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大肠杆菌L-丝氨酸脱水酶的表达改善甘氨酸营养缺陷型毕赤酵母L-丝氨酸的生长
1
作者 刘璐瑶 李康 +3 位作者 王世杰 白仲虎 杨艳坤 金坚 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2024年第13期16-24,共9页
氨基酸作为一种迟效碳源无法被微生物快速利用。L-丝氨酸脱水酶(L-serine dehydratase,L-SerDH)可以将L-丝氨酸一步催化为丙酮酸和氨进入中心碳代谢生成生物量,且此过程不需要消耗ATP和还原力。L-丝氨酸是甲酸利用途径(还原性甘氨酸途径... 氨基酸作为一种迟效碳源无法被微生物快速利用。L-丝氨酸脱水酶(L-serine dehydratase,L-SerDH)可以将L-丝氨酸一步催化为丙酮酸和氨进入中心碳代谢生成生物量,且此过程不需要消耗ATP和还原力。L-丝氨酸是甲酸利用途径(还原性甘氨酸途径)的关键中间体。因此,改善L-丝氨酸的利用可以为甲酸和丝氨酸作为碳源利用提供参考价值。该文对巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)进行了丝氨酸耐受性实验,结果显示毕赤酵母可以耐受20 g/L丝氨酸。对内源L-丝氨酸脱水酶在毕赤酵母中的表达进行了优化。在甘氨酸营养型毕赤酵母内分别表达了8种异源L-丝氨酸脱水酶,结果表示大肠杆菌tdcG基因编码的L-SerDH对丝氨酸利用改善效果最好,终OD 600提高至出发菌株的1.6倍。该研究验证了巴斯德毕赤酵母对L-丝氨酸的耐受性,并筛选得到了较优的L-丝氨酸脱水酶来源,为毕赤酵母的丝氨酸利用提供了更优的酶来源。 展开更多
关键词 L-丝氨酸脱水酶 巴斯德毕赤酵母 丝氨酸耐受性 甘氨酸营养缺陷型菌株 L-丝氨酸
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骨形态发生蛋白10及其突变体在CHO细胞中的表达
2
作者 段珂 段作营 金坚 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期106-112,共7页
为了解决骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10)前体蛋白proBMP10在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中由于Furin导致的表达产物不均一问题,构建了proBMP10在Furin酶切识别位点处的突变体proBMP10-1(R313K)和proBMP10-2(R316K),... 为了解决骨形态发生蛋白10(bone morphogenetic protein 10,BMP10)前体蛋白proBMP10在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中由于Furin导致的表达产物不均一问题,构建了proBMP10在Furin酶切识别位点处的突变体proBMP10-1(R313K)和proBMP10-2(R316K),并分别将目的基因定点整合进CHO-K1-BAK-/BAX-基因组,成功构建了稳定表达目标蛋白质的重组CHO细胞株。结果表明,proBMP10-2 (R316K)不再被Furin切割,且具有生物活性,而proBMP10-1(R313K)仍然会被Furin切割。 展开更多
关键词 骨形态发生蛋白10 突变体 定点整合
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基于位点特异性整合评价CHO细胞表达系统启动子活性的研究
3
作者 鲁晨 王子玉 +4 位作者 蔡燕飞 邓勇强 金坚 丁学峰 陈蕴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1400-1408,共9页
工业生产上中国仓鼠卵巢细胞(CHO)药物蛋白质的表达水平受多种因素影响:调控元件对转录翻译的影响、基因组整合位点的影响以及表达系统的影响等。转录作为基因表达第一步,较大程度影响蛋白质的表达,其中启动子在转录起始发挥至关重要的... 工业生产上中国仓鼠卵巢细胞(CHO)药物蛋白质的表达水平受多种因素影响:调控元件对转录翻译的影响、基因组整合位点的影响以及表达系统的影响等。转录作为基因表达第一步,较大程度影响蛋白质的表达,其中启动子在转录起始发挥至关重要的作用。启动子筛选大部分通过瞬时转染或随机整合,但存在拷贝数不明确或整合位点随机等而无法准确评价启动子活性。位点特异性整合在一定程度上降低位置效应对外源基因造成的影响,并有可能提高外源基因的表达水平。本课题组前期在CHO细胞基因组中发现并验证了多个可稳定表达外源蛋白质的位点,本研究选择其中1个位点(2c6)用于启动子活性的评价。采用CRISPR/Cas9基因编辑技术分别将猿猴病毒早期启动子(SV40)、小鼠延伸因子-1α(mEF-1α)、鸡β-肌动蛋白(cACTB)启动子和人磷酸甘油酸激酶启动子(hPGK)调控的报告基因(EGFP)表达盒定点整合至2c6位点上。通过流式分选仪分析细胞平均荧光强度,qPCR检测EGFP的mRNA水平,综合评价启动子的活性。结果表明,mEF-1α和cACTB启动子的活性优于SV40和hPGK。2次流式分选结果表明,位点特异性整合可以更为精确评价CHO细胞表达系统启动子活性。 展开更多
关键词 启动子评价 定点整合 中国仓鼠卵巢细胞 CRISPR/Cas9
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压缩采样技术及其应用 被引量:78
4
作者 金坚 谷源涛 梅顺良 《电子与信息学报》 EI CSCD 北大核心 2010年第2期470-475,共6页
如何降低宽带模拟信号数字化过程中的采样率,以及如何有效的对大量数据进行压缩存储一直是学者们关心的问题。该文综述了最近出现的一种新型信号处理方法—压缩采样(Compressive Sampling,CS),也称压缩传感(Compressive Sensing)。该方... 如何降低宽带模拟信号数字化过程中的采样率,以及如何有效的对大量数据进行压缩存储一直是学者们关心的问题。该文综述了最近出现的一种新型信号处理方法—压缩采样(Compressive Sampling,CS),也称压缩传感(Compressive Sensing)。该方法通过对稀疏信号进行观测而非采样,只需少量观测点就能精确的重构原始信号。结果表明新方法的观测频率可以远远低于奈奎斯特采样频率。该文除介绍其基本原理和主要实现方法外,同时列举了多种应用,并指出若干待研究的问题。 展开更多
关键词 压缩采样 稀疏性 观测矩阵 信号恢复
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吖啶酯标记的化学发光免疫分析优化参数评价 被引量:4
5
作者 金坚 管玲 +1 位作者 王博成 罗世能 《发光学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第3期258-264,共7页
以睾酮-3-羧甲氧基肟-牛血清白蛋白为免疫原,免疫家兔产生抗血清,10-甲基吖啶-9-羧酸[4-(N-睾酮-3-羧甲氧基肟)-氨乙基]苯酯为示踪化合物,采用平衡法建立睾酮化学发光免疫分析,数据用四参数Logistic... 以睾酮-3-羧甲氧基肟-牛血清白蛋白为免疫原,免疫家兔产生抗血清,10-甲基吖啶-9-羧酸[4-(N-睾酮-3-羧甲氧基肟)-氨乙基]苯酯为示踪化合物,采用平衡法建立睾酮化学发光免疫分析,数据用四参数Logistic函数处理.方法学考核标准曲线稳定,R为0.9967;ED50为82.15ng/L;批内和批间CV分别为5.78%和3.3%;平均回收率为107.28%;可测范围为19.3~264.6ng/L,与雌酮、雌二醇、雌三醇和孕酮的交叉反应率均小于1.35%;非特异结合率为9.64%.“桥效应”分析表明同位点、“桥” 展开更多
关键词 吖啶酯 化学发光 免疫分析 标记物 优化参数
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吖啶酯化学发光测量参数和睾酮抗体工作浓度的最佳化 被引量:2
6
作者 金坚 罗世能 +5 位作者 王博诚 官玲 张满达 张莲芬 谢敏浩 奚月芬 《发光学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1995年第1期88-94,共7页
10-甲基吖啶-9-羧酸[4-(N-睾酮-3-羧甲氧基肟)-氯乙基]苯酯(To-3-AEPMAC)发光测量的时间参数在低浓度区域测量十分重要.本文报道在0.00~0.21s间有一占发光总面积4.10±2.21%(&... 10-甲基吖啶-9-羧酸[4-(N-睾酮-3-羧甲氧基肟)-氯乙基]苯酯(To-3-AEPMAC)发光测量的时间参数在低浓度区域测量十分重要.本文报道在0.00~0.21s间有一占发光总面积4.10±2.21%(±s)的溶剂峰;峰发光的起始和终点在0.32~3.915间,峰时间参数位于0.43~2.22s间,反应速率分析也证实时间参数的实验结果.选择0.30s延迟时间和10s积分时间的化学发光积分参数测量既可排除溶剂发光的干扰,又可较精密地采集到T0-3AEPMAC的全部发光信号。而单位时间的发光峰高测量因随剂量增加峰时间参数延长不能满足建立超微量化学发光免疫化学分析测量的要求.本文根据化学发光免疫化学高灵敏和高精密的分析要求,通过抗体稀释曲线极值的优选、最大反应变化的标定和最小反应标准误点分析使睾酮抗体的工作浓度最佳化,即稀释度为1:18000. 展开更多
关键词 抗体 吖啶酯 睾酮抗体 化学发光 测量参数 浓度
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睾酮—吖啶酯化学发光示踪剂的制备及评价 被引量:1
7
作者 金坚 罗世能 +2 位作者 张志斌 谢敏浩 奚月芬 《发光快报》 EI CAS CSCD 1994年第1期62-66,共5页
本文报道了10-甲基-吖淀-9-核酸[4-(N一睾酮-3-羧甲氧基肟)-氯乙基]苯酯(To-3-AEPMAC)的合成、理化鉴定和免疫学评价.制备方法类似于以往甾体激素全抗原的合成,产品的化学发光信号与噪声比高,可测限为0.18fmol,线性可测范围可达6个数量... 本文报道了10-甲基-吖淀-9-核酸[4-(N一睾酮-3-羧甲氧基肟)-氯乙基]苯酯(To-3-AEPMAC)的合成、理化鉴定和免疫学评价.制备方法类似于以往甾体激素全抗原的合成,产品的化学发光信号与噪声比高,可测限为0.18fmol,线性可测范围可达6个数量级以上,与抗睾酮血清结合不改变吖啶酯的化学发光动力学和发光效率;免疫化学最高结合率和非特异结合稳定,抗血清稀释曲线比较证明产品的免疫反应性基本无损失,优于鲁米诺及其衍生物制备的示踪剂,符合建立超微量免疫化学分析中标记化合物的要求. 展开更多
关键词 吖啶酯 睾酮 化学发光 免疫化学
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人血栓调节素放射免疫分析 被引量:2
8
作者 金坚 何杨 +2 位作者 白霞 李佩霞 阮长耿 《标记免疫分析与临床》 CAS 1997年第4期221-224,共4页
从健康人尿中纯化了血栓调节素,免疫家兔产生抗血清,125I-血栓调节素用联结标记法制备,采用平衡法建立RIA数据用三次函数数据程序处理。方法的批内和批间CV分别为5.10%和10.94%,平均回收率为105.22%,可测范围为8.1~560μg/L... 从健康人尿中纯化了血栓调节素,免疫家兔产生抗血清,125I-血栓调节素用联结标记法制备,采用平衡法建立RIA数据用三次函数数据程序处理。方法的批内和批间CV分别为5.10%和10.94%,平均回收率为105.22%,可测范围为8.1~560μg/L,ED50为12.58μg/L,与凝血酶、蛋白C、蛋白S和蛋白C抑制物没有交叉反应。40名健康男、女性血浆血栓调节素含量为58.3±10.41μg/L(x±2s),本方法可为血栓栓塞性疾病的诊疗和蛋白C系统的基础及临床应用研究提供一种有效的分析手段。 展开更多
关键词 血栓调节素 放射免疫分析 血栓栓塞
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制药工程专业人才培养模式的探索与实践 被引量:7
9
作者 金坚 许正宏 邱丽颖 《海峡药学》 2008年第11期126-127,共2页
提高本科教学质量,关键在于人才培养模式的创新。制药工程专业是涉及药学、化学、生物学、化学工程学和管理学等多门学科的新兴专业,不同背景的院校对制药工程专业核心内涵界定不同,人才培养模式、专业建设也各具特色。我校的制药工程专... 提高本科教学质量,关键在于人才培养模式的创新。制药工程专业是涉及药学、化学、生物学、化学工程学和管理学等多门学科的新兴专业,不同背景的院校对制药工程专业核心内涵界定不同,人才培养模式、专业建设也各具特色。我校的制药工程专业,依托我校的优势学科,在人才培养模式方面进行了有益的探索,取得显著成效。 展开更多
关键词 制药工程专业 培养模式 特色培养
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前喻文化·同喻文化·后喻文化——M·米德《文化和宗奉》述评 被引量:14
10
作者 金坚 《当代青年研究》 1986年第10期18-22,41,共6页
《文化和宗奉:70年代新的代际关系》是一部关于文化学、家庭社会学和未来学的综合性著作。本书作者玛格丽特·米德(Margared Mead)是美国著名的女人类学家。1901年生于费城,早年就读于哥伦比亚大学人类学系“历史学派”创始人F·... 《文化和宗奉:70年代新的代际关系》是一部关于文化学、家庭社会学和未来学的综合性著作。本书作者玛格丽特·米德(Margared Mead)是美国著名的女人类学家。1901年生于费城,早年就读于哥伦比亚大学人类学系“历史学派”创始人F·鲍亚士门下,1928年发表了经典性的成名作《萨姆族的成丁》(Coming of agc in Samoa), 展开更多
关键词 同喻文化 后喻文化 前喻文化 原始文化 世界性 文化形态 六十年代 文化变迁 代际关系 文化认同
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赭曲霉毒素A的高灵敏时间分辨荧光免疫分析 被引量:28
11
作者 黄飚 陶文沂 +3 位作者 张莲芬 时瑾 杨海麟 金坚 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第7期662-666,共5页
采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用... 采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用杂交瘤细胞制备抗OTA单克隆抗体.用OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立OTA-TRFIA.该方法的灵敏度为0.03μg/L,测量范围为0.03 ̄1000μg/L,批内和批间变异分别为3.7%和5.3%,平均回收率为94.2%,与赭曲霉毒素B的平均交叉反应为3.7%,与黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争OTA-TRFIA的效应点均值ED80、ED50、ED20分别为(0.33±0.02)μg/L、(1.44±0.08)μg/L和(5.22±0.12)μg/L,说明方法的稳定性好,样品经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测OTA,两者的相关系数为0.925,结果相符.研究表明,OTA-TRFIA是目前报道的OTA检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景. 展开更多
关键词 赭曲霉毒素A(OTA) 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 真菌毒素 单克隆抗体
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中药虎杖中抗癌活性物质研究 被引量:27
12
作者 冯磊 张莲芬 +2 位作者 严婷 金坚 陶文沂 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2006年第7期689-691,共3页
目的:为虎杖药用价值的开发利用提供科学据依。方法:在生物活性测定指导下,从虎杖中分离得到一种较高抗癌活性的物质,并且用液质联用、红外光谱、紫外全扫描等方法鉴定其结构。MTT法测定它对L-02、HepG2、SHZ-888、MCF-7、MCF-7/ADM等... 目的:为虎杖药用价值的开发利用提供科学据依。方法:在生物活性测定指导下,从虎杖中分离得到一种较高抗癌活性的物质,并且用液质联用、红外光谱、紫外全扫描等方法鉴定其结构。MTT法测定它对L-02、HepG2、SHZ-888、MCF-7、MCF-7/ADM等细胞的抑制作用并用HE染色法观察其作用MCF-7/ADM细胞48 h、72 h后的肿瘤细胞形态学变化。结果:分离得到的物质为顺、反式-白藜芦醇,它能特异性抑制多种肿瘤细胞的生长,而对正常肝细胞毒性很小。同时,首次发现其对耐阿霉素的MCF-7乳腺癌细胞有直接的细胞毒性。结论:白藜芦醇是虎杖中一种活性强、低毒的抗癌物质。 展开更多
关键词 虎杖 白藜芦醇 MCF-7/ADM细胞 MTT法
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黄曲霉毒素B_1的高灵敏时间分辨荧光免疫分析 被引量:24
13
作者 黄飚 陶文沂 +3 位作者 张莲芬 时瑾 赵晓联 金坚 《核技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第4期295-300,共6页
采用时间分辨荧光技术建立了高灵敏的黄曲霉毒素B1(AFB1)间接竞争免疫分析法(AFB1-TRFIA)。以AFB1-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗AFB1抗体;AFB1与辣根过氧化酶的联结物(AFB1-HRP)包被96孔板为固相抗原,与游离AFB1共同竞争有限的抗A... 采用时间分辨荧光技术建立了高灵敏的黄曲霉毒素B1(AFB1)间接竞争免疫分析法(AFB1-TRFIA)。以AFB1-BSA为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗AFB1抗体;AFB1与辣根过氧化酶的联结物(AFB1-HRP)包被96孔板为固相抗原,与游离AFB1共同竞争有限的抗AFB1抗体;用稀土离子Eu3+标记的羊抗兔抗体进行示踪。该方法的灵敏度为0.01μg/L,测量范围为0.01—100μg/L,批内和批间变异分别为4.1%和6.8%,平均回收率为97.2%,与黄曲霉毒素B2的平均交叉反应为10%左右;黄曲霉毒素G2、赭曲霉毒素A、赭曲霉毒素B及HRP基本不干扰本方法对AFB1的检测。8条不同时间进行的AFB1-TRFIA的效应点值ED80、ED50、ED20分别为(0.07±0.01)μg/L、(0.63±0.02)μg/L和(12.5±0.47)μg/L。比较AFB1-TRFIA和AFB1-ELISA检测AFB1,两者的相关系数为0.917。研究表明,AFB1-TRFIA是目前报导的AFB1检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1(AFB1) 时间分辨荧光免疫分析(TRFIA) 真菌毒素 抗体
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稀土离子与乳铁蛋白结合的光谱研究 被引量:18
14
作者 朱兵 杜秀莲 +3 位作者 李荣昌 王夔 金坚 王博诚 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2001年第1期26-30,共5页
用紫外示差光谱、荧光光谱及圆二色谱等方法研究了 Tb3+ 和 Eu3+ 在 p H 7.4的条件下与乳铁蛋白及脱铁乳铁蛋白的结合作用 .结果表明 ,Tb3+及 Eu3+可特异性地结合在脱铁乳铁蛋白的两个 Fe3+结合部位 ,但不能从已经结合铁的乳铁蛋白中把... 用紫外示差光谱、荧光光谱及圆二色谱等方法研究了 Tb3+ 和 Eu3+ 在 p H 7.4的条件下与乳铁蛋白及脱铁乳铁蛋白的结合作用 .结果表明 ,Tb3+及 Eu3+可特异性地结合在脱铁乳铁蛋白的两个 Fe3+结合部位 ,但不能从已经结合铁的乳铁蛋白中把铁置换出来 .测得 Tb3+与这两个部位结合的条件平衡常数为 lg K1 =8.4 8± 0 .2 4和 lg K2 =6.72± 0 .1 8( 2 5℃ ,0 .1 0 mol/L Na Cl,0 .1 0 mol/L Hepes,p H=7.4 ) . Tb3+ 在这两个位点结合时 ,蛋白质的构象发生变化 .在 Tb3+ 与蛋白质的浓度比低时 ,构象趋于紧缩 ,色氨酸残基进入疏水的环境 ;当 Tb3+ 结合得较多时 ,构象转而开放 ,色氨酸残基转向亲水性环境 .但无论哪种情况 ,Tb3+ 与脱铁乳铁蛋白的结合都不影响蛋白的二级结构 . 展开更多
关键词 乳铁蛋白 脱铁乳铁蛋白 稀土离子 结合作用 生物效应 构象
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^(125)IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG44的杀伤作用 被引量:11
15
作者 李金泉 鲍耀东 +4 位作者 周岱 吴翼伟 江一民 王博诚 金坚 《核技术》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期881-884,共4页
为评价12 5IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG4 4的杀伤作用 ,把12 5IUdR加入到SHG4 4细胞的培养基中 ,孵育后测量细胞摄取12 5IUdR的放射性活度 ;采用克隆形成法测定12 5IUdR对SHG4 4细胞生长抑制的效果。结果表明 ,培养基中12 5IUdR浓度增加时 ... 为评价12 5IUdR对人脑胶质瘤细胞SHG4 4的杀伤作用 ,把12 5IUdR加入到SHG4 4细胞的培养基中 ,孵育后测量细胞摄取12 5IUdR的放射性活度 ;采用克隆形成法测定12 5IUdR对SHG4 4细胞生长抑制的效果。结果表明 ,培养基中12 5IUdR浓度增加时 ,SHG4 4细胞对12 5IUdR的摄取量也相应增加 (相关系数r =0 .9917)。SHG4 4细胞摄取12 5IUdR后生长受到明显抑制 ,细胞存活分数与培养基中12 5IUdR浓度呈直线负相关 (r =- 0 .9736 ) ,其半数致死剂量LD50 为 (8.7± 0 .12 )kBq/mL ,12 5IUdR组的SHG4 4细胞存活分数明显低于Na12 5I组 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,12 5IUdR能够掺入到SHG4 4细胞中 ,12 5IUdR对SHG4 4细胞有明显的杀伤作用 ,说明12 5IUdR可望成为治疗脑胶质瘤的潜在的一种放射性药物。 展开更多
关键词 脑胶质瘤 脱氧尿嘧啶核苷 SHG44细胞 放射性核素 治疗 碘125 放射疗法 放射性药物 杀伤作用 标记物
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改善稀有密码子和氨基酸残基限制提高重组人ADAM15去整合素结构域蛋白表达水平 被引量:14
16
作者 吴静 雷楗勇 +2 位作者 张莲芬 花慧 金坚 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期1067-1074,共8页
【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。... 【目的】为提高重组人ADAM(A Disintegrin And Metalloproteinase)15去整合素结构域蛋白(rhADAM15)的表达水平。【方法】在详尽分析rhADAM15的cDNA和GST(谷胱甘肽-S-转移酶)-ADAM15结构的基础上,选择表达宿主菌并对表达质粒进行改造。【结果】(1)选择能为大肠杆菌稀有密码子提供额外tRNA的Escherichia coli.Rosetta(DE3)作为宿主菌,将质粒pGEX-ADAM15转化于其中在最佳诱导表达条件下获得298mg/L融合蛋白GST-ADAM15;(2)采用PCR体外定点突变技术将目标蛋白编码区稀有密码子GGA(Gly425)替换为GGC,使融合蛋白表达水平提高9.4%;(3)通过消除凝血酶识别序列附近的Pro-Glu-Phe残基,提高凝血酶酶切效率,使rhADAM15产量提高了35.7%;(4)在GGA替换为GGC基础上切除"Pro-Glu-Phe"残基,使rhADAM15产量提高到68mg/L,比分别切除"Pro-Glu-Phe"残基、GGA替换为GGC和野生型提高了19.2%、51.1%和61.9%。【结论】这一结果表明,在充分认识目标蛋白特性的基础上定向选择表达宿主并改造表达质粒能实现外源蛋白高水平表达。 展开更多
关键词 ADAM15去整合素结构域 大肠杆菌Rosetta(DE3) 稀有密码子 PCR定点突变 抑制血管生成
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重组水蛭素与血栓前体关系的研究 被引量:12
17
作者 谭成 万卫星 +3 位作者 张荣军 张莲芬 韩玉珉 金坚 《核技术》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期343-346,共4页
氯胺-T法碘标水蛭素,采用固相饱和法、固相竞争法分析水蛭素与凝血酶-纤维蛋白原复合物的亲和力及定量结合关系,并分析水蛭素-凝血酶-纤维蛋白原复合物形成的时间反应动力学。结果显示,水蛭素可特异地与凝血酶-纤维蛋白原复合... 氯胺-T法碘标水蛭素,采用固相饱和法、固相竞争法分析水蛭素与凝血酶-纤维蛋白原复合物的亲和力及定量结合关系,并分析水蛭素-凝血酶-纤维蛋白原复合物形成的时间反应动力学。结果显示,水蛭素可特异地与凝血酶-纤维蛋白原复合物形成三元复合物,它们的分子配比为14∶14∶1(水蛭素:凝血酶:纤维蛋白原)。生理Ca^(2+)浓度是它们的最佳结合环境,水蛭素与凝血酶-纤维蛋白原复合物结合的亲和常数K_a为9.72 ×10~6L/mol;其结合反应可在30-45min达到平衡,提示水蛭素有作为血栓显像配基的可能性。 展开更多
关键词 水蛭素 凝血酶 碘标记物 血栓病 放射诊断
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黄芪活性成分的提取及其对淋巴细胞增殖的影响 被引量:20
18
作者 聂小华 史宝军 +3 位作者 敖宗华 尹光耀 金坚 陶文沂 《无锡轻工大学学报(食品与生物技术)》 CSCD 北大核心 2003年第4期49-51,共3页
研究了黄芪多糖(APS)、皂甙(AP)的提取工艺及其对淋巴细胞增殖的影响.通过单因素实验初步确定了APS,AP的提取工艺;淋巴细胞增殖实验表明,在12.5~100μg/mL范围内,APS,AP均能促进ConA诱导的T淋巴细胞增殖,其中APS的增强作用显著.
关键词 黄芪多糖 活性成分 皂甙 提取工艺 淋巴细胞增殖 中药 免疫活性
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松口蘑菌丝体糖蛋白对荷S_(180)肉瘤小鼠的抗肿瘤作用 被引量:13
19
作者 万彩霞 许泓瑜 +3 位作者 薛峰 许正宏 金坚 陶文沂 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1439-1440,共2页
关键词 松口蘑 菌丝体 糖蛋白 抗肿瘤
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肝ASGP受体功能显像剂的制备及显像研究 被引量:7
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作者 张荣军 梁高林 +6 位作者 万卫星 蔡刚明 叶万忠 陶永辉 张莲芬 谭成 金坚 《核技术》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第11期780-785,共6页
采用FPLC快速纯化人血清白蛋白,利用双功能试剂2-亚胺基-2-甲氧基乙基-1-疏代- 半乳糖甙与伯胺基的成脒反应,将硫代半乳糖残基引入人血清白蛋白分子,得到平均糖密度为 30的新半乳糖人血清白蛋白(NGA);用直接法... 采用FPLC快速纯化人血清白蛋白,利用双功能试剂2-亚胺基-2-甲氧基乙基-1-疏代- 半乳糖甙与伯胺基的成脒反应,将硫代半乳糖残基引入人血清白蛋白分子,得到平均糖密度为 30的新半乳糖人血清白蛋白(NGA);用直接法制备99mTc-NGA,其放化纯大于90%,且室温下 可稳定6h以上,符合显像要求。99mTc-NGA小鼠体内分布实验及大鼠、兔和狗的显像研究均 表明99mTc-NGA能够被肝脏特异摄取,且具有饱和性,主要通过胆道、肠道排泄,是一种较 好的肝ASGP受体功能显像剂。 展开更多
关键词 新半乳糖人血清白蛋白(NGA) ^(99m)Tc 肝受体显像 双功能试剂 糖蛋白
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