广谱高效Bt菌株的筛选及其杀虫蛋白基因的克隆

通过杀虫活性测定,获得1株对菜青虫、小菜蛾、二化螟等多种鳞翅目害虫均有较高杀虫活性的高效苏云金芽孢杆菌Bacillus thuringiensis(B t)菌株,命名为X-2.同时根据Cry1类蛋白N端部分氨基酸序列设计了1对简并引物,以苏云金芽孢杆菌X-2菌株质粒DNA为模板,应用PCR扩增技术得到一大小为3 468 bp的DNA片段(Cry1Ab X-2).该基因编码1 155个氨基酸,相对分子质量为130 780,等电点pI=5.06.序列比较表明该基因与Cry1Ab类基因高度同源(达95(以上),该基因已在GenBank中登录,登录号为AY847289.

苏云金杆菌以色列亚种几丁质酶基因的克隆及序列分析

从苏云金芽孢杆菌以色列亚种 (Bacillusthuringiensissubspisraelensis)中提取基因组DNA ,通过合成 1对特异性引物 ,用touchdownPCR的方法扩增几丁质酶ichi基因序列 (GenBank登录号 :AF5 2 6 379)。ichi序列全长为 2 5 70bp ,含有 1个 2 0 6 7bp的开放阅读框 (ORF) ,编码 6 88个氨基酸 ,推测分子量为 75 79kDa ,等电点pI=5 90的几丁质酶前体。序列和结构比较分析表明 :Ichi氨基酸序列与蜡状芽孢杆菌 (Bacilluscereus) 2 8 9几丁质酶CW、蜡状芽孢杆菌CH几丁质酶B及苏云金芽孢杆菌墨西哥亚种几丁质酶的同源性分别为 97 2 4 %、97 18%、97 6 3% ,而与苏云金芽孢杆菌巴基斯坦亚种的同源性只有 6 3 0 7%。Ichi编码区由分泌信号肽 (46AA)、催化区 (10 5AA)、粘蛋白Ⅲ型同源区 (74AA)及几丁质结合区 (40AA)组成。

黏质沙雷氏菌3种几丁质酶基因的克隆及功能预测

黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)可产生多种几丁质酶,为比较黏质沙雷氏菌Txch-1中几丁质酶系在结构上的差别,利用3对特异性引物从Txch-1中扩增获得了3种几丁质酶SeChiA、SeChiC、SeChi40基因,并进行生物信息学分析与比较。结果表明:SeChiA基因全长2 196 bp,含有1个1 692 bp的开放阅读框,编码563个氨基酸。SeChiA与Sanguibacter sp.C4几丁质酶(ABB91448)及多种沙雷氏菌属的几丁质酶A高度同源(≥94.8%),与多种昆虫几丁质酶也表现出较高的同源性(≥68.74%);结构域分析发现SeChiA含有分泌信号肽、N端结构域和催化域。SeChiC基因全长1 623 bp,含有1个1 443 bp的开放阅读框,编码480个氨基酸;SeChiC与S.marcescens不同菌株产生的几丁质酶C都表现出较高的同源性(≥95%);结构域分析发现SeChiC含有催化域、黏蛋白Ⅲ同源区及几丁质结合域。SeChi40基因全长1 501 bp,含有1个1 083 bp的开放阅读框,编码360个氨基酸;结构域分析发现它只含有催化域,而不含分泌信号肽和几丁质结合域。氨基酸序列比对发现SeChi40与其他几丁质酶的同源性较低(≤37.78%),可能是个新基因。

苏云金芽孢杆菌大型质粒DNA的小量提取

以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种、猝倒亚种及以色列亚种为材料,介绍了低拷贝大型质粒DNA的小量提取方法,该法采用PEG6000进行质粒纯化,省略了苯酚和氯仿抽提过程。实验证明,该法结果稳定,提取的质粒DNA产量和质量均符合大多数分子生物学实验的要求。

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种Cry1 Aa13基因的克隆及序列分析

根据GenBank中Cry1A类基因序列设计一对特异性引物,以苏云金芽孢杆菌猝倒亚种质粒DNA为模板,应用PCR扩增技术得到一大小约为3.6kb的DNA片段(Cry1Aa13).通过引物步行法测定该片段长3598bp,其中开放阅读框(ORF)长3540bp,编码1180个氨基酸,分子量为133.49kD,等电点pI=5.0.序列比较表明该基因与Cry1Aa类基因高度同源(达95%以上),该基因已在GenBank中登录,登录号为AF510713,并被Btδ 内毒素基因国际命名委员会正式命名为Cry1Aa13.

苏云金芽孢杆菌kurstaki亚种几丁质内切酶基因的生物信息学分析

以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种(Bacillus thuringiensissubspkurstaki)基因组DNA为模板,利用1对特异性引物通过Touchdown PCR方法扩增了长为2 576 bp的几丁质酶kchi基因序列(GenBank登录号:AY189740)。生物信息学分析发现:该序列包含1个完整的开放阅读框,编码688个氨基酸,推测是分子量约为75 820。等电点pI=5.89的几丁质酶前体。序列和结构比较分析结果表明:Kchi属于几丁质内切酶,包括几丁质酶催化区、粘蛋白Ⅲ型同源区和几丁质结合区3个结构域,在N端还有1个分泌信号肽。除与Bt巴基斯坦亚种几丁质酶同源性较低(相似性为61.3%)外,与Bt其他亚种的同源性都较高(≥92.0%)。

苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因cry1A的克隆及特征分析

苏云金芽孢杆菌猝倒亚种(Bacillusthuringiensissubsp.sotto)对鳞翅目幼虫有高毒力。根据cry1A类基因序列设计特异引物,应用PCR技术从该菌株中扩增得到一大小约为3 6kb的DNA片段。将获得的片段克隆至pGEM7zf中并转化大肠杆菌DH5α。在ABIPRISM377自动测序仪上对其5′及3′端进行部分测序,结果表明其核苷酸序列与cry1A基因高度同源。

高效防治烟粉虱的玫烟色棒束孢JZ-7的特性

为了寻求防治烟粉虱的有效措施,从自然罹病虫体上分离得到玫烟色棒束孢(Isaria fumosorosea),经室内毒力测定后,筛选出1株对烟粉虱具有较强致病力菌株JZ-7,27℃时菌丝生长和产孢量达到最大。YPD培养基上的菌丝生长最优,PDA、YM培养基次之,YG培养基最差;YPD培养基的产孢量最多,YM、PDA次之,YG最少。

一株高效防治甜菜夜蛾的莱氏野村菌的筛选

从罹病斜纹夜蛾中分离获得一杀虫真菌菌株Nr101,经ITS鉴定该菌为莱氏野村菌Nomuraea rileyi。室内采用浸渍法测定了其5个浓度(2.25×104-2.25×108个孢子/m L)对3龄甜菜夜蛾的毒力。施药后8 d后,2.25×108、2.25×107、2.25×106、2.25×105、2.25×104个孢子/m L浓度下,甜菜夜蛾3龄幼虫死亡率分别为100%、97.5%、86.67%、57.5%、43.33%。2.25×105、2.25×106、2.25×107、2.25×108的LT50分别为7.4165、5.7384、4.7908、4.3292 d。药后8 d LC50为6.2180×104,显示出很好的应用前景。

细菌几丁质酶的结构与功能研究进展

细菌几丁质酶因其潜在的应用价值而越来越受关注。细菌几丁质酶属于糖苷水解酶家族的18、19家族。典型的细菌几丁质酶包括将成熟几丁质酶分泌到胞外的信号肽、起催化作用的催化区、特异性结合氨基葡萄糖及几丁质的几丁质结合区以及一个功能尚不清楚的短的C端区域。本文重点介绍了细菌几丁质酶的结构域及其功能。

正常老年人与阿尔采默氏病人脑室、外侧裂、蛛网膜下腔及海马的CT对比测量

测量100例健康老年人及49例阿尔采默氏病病人头颅CT摄片.结果表明:病人脑室,外侧例、颞叶和额叶处蛛网膜下腔均扩大.尤以侧脑室下角显著扩大,海马明显缩小,较对照组有显著差异(P<0.001).提出:在弥漫性脑萎缩的CT诊断中,颞叶及海马萎缩,下角扩大(横径>7.7mm),有助于阿尔采默氏病人与正常老化的鉴别.

发展护理专业、探索中、高职《解剖学》教学的衔接

目前我国改革开放进入到一个崭新的阶段,我国进一步融入经济全球化.护理学科作为医药卫生事业的重要组成部分,已形成了独立的理论和技能实践体系,在保护人类健康中起着越来越重要的作用,成为不可替代的专业.

不同寄主植物上灰飞虱种群生命表的比较

为比较不同寄主植物上灰飞虱种群发展趋势,通过室内实验,组建了灰飞虱Laodelphax striatellus Fallèn在武育粳3号、盐稻8号、徐稻3号、Ⅱ优084、Ⅱ优42、扬麦12、稗草和千金子这8种寄主植物上的实验种群生命表;通过田间调查,比较了粳稻武运粳7号和籼稻Ⅱ优084上灰飞虱自然种群发生动态。不同寄主植物上灰飞虱实验种群生命表的比较结果表明,灰飞虱的若虫发育历期在稗草上最短,其次为扬麦12和粳稻上,而在杂交籼稻Ⅱ优084、Ⅱ优42和杂草千金子上的发育历期长达近30d;灰飞虱在稗草上的种群趋势指数亦最高,为45.57,其次为粳稻品种盐稻8号(39.36)、徐稻3号(34.54)和武育粳3号(31.70)上,其中盐稻8号与稗草上无显著差异;杂交稻Ⅱ优084和Ⅱ优42上灰飞虱的种群趋势指数显著低于粳稻上的;而灰飞虱在千金子上的种群趋势指数最低,仅为11.04。大田调查则表明,一定时期粳稻武运粳7号上灰飞虱种群个体数量显著高于籼稻Ⅱ优084上。研究表明灰飞虱的适宜寄主植物依次为稗草、粳稻品种和小麦。

防治灰飞虱高效活性化合物和杀虫单剂及复配剂研究

采用浸苗法测定了2种新型烟碱类活性化合物和4种杀虫单剂对灰飞虱3龄若虫的毒力,并对其中3种杀虫单剂的复配增效作用进行了研究。结果表明,在供试的6种化合物中,活性化合物SXSN001对灰飞虱的毒力最高,其他化合物按毒力由高到低依次为:噻虫嗪>SXSS001>吡虫啉>毒死蜱>吡蚜酮。将毒死蜱分别与吡蚜酮和噻虫嗪按一定比例复配后发现二者均表现出明显的增效作用,其中毒死蜱与吡蚜酮配比为9:20时,增效作用最明显,其校正毒力比为1.28,共毒系数为238.77;毒死蜱与噻虫嗪配比为16:1时,增效作用最明显,其校正毒力比为1.74,共毒系数为201.12。

不同药剂对灰飞虱成虫的作用特性研究

采用浸苗法测定了敌敌畏、乐斯本、锐劲特、高效氯氰菊酯、高效氟氯氰菊酯5种药剂对灰飞虱成虫的作用活性和作用速度以及敌敌畏对灰飞虱若虫的作用速度。结果表明,在5种药剂中,锐劲特的作用活性最高,对灰飞虱雄成虫的LC50仅为0.021 7 mg/L。其他依次为高效氯氟氰菊酯、高效氯氰菊酯、乐斯本和敌敌畏,敌敌畏的作用活性最低,LC50为63.99 mg/L。高效氯氟氰菊酯作用速度最快,对灰飞虱雄成虫的LT50仅为4.23 h,其他依次为高效氯氰菊酯、乐斯本、敌敌畏和锐劲特,锐劲特的作用速度最慢,LT50为17.45 h。敌敌畏在田间常用剂量4 000 mg/L(按80%EC 3 750 m l/hm2对水750 kg计算)下,对灰飞虱若虫的作用速度很快,对4龄灰飞虱若虫的平均致死时间仅为40.5 m in。

核型多角体病毒对不同日龄斜纹夜蛾成虫生殖的影响

核型多角体病毒不仅直接感染幼虫,也与宿主成虫的生殖密切相关。本文研究了斜纹夜蛾成虫在不同日龄摄入斜纹夜蛾核型多角体病毒(Sl NPV)时对其生殖力和卵巢发育的影响。结果表明,斜纹夜蛾成虫在不同日龄通过补充营养摄入病毒后,其生殖力所受影响因成虫日龄不同而异,随日龄增加,病毒的影响减弱。羽化后第1天即1日龄成虫摄入病毒,其平均产卵量和残留卵量分别为221.6和163.7粒/雌,均显著低于对照(390.5和237.5粒/雌),交配次数也显著降低;4日龄成虫摄入病毒,生殖力未受影响。成虫寿命均未受到病毒的影响。研究还发现斜纹夜蛾卵巢发育分成5级;病毒对1日龄雌蛾卵巢长度有影响,雌蛾在摄入病毒1 d后时,卵巢管长度显著低于对照,但此后又与对照无差异,病毒对2日龄成虫卵巢管长度无显著影响。

混合病毒在不同宿主中交替繁殖对病毒毒力的影响

研究了混合病毒在不同宿主中交替繁殖对病毒毒力的影响,选用对甜菜夜蛾Spodopteraexigua(Hüber)较专化的苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(AcNPV)和对斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)较专化的斜纹夜蛾核多角体病毒(SlNPV),按多角体数量1∶1混合后分别连续感染或交替感染甜菜夜蛾和斜纹夜蛾,比较各代病毒对两种夜蛾的活性。测定结果表明:SlNPV中国株和AcNPV混合,起始感染甜菜夜蛾,再在斜纹夜蛾和甜菜夜蛾中交替繁殖后,F4代斜纹夜蛾病毒(由斜纹夜蛾中收集的病毒)对3龄甜菜夜蛾幼虫的致死率极显著高于F2代斜纹夜蛾病毒,F3代甜菜夜蛾病毒(由甜菜夜蛾中收集的病毒)对斜纹夜蛾的致死率也显著高于F1代甜菜夜蛾病毒;混合病毒起始感染斜纹夜蛾,再经甜菜夜蛾和斜纹夜蛾交替繁殖后,斜纹夜蛾病毒对甜菜夜蛾的毒力以及甜菜夜蛾病毒对斜纹夜蛾的毒力也都显著提高。交替传代后的病毒比同代次连续传代后的病毒对非宿主的毒力显著提高,并且它们对原宿主的毒力未有减弱。AcNPV和SlNPV日本株混合病毒在甜菜夜蛾和斜纹夜蛾中交替繁殖后也表现出对非宿主毒力的提高。表明混合病毒在两种不同原宿主中交替繁殖比其在同种宿主中连续繁殖后对非繁殖原宿主的毒力显著提高。

转苏云金杆菌杀虫晶体蛋白基因抗虫水稻的GUS和PCR辅助选择

报道了转基因抗虫水稻克螟稻 1号 (Ts 9)与非转基因恢复系川恢 94 9、H97810 17及保持系 2 12B等杂交F3 代的GUS和PCR检测。GUS检测的结果 ,Ts 9与非转基因川恢 94 9、H97810 17杂交F3 代有较多的GUS阳性植株。GUS阴性植株与阳性植株的分离比约为 2∶1。用设计合成的一对引物进行PCR扩增的结果 ,大部分GUS检测呈阳性的植株及一个保持系 2 12B与Ts 9杂交F3 代植株获得了大小约 12 0 0bp的PCR产物 ,即cryIA (b)基因片段。试验结果表明PCR是比GUS叶片染色法更为灵敏、准确、方便的检测方法。

斑痣悬茧蜂和斜纹夜蛾核多角体病毒的互作及氟啶脲对寄生蜂的影响

探寻不同生物防治资源协同控制害虫的可行性，研究了斑痣悬茧蜂和斜纹夜蛾核多角体病毒（SIN．PV）联合作用于斜纹夜蛾时两者的相互影响，以及昆虫生长调节剂氟啶脲对斑痣悬茧蜂的影响。结果表明，住SIN—PV浓度为10^6PIB／ml、10^7PIB／ml和10^8PIB／ml3个浓度下，无论是病毒和寄生蜂一同处理，还是先寄生蜂处胛1d后再病毒处理，斑痣悬茧蜂对S1NPV的侵染力和侵染速度均无显著影响。联合处理时病毒对寄生蜂也无不良影响，蜂后代结茧数与对照无差异，仅缩短了先寄生蜂后10^6PIB／mlSINPV处理组寄生蜂从卯到茧的发育历期。．从氟啶脲对斑痣悬茧蜂的影响来看，寄生蜂寄生经1．25mg／L氟啶脲处理后的甜菜夜蛾，其后代发育历期和结茧均未受影响，仅羽化受影响。寄生蜂成虫直接经10mg／L、20mg／L和40mg／L（田间推荐剂量）氟啶脲处理后，均对后代结茧和发育历期等无显著影响。表明斑痣悬茧蜂可较安全地与一定浓度范围斜纹夜蛾核多角体病毒或氟啶脲耳天合用于夜蛾类害虫的控制。