PCR检测肠出血性大肠杆菌O157∶H7

目的 研究快速、特异、灵敏的检测肠出血性大肠杆菌O15 7∶H7的多重PCR方法 ,并比较单一PCR和多重PCR对检测灵敏度的影响。方法 选择O15 7∶H7的O抗原、H鞭毛抗原及SLT1和SLT2毒素基因特异的 4对引物 ,分别或共同进行PCR扩增 ,检测 4 0株O15 7∶H7和非O15 7∶H7菌株 ,将细菌按 10 1～ 10 6稀释后比较PCR的检测灵敏度。结果 所有O15 7∶H7菌株均在 4 97bp和 6 2 5bp处出现O15 7抗原基因和H7抗原基因产物 ,其产毒株在4 84bp和 (或 ) 2 10bp处出现SLT2和 (或 )SLT1基因产物 ,非O15 7∶H7菌株PCR结果均为阴性 ;单一PCR检测灵敏度为 15 0CFU/PCR反应 ,多重PCR为 >15 0 0CFU/PCR反应。结论 在经过增菌后 ,多重PCR比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏和简便 ,为产毒和非产毒O15 7∶H7的诊断提供了新的手段。

镉-金属硫蛋白的抗体制备及酶联免疫吸附法测定

镉金属硫蛋白的抗体制备及酶联免疫吸附法测定第二军医大学生化教研室（上海２００４３３）金慧英魏尧梅胡惠民冯伟华刘军华金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）是一种小分子富含巯基的蛋白质，可以与多种金属结合，并可被多种金属（镉、锌、汞、银等）诱...

金属硫蛋白在心肌细胞保护中与抗氧化酶的关系

目的 :探讨金属硫蛋白 (MT)在心肌细胞缺氧 /复氧损伤 (H/R)和预缺氧 (HPC)保护中与抗氧化酶的关系。方法 :建立培养的乳鼠心肌细胞缺氧 /复氧模型 ,检测HPC、锌诱导、外源MT和MT抗体等处理下 ,心肌细胞MT含量变化及抗氧化酶 (SOD ,CAT ,GSHpx)活力的相应变化。 结果 :HPC和锌诱导组MT含量及抗氧化酶的活力均显著高于H/R组P <0 .0 5、P <0 .0 1) :外源MT处理后SOD活力显著高于对照组 (P <0 .0 1) ,CAT和GSHpx活力虽然显著低于对照组但显著高于H/R组 (P <0 .0 1) ;使用MT抗体后 ,酶活力最低。结论 :MT参与HPC的心肌细胞保护作用 。

镉诱导金属硫蛋白的纯化及其抗体制备

目的：建立简便分离纯化镉诱导金属硫蛋白（ＣｄＭＴ）的方法，并制备抗ＣｄＭＴ抗血清。方法：采用加长ＳｅｐｈａｄｅｘＧ７５柱层析分离纯化由ＣｄＣｌ２诱导的大鼠肝组织ＣｄＭＴ，以此为抗原免疫家兔制得抗ＣｄＭＴ抗血清。结果：纯化的ＣｄＭＴ经ＳＤＳＰＡＧＥ测定相对分子质量及Ｃｄ含量测定与标准ＣｄＭＴ一致，氨基酸组分分析也与文献报道基本一致；获得的抗血清对大鼠ＣｄＭＴ具有特异性反应。结论：本法为一种简便高效的分离纯化ＣｄＭＴ的方法，抗ＣｄＭＴ抗血清的制备可为进一步建立敏感的ＥＬＩＳＡ和免疫组化方法进行组织内ＭＴ含量测定及定位，有利于深入研究Ｃｄ中毒机理和ＭＴ生物学功能。

金属硫蛋白对急性镉中毒后抗氧化酶的保护作用

目的：探讨金属硫蛋白（ＭＴ）对抗氧化酶的保护作用机制。方法：向大鼠尾静脉注射氯化镉建立镉中毒模型，分别于注射后不同时间测定肝组织ＭＴ的含量和抗氧化酶（ＳＯＤ，ＣＡＴ，ＧＳＨｐｘ）的活力变化。结果：镉中毒后３０ｍｉｎ～３ｈ，ＳＯＤ、ＧＳＨｐｘ和ＣＡＴ活力显著降低（Ｐ＜００５），６ｈ酶活力逐步恢复；ＭＴ的显著增加出现在３ｈ，６ｈ达最高峰（１３１９５±１５１５）μｇ／ｇ肝组织，随着ＭＴ的合成增加，抗氧化酶的活力逐步恢复。结论：镉中毒严重抑制抗氧化酶的活力，ＭＴ对抗氧化酶的活力恢复可能有良好的促进作用。

检测霍乱弧菌的基因芯片的制备

目的 研制快速、特异、灵敏的检测霍乱弧菌基因芯片。方法 选择霍乱弧菌特异的编码外膜蛋白的ompW基因和毒素ctxA基因 ,设计引物和探针 ,并制备检测芯片 ,通过 2次PCR扩增 ,制备荧光标记的靶序列 ,并与芯片进行杂交 ,检测霍乱弧菌和非霍乱弧菌病原体。结果 所有霍乱弧菌菌株在采用单一和多重PCR2种方法制备的荧光标记靶序列与芯片杂交 ,均在芯片相应探针处出现阳性信号 ,非霍乱弧菌菌株杂交结果均为阴性。结论 霍乱弧菌基因检测芯片的研制 ,为霍乱弧菌感染的诊断提供了准确、快速、灵敏的方法 ,还可选择更多的基因位点设计探针以提高检测的可靠性 ,可以达到高通量、集成化和自动化的要求。

镉中毒肝脏过氧化氢(H_2O_2)定位及抗氧化系统的变化

为探讨急性镉中毒后自由基产生和损伤的部位及机理，给予大鼠尾静脉注射氯化镉建立急性镉中毒模型，电镜观察自由基过氧化氢（Ｈ２Ｏ２） 的定位及细胞损伤，并测定抗氧化酶和氧化剂的变化。结果表明：Ｈ２Ｏ２ － ＣｅＣｌ３ 的阳性颗粒沉积在肝细胞膜上，最早出现在中毒后１ｈ，３ｈ 最严重，２４ｈ 消失；抗氧化酶活力受抑，以３ｈ 最严重（ｐ＜ ０－０１） ，６ｈ 后渐渐恢复；而ＧＳＨ 的含量在３ｈ 前均高于正常（ｐ ＜ ０－０５），以后逐步减少。提示自由基是急性镉中毒所致肝脏损伤的重要因素。

金属硫蛋白在培养乳鼠心肌细胞缺氧预处理中的作用

目的：探讨金属硫蛋白（ＭＴ）在培养乳鼠心肌细胞缺氧预处理中的作用机制。方法：建立培养的乳鼠心肌细胞缺氧／复氧模型，检测心肌细胞预缺氧２４ｈ后ＭＴ及丙二醛（ＭＤＡ）含量，Ｎａ＋－Ｋ＋ＡＴＰ酶、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活性的变化以及用ＭＴ抗体阻断后的相应变化。结果：缺氧预处理组ＭＴ含量及Ｎａ＋－Ｋ＋ＡＴＰ酶、Ｃａ２＋－Ｍｇ２＋ＡＴＰ酶活性显著高于对照组及缺氧／复氧组（Ｐ＜０．０５），ＭＤＡ含量显著低于缺氧／复氧组（Ｐ＜０．０１）；使用ＭＴ抗体后，酶活性则显著降低，而ＭＤＡ含量显著高于未加抗体和对照组（Ｐ＜０．０１）。结论：缺氧预处理产生大量 ＭＴ，后者可能通过减少 ＭＤＡ及促进 Ｎａ＋－ Ｋ＋ ＡＴＰ酶、Ｃａ２＋－ Ｍｇ２＋ ＡＴＰ酶的活性升高起到保护心肌的作用。

肠出血性大肠杆菌O157∶H7和霍乱弧菌的多重PCR检测

目的 建立同时检测肠出血性大肠杆菌 (O15 7∶H7)和霍乱弧菌的多重PCR方法 ,为霍乱和肠出血性大肠杆菌感染的快速诊断提供实验依据。方法 首先选择O15 7∶H7的O抗原(rfbE)、H鞭毛抗原 (fliC)基因以及霍乱弧菌外膜蛋白 (ompW )和肠毒素A亚单位 (ctxA)基因特异的 4对引物 ,分别或共同对O15 7∶H7和霍乱弧菌进行PCR扩增 ,并以琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。结果 所有O15 7∶H7菌株均在 4 97bp和 6 2 5bp处出现O15 7rfbE基因和H7fliC基因扩增产物 ;霍乱菌株均出现 5 6 0bp、30 2bp的ompW和ctxA基因扩增产物 ,O15 7∶H7和霍乱弧菌共同扩增可出现 4条单一条带。结论 选择 4对特异引物的多重PCR方法可简便、特异、快速、灵敏地对O15 7∶H7和霍乱弧菌进行同时检测。

葡萄球菌蛋白A抗体结合区基因的克隆、表达和纯化

目的构建表达金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)抗体结合区基因SPA-ZZ的pET-32a-ZZ表达载体,在大肠杆菌BL21中进行高效表达并初步纯化。方法用PCR从pEZZ18中克隆SPA抗体结合区基因ZZ,构建重组表达质粒pET32-ZZ,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒转化BL21感受态细菌,IPTG诱导表达,表达产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测(SDS-PAGE),并用Q-Sephrose Fast Flow柱进行初步纯化。结果得到了高效表达SPA-ZZ的pET32-ZZ表达载体,表达产物经SDS-PAGE检测相对分子质量为41 000,初步纯化后可得到较纯的表达蛋白。结论SPA抗体结合区蛋白ZZ能在大肠杆菌中高效表达,为SPA-ZZ的应用奠定了一定的基础。

大肠杆菌O157菌体抗原基因检测芯片的制备

选择编码O157菌体抗原特异合成酶的rfbE基因设计引物和探针,并制备检测芯片,通过两次PCR扩增,制备荧光标记的靶序列,并与芯片进行杂交,检测O157菌株和非O157病原体。结果所有O157菌株均在芯片相应探针处出现阳性信号,非O157杂交结果均为阴性;芯片检测灵敏度比PCR检测高50倍。说明基因芯片可以快速、灵敏、特异地检测O157菌体抗原,为建立快速灵敏的检测细菌病原体特征和鉴别诊断的自动分析系统提供了新方法。

艾箱灸预防肛肠病术后尿潴留的临床疗效观察

目的探讨采用艾箱灸预防肛肠疾病术后尿潴留的疗效。方法选取2016年10月～2018年5月我院肛肠外科收治的肛肠病患者,随机分为试验组与对照组,试验组在术后1 h予艾箱灸气海、关元、中极穴;对照组采用常规护理方法。观察两组患者术后首次排尿时间、首次排尿后膀胱残余量、术后6 h尿潴留发生率及艾箱灸预防尿潴留的疗效。结果试验组首次排尿时间为(195±55)min,首次排尿后膀胱残余量为(41±12)mL,术后6 h尿潴留发生率为9.54%;对照组首次排尿时间为(256±62)min,首次排尿后膀胱残余量为(156±23)mL,术后6 h尿潴留发生率为38.10%。结论艾箱灸气海、关元、中极穴能促进肛肠病患者术后排尿,缩短自主排尿时间,减少首次排尿后膀胱残余尿量,有效预防术后尿潴留的发生。

金属硫蛋白的分子生物学研究进展

本文对金属硫蛋白的基因结构、表达调控及染色体定位做了较详细的阐述，对当前有关金属硫蛋白的分子生物学新技术和新进展包括金属硫蛋白增强子运用、锌敏感蛋白的纯化及功能、缺如金属硫蛋白基因表达小鼠的建立和应用等做了综述，并对金属硫蛋白家族新成员——生长抑制因子做了简单介绍。

日目标教学法在中医院外科护生带教中的应用

临床护理实习为护理院校毕业的学生（一下简称护生）提供真实的临床实践机会,使其将专业理论知识应用于解决病人的临床实际问题,并学会适应和处理真实情景中的矛盾,是护理教育的重要环节。如何使护生在这个关键时期,学到更多的理论知识和操作技能,为今后走进工作岗位奠定坚实的基础,一直是各临床带教老师的研究目标。

霍乱弧菌和大肠杆菌O157∶H7检测芯片的制备

目的设计和制备快速检测霍乱弧菌和大肠杆菌O157∶H7基因芯片。方法选择霍乱弧菌特异的编码外膜蛋白的ompW基因和毒素ctxA基因以及大肠杆菌O157∶H7特异的编码菌体抗原rfbE、鞭毛抗原fliC和毒素SLT1、SLT2基因,设计引物和探针,并制备检测芯片,通过两次PCR扩增,制备荧光标记的靶序列,并与芯片进行杂交,检测霍乱弧菌和大肠杆菌O157∶H7。结果所有霍乱弧菌和大肠杆菌O157:H7菌株在采用单一和多重PCR两种方法制备的荧光标记靶序列与芯片杂交,均在芯片相应探针处出现阳性信号,非霍乱弧菌和非O157:H7菌株杂交结果均为阴性。结论基因芯片可以快速检测霍乱弧菌的O157∶H7。

某军区医院放射源全寿命管理现状分析

目的了解某军区医院放射源使用和管理的基本情况,为减少放射事故的发生,确保放射工作人员和公众的健康提供依据。方法依据国家相关法律法规,采用调查表、现场检查和防护监测的方法,对所有医院进行调查和监督监测。结果军区医院共有涉源单位20家,涉及多种放射性核素,放射源管理存在管理人员不专业,制度不落实,档案不健全,健康管理不规范和源存放和废源处置不规范等若干问题。结论加强自我管理和严格的卫生监督执法是放射源全寿命管理的关键。

检测差异表达基因技术的研究进展

随着差异表达基因检测技术的不断发展 ,建立了很多新的检测方法 ,本文对 m RNA差异显示技术 (DDRT-PCR)、c DNA示差分析技术 (c DNA- RDA )及抑制消减杂交技术 (SSH)的基本原理及工作流程作了综述 ,并介绍了它们的应用状况和特点 ,这些方法的建立和广泛应用可望发现更多的差异表达的基因 ,并通过其与表型的关系分析加快人们对基因功能的认识。

急性镉中毒大鼠睾丸氧化损伤机制的研究

目的 :探究急性镉中毒睾丸氧化损伤的特点以及睾丸对镉敏感的可能机制。 方法 :通过观察 MDA、还原态 GSH、SOD、CAT、GSHpx、MT等指标系统研究大鼠肝、睾丸两器官的细胞抗氧化体系在急性镉暴露后的时间变化规律。结果 :急性镉中毒使肝、睾丸两器官均发生严重的氧化损伤 ,细胞的抗氧化能力明显降低。但两者的变化规律不同 :肝脏在 6 h组 MT大量表达 (达正常值的 6 .7倍 )后 ,上述损伤逐渐减轻 ;而睾丸 MT表达的氧化损伤尽管在前 3h并不严重 ,但此后不断加剧。结论 :急性镉中毒时睾丸与肝氧化损伤规律明显不同 ,MT在睾丸中不能被诱导表达是睾丸对镉极其敏感的原因之一。