压史是MSA患者伴发WMH的独立危险因素(P<0.05)。结论部分MSA患者可伴发WMH,其严重程度与患者的运动症状及病情严重程度相关。年龄和高血压史影响WMH的发生。