2型猪链球菌天津分离株的鉴定及其遗传特征分析

为了解天津市某猪场引起育肥猪神经症状的病原及其特性和遗传特征,本研究采集8份患病猪脑组织样品经细菌分离、形态学观察、gdh基因和cps2J基因的PCR扩增及序列分析,确定8份样品中的分离株均为同一2型猪链球菌(SS2),命名为TJS75。测定其生长曲线、并按照文献方法进行溶血性试验、黏附/侵入试验和对小鼠的致病性试验,分析该SS2分离株特性。结果显示,TJS75菌株经TSB培养6 h~15 h可达对数生长期,对绵羊血红细胞(RBC)具有崩解效果,可黏附并侵入PK-15细胞(黏附率和侵袭率分别为5.16%和7.90%),且感染TJS75株的BALB/c小鼠出现不同程度的行动迟缓、呼吸急促、精神萎靡和神经症状等,经测定其LD50为2.15×107cfu/mL。进一步采用高通量测序,并预测其毒力基因,分析该菌株的遗传特征,结果显示,TJS75菌株基因组全长2368195 bp,GC含量40.88%,含有2299个编码基因,其中有1822、1830和1077个基因分别注释于GO、COG和KEGG数据库,携带的16S r RNA基因序列与国内分离的SS强毒株98HAH33和05ZYH33的亲缘性较近,毒力基因的预测结果显示该菌株携带499种毒力相关基因(编码173种毒力相关因子),依据功能分类,这些毒力基因参与SS2的黏附和侵袭、溶血、促进铁转运、自溶酶的合成、降解胶原酶、唾液酸的合成等。本研究首次分离到携带MRP毒力因子的ST25型SS2,为深入开展SS2 TJS75株的致病机制研究提供了科学依据。

Ⅰ群4型禽腺病毒Y17215-1株体外增殖规律及免疫原性研究

为探讨禽腺病毒4型分离株Y17215-1的体外增殖特性和免疫原性,本研究以LMH细胞为模型,摸索Y17215-1株最佳接种剂量和收获时间;通过活毒滴鼻接种和灭活疫苗肌肉注射的方式免疫SPF鸡,测定其免疫原性。结果显示:Y17215-1株0.1 MOI接种LMH细胞,培养48~72 h病毒滴度达到峰值108.625 TCID_(50)/mL。该病毒经肌肉注射对42日龄SPF鸡具有较强致病性,LD_(50)为103.000 TCID_(50)/0.2 mL。以10^(7.676) TCID_(50)的Y17215-1株滴鼻免疫21日龄SPF鸡,免疫后7 d 100%试验鸡产生中和抗体,14 d达到高峰。以Y17215-1株制备灭活疫苗肌肉注射免疫21日龄SPF鸡(10^(7.676) TCID_(50)/羽),免疫后7 d 70%试验鸡产生中和抗体,21 d达到高峰。在免疫后21 d用1000LD_(50)的Y17215-1株进行攻毒,活毒和灭活疫苗的保护率均为100%。以上结果表明:Y17215-1株具有很好的体外增殖特性和免疫原性,可以作为候选疫苗毒株。

京津冀地区猪繁殖与呼吸综合征流行特点及防控建议

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine respiratory and reproductive syndrome,PRRS)俗称“猪蓝耳病”,临床以母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪群呼吸道症状为主要特征。该病1987年在美国东南部首次报道,之后迅速扩散至美国主要养猪地区和加拿大。1990年和1991年该病相继在欧洲和亚洲暴发和流行。

PEDV、TGEV与PDCoV S蛋白表位基因三联疫苗的构建及其鉴定

[目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T细胞表位进行预测分析,构建新的表位肽段,命名为PPT,通过ExPASy、VaxiJen、TMHMM、SOPMA、SOLpro和AlphaFlod2等在线软件对PPT进行生物信息学分析,并利用C-IMMSIM在线软件对其免疫反应进行模拟。通过T2A将PPT与PEDV的COE序列、TGEV的SAD序列及PDCoV的CTD序列连接并构建至真核表达载体pEGFP-N1,经PCR和双酶切鉴定正确后,将获得的重组质粒转染HEK293A细胞,经DAPI染色、CCK8、RT-PCR及Western blotting试验验证重组质粒在体外表达情况。[结果]构建的表位蛋白PPT由17条表位肽段组成,经生物信息学软件分析,该蛋白为非跨膜蛋白,结构稳定,具有抗原性和可溶性,亲水性高,无过敏性。C-IMMSIM结果显示,PPT能引起机体树突状细胞(DC)增加,B、T细胞免疫反应,刺激免疫球蛋白IgG、IgM和细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平升高。重组质粒经PCR和双酶切鉴定结果显示,分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp出现特异性目的条带,与预期相符;重组质粒转染HEK293A细胞后,可见绿色荧光;RT-PCR扩增分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp处获得与目的基因大小相符的条带;CCK-8检测结果表明,重组质粒对细胞均无明显毒性作用;Western blotting检测结果显示,分别在31.7、16.1、37.9和27.5 ku处出现与目的蛋白分子质量大小一致的条带,重组质粒成功在HEK293A细胞中表达。[结论]本研究基于计算机软件分析设计的PPT表位蛋白成功构建三联疫苗,且在体外表达,为评价PEDV-TGEV-PDCoV三联表位疫苗的免疫效果提供依据。

猪伪狂犬病疫苗研究概况

猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)引起的一种猪的急性传染病,疫苗免疫是有效预防该病的主要措施。2011年以来由于PRV变异毒株的出现,原有商品化疫苗对PRV变异毒株的免疫保护效果下降,致使PR在我国再度流行,研发可有效预防PRV变异毒株的猪伪狂犬病疫苗成为新的研究热点。论文从PRV疫苗的种类分析比较不同时期、不同方法构建的PRV疫苗优缺点,并阐述不同种类的PRV疫苗的特性及免疫保护效果等研究现状,以期为相关领域研究人员提供参考。

浅析初中语文文本解读的有效策略研究

文章围绕初中语文文本解读的有效策略展开探讨,旨在提升学生对文本的理解深度和广度。文本解读不仅是语文教学的核心环节,也是学生语言能力和思维能力培养的重要途径。通过探讨多维度解读、独立思考、合作学习和多媒体辅助等策略,文章提出如何通过创新教学方法,帮助学生更好地掌握语文知识并提升综合素养。多维度的文本分析能够拓宽学生的思维视角,而独立思考则有助于培养学生自主解决问题的能力。合作学习和多媒体技术则通过互动与视觉辅助,增强学生的学习积极性与深层次理解能力,最终实现语文教学目标。

天津地区猪流感血清学调查

2002年-2005年期间,采用血凝抑制试验对天津市10个区县44个养猪场进行了猪流感病毒抗体检测,结果75%的被调查猪场抗体检测结果有阳性,检测的648份血清样品中,69.6%为阳性。流感病毒抗体亚型调查结果显示该地区流行的猪流感病毒主要为H1和H3亚型,抗体阳性率分别为55.4%和39.4%。部分猪群中存在抗H9亚型流感病毒抗体,阳性率为5.4%,但未发现H5亚型流感病毒抗体。此外,部分猪群中同时存在2种或3种亚型(H1,H3和H9)流感病毒的抗体,表明这些猪曾经同时被2种或3种不同亚型的流感病毒感染。

H_1N_1亚型猪流感病毒分离鉴定

用SPF鸡胚从2005-2006年采集自天津地区猪群样品中分离出3株猪流感病毒,测定了分离病毒的部分理化特性和生物学特性。3个猪流感病毒分离株均能凝集1%鸡红血球,将其制成琼脂扩散抗原与猪流感标准阳性血清反应均出现清晰白色沉淀线;经中国动物卫生与流行病学中心系统鉴定,3个毒株均为H1N1亚型,分别命名为A/Swine/Tianjin/TJ2/2005(H1N1)、A/Swine/Tianjin/TJ3/2005(H1N1)、A/Swine/Tianjin/TJ4/2006(H1N1)株。这3株病毒都为热不稳定型,60℃作用10 min即可使病毒失去感染能力,病毒对酸性环境(pH3.0)和乙醚均敏感。TJ2、TJ3、TJ4株的EID50依次为10-7.5/0.2 mL、10-7.17/0.2 mL和10-8.45/0.2 mL。人工感染试验结果表明,分离的3株病毒对鸡和小鼠无致病性,但对猪具有致病性,能引起部分感染猪发病,并产生明显的肺部病理变化,从发病猪体内均能分离到H1N1亚型猪流感病毒。

鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达

将鸡传染性贫血病毒M990 5株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中 ,然后转化到DH10BAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组 ,最后将重组子转染Sf9昆虫细胞 ,得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1_2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中 ;SDS_PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。

鸡传染性贫血病毒分子生物学研究进展

对国内外鸡传染性贫血病毒基因组及其编码蛋白等方面的最新研究成果进行了论述。

鸡源大肠埃希氏菌部分生物学特性研究

对从天津地区分离到的71株鸡大肠杆菌的部分生物学特性包括致病性、血清型、耐药特性和免疫原性等进行了研究。结果表明其中60株为致病性菌株,占分离菌株的84.5%;60个致病性菌株共定型出45个菌株,分属O1、O2、O5、O6、O20、O45、O53、O74、O75、O78、O88、O89、O92、O107、O111、O145等16个血清型,其中O78、O88、O2、O45、O53和O145为优势血清型,占定型菌株的73.4%;试验菌株具有广泛的耐药性,60个致病性菌株均为多重耐药。免疫原性测定试验结果表明,O2、O78、O88血清型菌株均可对相同血清型菌株提供很好的保护,但3个血清型菌株之间缺乏有效的保护。

当前猪病流行特点及防控形势分析

一、当前猪病流行概况（一）发生疾病的种类多1.病毒性疾病（12种）：口蹄疫、猪瘟、蓝耳病、病毒性腹泻病：PED/TGE/ROTA/PDCoV、猪伪狂犬病、圆环病毒相关疾病、猪流感、细小病毒病、日本乙型脑炎。2016年病毒性病原检测PEDV的检出率最高，为31.83%；其次为PCV2和PRRSV，检出率分别为27.29%、13.11%。2.细菌性疾病（11种）：猪喘气病（支原体肺炎）、副猪嗜血杆菌病、猪链球菌病、大肠杆菌病（黄白痢）、猪传染性胸膜肺炎、猪回肠炎（增生性肠炎）、猪丹毒、渗出性皮炎（葡萄球菌病）、猪萎缩性鼻炎、仔猪红痢。2016年细菌性病原大肠杆菌检出率最高，为39.15%；其次为猪链球菌和副猪嗜血杆菌，检出率分别为25.93%、21.82%。3.寄生虫病：附红细胞体病、弓形体病、蛔虫病、猪肺丝虫病、螨病。4.霉菌毒素中毒。

天津地区仔猪水肿病病原分离鉴定

从天津地区分离鉴定猪水肿病大肠杆菌27株,并测定了分离株的部分生物学特性。鉴定结果表明,定型的23个分离株分属O139,O101,O138,O 108,O141,O147,O149,O 21,O8等9个血清型(4株未定型),其中O 139,O138,O101为优势血清型;10个试验菌株可以产生水肿毒素;11个强致病性菌株中,5株可产生明显溶血环,而16个弱致病性菌株均无溶血性。药敏试验结果表明,头孢氨苄的抑菌作用最强,但所有分离株均有不同程度的耐药性。

鸡传染性贫血病致病机理研究进展

论述了鸡传染性贫血病的致病机制及其免疫病理方面的研究进展,包括鸡群的年龄抵抗力、再生障碍性贫血、免疫抑制和诱导的细胞凋亡等。

禽曲霉菌与大肠杆菌混合感染的诊治

武清县大良镇某养殖户所购肉雏鸡，突然爆发疾病，死亡率高达８９．５％，经临床与实验室检查，诊断为曲霉菌与大肠杆菌混合感染。经治疗后病情得到控制。

凋亡素研究进展

凋亡素(apoptin)是一种新近发现的可引起细胞发生凋亡的病毒蛋白.它是由鸡贫血病病毒基因组编码的一个大小约14kD的蛋白(VP3),由121个氨基酸组成,含2个富含脯氨酸的延伸区和核定位及核输出的基本氨基酸序列与信号;现有的研究表明,凋亡素与任何已知的病毒或细胞内多肽无序列同源性[1].由于其引起细胞凋亡的方式不同于已知的其它凋亡基因如:Bcl-2,p53等,因而已受到越来越广泛的关注.现就近年来对该凋亡素的研究作一综述.

天津地区鸡致病性大肠杆菌血清型分布及其优势血清型的外膜蛋白型研究

从天津地区各区县养鸡场分离 ,鉴定出 45株鸡致病性大肠杆菌。对 45株致病性大肠杆菌进行血清型鉴定 ,共定型出 3 1株 ,分属 1 4个血清型 ,其中 O78、O88、O2 、O4 5、O53、O14 5为优势血清型 ,占定型菌株的 58.3 %。提取 O78、O88、O2 、O4 5、O53和O14 56个血清型 1 8个分离株的外膜蛋白 ( Outermembrane protein,OMP) ,测定外膜蛋白型 ( Outmembrane protein patterns,OMPS) ,SDS-PAGE分析表明这些分离株共产生了 3个 OMP型 ( 1～ 3型 )。 OMP-1型为 O78、O88、O2 、O53、O14 55个血清型分离株所共有 ,OMP-2型为 O78、O4 5、O14 53个血清型分离株所共有。这表明同一血清的菌株可能属于完全不同的 OMP型 ,而血清型不同的菌株也可能为同一 OMP型。

一株人源H1N1亚型猪流感病毒的进化分析与生物学特性研究

为了解猪流感病毒(SIV)的变异情况,我们2009年11月从河北某养殖场采集呈流感症状的猪鼻拭子40份,接种10日龄SPF鸡胚,分离到一株猪流感病毒,通过RT-PCR和血凝抑制试验鉴定为H1N1亚型,命名为A/swine/Hebei/15/2009(H1N1),其全基因序列测定及同源性分析发现,8个基因片段均与2000年左右H1N1人流感病毒有较高的同源性。系统遗传演化显示,该病毒分离株是由2000年人源H1N1流感病毒A/Dunedin/2/2000(H1N1)进化而来。抗原性分析显示该株与甲型H1N1流感病毒和经典H1N1病毒株抗原性差异较大。对小鼠致病性试验表明该病毒株可以直接感染小鼠并导致小鼠轻微临床症状和组织病理学变化,但不致死小鼠,表现为低致病性。

猪繁殖与呼吸综合征病毒SJ株(天津分离株)感染仔猪的病理学

选用10~15日龄健康仔猪20头,随机分为攻毒组(15头)与对照组(5头),攻毒组滴鼻接种猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SJ株,3 mL/头;对照组滴鼻接种无PRRSV的细胞培养物,3 mL/头。攻毒组的主要临床表现为眼睑水肿、打喷嚏、呼吸急促、嗜睡、体温略升高。攻毒组与对照组在试验开始后24 h、7 d、14 d、21 d、28 d分别剖杀3头和1头仔猪,采集肺、脾、肾、扁桃体及各部位淋巴结作免疫组化及病理组织学观察;迅速采集肺组织,制作超薄切片,透射电镜观察。试验结果表明,PRRSV SJ株主要感染仔猪的肺脏与脾脏。免疫组化观察,攻毒后24 h^7 d,肺门淋巴结和扁桃体PRRSV抗原阳性反应最强;攻毒后14~28 d,脾脏PRRSV抗原阳性反应最强。攻毒后14~28 d,显微病变可见肺组织发生弥漫性、局灶性或间质性肺炎,肺泡隔因巨噬细胞、淋巴细胞及Ⅱ型上皮细胞增生而明显增厚。超微病变主要表现为,肺泡间隔中单核细胞增生,核孔消失,核内有异染色质聚集,Ⅱ型肺泡细胞高度变性等。

禽腺病毒血清4型纳米PCR检测方法的建立与初步应用

为建立一种快速有效检测禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的方法,本研究根据FAdV-4五邻体(Penton)基因序列,设计合成1对特异性引物,经过条件优化,建立了检测FAdV-4的纳米PCR方法(Nano PCR)。特异性试验结果显示,该方法对鸡新城疫病毒等12种家禽常见病原及国内报导的FAdV-1、FAdV-2、FAdV-8a、FAdV-8b、FAdV-11等5个主要血清型病毒的扩增结果均为阴性,仅FAdV-4检测结果为阳性,特异性较强。敏感性试验结果显示,该方法对FAdV-4的最低核酸检出量为54.0拷贝/μL,较常规PCR方法高10倍,敏感性较高。应用该方法和病毒分离培养法同时对87份临床样品进行检测,二者均检出14份阳性样品,总体符合率为100%。以上结果表明本研究建立的Nano PCR方法特异性好、敏感性高,可以用于FAdV-4的临床检测和分子流行病学调查。