黄芪对柯萨奇B_3病毒感染培养大鼠心肌细胞Ca^（2＋）内流及该病毒RNA复制

本研究结果发现，黄芪对柯萨奇Ｂ_３病毒（ＣＶＢ_３）感染大鼠心肌细胞及正常对照心肌细胞的Ｃａ^（２＋）内流均呈显著抑制作用（ｐ＜０．０１，Ｐ＜０．０５））；若在病毒感染１ｈ后加黄芪，经４８ｈ培养，对正常对照及感染细胞的Ｃａ^（２＋）内流亦有抑制作用（Ｐ＜０．０５）；同时细胞中ＣＶＢ_３－ＲＮＡ含量显著少于病毒对照组（Ｐ＜０．００１）。提示黄芪具有钙拮抗作用，可减少病毒感染引起的心肌Ｃａ^（２＋）内流量，有可能减轻感染细胞的继发性Ｃａ^（２＋）损伤；且对细胞中病毒ＲＮＡ的复制具有抑制作用，显示了其在病毒性心肌炎临床治疗上的应用价值。

药物对病毒感染培养心肌细胞Ca^（2＋）内流及CVB_3－RNA复制的影响

应用放射性同位素￣（４５）Ｃａ￣（２＋）示踪技术及光敏生物素标记ｃＤＮＡ探针杂交方法，观察了维拉帕米、黄芪、地塞米松等药物对感染柯萨奇Ｂ＿３病毒（ＣＶＢ＿３）的大鼠培养心肌细胞Ｃａ￣（２＋）内流及细胞中ＣＶＢ＿３－ＲＮＡ复制的作用。结果发现：在病毒感染４８ｈ，上述三药均可显著减少感染细胞及正常对照的心肌Ｃａ￣（２＋）内流（Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）；若在病毒感染后即加入上述药物，经４８ｈ培养后，黄芪组细胞中的ＣＶＢ＿３－ＲＮＡ含量显著少于病毒对照组（Ｐ＜０．００１），维拉帕米则显著增加（Ｐ＜０．０１）．而地塞米松对其无影响。提示黄芪与地塞米松具有一种与维拉帕米相似的减少病毒感染心肌Ｃａ￣（２＋）内流的作用，有可能减轻感染细胞的继发性Ｃａ￣（２＋）损伤；但三种药物对感染细胞中病毒核酸的复制有不同作用，可作为临床治疗病毒性心肌炎时的参考。

维拉帕米对病毒感染心肌细胞Ca^（2＋）内流及病毒核糖核酸复制的作用（摘要）

维拉帕米对病毒感染心肌细胞Ｃａ^（２＋）内流及病毒核糖核酸复制的作用（摘要）上海医科大学中山医院郭棋，彭天庆，顾全保，赵剑星，杨英珍我们在证实了病毒感染早期细胞Ｃａ（２＋）内流增加的基础上，进一步观察维拉帕米（Ｖｅｒ）对柯萨奇Ｂ３病毒（ＣＶＢ３）感染?..

CVB_3对成年大鼠培养心肌细胞Ca^（2＋）内流的影响

ＣＶＢ_３对成年大鼠培养心肌细胞Ｃａ^（２＋）内流的影响郭棋，顾全保，赵剑星，杨英珍，虞勇（上海医科大学中山医院上海市心血管病研究所，中国科学院上海细胞生物学研究所２０００３２）关键词柯薩奇病毒；Ｂ组；大鼠；心肌细胞ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ组病毒（ＣＶＢ）...

维拉帕米对CVB_3感染心肌细胞Ca^(2+)内流及CVB_3-RNA含量的影响

观察了维拉帕米(Verapamil,Ver)对感染柯萨奇B_3病毒(CVB_3)的大鼠培养心肌细胞Ca^(2+)内流及CVB_3-RNA复制的影响。结果发现在感染48h后,Ver对感染细胞及正常对照的Ca^(2+)内流均有显著的抑制作用(P<0.01);若在病毒感染同时加入Ver,经48h培养后,细胞中CVB_3-RNA含量显著高于病毒对照组(P<0.05)。提示钙拮抗剂(如Ver)可减少病毒感染引起的心肌Ca^(2+)内流增加,有可能减轻感染细胞的继发性Ca^(2+)损伤;但Ver会促进病毒RNA的复制,提示在急性病毒性心肌炎临床上用Ver治疗心律失常时宜慎重。

黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞L型钙通道的效应

目的:了解黄芪对感染柯萨奇病毒心肌细胞 L 型钙通道的影响,以探讨黄芪用于心肌炎治疗的作用机制。方法:以柯萨奇 B_3病毒感染急性分离的成年大鼠心肌细胞,利用膜片钳技术记录 L 型钙通道电流。结果:黄芪不影响正常心肌细胞 L 型钙通道电流的幅度,但可减缓 L 型钙通道电流的衰减。病毒感染增加心肌细胞 L 型钙通道电流的幅度,并改变其电压依赖性而使电流电压曲线向左下偏移。黄芪可抑制病毒感染细胞 L 型钙通道电流的增加。结论:黄芪通过抑制感染细胞经 L 型钙通道的跨膜钙内流和稳定 L 型钙通道的作用,可防止病毒感染可能导致的细胞内钙超载和异常电活动。

黄芪对感染病毒大鼠心肌细胞钙通道及钠钙交换载体的效应

目的与方法：以柯萨奇Ｂ３病毒感染急性分离的成年大鼠心肌细胞，利用膜片钳记录技术了解黄芪对感染柯萨奇病毒后心肌细胞Ｌ型钙通道及钠钙交换载体的影响，以探讨黄芪用于心肌炎治疗的作用机制。结果：黄芪不影响正常心肌细胞Ｌ型钙通道电流的幅度，但可减缓Ｌ型钙通道电流的衰减。黄芪也不影响内向ＮＣＥ电流，但使外向ＮＣＥ电流增加，从而使动作电位期间由ＮＣＥ转运入细胞内的钙离子增加。病毒感染增加心肌细胞Ｌ型钙通道电流的幅度，抑制内向钠钙交换电流，并使钠钙交换电流的逆转电位负移。黄芪可抑制病毒感染细胞Ｌ型钙通道电流的增加，减轻ＣＶＢ３对内向ＮＣＥ电流的抑制作用和使负移的逆转电位正常化。结论：黄芪通过拮抗ＣＶＢ３感染对Ｌ型钙通道和钠钙交换电流的影响，可防止病毒感染可能导致的细胞内钙超载和异常电活动，从而对感染细胞起到保护作用。

大鼠、豚鼠心肌细胞的简单、快速分离

本文介绍了一种简单、快速分离成年大鼠、豚鼠心肌细胞的方法。所分得的细胞形态结构完整，具有良好的钙耐受性，膜片钳上易于形成高阻抗接封，因而适于作各种电生理记录。

牛磺酸对培养大鼠心肌细胞感染 Coxsackie B_3 病毒的影响

目的：观察牛磺酸对病毒性心肌炎模型的保护作用。方法：取新生ＳＤ大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞，１８ｈ后接种１００ＴＣＩＤ５０的ＣｏｘｓａｃｋｉｅＢ３病毒（ＣＶＢ３）做为实验性病毒性心肌炎模型。结果：牛磺酸能剂量依赖性地减少感染ＣＶＢ３后心肌细胞乳酸脱氢酶、天冬氨酸氨基转移酶的释放，降低上清液的病毒滴度，对搏动停止、细胞病变及超微结构均有保护作用，并发现感染ＣＶＢ３后心肌细胞内牛磺酸含量下降。结论：临床应用牛磺酸治疗病毒性心肌炎有实验依据。

黄芪甲甙改善扩张型心肌病小鼠左室重构与磷酸化p-38MAPK相关性的实验研究

目的:探讨黄芪甲甙对柯萨奇病毒B3(CVB3)扩张型心肌病(DCM)小鼠左室重构的影响及其可能的作用机制。方法:BALB/c小鼠腹腔无菌重复增量接种CVB3建立扩张型心肌病动物模型(n=30);感染CVB3的小鼠以黄芪甲甙(0.6mg.kg-1.d-1)灌胃作为扩张型心肌病+黄芪甲甙治疗组(n=20);同期腹腔无菌注射等容积不含病毒的EMEM液作为正常对照组(n=10)。用高频超声心动图测量左室大小及心功能指数,用ELISA技术检测血清I、III型前胶原端肽(PINP、PICP及PIIINP)浓度并计算PICP/PICN比值,苦味酸天狼猩红胶原特异染色和偏光显微镜显像,并辅以图像分析软件计算心肌胶原容积积分(CVF)和I型胶原的含量,分别应用RT-PCR和Western blotting技术检测心肌组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原变化和磷酸化p38MAPK的表达。结果:黄芪甲甙显著提高DCM小鼠的生存率、有效地降低扩大的左室内径及增加心脏功能;组织学和血清学显示DCM小鼠心肌组织胶原沉积明显多于正常对照组,而这种增多的趋势可被黄芪甲甙明显抑制(P<0.01);DCM小鼠心肌磷酸化p38MAPK表达高于正常对照组,黄芪甲甙治疗后p38MAPK活性明显低于正常对照组(分别为P<0.01和P<0.05)。结论:黄芪甲甙改善CVB3感染后导致的扩张型心肌病左室重构可能与降低磷酸化p38MAPK活动密切相关。

慢性心力衰竭患者血清中cTnI/T与不同心血管疾病的关系

目的探讨血清心肌肌钙蛋白(Tn)I/T(cTnI/cTnT)在慢性心力衰竭(心衰)中的意义以及其对心血管疾病发生发展的影响.方法110例临床诊断为慢性心衰患者,根据病因分为高血压、冠心病、扩张型心肌病3组,用化学发光法测定血清cTnI/T水平,用超声心动图测定左心室射血分数(LVEF)及左心室大小(LVDd、LVDs),同时进行肝、肾功能的常规检测.其中20例患者在临床治疗期间跟踪随访3～6个月,观察心功能的变化与cTnI/T的关系.结果血清cTnI在扩张型心肌病慢性心衰患者中显著高于其他组(P＜0.05),cTnI的阳性率在LVEF 31%～40%段明显增高,与LVEF≤30%、LVEF 41%～50%段比较,差异有显著性(P＜0.05);血清cTnT升高与血肌酐异常者呈显著相关,(r=0.345,P=0.005),而血清cTnI的升高与肌酐的高低无关.随访发现,经治疗后心功能改善的患者,血清cTnI/T显著下降;但是,若疗效不佳,心功能有恶化时,血清cTnI/T较治疗前有所升高,有显著统计学差异.结论扩张型心肌病患者可能存在慢性心肌损伤,其损伤程度在LVEF 30%～41%可能较重;慢性心衰患者肾功能损害对血清cTnT的影响较大,而cTnI不变,因此血清cTnI可作为评判慢性心肌损伤的特异指标.

病毒性心肌炎的临床及实验研究(1978～1987)

本研究应用双份血清柯萨奇B组病毒中和抗体效价≥4倍上升,或单份血清抗体效价≥640作为病毒学诊断依据,前瞻性收集自1978～1986年393例临床诊断为急性病毒性心肌炎的随访资料,总结分析8年余来发病概况（柯萨奇B组病毒性心肌炎占54％）,病例总数近年来有逐年增长（10例/年→51例/年）,主要散发。柯萨奇B组病毒感染中B2最常见,依次为B4、B2、B5781株（B5亚型）。2型或2型以上感染不少见。1979～1984年B2、B4型占2/3,1985、1986年B3、B5781型占2/3。

牛磺酸对柯萨奇B3病毒感染新生大鼠心肌细胞外向钾电流的影响

观察牛磺酸对柯萨奇Ｂ３病毒（ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ３，ＣＶＢ３）感染新生大鼠心肌细胞外向钾电流（ｏｕｔｗａｒｄｃｕｒｒｅｎｔ，Ｉｏｕｔ）的影响。方法运用全细胞膜片钳技术记录了分离的大鼠心肌细胞外向钾电流，并观察牛磺酸的作用。结果ＣＶＢ３感染可使正常大鼠心肌细胞Ｉｏｕｔ明显增加，牛磺酸对正常大鼠心肌细胞Ｉｏｕｔ无明显影响，但可使ＣＶＢ３感染的Ｉｏｕｔ趋于正常。结论牛磺酸对ＣＶＢ３感染心肌细胞Ｋ＋通道电流的作用可能是其发挥抗心肌损伤作用的机制之一。

钙离子与牛磺酸两者跨心肌细胞膜内流的相互影响

目的和方法：取新生ＳＤ大鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞，采用放射性同位素４５Ｃａ２＋及３Ｈ－牛磺酸示踪技术，观察钙离子与牛磺酸跨心肌细胞膜内流的相互影响。结果：（１）牛磺酸内流在低胞外Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｏ，０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高［Ｃａ２＋］ｏ（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）均比正常［Ｃａ２＋］ｏ（１５ｍｍｏｌ／Ｌ）和高［Ｃａ２＋］ｏ（４０ｍｍｏｌ／Ｌ）时增加，尤以低［Ｃａ２＋］。时明显；异搏定（１０μｍｏｌ／Ｌ）能促进牛磺酸的内流；（２）１０～２０ｍｍｏｌ／Ｌ牛磺酸对不同［Ｃａ２＋］。（０５、１５和４０ｍｍｏｌ／Ｌ）下的Ｃａ２＋内流均有抑制作用，而１ｍｍｏｌ／Ｌ牛磺酸只抑制高［Ｃａ２＋］ｏ时Ｃａ２＋内流，对低［Ｃａ２＋］ｏ和正常［Ｃａ２＋］ｏ时Ｃａ２＋内流无明显作用；１～２０ｍｍｏｌ／Ｌβ－丙氨酸对Ｃａ２＋内流无明显影响。结论：胞外Ｃａ２＋浓度的变化可直接影响牛磺酸内流，而牛磺酸能抑制Ｃａ２＋的内流，两者相互影响。

扩张型心肌病移植心脏的病毒基因检测及其随访观察

目的 对扩张型心肌病移植心脏受体心肌组织进行多种病毒基因检测 ,并对所有心脏移植后的病人跟踪随访 ,了解病毒感染与移植后心脏的冠脉血管病变间的关系 ,初步判断预后。方法 利用RT PCR及PCR技术检测 12例扩张型心肌病移植受体心脏心肌组织中的多种病毒基因片段。结果 12例心脏组织中有 7例肠道病毒阳性 ,4例腺病毒阳性 ,1例HCMV阳性 ,2例EBV阳性。而且 ,有的病例在同一组织中可检测到几种病毒 ,且在不同部位。经过 1年多随访 ,初步发现有病毒感染者 ,移植后的心脏冠脉血管发生狭窄的概率高于病毒基因阴性者 ,而且多种病毒混合感染的血管病变较单种病毒更容易发生。结论 病毒感染导致的扩张型心肌病可能是多因素的 ,同时它对移植后心脏的结构、功能改变似乎有一定的影响。

ADAMTS-1与小鼠急、慢性病毒性心肌炎心肌纤维化相关性的初步研究

目的检测ADAMTS-(a disintegrin and metalloprotease with throm- spondin type 1 motifs)在急、慢性柯萨奇病毒B3(CVB3)心肌炎小鼠心肌组织中的表达,并分析其与心肌纤维化的关系。方法以CVB3单次感染或重复增量感染Ba1b／C小鼠分别建立急性病毒性心肌炎(急性组,20只)及慢性病毒性心肌炎(慢性组,25只)模型,同期小鼠腹腔无菌注射等剂量不含病毒的EMEM液作为各自正常对照组(均为10只)。以苦味酸天狼猩红行心肌胶原组织特异性染色,并运用图像分析软件计算心肌组织中的胶原容积积分(collagen volume fraction,CVF,％;用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组织化学方法分别检测小鼠心肌组织中ADAMTS-1基因水平和蛋白水平的表达。结果两组病毒性心肌炎小鼠心肌组织中CVF显著增加,且慢性组更为显著(P<0．01):急、慢性组ADAMTS-1 mRNA均明显高于其正常对照组,尤以慢性组升高更为显著(P<0．05);免疫组织化学检测结果显示, ADAMTS-1在心肌组织细胞胞质内表达;各实验组小鼠心肌组织中ADAMTS-1 mRNA的表达与CVF呈正相关。结论ADAMTS-1在急、慢性病毒性心肌炎心肌组织中呈进行性增加并与胶原增生密切相关,表明ADAMTS-1可能通过调节胶原代谢参与心肌纤维化的发生、发展。

大鼠心肌细胞L型和T型钙通道的特性

目的研究大鼠心肌细胞Ｌ型和Ｔ型钙通道的特性。方法参照Ｈａｍｉｌ法记录全细胞跨膜钙电流。结果Ｔ型和Ｌ型钙通道可并存于大鼠心肌细胞膜上。Ｔ型钙通道激活电压在－７０～－６０ｍＶ，持续时间在２０～３０ｍｓ，电流幅度较小；Ｌ型钙通道激活电压在－３０～－２０ｍＶ，持续时间在１５０～２００ｍｓ，电流幅度较大。在细胞外钙离子浓度为０．５、２和１０ｍｍｏｌ／Ｌ时，Ｌ型钙通道的平均电流分别为（１．４３±０．３６）、（１．９６±０．３９）和（４．１３±０．７５）ｐＡ／ｐＦ；峰电流分别为（５．５０±１．５８）、（８．１７±２．１４）和（１３．６３±３．５９）ｐＡ／ｐＦ；电流幅度随时间变化可分为无明显衰减、缓慢衰减和快速衰减３种方式。与豚鼠心肌细胞相比，大鼠心肌细胞对钙通道特异性阻断剂相对不敏感。结论Ｌ型钙通道是大鼠心肌细胞膜上的主要电压依赖性钙通道，而Ｔ型钙通道在心室肌细胞上不起主要作用。

醛固酮诱导扩张型心肌病小鼠心肌PCPE-1 mRNA的表达

目的探讨醛固酮是否影响柯萨奇病毒B_3(CVB_3)所致小鼠扩张型心肌病(DCM)心肌组织中PCPE-1(Procollagen C-Proteinase Enhancer 1)的表达。方法以CVB_3重复增量感染Balb/c小鼠建立病毒性扩张型心肌病动物模型(n=30)；小鼠感染CVB_3 24 h后以螺内酯(7．5 mg/kg/day)灌胃作为螺内酯干预(Spi)组(n=20)；同期腹腔无菌注射等容积不含病毒的EMEM液设立为正常对照(Con)组(n=10)。运用苦味酸天狼猩红胶原特异染色和偏光显微镜显像,并辅以图像分析软件计算心肌胶原容积积分(CVF)和Ⅰ型胶原的含量。应用RT-PCR技术检测心肌组织中Ⅰ型胶原(ColⅠ)和PCPE-1 mRNA的表达。结果DCM小鼠CVF和Ⅰ型胶原明显增多(P＜0．001),而这种增高的趋势在螺内酯干预组被明显遏制(P＜0．01)；与正常对照组比较,DCM小鼠心肌组织中PCPE-1及ColⅠmRNA同时异常增加(P＜0．001),螺内酯干预后PCPE-1及ColⅠmRNA的表达显著降低(分别为P＜0．01和P＜0．05)。结论醛固酮可刺激病毒感染导致的DCM小鼠纤维化心肌组织中PCPE-1 mR- NA的表达增高,PCPE-1将可能作为临床心肌纤维化药物干预潜在的作用靶点。

中性粒细胞介导的心肌缺氧再给氧损伤和L-精氨酸的保护作用

目的 探讨中性粒细胞对心肌复氧损伤的影响及L 精氨酸对中性粒细胞介导损伤的保护作用。方法 采用体外培养的乳鼠心肌细胞 ,72h后分 4组 :Ⅰ组单纯缺氧 5h ,再给氧 1 0h ;Ⅱ组在再给氧的同时加入中性粒细胞 ;Ⅲ、Ⅳ组在缺氧前分别先用 1、5mmol/L的L 精氨酸孵育 2h ,再行缺氧复氧。实验过程中在相差显微镜下观察细胞形态、搏动状况 ,各组在实验开始前、缺氧后和再给氧后抽取上清液 ,测LDH ,并在实验结束时计数各组的细胞存活率。结果 Ⅲ、Ⅳ组缺氧后LDH值明显低于Ⅰ、Ⅱ组 (分别为P <0 .0 5和 <0 .0 1 ) ;复氧后Ⅱ组LDH明显高于Ⅰ组 (P <0 .0 5 ) ,而Ⅲ、Ⅳ组则明显好于Ⅱ组 (P <0 .0 1 ) ;细胞存活率在Ⅱ组低于Ⅰ组 (P <0 .0 5 ) ,Ⅲ、Ⅳ组则明显较高 (与Ⅱ组相比P <0 .0 1 )。结论 中性粒细胞可通过多种机制加重心肌的再给氧损伤 ,而L 精氨酸可拮抗中性粒细胞的损伤 。

多种病毒感染与心肌疾病发病的关系

目的:检测不同临床表现的心肌疾病心肌组织中多种病毒基因,结合病理诊断进一步探讨多种病毒感染与心肌疾病的关系。方法:50例临床诊断为扩张型心肌病、病毒性心肌炎、肥厚型心肌病、限制型心肌病以及冠心病患者行心内膜心肌活检,分别检测肠道病毒RNA、腺病毒DNA、巨细胞病毒DNA、单纯疱疹病毒DNA及EB病毒DNA,12例脑外伤死亡者心肌组织作正常对照。结果:22例扩张型心肌病患者,病理学支持者17例,其中Evs RNA阳性者为8例(47.1％)、ADV DNA阳性者7例(41.2％)、EBV DNA阳性者1例(5.9％);17例心肌炎,11例病理学证实,其病毒基因检测阳性率分别为Evs RNA72.7％(8/11)、ADV DNA 18.2％(2/11)、EBV DNA 9.1％(1/11);1例肥厚型心肌病Evs RNA阳性。结论:多种病毒参与了心肌疾病的发病。