亚洲柑桔间座壳菌生长条件及纳米试剂室内毒力研究

为明确重庆市长寿区柑桔砂皮病菌的生理生化特征及生长条件,筛选新型高效纳米药剂,在“爱媛38”杂柑园采集砂皮病叶片样品,分离纯化菌株,应用形态学方法和rDNA-ITS序列分析方法鉴定分离菌株,并研究其生物学特性;采用菌丝生长速率法测定3种纳米试剂及3种杀菌剂对分离菌株的抑制率,测定毒力。结果表明,分离鉴定获得病菌1株,综合菌株的培养性状、形态特征和rDNA-ITS序列比对结果,鉴定菌株为亚洲柑桔间座壳菌Diaporthe citriasiana。不同培养基培养的菌株生长性状有明显差异,菌株对甘油、麦芽糖和可溶性淀粉等碳源的利用效果佳、菌丝扩展速度快,菌株对蛋白胨氮源的利用效果最好;菌株在15~30℃范围内均能生长,最适生长温度为20~30℃,致死温度为35℃;菌株在pH值5~9均能生长,最适pH值为5~7;菌株只在光暗交替培养条件下才出现花瓣状轮纹状菌落。SiO_(2)纳米试剂、土霉素碳量子点(OTC-CQDs)纳米试剂和星状阳离子聚合物(SPc)纳米载体皆对菌株具有较强的抑制作用,SiO_(2)纳米试剂的抑制作用相对最强、EC_(50)为1.024μg/mL,SPc的抑制作用相对最弱、EC_(50)为6.928μg/mL。40%吡唑醚菌酯·喹啉铜SC、32%噻呋·氟环唑SC和430 g/L戊唑醇SC对菌株具有强抑制作用,EC_(50)值范围为1.024~1.240μg/mL。

马铃薯晚疫病菌对甲霜灵抗性的快速检测方法

为快速检测马铃薯晚疫病菌——致病疫霉Phytophthora infestans对甲霜灵的抗性,基于已知致病疫霉RPA190基因的T1145A变异引起的F382Y氨基酸点突变与甲霜灵抗性有关,通过设计4对特异性引物F382Y-F1/F382Y-R、F382Y-F2/F382Y-R、F382Y-F3/F382Y-R和F382Y-F4/F382Y-R建立等位基因特异性PCR(allele specific-polymerase chain reaction,AS-PCR)快速分子检测法,其中F382Y-R引物在4对引物里保持不变,并分析所建分子检测法的特异性和灵敏度。结果表明,正向特异性引物F382Y-F2、F382Y-F3和F382Y-F4的3′末端在致病疫霉抗甲霜灵菌株原有核苷酸突变位点1145A(对应引物为F382Y-F1)的基础上,再人工引入第1144位的核苷酸突变,将1144T分别突变成1144G、1144C和1144A,并优化退火温度和特异性引物与内参引物ITS1/ITS4比例,最终确定最适退火温度分别为54、60和58℃,特异性引物与内参引物最适浓度比例均为5∶1。以该3条引物对应的3对特异性引物和内参引物ITS1/ITS4组成的3组多重AS-PCR引物对甲霜灵敏感和抗性菌株具有良好的特异性,敏感菌株的扩增产物含1条879 bp的内参片段,抗性菌株的扩增产物为1条879 bp的内参片段和1条461 bp的目的片段。3组AS-PCR检测体系均具有较高的灵敏度,其中引物F382Y-F4/F382Y-R对致病疫霉DNA的检测灵敏度达0.4 pg/μL,引物F382Y-F2/F382Y-R和F382YF3/F382Y-R的检测灵敏度达4 pg/μL。