基于NFAT5介导的EMT研究益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制

目的探讨活化T细胞核因子5(nuclear factor of activated T cells 5,NFAT5)对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响以及益糖康改善高血糖对肾脏早期损伤的作用机制。方法SD雄性大鼠20只,随机分成生理盐水组和益糖康组,每组10只。生理盐水组给予1 mL/100 g生理盐水灌胃,益糖康组给予2.10 g/100 g益糖康煎剂灌胃,连续5 d,腹主动脉取血,离心分离上清。通过高糖诱导HK-2细胞构建早期糖尿病肾病体外模型,并加入相应的药物进行干预。分别采用qRT-PCR和Western blot实验检测转染NC-siRNA(NC-siRNA组)/NFAT5-siRNA(NFAT5-siRNA组)或生理盐水含药血清处理(NS组)/益糖康含药血清处理(YTK组)以及益糖康含药血清处理同时转染GV492-Empty(YTK+GV492-Empty组)/GV492-NFAT5(YTK+GV492-NFAT5组)细胞中NFAT5、E-cadherin以及Vimentin mRNA和蛋白表达水平的改变。再分别采用划痕和Transwell实验检测各组细胞迁移力和侵袭力的改变。结果转染NFAT5-siRNA能够明显抑制NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达;与NC-siRNA组相比较,NFAT5-siRNA组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.01)均明显减弱。与NS组相比较,YTK组细胞中NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.05)的表达水平明显降低。转染GV492-NFAT5能够明显促进NFAT5 mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达;与YTK+GV492-Empty组相比较,YTK+GV492-NFAT5组细胞中E-cadherin mRNA(P<0.01)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著降低,Vimentin mRNA(P<0.05)和蛋白(P<0.01)的表达水平显著升高,细胞的迁移力(P<0.05)和侵袭力(P<0.05)均明显增强。结论在高糖环境下,NFAT5会促进人肾小管上皮细胞发生EMT;益糖康能够通过下调NFAT5表达抑制肾小管上皮细胞发生EMT从而改善高血糖对肾脏的早期损伤。

沉默Toll样受体4表达对肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的探讨Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)对肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响。方法体外化学合成针对TLR4的小干扰RNA(TLR4-si RNA),通过脂质体介导转染人肺腺癌A549细胞。采用Real-time PCR和流式细胞仪检测分析干扰后A549细胞中TLR4 m RNA及蛋白的表达情况。另外,采用流式细胞仪检测分析干扰72 h后细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果与对照组比较,转染TLR4-si RNA后,A549细胞中TLR4 m RNA及蛋白的表达显著下降(P<0.05),细胞的凋亡率明显增加[(1.73±0.32)%vs.(7.40±0.75)%(P<0.01)],细胞周期出现G0/G1期停滞[(48.21±1.15)%vs.(66.26±2.45)%(P<0.05)],同时S期细胞比例明显减少[(34.25±1.46)%vs.(22.63±3.39)%(P<0.05)]。结论 TLR4-si RNA能有效沉默A549细胞中TLR4的表达,在促进细胞凋亡的同时能够影响细胞周期分布从而抑制肿瘤细胞的生长,特异性干预TLR4基因的表达有望成为治疗肺癌的一种新手段。

小干扰RNA沉默TLR4表达对脂多糖促进人肺癌SPCA1细胞增殖的影响

目的:探讨Toll样受体4(TLR4)对脂多糖(LPS)促进人肺癌SPCA1细胞增殖的影响。方法:采用LPS(10μg/ml)刺激细胞,模拟慢性炎症的细胞微环境。将靶向TLR4基因的小干扰RNA(TLR4-siRNA)或阴性对照(NC-siRNA)通过脂质体介导转染人肺癌SPCA1细胞,24 h后加入10μg/ml LPS。按转染siRNA和加入LPS情况,实验分为不做任何处理的Control组、NC+10LPS组以及TLR4-siRNA+10LPS组。采用Real-time PCR和流式细胞术检测SPCA1细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达情况;采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测分析细胞周期分布情况。结果:与NC+10LPS组相比较,TLR4-siRNA+10LPS组细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达水平显著下降(P<0.01);与Control组和NC+10LPS组相比较,TLR4-siRNA+10LPS组SPCA1细胞的增殖明显减缓(P<0.01),TLR4-siRNA+10LPS组细胞克隆形成能力明显降低[(4.50±1.89)vs(13.33±1.81)、(15.75±1.25)个,P<0.01];TLR4-siRNA+10LPS组细胞周期阻滞于G0/G1期[(61.55±0.55)%vs(53.59±1.59)%、(51.72±0.77)%,P<0.01]。结论:TLR4-siRNA能有效沉默SPCA1细胞中TLR4的表达,能够阻滞细胞的生长,抑制细胞的增殖。

益糖康对高糖诱导人肾小管上皮HK-2细胞增殖、凋亡的影响及其机制研究

目的探讨中药复方"益糖康"对高糖状态下人肾小管上皮HK-2细胞增殖和凋亡的影响,并探讨了其潜在的作用机制。方法体外培养人肾小管上皮HK-2细胞,分为正常对照组(NG组,葡萄糖含量5.6 mmol/L)、高糖组(HG组,葡萄糖含量30 mmol/L)、高糖+生理盐水组(HG+NS组,葡萄糖含量30 mmol/L,生理盐水含药血清干预)以及高糖+"益糖康"组(HG+YTK组,葡萄糖含量30 mmol/L,"益糖康"含药血清干预)。高糖预处理24 h后,加入"益糖康"含药血清进行干预,再分别采用CCK-8法、流式细胞术及Real-time RT PCR法检测各组细胞的增殖力、凋亡率以及Caspase-3和Caspase-7 mRNA表达水平的改变。结果与NG组相比,HG组细胞的增殖力在24 h和48 h均明显降低;高糖处理48 h后,细胞的凋亡率显著上升[(4.77±3.29)%vs(51.53±3.56)%(P<0.01)];细胞中Caspase-3(P<0.05)和Caspase-7(P<0.01)mRNA的表达水平显著上调。相比较于HG+NS组,HG+YTK组细胞的增殖力在24 h和48 h均明显升高;细胞的凋亡率显著降低[(44.07±1.45)%vs(26.97±7.90)%(P<0.01)];细胞中Caspase-3和Caspase-7 mRNA的表达水平显著下调(P<0.05)。结论 "益糖康"干预能够有效逆转高糖刺激对人肾小管上皮HK-2细胞增殖力、凋亡率以及凋亡特征基因表达的影响。

活化T细胞核因子5对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡能力的影响

目的:探讨活化T细胞核因子5(nuclear factor 5 of activated T cells, NFAT5)对人胃癌MGC803细胞增殖及凋亡能力的影响及其可能的机制。方法:设计并合成3条靶向NFAT5基因的siRNA(siRNA2567、siRNA2714和siRNA4562)及1条与NFAT5基因无同源性的阴性对照siRNA(NC-siRNA),脂质体介导转染人胃癌MGC803细胞后,采用Real-time PCR检测分析细胞中NFAT5 mRNA表达水平的变化,进而筛选出有效抑制NFAT5基因表达的siRNA(NFAT5-siRNA)。NFAT5-siRNA转染MGC803细胞48 h后,进一步采用Real-time PCR和Western blotting验证并检测细胞中NFAT5和S100A4 mRNA及蛋白表达水平的变化,流式细胞术和CCK-8法分析抑制NFAT5表达对细胞增殖及凋亡的影响。结果:转染siRNA2567对NFAT5 mRNA的表达抑制最为明显(P<0.01),siRNA2567被验证为NFAT5-siRNA。转染NFAT5-siRNA 48 h后,NFAT5和S100A4 m RNA及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05);与NC-siRNA组相比较,NFAT5-siRNA组MGC803细胞的增殖率在72 h和96 h均显著降低(P<0.01);NFAT5基因沉默48 h后,MGC803细胞的凋亡率由(2.7±0.2)%上升至(7.9±0.2)%(P<0.01)。结论:NFAT5-siRNA能有效沉默人胃癌MGC803细胞中NFAT5基因表达,在抑制细胞增殖率的同时能够有效促进细胞凋亡,该作用可能通过调控S100A4表达实现。

miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响

背景:miR-7在胃癌等多种肿瘤组织中表达下调,主要发挥抑癌作用。现已证实,miR-7能够影响胃癌细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭等多种细胞生物学功能。然而,目前有关miR-7与胃癌细胞干样特性关系的研究较少,机制尚不明确。目的:探讨miR-7-5p对人胃癌SGC-7901细胞干样特性的影响。方法:以胃癌细胞株SGC-7901为模型,用NC、miR-7-5p mimics、inhibitor NC及miR-7-5p inhibitor转染细胞,转染48 h后采用倒置荧光显微镜观察转染效率,RT-qPCR方法检测miR-7-5p、Nanog和Sox2 mRNA表达水平,采用成球实验和软琼脂集落实验检测细胞成球能力和软琼脂集落形成能力,流式细胞术检测CD24^(+)CD44^(+)细胞亚群比例。结果与结论:(1)与inhibitor NC或NC组比较,转染miR-7-5p inhibitor或mimics后,胃癌SGC7901细胞中miR-7-5p的表达量显著降低或升高(P<0.01);(2)与NC组比较,miR-7-5p mimics组成球数量和软琼脂集落形成数量明显减少(P<0.05,P<0.01),而miR-7-5p inhibitor组成球数量和集落形成数量则明显高于miR-7-5p inhibitor NC组(P<0.05,P<0.01);(3)miR-7-5p mimics组CD24^(+)CD44^(+)细胞比例明显低于NC组(P<0.01),而miR-7-5p inhibitor组CD24^(+)CD44^(+)细胞的比例显著高于inhibitor NC组(P<0.01);(4)miR-7-5p mimics组Nanog和Sox2 mRNA表达明显低于NC组,miR-7-5p inhibitor组Nanog和Sox2 mRNA表达显著高于inhibitor NC组(P<0.05,P<0.01);(5)结果表明,miR-7-5p可以通过减弱胃癌细胞的成球能力、软琼脂集落形成能力以及降低胃癌细胞中CD24^(+)CD44^(+)细胞亚群比例等方式抑制胃癌细胞的干样特性,其机制可能与调控干性相关基因Nanog和Sox2的表达有关。

siRNA沉默TLR4表达对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨靶向TLR4基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭的影响。方法:设计并合成针对TLR4基因的3条siRNA(siRNA722、siRNA1673和siRNA2560)及1条与TLR4基因无同源性的阴性对照siRNA,采用Real-time PCR和Western blotting方法测定干扰后A549细胞中TLR4 mRNA及蛋白的表达水平,筛选出有效抑制靶基因表达的siRNA并确定最佳转染条件。TLR4特异性siRNA(TLR4-siRNA)转染A549细胞后,采用CCK-8法和Transwell小室法分别检测沉默TLR4对A549细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:与阴性对照相比,siRNA1673在转染48 h后对TLR4 mRNA和蛋白表达的抑制最为明显[(0.45±0.03)vs(0.83±0.02),(0.23±0.06)vs(0.98±0.09);均P<0.01]。TLR4-siRNA转染72 h后A549细胞增殖活性显著下降[(0.77±0.01)vs(0.98±0.11)、(0.93±0.04),P<0.01];转染48 h后,TLR4-siRNA组A549细胞的侵袭细胞数明显少于阴性对照组[(23.60±2.88)vs(59.80±5.54)个,P<0.01]。结论:TLR4-siRNA能够沉默A549细胞中TLR4基因表达,抑制A549细胞的增殖和侵袭能力,TLR4可能成为肺癌基因治疗的候选靶点。

活化T细胞核因子5对人胃癌MGC803细胞迁移、侵袭及细胞周期的影响

背景:近年研究发现,活化T细胞核因子5(nuclear factor 5 of activated T cells,NFAT5)高表达与多种肿瘤的发生进展关系密切。前期研究发现,NFAT5能够促进人胃癌MGC803细胞增殖并抑制其凋亡。目的:探讨NFAT5对人胃癌MGC803细胞迁移力、侵袭力及细胞周期的影响。方法:实验分为siRNA阴性对照组与NFAT5-siRNA组。有效转染人胃癌MGC803细胞沉默NFAT5基因表达后,采用划痕实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测各组细胞迁移力、侵袭力及细胞周期分布的改变。结果与结论:(1)siRNA阴性对照组划痕的愈合能力明显高于NFAT5-siRNA组;(2)NFAT5-siRNA组穿过小室的细胞数目明显少于siRNA阴性对照组[(134.63±25.62)个vs.(195.00±60.41)个,P<0.05];(3)与siRNA阴性对照组相比,NFAT5-siRNA组细胞中G;期细胞比例显著升高[(60.03±0.55)%vs.(62.46±0.73)%,P<0.05],而S期细胞比例显著降低[(28.24±1.16)%vs.(25.44±1.15)%,P<0.05];(4)提示沉默人胃癌MGC803细胞中NFAT5基因表达能够有效减弱细胞的迁移力和侵袭力,改变细胞周期分布,进而减少细胞增殖,NFAT5有望成为胃癌诊治的新靶点。

生物化学实验教学中如何提高学生的综合素质

生物化学作为一门实验性基础医学学科，对医学的发展起着重要的作用。实验过程中教师有意识地培养学生良好的实验习惯和科研基本能力、扩展学生的知识面能够有效提高学生的综合素质，为医疗事业培养出优秀的人才。

浅谈指导大学生创新创业计划项目的几点体会——以辽宁中医药大学医学检验专业为例

该文通过总结辽宁中医药大学医学检验学院三项大学生创新创业计划项目,从注重人员构成的设置和选题方向的合理性、注重对学生文献检索能力和创新能力的培养以及注重对学生严谨科学作风的培养等几个方面,阐述作者在指导“大创”项目时的心得体会,以期为高校培养适应新形势的创新人才提供借鉴。

PBL教学法在临床生物化学检验实验教学中的应用探析

文章以医学检验专业四年制93名学生为研究对象,融合PBL教学法于临床生物化学检验实验课教学过程中,在课程结束后,以发放调查问卷的形式对教学效果进行评价,探讨了PBL教学法在临床生物化学检验实验教学中的作用与意义。

《临床生物化学检验》绪论教学改革研究

《临床生物化学检验》是该校医学检验专业的一门重要主干课,也是由多种学科和多种技术融合而成的一门应用型学科。不断涌现的检验医学新技术对大专院校培养医学检验专业学生提出了新的要求,更对传统《临床生物化学检验》的教学内容和教学形式提出了严峻的挑战。为提高课程的学习效果,作者尝试在绪论教学阶段进行了改革,以期为培养能够适应新形势的检验人才提供参考。

基础医学实验仪器课程改革初探

目的探索《基础医学实验仪器使用基本操作方法》课程教学方法,以提高教学质量。方法尝试编写有预设问题的实验报告册、安排学生进行现场预习以及制作仪器操作演示视频等改革措施。结果降低了实验预习中的盲目性,加深了学生对学习内容的理解和记忆,增强了学生分析问题和解决问题的能力。

深化医学仪器实验教学改革,全面提高学生综合素质

基础医学实验仪器基本操作方法是一门实用性很强的基础医学实验课程。结合仪器课程近几年来的教学实践,尝试优化教学内容、改革教学方式、建立科学的考核体系并且努力提高教师自身素质,不仅有效地提升了教学质量,同时也有利于训练学生的科研基本能力并且能够扩展学生的知识面,对培养学生的综合素质有积极的推动作用。

培土生金法对脾虚哮喘大鼠模型水通道蛋白5表达的影响

目的观察培土生金法对脾虚哮喘大鼠模型肺组织水通道蛋白5(AQP5)表达的影响,探讨脾虚对哮喘气道黏液高分泌形成的影响及培土生金法对其的调控作用。方法 50只健康雄性Wistar大鼠,随机分为5组:对照组、脾虚哮喘组、哮喘组、脾虚哮喘治疗组、哮喘治疗组,每组10只。采用RT-PCR测定大鼠肺组织AQP5 mRNA表达水平,采用免疫组化测定肺组织AQP5蛋白表达水平。结果脾虚哮喘组、哮喘组与对照组比较,脾虚哮喘组与哮喘组比较,大鼠肺组织AQP5 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.01)。脾虚哮喘治疗组与脾虚哮喘组比较,哮喘治疗组与哮喘组比较,肺组织AQP5 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01)。结论培土生金法能够升高脾虚哮喘和哮喘时肺组织AQP5 mRNA和蛋白表达水平。

补脾益气方对脾虚哮喘大鼠肺组织黏蛋白5AC表达的影响

目的观察补脾益气方治疗前、后的脾虚哮喘大鼠黏蛋白(mucin,MUC)5AC表达的变化,旨在探讨补脾益气方对脾虚哮喘气道黏液高分泌的影响。方法 50只W istar雄性大鼠,按照随机数字法分为5组:对照组、脾虚哮喘组、哮喘组、脾虚哮喘治疗组和哮喘治疗组,每组10只。采用ELISA测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中MUC5AC含量,采用RT-PCR测定肺组织MUC5AC的mRNA表达水平。结果脾虚哮喘组和哮喘组大鼠BALF中MUC5AC含量和肺组织MUC5AC表达均显著升高,和对照组比较差异显著(P<0.01)。并且和哮喘组相比较,脾虚哮喘组BALF中MUC5AC含量和肺组织MUC5AC表达显著升高(P<0.01)。和脾虚哮喘组比较,脾虚哮喘治疗组BALF中MUC5AC含量和肺组织MUC5AC表达显著降低(P<0.01),和哮喘组比较,哮喘治疗组BALF中MUC5AC含量显著降低(P<0.01)。结论脾虚哮喘大鼠肺组织MUC5AC表达进一步升高,BALF中的MUC5AC含量进一步增加,补脾益气方能够使其不同程度逆转。

培土生金法对脾虚哮喘模型大鼠NF-κB表达的影响

目的观察培土生金法对脾虚哮喘模型大鼠TNF-α/NF-κB信号通路变化的影响,探讨培土生金法干预哮喘气道炎症和黏液高分泌的信号转导机制。方法健康雄性Wistar大鼠50只,随机分成5组:对照组、脾虚哮喘组、哮喘组、脾虚哮喘治疗组和哮喘治疗组,每组10只。采用ELISA试剂盒法测定血清和BALF中TNF-α的含量,采用免疫组化测定大鼠肺组织NF-κBp65的表达和入核率。结果脾虚哮喘组和哮喘组血清和BALF中TNF-α含量及大鼠支气管上皮细胞中NF-κBp65阳性表达均显著升高,和对照组比较差异显著(P<0.01);但是脾虚哮喘组和哮喘组比较,血清和BALF中TNF-α含量无显著性差异。与哮喘组比较,脾虚哮喘组大鼠支气管上皮细胞中NF-κBp65入核率显著增加(P<0.01)。和脾虚哮喘组比较,脾虚哮喘治疗组血清和BALF中TNF-α含量及肺组织NF-κBp65入核率显著降低(P<0.01);和哮喘组比较,哮喘治疗组血清和BALF中TNF-α含量及肺组织NF-κBp65入核率显著降低(P<0.01)。结论培土生金法能够降低脾虚哮喘和哮喘大鼠血清和BALF中TNF-α的含量和肺组织NF-κBp65入核率。

四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织Bax和Bcl2表达的影响

本实验通过观察四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织生长抑制作用及凋亡相关蛋白Bax和Bcl2表达的影响,探讨培土生金法中药复方干预肺癌的作用机制。首先在小鼠右侧腋窝皮下,接种浓度为1×107个/m L的小鼠肺癌Lewis细胞悬液0.1 m L,建立肺癌小鼠模型,成瘤后,将小鼠分为3组:Lewis肺癌组、中药治疗组、顺铂组。中药治疗组每天采用四君子丸0.0936 g/10 g,灌胃一次,连续14 d;顺铂组每周一次腹腔注射顺铂0.05mg/10 g,持续2次。然后取材,采用TUNEL荧光染色法观察各组肿瘤组织细胞凋亡的变化,采用免疫组化和免疫印迹测定肿瘤组织Bax和Bcl2蛋白表达的变化。TUNEL法荧光染色显示:和Lewis肺癌组比较,中药治疗组、顺铂组细胞凋亡指数显著增加(P<0.01);免疫组化和免疫印迹结果显示:和Lewis肺癌组比较,中药治疗组和顺铂组Bax的蛋白表达水平显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。实验表明四君子丸能够干预Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织中Bax和Bcl2的表达,从而促进肿瘤细胞凋亡。

痰湿型多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞AMPK/UCP2途径与线粒体功能变化的研究

目的观察痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)(AMPK/UCP2)途径与线粒体功能的变化,探讨“痰湿不孕”的机制。方法选取动情周期规律SD大鼠22只。运用高脂+来曲唑灌胃法复制痰湿型PCOS大鼠,随机分为对照组和模型组,造模成功后,取卵巢组织提取原代颗粒细胞,比色法检测三磷酸腺苷(ATP)含量;化学发光法检测活性氧(ROS)水平;Western blot法检测AMPKα、p-AMPKα及UCP2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠颗粒细胞线粒体数量减少,出现肿胀,嵴断裂及空泡化改变;ATP降低、ROS增高(P<0.01);p-AMPKα/AMPKα比值降低(P<0.05);UCP2蛋白表达升高(P>0.05)。结论“痰湿不孕”可能与AMPK/UCP2途径所致的线粒体受损相关。

四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞caspase-3表达的影响

目的探讨四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。方法在小鼠右侧腋窝皮下,接种浓度为1×10~7个/ml的小鼠肺癌Lewis细胞悬液0.1 ml,模型建立成功后将小鼠分为Lewis肺癌组、中药治疗组(成瘤后灌胃四君子丸0.093 6 g/10 g,1次/d,连续14 d)、顺铂组(腹腔注射0.05 mg/10 g,1次/w,持续2次)。采用透射电镜观察各组肿瘤组织细胞形态学变化,采用Real-time PCR和免疫组化测定肿瘤组织caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果透射电镜结果显示:Lewis肺癌组细胞镜下呈现出明显恶性肿瘤细胞特征;中药治疗组镜下可见肿瘤细胞以凋亡变化为主,大量凋亡细胞、凋亡小体及坏死细胞;顺铂组镜下可见坏死细胞和典型凋亡细胞及凋亡小体。Real-time PCR及免疫组化结果共同显示:和Lewis肺癌组比较,中药治疗组和顺铂组caspase-3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论四君子丸能够显著提高Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织中caspase-3的表达,从而促进肿瘤细胞凋亡。