中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1(Ers-MIH1)-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达

蜕皮抑制激素(molt-inhibitinghormone,MIH)属甲壳动物高血糖激素(crustaceanhyperglycemichormone,CHH)家族。MIH抑制Y 器官蜕皮激素的合成。以中华绒螯蟹(Eriocheirjaponicasinensis)眼柄总RNA为模板,根据中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1(Eriocheirjaponicasinensismolt inhibitinghormone 1,Ers MIH1)基因序列设计引物,用RT PCR的方法获得了Ers MIH1基因成熟肽的cDNA片段。序列分析表明,Ers MIH1基因成熟肽编码区含有228bp,编码75个氨基酸残基,与已发表的序列一致。将该cDNA片段插入到中间载体pMD18 T中,酶切后再将该片段插入到pGEX 4T 1表达载体中,构建成表达质粒pGEX 4T MIH1。在BL21细胞中经IPTG诱导表达,得到GST MIH1的融合蛋白。SDS PAGE分析表明,经0.1mmol/LIPTG诱导4h,发现大量GST MIH1融合蛋白表达,在分子量(Mr)为34kD处有1条特异的蛋白质条带。中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1融合蛋白的成功表达为进一步深入研究MIH在中华绒螯蟹蜕皮过程中的作用机制奠定了基础。

不同脱冷温度对巴氏奶保存性能的影响

[目的]探讨不同脱冷温度对巴氏奶保存性能的影响,为巴氏奶的生产经营者及消费者提供更具实际意义参考。[方法]设置25℃、30℃和35℃三个不同的脱冷温度,每隔1 h检测样品酸度、pH值、口感和组织状态,直到变质为止,作为比较评估样品保存性能的客观指标。[结果]35℃条件下存放8 h,30℃下存放10 h,25℃条件下存放22 h的巴氏奶口感及其组织状态可接受。[结论]鉴于巴氏奶的特性,综合考量建议25℃条件下贮藏也不应超过6 h,并且食用前要彻底加热。

靶向akirin2基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效率的测定

为了抑制C2C12细胞中akirin2基因的表达,试验采用siRNA表达载体法构建了靶向akirin2基因的RNA干扰(RNAi)真核表达载体。首先针对akirin2基因设计并合成了相应的干扰序列,退火后将其与RNAi表达载体psiRNA-h7SKGFPzeo进行连接,构建成干扰载体akirin2-pshRNA0、akirin2-pshRNA1。将构建好的载体通过Turbofect转染试剂转染小鼠成肌细胞C2C12,通过荧光定量PCR检测其干扰效率,经酶切和测序鉴定所构建的akirin2基因RNA干扰载体与设计序列完全相符。结果表明:重组干扰载体akirin2-pshRNA0和akirin2-pshRNA1构建成功。将重组RNAi载体转染C2C12细胞,与正常对照组相比,转染akirin2-pshRNA1组的akirin2基因mRNA相对表达量显著降低,表达量下调了60.62%(P<0.05)。说明试验构建的靶向akirin2基因的RNAi载体akirin2-pshRNA1可以有效地抑制C2C12细胞中akirin2基因的表达。

预乳化在牛乳中添加DHA的工艺研究

DHA作为多元不饱和脂肪酸系列中重要的一种,现已发现其对人类的许多疾病的治疗和预防有着重要的意义。但是由于DHA常温下易于氧化,目前在牛乳中添加DHA所采用的方法和工艺,不仅设备和原料价格昂贵,而且生产工艺要求高,给生产带来了极大的风险,同时也加大了生产成本。试验就是否可以通过预乳化这一简单的工艺将普通的DHA添加到牛乳中进行了研究。

青年教师如何上好一堂生物化学课

本文从课前准备,课堂教学和课后辅导这三方面出发,并结合多年的教学实践,探讨了青年教师和初次上课的教师如何才能上好生物化学课,希望对青年教师在授课中能有所启发和帮助。

猪akirin2基因的组织表达谱及序列分析

克隆猪的akirin2基因,并对该基因在猪的18个组织中的分布进行研究。猪akirin2基因编码区全长为612 bp(Gen Bank登录号KC140110.1),推测的氨基酸序列包含203个氨基酸,为酸性蛋白。利用BLAST工具对克隆到的猪akirin2基因序列与人、大鼠、小鼠、绵羊和牛的序列进行同源性比较。采用软件对氨基酸序列进行分析,用相关序列的比对结果进行系统进化树分析。组织分布结果显示,猪akirin2基因在脑组织中高表达,在淋巴、睾丸中表达量相对较低,在心脏、十二指肠、直肠、皮肤、胸腺中几乎检测不到该基因的表达。序列分析结果显示,猪akirin2基因与绵羊和牛的同源性最高,均为96%,与人、小鼠、大鼠的同源性分别为95%、91%、89%。氨基酸序列分析发现,存在1个10个肽的核定位信号序列19-PASPKRRRCA-28,推测的氨基酸序列的二级结构中含有2个a-螺旋。在重建的系统进化树上,几个不同物种的akirin2蛋白分成3支,结果表明猪akirin2与人、牛和羊的亲缘关系比其与小鼠和大鼠的近,与鸡的亲缘关系最远。

现代教育技术在动物生物化学实验教学中的应用

为充分发挥现代教育技术对动物生物化学实验教学的作用,本文以《现代教育技术在动物生物化学实验教学中的应用》为课题,从动物生物化学实验教学中存在的主要问题入手,对其进行了全方位、深层次地剖析,并在此基础上探析了现代教育技术-多媒体技术在动物生物化学实验教学中的作用,最后探讨了现代教育技术-虚拟仿真实验在动物生物化学实验教学中的应用。

普通高等农林院校生物化学学习兴趣培养的实践与探索

生物化学是农林院校畜牧兽医等专业的主要基础课。从任课教师课前准备、课堂上及课外三个环节入手,探讨如何激发和培养学生学习生物化学的兴趣,以及如何进一步调动学生的内在能动性,提高和保持学生的学习兴趣,对如何克服学生学习生物化学课程的畏难心理提出了建议。

DHA在调配型酸性乳饮料中添加工艺的研究

DHA作为多不饱和脂肪酸系列中重要的一种,现已发现其对人类的许多疾病的治疗和预防有着重要的意义。但是由于DHA常温下易于氧化,在牛乳中添加DHA一直是一个难题。为了达到在调配型酸性乳饮料中强化DHA的目的,本文对其添加工艺进行了初步的研究。

重叠延伸拼接法从基因组DNA中获得Ers-MIH1基因的编码区

蜕皮抑制激素(molt-inhibiting hormone,MIH)产生于端髓X-器官(MTXO),储存在甲壳动物眼柄的窦腺中,抑制Y-器官蜕皮素的分泌,参与调控甲壳动物的生长和发育等重要的生理活动。提取中华绒螯蟹肌肉组织中的基因组DNA,以此为模板,采用重叠延伸拼接法(gene splicing by overlap extension,SOE)将中华绒螯蟹蜕皮抑制激素1Eriocheir sinensismolt-inhibiting hormone-1(Ers-MIH1)成熟肽基因的编码区连接起来,克隆到pMD18-T载体中,随机挑取3个阳性克隆测序,测序结果与已知的Ers-MIH1基因编码区的序列相一致。从基因组DNA中克隆该基因的方法有效地解决了取材不便给研究中华绒螯蟹蜕皮抑制激素基因所带来的限制等问题。

仔猪多胺代谢相关基因的克隆及断奶对其mRNA表达的影响

多胺是一类广泛分布于组织细胞内的天然低分子多价生物活性物质，在动物的消化、营养代谢以及正常生长中发挥重要作用。本实验克隆了猪（Susscrofa）的7个与多胺代谢相关的基因，分别是精氨酸脱羧酶（ADC）、鸟氨酸脱羧酶（ODC）、鸟氨酸转氨酶（OAT）、

中华绒螯蟹卵巢差减cDNA文库的构建

应用抑制性差减杂交技术构建中华绒螯蟹卵巢两个发育时期的差减cDNA文库。正向差减杂交以Ⅲ期卵巢为试验方、Ⅱ期卵巢为驱动方 ,反向差减杂交以Ⅱ期卵巢为试验方、Ⅲ期卵巢为驱动方 ;将所获差减cDNA片段克隆入质粒表达载体 ,转化大肠杆菌JM 10 9。最后获得的正、反向差减文库分别含 86 3、 36 0个重组子。PCR扩增鉴定正、反向差减cDNA文库的插入片段平均大小分别为 36 0和 16 0bp 。

中华绒螯蟹卵巢RACE cDNA文库的构建

应用抑制性差减杂交技术 ,已经获得了中华绒螯蟹卵巢发育过程中差异表达基因的部分cDNA序列。为了进一步获得基因的全长cDNA序列 ,运用SMART技术 ,成功构建了中华绒螯蟹卵巢 (Ⅲ期 )RACEcDNA文库。琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,文库所含全长cDNA的长度主要集中在 5 0 0～ 2 0 0 0bp之间 ,RACEPCR结果表明 ,所用基因特异性引物与接头引物皆能扩增出产物 ,说明所构文库的质量较好 ,适于用RACE方法从中分离中华绒螯蟹卵巢发育相关基因的全长cDNA。

荷斯坦奶牛牛乳中营养成分的相关及回归分析

采集河南省郑州市3个牛场荷斯坦奶牛的生鲜牛乳,检测了多项成分的含量,分析了各成分之间的相关性,并对全脂乳固体和乳脂之间及脱脂乳固体与密度之间进行了回归分析。结果表明:全脂乳固体与乳脂含量呈极显著的正相关;脱脂乳固体含量与密度呈极显著的正相关;密度则主要与蛋白、乳糖的含量相关而与乳脂含量无相关性,回归方程分别为:y(全脂乳固体含量)=8.006+1.107(x脂肪含量),y(脱脂乳固体含量)=-195.638+197.792(x密度)。

石参中黄酮类化合物含量的测定及抗氧化活性的研究

[目的]测定石参中总黄酮含量并对其抗氧化性进行研究。[方法]采用超声波提取技术用体积分数为80%的乙醇提取石参中的总黄酮,分光光度法测定石参中的总黄酮类含量,研究石参中黄酮类化合物对超氧自由基、羟基自由基的清除作用。[结果]石参中总黄酮含量为0.742 5%,石参中黄酮类化合物对自由基清除作用随着黄酮浓度的增大而表现出明显的量效关系。总黄酮浓度为9.791×10-4mg/ml时对超氧自由基的清除率最高,为48.91%;浓度为0.009 9 mg/ml时对羟基自由基的清除率最高,达到83.76%。[结论]石参总黄酮对超氧自由基、羟基自由基均具有一定的清除作用。

基于移动互联网的高校思想政治教育路径探究

为充分发挥移动互联网在高校思想政治教育工作中的价值作用,从而促进高校思想政治教育的实效性,笔者从移动互联网与思想政治教育相关概念阐述入手,对高校思想政治教育现状进行了全方位、深层次地剖析,并在此基础上全面而深入地探究了基于移动互联网的高校思想政治教育路径,给出了笔者具有建设性的个人建议.

猪甲状腺激素应答spot14基因的克隆及组织表达研究

基于电子延伸序列,设计1对克隆引物,成功克隆了猪甲状腺激素应答spot14(thyroid hormone responsive spot14,THRSP)基因(GenBank登录号:JF_951726),并进行了序列分析,同时利用RT-PCR方法分析了THRSP基因的组织分布规律。结果发现,克隆的猪THRSP基因长为621bp,包括一个完整的开放阅读框架453bp,编码150个氨基酸。克隆的猪THRSP基因与人、牛、小鼠、褐鼠、欧洲兔、鸡的核苷酸序列同源性分别为83.8%、88.5%、80.9%、80.7%、85.1%、47.1%;推导的cDNA编码区(CDs)的氨基酸序列与人、牛、小鼠、褐鼠、欧洲兔、鸡的同源性分别为76.9%、80.8%、76.2%、76.2%、82.1%、32.0%,构建的系统发育树显示猪与牛的亲缘关系最近。组织表达分析结果表明,THRSP基因在肝脏和脂肪组织中高表达,在脑、脾脏、胃、皮肤、盲肠、直肠中表达量相对较低,在肺脏、十二指肠、空肠、回肠中微量表达,在肾脏、肌肉中无表达。THRSP基因在肝脏、脂肪等脂肪生成组织的高表达暗示了其可能作为调节脂肪合成代谢的调控因子参与脂肪合成,但其调控机理有待进一步研究。

牛乳腺脂肪合成关键酶基因在乳汁体细胞中的表达研究

为了阐明乳脂合成的影响因素及其内在分子机理,为反刍动物原料乳的优化,特别是为乳脂肪的营养调控和遗传改良提供理论依据。本试验以奶牛初乳、常乳和末乳中的乳汁体细胞为研究对象,以看家基因GAPDH为内参,对初乳、常乳和末乳中LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、ACC、FASN、SCD、ADFP、XDH和BTN1A1 mRNA进行半定量RT-PCR分析。结果发现,LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、SCD、AD-FP、XDH和BTN1A1 mRNA在初乳、常乳和末乳中均有表达,而ACC和FASNmRNA只在初乳中表达,常乳和末乳中均不表达;半定量结果表明,与初乳相比,常乳和末乳中LPL、CD36、VLDLR、ACSS2、ACSL1、FABP3、SCD、ADFP、XDH和BTN1A1 mRNA转录水平显著降低(P<0.05),且常乳与末乳间差异不显著(P>0.05)。研究结果提示初乳期乳腺脂肪合成能力明显高于常乳和末乳期乳腺,且脂肪合成关键酶基因的表达与细胞内脂转运和代谢的生理变化有关。

肌肽对猪肉匀浆的氧化抑制作用研究

利用.OH和金属离子促进猪肉匀浆液的脂质过氧化,检测不同浓度的肌肽对其过氧化的抑制作用.结果表明,在.OH促进的脂质过氧化体系中,1 mmol/L肌肽显著抑制了猪肉匀浆中TBARS的形成量(P<0.05),氧化抑制率为13.47%,20 mmol/L时肌肽的作用效果极显著(P<0.01),氧化抑制率为47.90%.在Fe2+、Fe3+、Cu2+促进的脂质过氧化体系中,不同浓度的肌肽均显示出抗氧化效果,且随着肌肽浓度的增加而增强,其中肌肽在Cu2+体系中的抗氧化效果最明显,1 mmol/L时抑制率为41.36%.

CD147基因在家兔肠道的克隆与结构预测

基于电子延伸序列，克隆并分析兔CD147基因。采用兔十二指肠黏膜组织提取总RNA，进行RT-PCR反应，测序并进行结构预测。克隆的兔CD147基因包含一个完整的开放阅读框架，全长为810bp，编码由270个氨基酸残基组成的CD147前体蛋白，推导的氨基酸序列信号肽为1～16个氨基酸。氨基酸序列与牛、人、褐鼠、野猪的同源性分别为62．5％，65．9％，59．5％和66．3％，三级结构预测表明CD147具有2个免疫球蛋白类似区。试验成功克隆了兔CD147基因，注册到GenBank（Accession．EU650668），并预测其三级结构，为进一步研究其生物学功能奠定基础。