微阵列芯片法和多同源基因序列测序在非结核分枝杆菌菌种鉴定中的差异

目的比较微阵列芯片法和多同源基因序列测序在非结核分枝杆菌(NTM)菌种鉴定中的差异,为NTM感染提供精准诊断依据。方法采用罗氏固体培养法复苏天津市海河医院2016—2019年保存的170株NTM菌株,分别采用微阵列芯片法和同源基因序列[16S rRNA、RNA聚合酶亚基B(rpoB)、热休克蛋白65(hsp65)]测序进行鉴定。以多同源序列测序分析结果为参考,分析微阵列芯片法菌种鉴定的准确性。比较2种方法样本周转时间(TAT)的差异。结果微阵列芯片法鉴定出8个NTM菌种,同源序列测序鉴定出14个。微阵列芯片法无法鉴定出缓慢生长群的猿分枝杆菌、慢生黄分枝杆菌、副瘰疬分枝杆菌和快速生长群的龟分枝杆菌、马德里分枝杆菌、母牛分枝杆菌等10个菌种,多同源序列测序可鉴定出全部的菌种。以多同源序列测序分析结果为参考,微阵列芯片法鉴定错误7株,鉴定到复合群的正确率为90.0%(153/170);16S rRNA、rpoB、hsp65单独和3个同源序列联合分析鉴定到复合群的正确率分别为93.5%、98.8%、99.4%和100.0%。对于微阵列芯片法无法区分的53株龟/脓肿分枝杆菌复合群(MABC),3个同源序列联合测序鉴定出6株龟分枝杆菌、25株MABC脓肿亚种、20株MABC马赛亚种和2株MABC bolletii亚种。微阵列芯片法单个样本鉴定TAT为8 h,170株NTM菌株全部鉴定需要2 d;多同源序列测序单个样本鉴定TAT为3 d,170株NTM菌株全部鉴定约需要5 d。结论微阵列芯片技术可快速鉴定临床常见分枝杆菌。多同源基因序列测序不仅可鉴定临床常见分枝杆菌,还可鉴定微阵列芯片法无法鉴定出的菌种和可能鉴定错误的菌种及其亚种,但所需时间较微阵列芯片法长。

Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960在结核病诊断中的应用

目的探讨Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960在结核病诊断中的应用价值。方法选择180例受试者,其中肺结核98例、肺外结核35例及非结核病47例。所取受试者痰、支气管灌洗液、脑脊液等标本分别采用Xpert MTB/RIF、T-SPOT·TB及BACTEC MGIT960单独检测及联合检测,用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)评价各检测方法的诊断效能,采用Kappa检验分析Xpert MTB/RIF与BACTEC MGIT960对利福平耐药性检测的一致性。结果 T-SPOT·TB、T-SPOT·TB+MGIT960、Xpert MTB/RIF+MGIT960+T-SPOT·TB对肺结核与肺外结核检测的阳性率高于Xpert MTB/RIF、MGIT 960单独检测及二者联合检测(P均<0.05)。T-SPOT·TB、T-SPOT·TB+MGIT960、Xpert MTB/RIF+MGIT960+T-SPOT·TB诊断结核病的AUC比较差异无统计学意义(P均>0.05),但均大于Xpert MTB/RIF、MGIT 960、Xpert MTB/RIF+MGIT960的AUC(P均<0.05)。Xpert MTB/RIF与BACTEC MGIT960对利福平耐药性检测具有较高的一致性(κ=0.735)。结论 T-SPOT·TB检测、T-SPOT·TB联合MGIT960检测、三者联合检测对结核病诊断有较高价值,三者联合检测的价值最高。

乙型肝炎血清学标志物与HBV-DNA定量及肝功能指标相关性研究

目的探讨乙型肝炎不同血清学标志物(HBV-M)模式下HBV-DNA定量与肝功能的关系。方法对304例乙肝患者血清用ELISA法作HBV-M测定,用荧光定量PCR(FQ-PCR)法测定HBV-DNA含量,全自动生化仪进行肝功能指标总胆红素(TBil)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ谷氨酰基转移酶(γ-GT)及谷草转氨酶线粒体同工酶(ASTm)测定,并作统计学分析。结果 HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)(大三阳组)HBV-DNA定量显著高于HBsAg(+)HBeAg(-)HBcAb(+)(小三阳组)(t=6.47,P<0.05)和HBsAg(+)HBcAb(+)组(简称"1,5组")(t=2.25,P<0.05),后两者间差异无统计学意义(t=1.21,P>0.05);大三阳组的HBV-DNA阳性率为90.8%(108/119)明显高于小三阳组的32.4%(52/150)及1,5组的34.3%(12/35)(P<0.05)。HBV-DNA定量与肝功能各指标的相关性分析表明,全部病例分析仅TBil与HBV-DNA水平无统计学相关性,但分组分析表明,大三阳组中TBil和γ-GT与HBV-DNA水平无统计学相关性,而小三阳组和1,5组TBil、ALT、AST、γ-GT和ASTm与其均存在一定的相关性。结论乙肝患者中,大三阳组与小三阳组、1,5组间HBV-DNA水平及阳性率存在显著性差异,此外,乙肝患者血清学不同的HBV-M下,HBV-DNA水平与肝功能指标TBil、ALT、AST、γ-GT和ASTm的相关性不尽相同。

甜菜碱/聚合物二元体系驱油性能研究

在模拟大庆油田条件下测定了0.5、1.5、2.5 g/L聚合物污水溶液的黏度、储能模量G'和损耗模量G″,由G'和G″按文献公式计算了溶液的第一法向应力差N1;用以表征黏弹性溶液的弹性时,频率10 Hz下的N1值比G'值要明锐些。用聚合物浓度0、0.5、1.5、2.5 g/L,表面活性剂(磺基甜菜碱BS)浓度0～0.3 g/L的16个实验驱油体系连续驱替油饱和的含水中性润湿人造岩心,由驱替压力梯度和实测油水界面张力计算了毛管数,考察了采收率与聚合物浓度关系(等毛管数条件)和采收率与表面活性剂浓度关系(等聚合物浓度条件),结果如下:为达到同一毛管数值(数量级)所需的表面活性剂浓度随聚合物浓度增大而略有减小;适宜浓度聚合物不影响表面活性剂的驱油效率,而且可提高采收率;聚合物浓度超过适宜值范围会降低表面活性剂和聚合物本身的驱油效率;聚合物浓度适宜范围的上限随毛管数增大而减小,亦即随油水界面张力减小而减小。

实时荧光PCR技术在不同类型结核病诊断中的应用价值

目的分析比较实时荧光PCR与涂片镜检、培养三种方法在结核杆菌检测的差异。方法对我院疑似结核病患者的临床标本同时进行实时荧光PCR检测、涂片镜检和培养,将三组检测结果进行比较。结果 215例疑似肺结核患者痰标本同时采用实时荧光PCR、涂片镜检和培养三种方法检测,阳性检出率分别为46.5%、32.6%和44.7%。实时荧光PCR法与涂片镜检法的阳性率间比较有统计学意义,实时荧光PCR法与培养法的阳性率间比较无统计学意义。112例疑似其他类型结核病患者的胸腹水、脑脊液、穿刺液和尿液等非痰标本同时采用上述三种方法检测,阳性率分别为18.8%、3.6%和16.1%。统计学意义同上。结论实时荧光PCR检测技术在临床上对结核病的诊断和鉴别具有较好的应用价值。

结核性胸水生化学指标与实时荧光PCR检测结果的关系分析

目的探讨结核性胸水生化学指标与实时荧光PCR检测结果之间的关系。方法对该院结核科93例结核性胸膜炎住院患者测定其胸水生化指标腺苷脱氨酶(ADA)、乳酸脱氢酶(LDH)、血管紧张素转化酶(ACE)、葡萄糖、蛋白质水平,同时采用实时荧光PCR技术测定胸水中结核分枝杆菌DNA,分析实时荧光PCR检测结果与生化学指标之间的关系。结果实时荧光PCR检测45例阳性,48例阴性。PCR阳性组生化学指标ADA、LDH、ACE、葡萄糖和蛋白质的酶活性或含量分别为(69.4±39.3)U/L、(614.3±341.3)U/L、(22.4±30.4)U/L、(3.5±2.5)g/L和(47.1±9.4)g/L;PCR阴性组分别为(62.9±21.5)U/L、(558.1±284.1)U/L、(25.0±24.3)U/L、(4.4±1.3)g/L和(50.3±5.3)g/L。阳性组与阴性组的生化学指标比较,差异均无统计学意义。结论实时荧光PCR检测联合胸水生化学检测对结核性胸膜炎病情诊断具有重要意义。

脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展

脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一,对大多数抗结核药物耐药,临床治疗难度大。脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异,临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物的选择有重要价值。中华医学会结核病学分会制定了非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南(2020版),按照美国临床和实验室标准协会(CLSI)分枝杆菌药敏试验标准(2018版)进行脓肿分枝杆菌药敏试验,建议根据药敏试验结果选用多药联合治疗方案。现就脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及对主要治疗药物的耐药机制的研究进展进行综述。

非结核分枝杆菌病实验室诊断技术及药敏试验研究进展

非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacteria,NTM）是指结核分枝杆菌复合群（结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌）和麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。随着结核病疫情的有效控制,新的诊断技术水平不断提高,更多的NTM感染被鉴定出,人们也重新认识到NTM感染的重要性,确认了NTM可感染肺部、皮肤、骨骼、淋巴结等组织和器官,由此导致相应部位的非结核分枝杆菌病发生。

HEXIM对转录延伸的调控及其在人类疾病中的作用

环六亚甲基二乙酰胺诱导蛋白(hexamethylene bis-acetamide-inducible protein,HEXIM)是新近发现的参与转录延伸调控的蛋白质,包括HEXIM1和HEXIM2两种同源物.两者均为dsRNA结合蛋白,常以二聚体形式存在,且在调控真核生物RNA聚合酶Ⅱ所催化的转录延伸中功能互补.HEXIM主要通过与7SK snRNA结合,再与正性转录延伸因子b(positive transcription elongation factor b,P-TEFb)形成复合物,抑制P-TEFb的激酶活性,进而抑制转录延伸.近年来发现,HEXIM的转录延伸调控作用参与了人类AIDS、心肌肥大、恶性肿瘤等多种疾病的发生、发展过程.开展以HEXIM为分子靶标的新药研发将为相关疾病的治疗开辟新的途径.

P-TEFb在转录延伸中的作用及其与人类疾病的关系

正性转录延伸因子b(positive transcription elongation factor b,P-TEFb)由CDK9和cyclinT1(或cyclinT2a、cyclinT2b、cyclinK)组成,对真核生物RNA-polyⅡ所介导的转录延伸具有正性调节作用。体内P-TEFb存在活性型(P-TEFb-Brd4)和非活性型(P-TEFb-7SKsnRNA-HEXIM1)两种形式,二者间的转变是调节转录延伸的关键。近年来发现P-TEFb与HIV-1感染和心肌肥大等疾病密切相关。

Xpert MTB/RIF在快速诊断肺结核及利福平耐药中的临床应用

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在肺结核诊断及其耐药性检测中的临床应用价值。方法收集408例结核患者标本,同时采用抗酸染色法、固体培养法及Xpert MTB/RIF检测,并对其结果进行分析比较。结果 408例标本抗酸染色法、固体培养法和Xpert MTB/RIF检测出结核分枝杆菌的阳性率分别为25.00%(102/408)、42.16%(172/408)和58.09%(237/408)。经统计学分析,Xpert MTB/RIF阳性率高于抗酸染色法和固体培养法,差异均有统计学意义(P<0.05)。其中,固体培养法和Xpert MTB/RIF检测均为阳性的标本共168例,经比例法药物敏感试验与Xpert MTB/RIF检测利福平耐药率分别为26.19%(44/168)和27.38%(46/168),2种方法耐药率比较,差异无统计学意义(P>0.05),以比例法药敏试验作为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度为97.73%(43/44),特异性为97.58%(121/124)。结论 Xpert MTB/RIF可快速、准确检测结核分枝杆菌及利福平耐药性,具有重要的临床应用价值。

2018—2019年天津地区非结核分枝杆菌菌种分布及耐药性观察

目的观察2018—2019年天津地区非结核分枝杆菌(NTM)菌种分布及耐药情况。方法选取2018年1月—2019年12月天津市海河医院分离出的NTM菌株282株,采用微阵列基因芯片法进行法菌种鉴定,采用微量液体培养基最低抑菌浓度法进行药敏试验。结果282例NTM菌株分为8种,胞内分枝杆菌占比最大(29.08%),其次为龟/脓肿分枝杆菌(26.60%)和堪萨斯分枝杆菌(23.41%),鸟分枝杆菌占9.57%、偶然分枝杆菌占6.38%、戈登分枝杆菌占3.19%、瘰疬分枝杆菌占1.06%、浅黄分枝杆菌占0.71%。NTM对异烟肼的耐药率为100%,对氨基水杨酸、链霉素、卡那霉素和卷曲霉素的耐药率均高于80%。胞内分枝杆菌对利福布汀和氯法齐明的耐药率低,堪萨斯分枝杆菌对异烟肼、对氨基水杨酸和卡那霉素的耐药率均高于80%,鸟分支杆菌对丙硫异烟胺、利福布汀和氯法齐明的耐药率均较低,偶然分枝杆菌对左氧氟沙星和莫西沙星的耐药率均低于30%,戈登分枝杆菌对左氧氟沙星、莫西沙星和利奈唑胺的耐药率极低。结论2018—2019年天津地区NTM菌株有8种,以胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌为主。不同NTM菌种对14种常用抗菌药物的耐药率有种间差异,对常规抗菌药物耐药率高。

XpertMTB/RIF联合T-SPOT.TB对结核性胸膜炎及其耐药性的临床研究

目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)、结核感染T细胞斑点检测(T-SPOT.TB)胸腔积液对结核性胸膜炎及其耐药性的临床价值。方法选取2012年6月-2016年10月于天津市海河医院就诊的确诊结核性胸膜炎患者101例;同期选取院内其他疾病合并胸腔积液的患者79例,分别留取胸腔积液标本进行Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB检测,同时完成胸腔积液BACTE C MG1T960液体培养以及药物敏感性等相关性检查,分别与临床诊断和BACTEC MG1T960液体培养作为参考标准进行评价。结果结核性胸膜炎组Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB的敏感性分别为82.18%和88.12%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05),特异性分别为96.10%和98.73%,差异无统计学意义(P>0.05);Xpert MTB/RIF和T-SPOT.TB与BACTEC MU1T960液体培养的Kappa值分别为0.277和0.668;Xpert MTB/RIF在诊断利福平耐药率与BACTEC MU1T960液体培养Kappa值为0.786。结论 T-SPOT.TB的敏感性结合Xpert MTB/RIF的特异性不但缩短了诊断时间而且提高了胸膜炎诊断的准确性,减少误诊率,为结核性胸膜炎的早期诊断提供了有利的帮助,Xpert MTB/RIF能对利福平的耐药性做出快速的判断。

破乳剂GP的合成及配方优选

考察了不同的起始剂、催化剂、亲油头的大小、环氧乙烷与环氧丙烷配比、嵌段数对聚醚脂类非离子表面活性剂GB脱水效果的影响。结果表明:以多乙烯多胺为起始剂,醋酸钙为催化剂,将质量分数25％～30％环氧乙烷、环氧丙烷进行多嵌段聚合,可以得到性能优质多枝型的聚醚酯,将其用于大庆油田含水原油脱水率大于70％。

氨基酸型表面活性剂用于提高原油采收率

报道了由脂肪胺和丙烯酸甲酯合成的N-长链烷基-β-氨基丙酸（AAPZ）的界面活性、放置稳定性和驱油性能,实验温度45℃。小试、中试、规模生产的AAPZ在大庆采油四厂回注污水中的3.0和0.5 g/L溶液,在加入或不加2.0 g/L HPAM或抗盐聚合物时,与黏度10 mPa.s的大庆采油四厂模拟原油间的界面张力均达到10-3mN/m超低值,且至少维持220天。在均质人造砂岩岩心上,在水驱之后分别注入0.35 PV AAPZ（5.0 g/L）/抗盐聚合物（3.0g/L）二元体系或NaOH（10）/ORS-41（3.0）抗盐聚合物（3.0）三元体系,采收率增值分别为23.1%和19.9%。在人造非均质大岩心上,按水驱-聚驱-AAPZ/抗盐聚合物二元驱-聚驱-水驱的程序驱油,改变前置HPAM段塞尺寸（0.1-0.725PV）,注入0.21-0.348 PV AAPZ（3.0）/抗盐聚合物（2.0）主段塞时,水驱后采收率增值差别很小,在29.2%-30.6%范围,而主段塞中抗盐聚合物浓度为1.5和1.0 g/L时,水驱后采收率增值分别为最高（31.7%）和最低（25.6%）。该二元体系的岩心注入压力,明显低于相同浓度的聚合物溶液。

SIRT1的生物学功能及其在胰岛素抵抗中的作用

SIRT1是NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶,通过使底物发生去乙酰化作用参与了DNA修复、细胞凋亡/细胞生存、细胞分化、内分泌信号通路和衰老等生命过程的调节.SIRT1在胰岛素敏感的组织器官中,通过调节胰岛素相关蛋白之间的相互作用与胰岛素信号转导途径,改善胰岛素敏感性和胰岛素抵抗,并且SIRT1在线粒体损伤中的作用与胰岛素抵抗发生有着密切的联系.

肺结核患者D-二聚体及纤维蛋白原检测的临床意义

目的检测肺结核患者血浆D-二聚体、纤维蛋白原浓度变化,进一步探讨其临床意义。方法分别检测了142例肺结核患者和86例健康对照者血浆D-二聚体和纤维蛋白原水平,分析两组间的差异。结果肺结核组较健康对照组D-二聚体和纤维蛋白原水平显著升高(P<0.05)。结论肺结核患者体内存在高凝状态,容易形成血栓性疾病,监测相关指标,预防血栓性并发症有重要临床意义。

DNA与结核抗体联合检测对结核性胸膜炎的诊断意义

目的探讨DNA和结核抗体(TB-Ab)联合检测在结核性胸膜炎的临床诊断意义。方法分别采用斑点金免疫渗滤法和实时荧光定量PCR法对95例结核性胸腔积液患者及45例非结核性胸腔积液患者进行TB-Ab和结核分枝杆菌DNA检测,并对结果进行分析比较。结果结核性胸膜炎组结核分枝杆菌DNA检测阳性率为56.8%,显著高于非结核性胸膜炎组(4.4%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结核性胸膜炎组TB-Ab检测阳性率为58.9%,显著高于非结核性胸膜炎组(6.6%),差异具有统计学意义(P<0.05)。两项指标应用结核性胸膜炎组阳性率可提高为78.9%,显著高于涂片镜检以及结核菌培养单项检测阳性率,差异具有统计学意(P<0.01)。结论结核分枝杆菌DNA与TB-Ab联合检测可明显提高结核性胸膜炎的阳性检出率,而且快速、简便、易操作。

荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检测中的临床应用

目的评价荧光PCR熔解曲线法在结核分枝杆菌耐药检出中的临床应用价值。方法以改良罗氏培养法及绝对浓度法作为对比,利用荧光PCR熔解曲线法检测53例肺结核患者对利福平、异烟肼耐药情况。结果两种方法的单耐药率、耐多药率比较差异无统计学意义(P>0.05)。同一标本两种方法检测对比显示,与绝对浓度法相比,熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药的敏感度分别为80.0%和81.0%,特异度分别为100.0%和93.8%,准确度分别为92.2%和86.8%,两种方检测法的一致性分析Kappa值分别为0.754和0.710,表明两者一致性佳。结论相对于传统方法,熔解曲线法敏感度、特异度良好且安全、高效,在耐药肺结核治疗中有良好的应用价值。

阳离子型破乳剂组分C的合成及配方优选

为促进原油破乳,提高脱水率,在室内合成了一种阳离子表面活性剂组分C,并分析了合成过程中的影响因素。结果表明:采用过硫酸盐-脂肪胺引发体系时,共聚反应易控制,获得的共聚物特性黏数天,残余单体含量少;提高共聚物的特性粘数,可以提高原油脱水率,但增加幅度不大,当阳离子单体二甲基二烯丙基氯化铵(DC)的质量浓度为0.03g·L^(-1)时,脱水率最高。