适用于SSR分子标记的玉米单粒种子DNA快速提取新方法

研究了玉米单粒种子DNA的提取新方法,利用该方法提取DNA,液氮、研磨、离心、沉淀、SDS、CTAB及氯仿都不用,一个工作人员提取100粒种子(1个检测样品)DNA只需30min左右,一天可以提取1600粒种子(16个检测样品)的DNA,并且提取的DNA分子量大,不降解,完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。

玉米单粒种子DNA提取新方法及在玉米种质鉴定中的应用研究

本文主要对三米单粒种子DNA提取方法及在玉米自交系鉴定中的应用进行了研究，结果表明该方法提取适度快。提取的DNA分子量大．没有降解，质量好，完全可以满足RAPD分析的需要，这就为RAPD在玉米种质及纯度签定上的应用提供了技术上的保证．有利于该项技术的普及和推广。

玉米单株幼芽DNA快速提取新方法

为了攻克利用DNA指纹技术进行玉米种子纯度鉴定中存在的技术难关,对玉米单株幼芽DNA快速提取 方法进行了研究,结果表明:利用新方法提取DNA,不用液氮、不用研磨、不用离心、不用沉淀,不用SDS、不用CTAB、 不用氯仿,并且提取的DNA不降解、完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要。一个人提取100 株幼芽(1个检测样品)DNA只需30 min左右,1 d可以提取2000株幼芽(20个检测样品)的DNA,为DNA指纹技术 在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。

引物组合法在利用DNA指纹鉴定玉米自交系真伪中的应用研究

利用RAPD分子标记方法对我国 4 6个骨干玉米自交系进行了鉴定研究 ,结果表明 ,仅用A6 ,C6 ,D2 ,F10 ,H19,N19等 6个引物的指纹组合即可将这 4 6个自交系相互区分开来 ,不需要针对每个自交系筛选特异性标记 ,克服了利用特异性标记鉴定玉米自交系的局限性 ;研究出基于WINDOWS98操作平台的玉米DNA指纹数据库和指纹分析软件。并且该数据库和分析软件对自交系的数量和引物数量都是开放性的 ,如果要区分开m个自交系 ,最多只用n个引物即可 ,二者的关系是 :2 n≥m。

不同高产夏玉米品种养分吸收特性的研究

本试验于1991～1992年研究了紧凑型玉米掖单13和平展型玉米沈单7号对N、P2O5、K2O的吸收特性。结果表明，玉米对养分的吸收高峰出现的时间和次数因品种不同而异，沈单7号对N、P2O5、K2O的吸收均有两个高峰，分别在6叶展至12叶展和吐丝至吐丝15d，且最高峰都在6叶展至12叶展；掖单13对N、P2O5、K2O的吸收都只有一个高峰，其中对N、P2O5的吸收高峰出现在12叶展至吐丝期，而对K2O的吸收高峰在6叶展至12叶展。

利用DNA指纹技术进行玉米自交系类群划分新方法——遗传背景分析法

对52个待测玉米自交系和15个对照自交系进行DNA指纹分析,计算待测玉米自交系与各类群对照自交系之间的遗传距离,不用聚类分析方法,直接根据遗传距离进行类群划分,结果表明,与传统的聚类分析方法相比,遗传背景分析方法是十分有效的玉米自交系类群划分新方法,将52个玉米自交系主要分为5大类群,即瑞德群,黄改群,P群,旅大红骨群和兰卡斯特群,未发现新的优势类群,除了自交系黄C以外,其他所有玉米自交系的类群划分结果与系谱来源相吻合,并指出黄C属于瑞德群。

影响DNA指纹技术进行玉米亲子鉴定准确性的主要因素研究

利用DNA指纹技术,分别采用不同数量的SSR引物,对 14个同母异父杂交组合及其父本进行亲子鉴定,研究影响玉米亲子鉴定结果准确性的主要因素,结果表明: (1 )与母本具有共同血缘的自交系作为父本将影响亲子鉴定的准确性; (2)采用引物数量不同,检测的DNA片段数量不同,也影响鉴定结果的准确性,采用引物数量越多,检测的DNA片段数量越多,鉴定结果越准确。

玉米单粒种子DNA提取新方法

本研究主要对玉米单粒种子ＤＮＡ的提取方法进行了探讨，取得了突破性进展。研究出在不用液氮的情况下，防止ＤＮＡ降解的关键技术。该方法操作步骤简单、快速、实用性强，一天时间可以提取近３００个样品，并且采用该方法提取的ＤＮＡ分子量较大，质量好。为ＲＡＰＤ在玉米种质及纯度鉴定上的广泛应用提供了技术上的保证，有利于该项技术的普及和推广。

依赖性派生玉米品种DNA指纹鉴定标准研究

模仿育种是一快速、高效、针对性强的（改良）育种方法，但是根据最新国际保护公约规定，所育品种属于依赖性派生品种，侵害了原品种权人的权利。改良品种与原品种的遗传差异多大才算是依赖性派生品种，目前国内外没有标准。以BA为母本，以H28、昌7-2、9502、P138、齐319、连87、吉853、京2101、京343、京832为父本组配了10对同母异父玉米杂交组合，研究了杂交组合两两之间的遗传差异。结果表明：遗传差异在20％以下的组合，父本之间具有明确的血缘关系；遗传差异在20％～30％的组合，父本之间有40％具有血缘关系，没有血缘关系的占60％；遗传差异在30％以上的组合，父本之间全部没有血缘关系。无论两父本之间是姊妹系，还是其中一个父本是用另一个父本回交2次改良而成，用它们组配的杂交组合之间的遗传差异都在10％以上。通过回交3次改良的组合，与原组合之问的遗传差异在10％以下。因此，将遗传差异小于10％作为判断是否是依赖性派生品种的DNA指纹鉴定标准。

亲子鉴定技术在玉米杂交组合组配中的应用研究

玉米杂交组合组配鉴定工作是玉米育种工作中十分重要的技术环节,需要消耗大量的人力、物力和财力,如何使玉米育种工作者从繁重的杂交组合组配、鉴定工作中解放出来,集中精力进行玉米自交系的选育,提高玉米育种效率值得研究。本试验以BA为母本,以H28、昌7-2、9502、P138、齐319、吉853、京2101、京343、京832为父本组配了9对同母异父玉米杂交组合,利用DNA指纹技术,将亲子鉴定技术应用到玉米杂交组合组配和鉴定工作之中。结果表明,将亲子鉴定技术应用到玉米杂交组合组配和鉴定之中,省时省力、结果准确可靠,是完全可行的。

适用于分子标记辅助育种的玉米单粒胚乳DNA快速提取方法

为了攻克利用分子标记辅助玉米育种技术中存在的技术难关,本文专门对玉米单粒胚乳DNA快速提取方法进行了研究,结果表明:利用该方法提取玉米单粒胚乳DNA,需要胚乳少,不用液氮、不用研磨、不用离心、不用沉淀,不用SDS、不用CTAB、不用氯仿,并且提取的DNA不降解、完全可以满足SSR分子标记的需要。而且提取时间短,一个人提取100粒玉米种子胚乳DNA只需30min左右。更重要的是,切除部分胚乳的子粒仍然能够正常发芽,为利用分子标记辅助玉米育种技术的普及和推广解决了关键性技术难题。该项技术可以应用到玉米种子纯度及真伪快速鉴定,玉米种质资源的遗传背景分析、目标基因的快速跟踪筛选、玉米自交系的快速提纯等方面,具有广阔的应用前景。

中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅱ.适于玉米自交系和杂交种指纹图谱绘制的SSR核心引物的确定

本项研究利用60个玉米自交系对初选出的158个SSR引物对进行进一步筛选,综合考虑PIC值大小、扩增带型统计的难易及引物的重复性高低,确定bnlg439、bnlg125、phi053、bnlg197、phi072、bnlg238、phi126、bnlg161、bnlg240、bnlg619共10个引物对作为构建玉米自交系和杂交种指纹库的核心引物;同时提出适用于计算玉米SSR指纹图谱概率的公式:P=1/N,对自交系N=n;对杂交种,N=Cn1+Cn2。n为所用引物的等位基因数。

玉米抗旱性鉴定研究进展

介绍了国内外关于玉米抗旱性鉴定原理、方法、指标、研究的现状、进展和存在的问题,并从作物遗传育种学的角度,指出了今后玉米抗旱性鉴定研究的发展方向。

比较三种DNA指纹分析方法在玉米品种纯度及真伪鉴定中的应用

本项研究归纳出三种DNA指纹分析方法 ,即特征谱带法、引物组合法和核心引物组合法 ,并比较了这三种方法在玉米品种纯度及真伪鉴定中的应用价值。在玉米基因组上均匀选取 6 2对SSR引物对 6 0个玉米自交系进行分析。 6 2对SSR引物共检测到 2 38个等位基因变异 ,平均每个位点的等位基因数4 0 8个 ,平均多态性信息量 (PIC) 0 6 12 ,平均标记索引系数 (MI) 2 5 8,评估引物多态性的三个指标并不完全一致。三种方法的比较研究表明 ,特征谱带法仅在固定的材料范围内有效 ,当扩大范围后 ,原来具有特征带的样品往往不再具有特征带 ,且需要筛选大量的引物 ,效率很低 ;引物组合法通过不同引物的有限组合 ,完全可以区分全部材料 ,避免了筛选大量引物的工作 ;核心引物组合法是引物组合法的扩展 ,不同实验室通过使用固定的一套核心引物组合 ,其指纹图谱可以相互比较和整合 ,为玉米DNA指纹图谱分析的标准化奠定基础。

青贮玉米育种研究进展

本文对青贮玉米育种的主要性状、种质资源和主要性状的遗传等方面进行综述 ,对青贮玉米育种中存在的主要问题进行了分析和探讨。

中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅲ.多重PCR技术在玉米SSR引物扩增中的应用

根据21对玉米SSR引物扩增片段大小范围组成不同的引物组合进行多重PCR反应的研究。在与单一PCR相同的反应条件下,47个两重PCR组合出现5种不同的扩增情况,其中30个组合扩增正常;10个三重PCR组合中有9个组合扩增正常;两个四重PCR组合中有1个扩增正常,这些筛选出的正常扩增的组合可应用于今后玉米DNA指纹库构建研究中。研究表明,应用与单一PCR完全相同的反应条件,大部分能够获得正常扩增的多重PCR组合,在此基础上提出了简化的多重PCR优化程序。

鲜食糯玉米不同品种授粉后籽粒品质主要成分的变化

【目的】试图阐明糯玉米籽粒品质主要成分授粉后的变化动态。【方法】以15个糯玉米品种为材料,采用完全区组设计,分析灌浆期籽粒粗淀粉、可溶性糖、蛋白质含量变化规律,及与品尝品质和产量的相关性。【结果】影响品质的主要因子是:外观品质、糯性和柔嫩性。灌浆各时期籽粒粗淀粉、可溶性糖、蛋白质含量的品种间差异显著。籽粒粗淀粉积累呈"S"型增长曲线,符合Richards方程,y=K/(1+Ae-Bx)1/N,粗淀粉积累起始增长势高、活跃增长期长、快增期灌浆速率高有利于籽粒粗淀粉积累。可溶性糖含量随授粉后天数的增加呈下降趋势,下降速率以吐丝后4～12d较快,12～20d渐慢,20～24d又变快,24d后又转慢,到成熟期降至最低值。蛋白质含量与授粉后天数的变化符合方程Y=a×ebx,b绝对值小有利于籽粒蛋白质含量的提高。【结论】授粉后糯玉米不同品种籽粒品质主要成分分别具有一致的变化规律,方程参数值不同体现了籽粒品质成分品种间差异。

中国玉米新品种DNA指纹库建立系列研究 Ⅰ.玉米品种纯度及真伪鉴定中SSR技术标准实验体系的建立

本研究从DNA提取、PCR扩增、电泳检测等环节对SSR技术进行了优化,最终建立一套完善的适用于玉米品种鉴定的SSR标准体系。并以玉米杂交种农大108的纯度鉴定为例,探索了该体系在玉米杂交种鉴定中实际应用的可行性。

应用RAPD分子标记技术对我国骨干玉米自交系进行类群划分

利用ＲＡＰＤ分子标记技术，对我国目前２５个主要玉米自交系进行亲缘关系类群划分。本项研究建立了从玉米种子、幼芽以及叶片组织中提取微量ＤＮＡ的方法。从ＲＡＰＤ引物试验盒Ａ至Ｏ共计３００个引物中，筛选出对玉米扩增产物具有多态性的引物４０个，其中具有特别明显多态性的引物１０个。它们是Ｆ３、Ｏ２０、Ａ１９、Ｍ２、Ｍ６、Ｎ１１、Ｎ１２、Ｎ１９、Ｃ７和Ｇ１４等。依据１０个引物扩增谱带建立０，１型数据，计算２５个自交系间遗传距离，并进行聚类分析。结果表明：供试的２５个自交系共可划分为５个类群。Ⅰ类为四平头血缘系统：包括黄早四、吉８５３、黄野四、四自四、１９６、８１５１５、４０４、Ｈ２１等共８个；Ⅱ类为瑞德黄马齿血缘系统：包括４７８、４８８、３１８９、７９２２、８１１２、Ｂ尖８、５００５等共７个自交系：Ⅲ类为兰卡斯特血缘系统：包括Ｍｏ１７、早４９、多２２等共３个；Ⅳ类为旅大红骨血缘系统：只有Ｅ２８一个自交系；Ⅴ类共有Ｐ７８、９５０２、１７８、Ｐ１３８、００７、Ｐ１７等６个自交系。这一类群都是由杂交种Ｐ７８５９９后代选系而来，与美国另外两个类群瑞德黄马齿系统和兰卡斯特系统关系较远，它们之间选配的杂交组合大多具有较强的杂交优势。?

玉米品种SSR标记毛细管电泳荧光检测法与变性PAGE银染检测法的比较研究

以192份玉米品种为材料,用7对SSR引物对毛细管电泳荧光检测和常规的变性PAGE银染检测两种SSR标记检测方法进行比较分析。结果表明,两种方法检测的SSR标记片段大小一致。毛细管电泳荧光检测法检测的结果更为精确、灵敏、高效,更适用于高通量材料的检测分析。对少量材料进行检测分析以及SSR标记的筛选时,使用常规的变性PAGE银染检测法更经济适用。