卵母细胞体外成熟预防卵巢过度刺激综合征的应用

目的:探讨卵母细胞体外成熟预防卵巢过度刺激综合征(ovarian hyperstim- ulation syndrome,OHSS)的效果。方法:51例IVF长方案超排卵过程中出现OHSS早期征象时,按患者意愿分成两组,实验组于当天注射人绒毛膜促性腺激素(hCG)36h后取卵,经体外培养成熟行体外受精、胚胎移植;对照组则继续按常规用药方案及受精方案行胚胎移植。测定两组出现OHSS早期征象当日的E_2、统计FSH用药天数、用药量、受精率及临床妊娠率。结果:实验组与对照组在出现OHSS早期征象当日的血E_2水平、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率无统计学差异;但实验组的FSH总用量、FSH用药天数、获卵数方面显著低于对照组(P<0.05)。实验组1例发生中度OHSS,对照组则发生3例重度OHSS和2例中度OHSS,重度OHSS发生率差异极显著(P<0.01)。结论:超排卵过程中,出现OHSS早期征象时改行卵母细胞体外成熟培养技术可有效地降低OHSS的发生率。

体外受精中受精低下周期的促排卵方案及妊娠结局观察

目的分析体外受精(IVF)周期受精低下的原因及妊娠结局。方法观察IVF受精低下83周期(受精低下组),以同期受精正常的1,717个IVF周期为对照组,比较两组的卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率;同时观察不同促排方案对受精低下的影响。结果两组不同促排方案的受精低下比率无显著差异(P>0.05);卵裂率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率、流产率也均无显著差异(P>0.05)。结论促排卵方案不是影响受精低下的因素,受精低下周期中获得的胚胎质量及发育潜能没有影响。

改良直接上游法在体外受精中的应用

目的:探讨改良直接上游法在常规体外受精(IVF)中的应用价值。方法:487个拟行常规IVF周期中,获卵数均不少于8个。将同一来源卵随机分成实验组和对照组,实验组采取改良直接上游法处理精液,对照组则采用常规上游法处理。比较两组受精及胚胎发育情况,检测两组受精后3小时氧化损伤相关的脂质过氧化水平。结果:实验组精液与对照组相比,精液密度显著降低(22.7±12.6vs28.3±17.8,P<0.01),但活率差异无统计学意义(82.3±13.1vs80.9±12.5,P>0.05)。两组受精率、早补救发生比率、卵裂率、优质胚胎率比较,差异均无统计学意义(73.96%vs71.82%,6.16%vs6.16%,98.92%vs98.63%,56.67%vs57.21%,P>0.05),两组种植率、临床妊娠率、流产率比较,差异也无统计学意义(32.49%vs30.44%,9.38%vs10.83%,P>0.05)。实验组与对照组丙二醛(MDA)水平比较差异有统计学意义(12.23±3.24vs18.51±3.55,P<0.05)。实验组也未增加污染几率。结论:改良直接上游法用于常规IVF周期,是一种简单、有效的精液处理方法。

异种动物核移植研究进展

异种核移植作为新型发展起来的动物繁殖技术 ,在畜牧生产、医学、生物学领域愈来愈表现出其巨大的价值。人们以前已经进行了一系列的探索 ,如在供体细胞方面 ,人们尝试使用了包括肝脏细胞、乳腺细胞在内的各种类型的细胞 ,并采取各种措施处理供体细胞 ;而对于受体细胞多采用卵泡 -卵丘复合体进行体外培养或通过超排获得 ;比较各种融合方法 ,目前多采用电融合方法 ,也较化学融合、病毒介导融合等方法简单 ;至于重构胚的培养则多采用培养液体外培养的方法 ,此方法操作简单 ,也比较容易观察记录实验过程。

波尔山羊及黄牛耳部成纤维细胞的体外培养

为了获得丰富的核移植供核体细胞 ,通过活体采集波尔山羊及黄牛耳部皮肤 ,利用组织块和消化法开展原代培养 ,并进行传代培养和培养细胞的冷藏、冷冻保存实验。建立了简易的波尔山羊和黄牛成纤维细胞体外培养程序。

牛、羊成纤维细胞的冷冻与冷藏保存

以体外培养的布尔山羊和黄牛耳组织成纤维细胞为研究对象 ,进行了哺乳动物体细胞的冻存与冷藏试验。结果表明 ,牛、羊的耳成纤维细胞在液氮中冻存 4 8h或冷藏 19d(4℃ )后再接种培养 ,仍能正常贴壁与生长。本试验筛选出一种简单易行的细胞冻存方案。

牛-兔种间重组胚体外发育能力的研究

以超排的青年母兔和经产母兔卵母细胞为受体细胞,以处于休眠期和非休眠期的黑毛和牛耳成纤维细胞为核供体,共获得180枚种间重组胚,采用M199+10%FBS和RD+10%FBS2种培养液进行体外培养,有112枚发育到2-细胞期(62.2%),26枚发育到桑椹胚期(14.4%),20枚发育到囊胚期(11.1%)。结果显示,供体细胞处于休眠期与否,对重组胚的卵裂率无显著影响(P<0.05),但以休眠期细胞为核供体的重组胚8-细胞～16-细胞胚的发育率及桑椹胚发育率显著高于非休眠期细胞的重组胚(P<0.05),二者在囊胚发育率上差异极显著(P<0.01);以M199为培养液的胚胎在卵裂率、桑椹胚发育率和囊胚发育率上与RD组无显著差异(P>0.05)。

子宫内膜异位症血清CA125水平与体外受精结局

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)不孕患者体外受精-胚胎移植(IVF-ET)前血清CA125水平与其结局的关系。方法:在控制性超排卵前一周期的非月经期测定65例(67个周期)中-重度EMs不孕(EMs组)及78例(78个周期)输卵管不孕(对照组)患者的血清CA125水平。对两组IVF-ET不同结局及其血清CA125水平进行分析。结果:EMs组IVF-ET不良结局发生率高于对照组(P=0.044),有不良结局的患者血清CA125水平高于对照组中相应的患者(P=0.000)。EMs组内不良结局患者血清CA125水平高于继续妊娠患者(P=0.002)。EMs组血清CA125水平与不良结局呈显著正相关(rs=0.427,P=0.002),血清CA125最佳截断点为12.37kU/L,当以CA125≥12.37kU/L为依据,判别EMs不孕患者IVF-ET不良结局的敏感性为83%(39/47),特异性为80%(16/20),准确率为82%(55/67)。结论:EMs患者IVF-ET前血清CA125≥12.37kU/L预示其结局可能不良。

微刺激方案对卵巢低反应患者体外受精-胚胎移植周期治疗结局的分析

目的探讨来曲唑/尿卵泡刺激素微刺激方案对卵巢低反应患者的治疗结局。方法研究对象为2007年7月至2009年4月在我院生殖中心接受体外受精/卵胞浆内单精子注射(IVF/ICSI)助孕的卵巢低反应患者111例,随机分为两组,60例使用微刺激方案(实验组),51例使用微量长方案(对照组)。对两组的周期取消率、获卵数、可移植胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率等进行比较。结果对照组与实验组的平均获卵数分别为(4.0±1.3)和(3.0±2.0)个,差异有显著性(P<0.05);两组周期取消率、可移植胚胎数、临床妊娠率、胚胎种植率差异无显著性(P>0.05)。结论来曲唑/尿卵泡刺激素微刺激方案对卵巢低反应的患者是一种有效的治疗方案,并且费用低廉。

人工黄体期促排方案治疗卵巢储备功能低下患者的实验室结局

目的探讨人工黄体期方案用于卵巢储备功能低下患者促排卵治疗的可行性及有效性。方法收集2016年5月至2017年4月在安徽省立医院行辅助生殖技术助孕的449例卵巢储备功能低下(DOR)患者的临床资料,根据促排卵方案的不同把应用人工黄体期促排卵方案245例患者设为观察组,把应用微刺激促排卵方案204例患者设为对照组;比较两组患者的年龄、促排周期数、基础血清卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)及孕酮(P)水平、获卵数、成熟卵数、正常受精数、优质胚胎数以及周期取消率、正常受精率、优质胚胎率的差异。结果观察组的总周期取消率为25.71%低于对照组34.8%,差异有统计学意义(P=0.036);观察组获卵数(3.18±2.65)个、成熟卵数(2.93±2.49)个均高于对照组(2.74±2.27)个、(2.51±2.14)个,但差异均无统计学意义(获卵数P=0.059,成熟卵数P=0.058);观察组的优质胚胎数(1.50±1.69)个及优质胚胎率69.04%均高于对照组(1.19±1.32)个、60.65%,差异均有统计学意义(优质胚胎数P=0.027,优质胚胎率P=0.008);但正常受精数及正常受精率两组间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论人工黄体期促排卵方案对于DOR患者,可行有效,是一种较好的促排卵选择。

常规体外受精失败周期早补救卵胞浆内单精子注射与部分-卵胞浆内单精子注射受精方式的回顾性分析

目的比较早补救卵胞浆内单精子注射(ICSI)与部分(Half)-ICSI两种授精方式在体外受精(IVF)助孕中的应用。方法回顾性分析76个常规IVF发生受精失败的移植周期。其中30个周期为早补救ICSI授精方式(早补救ICSI组),46个周期为Half-ICSI授精方式(Half-ICSI组)。分析受精情况、胚胎质量、种植率、妊娠率、抱婴回家率、出生缺陷和卵母细胞利用情况。结果早补救ICSI组与Half-ICSI组的双原核(2PN)受精率、多PN受精率、1PN受精率、优质胚胎率、胚胎种植率、妊娠率、抱婴回家率、出生缺陷无显著差异(P>0.05)。但早补救ICSI组卵母细胞利用率高于Half-ICSI组,平均受精卵数分别为(6.30±2.96)和(4.20±1.75)(P<0.001),胚胎数分别为(6.20±2.89)和(4.11±1.68)(P<0.001),冷冻胚胎数分别为(3.20±2.76)和(1.56±1.68)(P<0.01)、冷冻周期率分别为76.67%和50.00%(P<0.05)。结论在常规IVF完全受精失败的周期,早补救ICSI授精方式与Half-ICSI授精方式的受精率、胚胎质量和妊娠结局类似,但前者有更好的卵母细胞利用率和更多可利用胚胎。

冷冻平皿并添加血清替代物改善小鼠囊胚的玻璃化冷冻效果

目的:观察在冷冻液中添加血清替代物(SSS)并使用冷冻的平皿作载体改善昆明小鼠囊胚玻璃化冷冻的效果。方法:平皿组冷冻保护液中添加高浓度SSS,处理好的囊胚滴在冷冻的平皿后投入液氮中行玻璃化冷冻;开放麦管组囊胚装入开放的麦管中玻璃化冷冻。冷冻一周,解冻后移入人输卵管液中孵育。结果:解冻后平皿组囊胚回收率100%,回收囊胚扩张率88%、孵化率82%;开放麦管组囊胚回收率89%,回收囊胚扩张率77%、孵化率67%,二者相比差异有显著性(P<0.05);平皿组囊胚质量分级退化率8%,开放麦管组退化率28%,但二者相比差异无显著性(P>0.05)。结论:保护液中添加血清替代物并使用冷冻的平皿可以改善小鼠囊胚玻璃化冷冻的效果。

早期妊娠中血清sHLA-G水平与妊娠结局的关系

目的通过定量测定孕妇早期妊娠血清中的可溶性人白细胞抗原G(sHLA-G)的表达,探讨sHLA-G的表达水平与妊娠结局的关系。方法收集35例孕30d左右孕妇,20例未孕妇女外周血清,采用ELISA法定量检测样本中sHLA-G的表达;比较早期妊娠、早期自然流产和未孕妇女三组sHLA-G的表达水平。结果早期妊娠组血清中sHLA-G的表达水平为(62.35±1.02)U/mL,原因不明性流产组为(27.74±0.95)U/mL,未孕组为(20.56±0.79)U/mL,其中早期妊娠组血清中sHLA-G的表达水平高于原因不明性流产组(P<0.01)和未孕组(P<0.01),差异有显著性。结论妊娠早期孕妇血清中sHLA-G与妊娠成功有直接关系,sHLA-G降低可能会导致原因不明性流产的发生。

体外成熟卵母细胞及畸形精子症体外受精方式的探讨

目的:为体外成熟卵母细胞(IVM)及重度畸形精子症选择有效、安全、经济的受精方式。方法:一组为拟接受常规体外受精(IVF)改为IVM的患者,另一组为重度畸形精子症患者(改良巴氏染色正常形态精子<5%,密度>20×106/mL,a+b级精子≥50%)。如患者获未成熟卵母细胞数≥15,选择其1/3卵母细胞行常规IVF方式受精,余2/3卵母细胞行单精子卵胞浆内注射方式受精。比较同一患者同一周期不同受精方式的受精率、卵裂率、优质胚胎率。结果:两种受精方式的受精率、卵裂率、优质胚胎率均无明显差异,两组中共有4例临床妊娠。结论:(1)为防止超排卵发生的卵巢过度刺激而由常规IVF改为IVM时,若男方精液质量和形态均正常,可以选择常规IVF方式受精。(2)重度畸形精子症者若精液质量正常,亦可选择常规IVF方式受精。

采用长方案控制超排卵中HCG日LH水平与妊娠结局的关系

目的探讨患者行IVF-ET经垂体降调节后,注射HCG日血清LH水平与妊娠结局的关系。方法回顾性收集行IVF-ET长方案助孕274个周期的资料,分析HCG日血清LH水平与Gn用量及妊娠的关系。结果 ROC曲线显示HCG日血清与IVF临床妊娠率存在着明显的相关性;HCG注射日血清LH≤1.05IU/L者妊娠率(37.7%)明显低于LH>1.05IU/L者(52.5%);其Gn用药剂量增加(P<0.001)和Gn用药天数延长(P<0.003);优质胚胎获得率、种植率和临床妊娠率低(P<0.05);早期流产率高(P<0.05);组间HCG日血清E2水平、获卵数、受精率、卵裂率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论长方案COH中HCG日血清LH≤1.05IU/L会引起垂体的过度抑制,增加Gn剂量及延长Gn天数,将会导致种植率、临床妊娠率下降和早期流产率增高。

两种方法处理后精子形态的变化

目的研究上游法和密度梯度离心法(Percoll法)处理前后精子畸形率的改变。方法60例精液标本分别行上游法和密度梯度离心法优选,处理前后均行精子形态改良巴氏染色分析。结果上游法和密度梯度离心法都可以显著降低精子的畸形率,上游法以颈部和尾部畸形最为明显,其他畸形降低不显著;而密度梯度离心法处理后精子以大头和双头畸形降低较为显著,其他种类畸形精子率下降不显著。结论上游法和密度梯度离心法对改善精子畸形率的作用有限。

不同浓度的蔗糖溶液快速冻存人类精子的实验研究

目的:探讨使用非渗透性冷冻保护剂蔗糖快速冻存人类精子的可行性。方法:收集正常精液标本40份,经上游法处理后,收集上游精子悬液,分成6份,1份作为对照,其余5份分别用常规精子冷冻法,0.15、0.20、0.25、0.30 mol/L蔗糖溶液冷冻精子,复苏后比较6组精子活动率、前向运动精子活动率及精子质膜完整性。结果:所有冷冻组复苏后精子活动率、前向运动精子活动率及膜完整率与冷冻前上游组(96.2±1.8)%,(93.8±2.8)%,(99.0±0.8)%比较均显著下降,差异有显著性(P<0.05)。精子活动率结果:蔗糖冷冻组之间比较,0.20 mol/L组解冻后精子活动率高于0.15、0.25、0.30 mol/L组,分别为(55.5±6.3)%、(45.9±6.6)%、(50.4±9.4)%、(45.5±11.2)%,差异有显著性(P<0.05)。0.20、0.25 mol/L蔗糖冷冻组与常规慢速冷冻组(53.6±5.0)%比较,差异均无显著性(P>0.05);0.15、0.30 mol/L蔗糖组均低于常规慢速冷冻组(P<0.05)。前向运动精子活动率结果:0.20 mol/L蔗糖冷冻组与常规冷冻组比较差异无显著性[(44.4±7.4)%vs(42.3±8.1)%,P>0.05];以上两组均高于0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组,分别为(37.1±8.3)%、(33.1±9.2)%、(22.0±9.1)%,差异有显著性(P<0.05)。精子膜完整率结果:0.20 mol/L蔗糖冷冻组(70.1±6.9)%高于常规冷冻组、0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组,分别为(63.1±6.8)%、(57.7±8.3)%、(63.5±10.7)%、(57.8±12.9)%,差异有显著性(P<0.05);常规冷冻组与0.15、0.25、0.30 mol/L蔗糖冷冻组比较差异无显著性(P>0.05)。结论:终浓度为0.20 mol/L的蔗糖溶液作为人类精子冷冻保护剂是可行的,快速冷冻方法简便、快速、经济、安全有效。