16S rRNA基因序列在动物消化道细菌鉴定中的应用研究

在概述细菌16SrRNA基因特点和动物消化道微生物生态系统的基础上,对16SrRNA基因序列在动物消化道微生物分离鉴定中的应用进行了综述,并展望了其研究方向。

小鼠胚胎胃肠道细菌的分离与初步鉴定

对常规饲养、正常妊娠的小白鼠胚胎后期胃肠道细菌进行分离鉴定,通过细菌培养特性、形态特征和生化试验鉴定,初步确定小鼠胚胎后期胃肠道中存在的微生物菌群有微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、变形杆菌属(Proteus)和双岐杆菌属(Bifidobacterium)等细菌,其中G+细菌占据了绝对优势,小鼠胚胎胃肠道中细菌的平均数量达到1.2×102CFU/g～3.2×102CFU/g。本研究为哺乳动物胚胎时期存在于胃肠道中细菌的深入研究奠定了基础。

大连地区奶牛隐性乳房炎主要病原菌的分离鉴定及药敏试验

为了明确引起大连地区奶牛隐性乳房炎的主要病原菌及其发病情况,对大连市不同地区的256头黑白花泌乳奶牛进行调查研究,对奶牛隐性乳房炎奶样进行病原菌的分离鉴定及药敏试验。结果表明,检出奶牛隐性乳房炎阳性率为65.63%、乳区阳性率为51.95%;病原菌以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、链球菌(Streptococcus)和大肠杆菌(Escherichia coli)为主,占检出细菌总数的83.33%;体外药敏试验筛选出了对主要病原菌高度敏感的药物,能有效地治疗奶牛隐性乳房炎。

理化因素对葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1免疫活性的影响

应用免疫琼脂扩散法检测温度、pH、反复冻融、保护剂等理化因素对GST-mTSST-1融合蛋白免疫活性的影响,结果表明,在4℃30 d、20℃72 h、37℃72 h条件下,GST-mTSST-1融合蛋白的免疫活性不受影响,但该蛋白不耐高温,60℃5 min完全失活,耐碱不耐酸,对反复冻融有较好的稳定性,50 mg/mL蔗糖保护剂有利于提高该蛋白的免疫稳定性,为GST-mTSST-1融合蛋白规模化生产工艺的设计奠定了基础.

猪繁殖与呼吸综合征弱毒活疫苗免疫猪脾脏转移因子的制备及其活性分析

从猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)弱毒活疫苗免疫猪脾制备转移因子(TF),检测其免疫活性,为开发新型免疫增强剂和有效防制PRRS提供科学依据。用PRRSV弱毒活疫苗免疫健康育成猪,无菌采集脾,通过透析法从脾提取TF。应用磺基水杨酸法、茚三酮反应和硝酸-钼酸铵试验等方法检测TF的主要成分,经高效液相色谱法测定TF中氨基酸种类及其含量;通过鸡红细胞吞噬试验和MTT法,检测TF对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和外周血淋巴细胞增殖活性的调节作用。进而将9头4周龄健康仔猪随机分为A、B和C组,每组3头。A组每头猪左、右侧耳后分别肌内注射1头份PRRSV疫苗和1mL TF;B组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL TF的混合液;C组每头猪注射1头份PRRSV疫苗与1mL生理盐水混合液。免疫后20d,通过MTT法检测每组猪外周血淋巴细胞(PBLC)的增殖活性。制备的TF内无蛋白质成分,含有核酸和18种氨基酸,每毫升TF含核酸21.5μg、总氨基酸3.479mg。TF能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬能力和PBLC增殖活性。当TF与PRRSV疫苗分开或混合注射给4周龄仔猪后,能够显著提高仔猪PBLC的增殖能力。从PRRS弱毒活疫苗免疫猪的脾制备了TF,其能显著提高巨噬细胞的吞噬功能和外周血淋巴细胞的增殖活性。

固体缓蚀棒技术在王官屯油田的应用

王官屯油田部分油井井筒腐蚀严重。地层水矿化度高,采出液中富含H2S、CO2等酸性气体是腐蚀的主要原因。针对王官屯油田采出液特性,研制了一种具有缓慢释放特点的缓蚀剂,并制成固体缓蚀棒。在温度为60℃、缓蚀剂浓度为30mg/L时,N80钢试片在油田采出水中的缓蚀率为78.91%,综合考虑后确定固体缓蚀棒中缓蚀成分的含量为40%。现场应用10口井,平均检泵周期由2个月延长至4个月。该技术工艺简单,缓蚀效率高,对地层无伤害,有效期长,可为油田井筒防腐提供借鉴。

高师院校微生物实验教学体系建设与实践研究

高等师范院校微生物学实验是微生物学等相关现代生物技术的基础实验内容,也是一门实践性与应用性很强的学科。应针对高师院校生物科学专业的特点和培养目标,紧密结合实践,对微生物学实验课程体系的教学内容、教学方法与手段、考核机制进行改革,创建适合于培养本科生创新能力的实验教学体系,提高学生实验的积极性与主动性,从而有效培养学生的实验操作能力与创新精神,以适应现代生物学新课改与创新的需要。

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法,监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5.0μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为D490 nm≥0.219,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性,适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。

家兔胚胎胃肠道细菌分离及16S rRNA基因序列分析

为研究家兔胚胎胃肠道细菌菌群的种类,对常规饲养、正常妊娠的家兔胚胎后期胃肠道细菌进行分离,基于分离细菌的生理生化特性、16S rRNA基因序列的同源性比较及系统发育分析,初步确定家兔胚胎后期胃肠道中存在的微生物菌群有微球菌属(Micrococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、棒杆菌属(Corynebacterium)以及蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)等细菌,其序列同源性均为97%～99%。分离细菌均为G+细菌,家兔胚胎胃肠道中细菌的平均数量达到0.8×102cfu/g～1.2×102cfu/g,本研究为哺乳动物胚胎时期存在于胃肠道中细菌的深入研究奠定了基础。

重组猪β-防御素1对大肠杆菌的抑制作用

旨在评价重组猪β-防御素1(porcineβ-defensin 1,pBD1)对大肠杆菌(E.coli)的体外抑制活性及其对大肠杆菌病鸡的治疗效果。应用琼脂板打孔扩散法和微量抑菌试验,分别测定重组pBD1对3株E.coli(O141、SJZ1和SJZ2株)的体外抑制效果,继而将40只11d的雏鸡随机分为5组(n=8),即A(防御素)组、B(抗生素)组、C(防御素与抗生素联合治疗)组、D(感染非治疗)组和E(空白对照)组。A、B、C和D组:同时经颈部皮下和口服途径分别给每只鸡接种1mL E.coli O141株(1.25×109 cfu·mL^(-1));E组:以同样途径分别给每只鸡接种1mL肉汤。当感染鸡表现临床症状时,A、B、C和D组分别口服pBD1[50μg·(只·次)^(-1)]、头孢曲松钠(50mg·kg^(-1),按体重给药,下同)、pBD1和头孢曲松钠[分别为50μg·(只·次)-1和50mg·kg^(-1)]及等体积的无菌生理盐水,每天1次,连续治疗7d。结果表明,重组pBD1在体外对3株E.coli均具有明显的抑制活性,抑菌效果随浓度增加而增强。与非治疗组相比,三个治疗组的临床症状和病理变化明显减轻,发病率、死亡率降低,感染后期防御素治疗组、防御素与抗生素联合治疗组的体重极显著高于感染非治疗组(P<0.01)。以上结果显示,重组pBD1对E.coli生长具有明显抑制作用,对大肠杆菌病鸡具有良好的治疗效果;重组pBD1的治疗效果优于头孢曲松钠,有助于病鸡恢复;当pBD1与头孢曲松钠联合使用时,疗效更佳。该研究结果可以为大肠杆菌病的有效治疗提供科学依据,为新型抗菌制剂pBD1的研究与开发奠定重要基础。

“卓师计划”背景下生物学青年实验教师的培养路径

为建设一支高素质专业化创新型的实验教师队伍,加快高水平师范本科教育建设,为新时代“卓越计划”的实施提供师资保障,探讨高师院校生物学青年实验教师培养路径与实践。通过实施科学研究与实验教学深度融合,注重实验课程全局观,重视“以生为本”的教育教学方法和模式改革,提升青年实验教师的教学科研创新能力;引领培养青年实验教师教育情怀,构筑传带教研共同体;搭建优质教学科研平台,改革考核评价和职称评聘机制,激发青年实验教师的教学科研热情和创新发展潜力。通过培养路径的创新实践,显著提升学院青年实验教师专业综合素养和实践教学能力,为地方高师院校青年实验教师队伍建设提供借鉴。

金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因的克隆、表达及其生物活性分析

目的体外表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)凝固酶Coa,评价其生物学活性。方法根据GenBank中金黄色葡萄球菌凝固酶coa基因序列设计特异性引物,采用PCR方法从S.aureus USA300 CA-MRSA 923株基因组中扩增coa基因片段,将其克隆至pET-24b(+)表达载体,构建重组表达质粒pET-24b-coa;将经双酶切及测序鉴定正确的重组质粒转化感受态细胞E.coli BL21(DE3)中进行IPTG诱导表达;通过SDS-PAGE和Western blot对表达的重组Coa(rCoa)进行鉴定,测定rCoa对人血液和兔血浆的凝固活性;最后用纯化的重组蛋白rCoa免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA和Western blot分析其免疫原性。结果构建的重组质粒pET-24b-coa在E.coli BL21(DE3)中以包涵体形式表达rCoa,分子量约74.8 ku,与预期蛋白大小相符;rCoa在体外具有凝固人全血和兔血浆活性,能刺激小鼠产生高效价的抗Coa特异性抗体。结论成功地获得了具有良好凝固酶活性和抗原性的金黄色葡萄球菌凝固酶重组蛋白rCoa,为进一步深入研究S.aureus凝固酶Coa的功能及以Coa为靶点的抗金黄色葡萄球菌抑制剂和疫苗的研制奠定基础。

安装助抽增液器前后抽油井载荷分析

依据油井载荷理论计算公式,对助抽增液器安装前后抽油杆的受力分布进行了计算分析,找出提高油井泵效、减小抽油杆偏磨、降低杆底部断脱和油管底部漏失的新途径。

雪莲培养物对小鼠免疫功能的影响

考察雪莲细胞培养物对小鼠免疫功能的影响,对比了不同剂量组3.4、16.7、33.4mg/kg.d的雪莲培养物喂小鼠后,对测定指标的影响,结果显示,三个剂量组对脾脏指数无影响;剂量组3.4 mg/kg.d能提高巨噬细胞吞噬率和T淋巴细胞转化率;中、高剂量组对血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬率,T淋巴细胞转化率等四项免疫指标有显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)增高。说明雪莲培养物具有良好的增强免疫力的作用。

人工地震驱油技术在王官屯油田的应用

作为三次采油新技术的人工地震驱油技术投入少、工艺简单、对油层和环境无污染,可有效增加驱动能量,降低原油粘度,增强原油流动性,产出高。本文简要介绍了人工地震驱油技术的原理及在王官屯油田的应用,为类似油田的应用提供一定借鉴。

大港南部油田有杆泵井偏磨机理探讨及综合防治

大港南部油田部分油井抽油杆和油管偏磨严重,造成抽油杆断脱、油管漏失及频繁作业,严重影响了油田的正常生产。通过对165口因杆管偏磨造成抽油杆断脱、油管漏失的井进行调查分析,结合抽油杆下行阻力理论计算,发现造成杆管偏磨的主要原因是高冲次、高含水、低沉没度导致抽油杆下行弯曲和井斜变化大。结合生产实际提出了抽油杆底部集中加重、中性点扶正、配套应用大流道泵减少抽油杆下行弯曲;底部减少加重、偏磨段连续扶正、上部延伸保护和井口旋转减少井斜偏磨;确定合理的生产参数减少杆柱共振等综合配套防治技术。现场应用表明,提出的方法可有效地改善大港南部油田偏磨现象。

抽油机井杆、管防偏磨工具优选与应用

为了对油井杆、管偏磨进行有效的治理,对近三年应用的多种防偏磨工具按照技术评价、使用效果、性价比以及质量保证的评价方法,从结构、材质、质量等方面优选出了双向耐磨接箍、叶片扶正器、玻璃内衬管等应用效果较好的防偏磨工具。在结合偏磨机理分析和治理对策的基础上,针对高液量和低液量斜井、稠油、高含蜡斜井等井况制定了相应的综合配套措施并进行了现场推广应用,实现了短周期井的有效治理,为今后井下工具实行优胜劣汰提供了一条有效的途径。

猪流行性腹泻病毒HBMC2012株的分离鉴定及其致病性研究

为从腹泻仔猪肠道内分离鉴定猪流行性腹泻病毒(PEDV)并明确其致病性,本文研究应用Vero-81细胞从腹泻仔猪小肠及其内容物中分离鉴定了一株PEDV(HBMC2012株),分析了其遗传变异特征,并将该病毒分离株经口腔感染5头3 d健康初生仔猪,观察其临床表现和病理变化,检测病毒在组织中的分布,分析病毒血症和经粪便排毒的动态。结果显示,分离的PEDV HBMC2012株可以引起明显的细胞病变,与目前国内及美国流行的PEDV株同源性高,与2010年之前的国内流行PEDV株、欧洲株CV777和韩国株DR13同源性低。该病毒株可以导致仔猪出现PED典型的临床症状与病理变化,病毒主要分布于空肠后端、回肠和十二指肠黏膜上皮细胞内,病毒血症和粪便排毒至少持续14 d。该研究结果为PEDV的致病机制和弱毒疫苗研究奠定了基础。

榆耳发酵液多糖对小鼠免疫功能的影响

为了探讨榆耳发酵液多糖对小鼠免疫功能的影响,用1、5和20mg/d的发酵液多糖饲喂小鼠后,测定了脾脏指数、血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬率、T淋巴细胞转化率及CD4+/CD8+比值。结果表明,与水对照组相比,低、中、高三个剂量对脾脏指数均无影响;低剂量组可显著提高巨噬细胞吞噬率(p<0.01)和T淋巴细胞转化率(p<0.05);中、高剂量组对血清溶血素水平、巨噬细胞吞噬率、T淋巴细胞转化率及CD4+/CD8+比值等四项免疫指标有显著(p<0.05)或极显著(p<0.01)增高。说明榆耳发酵上清液多糖对小鼠具有良好的免疫增强功效。