赣州市城镇居民地中海贫血分子流行病学调查

目的调查赣州市城镇居民地中海贫血（地贫）基因携带率、突变类型及分布特征。方法 2011年8～11月连续采集3 655例赣州市城镇健康体检者外周血进行红细胞参数分析,以平均红细胞体积（MCV）〈82 fL或平均红细胞血红蛋白含量（MCH）〈27 pg为地贫表型阳性筛查指标。阳性标本用导流杂交技术检测5种α-和15种β-珠蛋白基因突变。结果表型筛查阳性标本771例,检出α-地贫246例,β-地贫82例,α-复合β-地贫8例。检出5种α-地贫等位基因-SEA/、-α^3.7/、-α^4.2/、αα^QS/和αα^CS/;检出6种β-地贫突变类型ⅣSⅡ-654（C〉T）、CD41-42（-CTTT）、-28（A〉G）、CD17（A〉T）、CD27-28（＋C）、-29（A〉G）。赣州市城镇居民地贫基因携带率为9.44%,其中α-地贫6.98%,β-地贫2.46%。结论查明赣州市城镇居民地贫的分子流行病学特征,为地贫防控提供了参考资料。

利用荧光共振能量转移技术研究活细胞TLR4与MD-2作用结构域

脂多糖(LPS)的识别和信号转导是宿主发生防御反应的关键,Toll样受体4(TLR4)与髓样分化蛋白-2(MD-2)形成复合物在LPS的识别及其信号转导中发挥了重要作用.研究TLR4与MD-2结合的功能结构域,对于深入了解LPS信号转导机制及其内毒素休克的防治具有重要意义.运用基于强度的三通道荧光共振能量转移技术(FRET)及基因突变和转染技术,研究了活细胞TLR4与MD-2作用的结构域.结果表明:N端Glu24～Met41缺失使TLR4与MD-2结合能力明显下降;LPS刺激后TLR4聚合迅速增加,而缺失Glu24～Met41的TLR4不能聚合.上述结果提示,TLR4的Glu24～Met41不仅是结合MD-2的区域,并且还参与了LPS刺激后TLR4的聚合作用.

丝裂原活化的蛋白激酶在高迁移率族蛋白1诱导内皮细胞释放炎性细胞因子中的作用

目的研究重组人高迁移率族蛋白1(HMGB1)诱导内皮细胞释放趋化因子白介素-8(IL-8)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的规律及其与脂多糖(LPS)的协同作用;探讨丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)信号通路在上述作用中的地位。方法用LiquiChip液相蛋白芯片系统检测不同浓度重组HMGB1(0~75ng/ml),或者HMGB1(15ng/ml)刺激后不同时间点人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分泌IL-8、MCP-1的水平变化以及HMGB1(15ng/ml)与LPS(10ng/ml)共同刺激后IL-8、MCP-1的水平变化;探讨MAPK信号通路在HMGB1诱导内皮细胞释放趋化因子中的作用时首先加入抑制剂SB203580(20mol/L)、PD98059(20mol/L)和JNKinhibitorII(50nmol/L)预处理细胞1h,再加入HMGB1和LPS刺激。结果在HMGB1蛋白刺激后3~6h,IL-8和MCP-1水平开始增加,12~24h持续增高(P<0.01);随着HMGB1浓度的增加,IL-8和MCP-1水平也明显升高,与基础值相比差异有统计学意义(P<0.01)。如果用LPS(10ng/ml)和...

髓样分化蛋白-2在识别和转导内毒素信号中的作用

脂多糖(LPS)通过TLR4介导细胞炎症反应.研究表明,髓样分化蛋白-2(MD-2)通过与TLR4形成复合物参与LPS诱导的细胞信号过程.TLR4/MD-2复合物中的MD-2结合LPS后,引起TLR4低聚化,进而激发下游信号.MD-2合成后,大部分在内质网/高尔基体和TLR4结合,然后以TLR4/MD-2复合物的形式在细胞表面表达.这既能调节TLR4的胞内分布,又能辅助TLR4识别LPS.还有一部分MD-2释放到血浆中,形成可溶性的MD-2(sMD-2).sMD-2在CD14参与下,能结合血浆中的LPS,形成LPS-sMD-2复合物从而辅助只表达TLR4而不表达MD-2的细胞识别LPS,但过度表达的sMD-2又能抑制LPS信号.MD-2在TLR4介导的内毒素识别和信号转导过程中发挥了重要的调控作用.

赣州市地中海贫血基因突变类型研究

目的:了解赣州市地中海贫血的基因突变型及构成比。方法:收集2012年7月至2013年7月本院地贫基因诊断样品425例,采用Gap-PCR和PCR-反向斑点杂交检测α-和β-珠蛋白基因突变。结果:检出141例α-地贫、113例β-地贫和10例α-复合β-地贫,其中Hb H病38例,重型β-地贫11例。检出5种α-地贫等位基因--SEA/(67.02%)、-α3.7/(18.32%)、-α4.2/(6.81%)、ααCS/(5.24%)和ααQS/(2.62%)。检出8种β-地贫突变类型IVSII-654(C>T)(40.88%)、CD41-42(-CTTT)(35.77%)、-28(A>G)(10.22%)、CD17(A>T)(8.03%)、CD27-28(+C)(2.19%)、CD 71-72(+A)(1.46%)、βeM(G>A)(0.73%)、IVS1-1M(0.73%)。结论:本研究发现赣州市地贫基因突变类型及构成比具有种族和地域特性,为赣州市地贫防控提供了参考。

环介导等温扩增技术在现场工作中的应用进展

核酸扩增技术是病原微生物检测和遗传性疾病诊断的重要武器，其中常规PCR和实时荧光定量PCR已在临床检验中得到广泛的应用，但这些技术操作复杂，对实验室人员、仪器和环境的要求较高。无法在基层和现场工作中灵活使用。环介导等温扩增（100p—mediatedisothermalamplification．LAMP）是日本学者Notomi等于2000年发明的核酸扩增技术。与PCR技术相比，具有操作简单快速、对仪器和样本质量要求低等特点．尤其适用于现场工作使用。

2015～2017年非发酵菌临床分布特点和耐药性变迁

目的了解非发酵革兰阴性杆菌的临床分布特点和耐药情况。方法回顾性分析赣南医学院第一附属医院2015年1月至2017年12月临床分离的非发酵革兰阴性杆菌,采用法国生物梅里埃公司VITEK-2 COMPACT进行细菌鉴定和体外药敏试验,K-B纸片扩散法作补充,并按2015年美国临床和实验室标准化协会(CLSI)判读药敏试验结果。结果共检出非发酵菌4 029株,其中鲍曼不动杆菌居首位1 719株,其次是铜绿假单胞菌和嗜麦芽寡养单胞菌,分别1 471株和501株。分离的非发酵菌主要来自呼吸道,占72.6%,其次为血液(7.7%)、尿液(7.7%)和伤口分泌物(6.6%)。科室分布主要为重症监护室(39.7%),其次为神经外科(17.2%)和呼吸内科(10.1%)。药敏结果显示,鲍曼不动杆菌对青霉素类、头孢菌素类、喹诺酮类、氨基糖苷类药物呈高度耐药性,尤其对亚胺培南的耐药率维持在75%～81%的高水平,多重耐药和泛耐药情况严重;铜绿假单胞菌对常用的抗菌药物敏感性较好,但对亚胺培南的耐药率有逐年上升的趋势,从2015年的22.3%上升到2017年的39.8%。结论非发酵菌的检出率较高,多重耐药情况严重,应引起临床和感染管理科的重视,做好院内感染监控,防止院内感染暴发流行。

用FRET技术研究TLR4和MD-2的相互作用

目的利用荧光共振能量转移(FRET)技术在活体细胞研究人Toll样受体(TLR)4与髓样细胞分化蛋白2(MD-2)的相互作用。方法用PCR方法扩增TLR4编码序列和MD-2编码序列(不包括信号肽序列)并分别亚克隆入带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白和增强型黄色荧光蛋白表达载体(pECFP-C1-SP,pEYFP-C1-SP)中,重组质粒经酶切、序列鉴定分析后分别或共同转染HEK293细胞,用荧光显微镜观察荧光蛋白表达和分布情况,并用常规的方法和受体光漂白的方法对共表达青色荧光蛋白(CFP)-TLR4和黄色荧光蛋白(YFP)-MD-2的细胞进行FRET分析。结果重组质粒在HEK293细胞中得到表达,仅转染pECFP/TLR4或pEYFP/MD-2的细胞可见青色或黄色荧光主要分布在胞质内,以核周较多;而共转染pECFP/TLR4和pEYFP/MD-2的细胞可同时检测到青色和黄色荧光,主要分布在细胞膜,同时胞质也有少量表达。无论是用常规的方法还是受体光漂白的方法,对共表达CFP-TLR4和YFP-MD-2的细胞进行FRET分析结果表明有FRET现象的发生,提示TLR4和MD-2有相互作用并形成复合物。结论本研究为TLR4和MD-2在活体细胞中的相互作用提供了直接的证据。

CEA、NSE、CYFRA21-1、ProGRP联合检测在肺癌诊断中的临床价值

目的探讨血清癌胚抗原(CEA)、特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)、神经元胃泌素释放肽前体(ProGRP)肿瘤标志物联合检测在肺癌诊断中的应用价值。方法以618例肺癌患者(342例腺癌患者、184例鳞癌患者、92例小细胞肺癌患者)和101例肺良性疾病患者,83例健康体检者共同为观察对象,分别检测血清CEA、CYFRA21-1、NSE、和ProGRP水平。结果肺癌组4种标志物水平显著高于肺良性疾病组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。腺癌患者血清CEA水平明显高于鳞癌、非小细胞肺癌和小细胞肺癌,差异有统计学意义(P<0.05)。鳞癌CYFRA21-1较腺癌和小细胞肺癌高,差异有统计学意义(P<0.05)。ProGRP水平小细胞肺癌组显著高于鳞癌和腺癌组,差异有统计学意义(P<0.05)。通过四个项目的联合检测诊断肺腺癌、肺鳞癌、小细胞肺癌的各项指标敏感度可提高为85.38%、86.95%、94.56%,明显高于单一标志物检测,但特异性不及某些标志物单一检测。结论肿瘤标志物联合检测在肺癌筛查中应用价值较高,能明显提高肺癌的检出率,有利于肺癌的早期诊断,可以广泛应用于临床中。

黏液型铜绿假单胞菌的临床分布和耐药特点分析

目的分析黏液型铜绿假单胞菌(PA)的耐药特点,为临床合理选用抗菌药物提供参考依据。方法收集该院2017年1月至2018年12月送检的临床标本中分离的PA,采用K-B纸片扩散法检测PA对临床常用抗菌药物的耐药性。结果临床送检的各类标本中共分离出PA 1245株,其中黏液型PA 40株(3.2%),非黏液型PA1205株(96.8%)。40株黏液型PA除1株来自尿液标本以外,其余39株均来自呼吸道标本;来源患者的疾病类型以慢性阻塞性肺疾病(COPD)和支气管扩张症所占比例最高,主要分布于呼吸内科(52.5%),其次为重症监护室(ICU,12.5%)。黏液型PA对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为25.0%和17.5%,对临床其他常用抗菌药物的耐药率均不高,为2.5%~25.0%;与非黏液型PA相比,黏液型PA对哌拉西林的耐药率更低,对头孢吡肟、左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率更高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黏液型PA对临床常用抗菌药物的总体耐药率并不高,但值得注意的是,检验科在审核报告时应提示临床医生此类细菌可能形成生物膜,治疗时需考虑进行有效的抗PA生物膜治疗。

赣南地区客家人重型地中海贫血基因突变类型分析及防治的研究

目的:探讨赣南地区客家人重型地中海贫血基因突变类型及其比例,为本地区地中海贫血的防治、指导遗传咨询及流行病学研究提供一定的参考数据。方法:选择2009年1月-2019年1月赣南医学院第一附属医院收治的客家人重型地中海贫血患者81例,采用跨越断裂点PCR(Gap-PCR)法检测缺失型α-地中海贫血,采用PCR-反向点杂交(PCR-RDB)法检测α-地中海贫血点突变和β-地中海贫血点突变,对我院81例客家人重型地中海贫血患者进行地中海贫血基因检测分析,计算基因突变频率。结果:在81例客家人重型地中海贫血患者中,共检出4种β-地中海贫血(纯合子)基因型,依次是CD41-42(-TTCT)(19例)、β-IVS-II-654(C→T)(9例)、-28M(A→G)(1例)、CD17(A→T)(1例);12种β-地中海贫血(杂合子)基因型,依次是CD41-42(-TTCT)/β-IVS-II-654(C→T)(15例,29.41%),β-IVS-II-654(C→T)/β-28M(A→G)(13例,25.49%);CD41-42(-TTCT)/β-28M(A→G)(9例,17.65%);β-IVS-II-654(C→T)/CD27/28(+C)(3例,5.88%);CD41-42(-TTCT)/CD27/28(+C)(3例,5.88%);β-28M(A→G)/CD17(A→T)(2例,3.92%);CD41-42(-TTCT)/CD17(A→T)、CD41-42(-TTCT)/Βe、β-IVS-II-654(C→T)/β-29、βCD17(A→T)/CD71-72(+a)、βCD71-72/β-28M(A→G)、β-28M(A→G)/β-IVS-II-654(C→T)(各1例,各占1.96%)。β纯合地中海贫血合并α地中海贫血基因3例,β杂合地中海贫血合并α地中海贫血基因5例。结论:江西赣南地区客家人重型β-地中海贫血发病率较高,其基因突变类型分布情况如下:β-地中海贫血(纯合子)以CD41-42(-TTCT)基因型为主;β-地中海贫血(杂合子)以CD41-42(-TTCT)/β-IVS-II-654(C→T)及β-IVS-II-654(C→T)/β-28M(A→G)两种基因型为主;β复合α地中海贫血以CD41-42(-TTCT)基因为主。

肾功能对血清ProGRP的影响分析

目的探讨肾功能对血清胃泌素释放肽前体(Pro GRP)水平的影响。方法以2015年1月至2016年12月赣南医学院第一附属医院肾内科收治的146例非肿瘤性肾功能损害患者为研究对象,检测其血清胃泌素释放肽前体(Pro GRP)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、尿素(Urea)、肌酐(CRE)、胱抑素C(Cys C)等指标。先采用Cockcroft-Gault公式估算研究对象内生肌酐清除率(Ccr),然后再根据Ccr将他们分为5组:Ccr>80ml/min为A组(29例)、Ccr 51~80ml/min为B组(27例)、Ccr 20~50ml/min为C组(28例)、Ccr 10~19ml/min为D组(32例)、Ccr<10ml/min为E组(30例)。结果⑴不同Ccr组之间患者血清Pro GRP水平比较差异有统计学意义(F=17.476,P<0.01),两两比较显示E组血清Pro GRP水平显著高于A组、B组、C组、D组(P<0.05),D组血清Pro GRP水平显著高于A组、B组、C组(P<0.05),A组、B组、C组之间血清Pro GRP水平两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。⑵研究对象血清Pro GRP与血清Urea(r=0.395,P<0.01)、CRE(r=0.510,P<0.01)、Cys C(r=0.575,P<0.01)呈显著正相关,与Ccr(r=-0.558,P<0.01)呈显著负相关。血清NSE与血清Urea(r=0.108,P>0.05)、CRE(r=0.068,P>0.05)、Cys C(r=0.067,P>0.05)、Ccr(r=0.010,P>0.05)无显著相关性。结论肾功能受损对血清Pro GRP水平存在影响,用Pro GRP辅助诊断小细胞肺癌(SCLC)时应排除肾功能损害的影响。

宫颈癌全外显组测定及易感基因研究

目的临床研究微小RNA-96(MiR-96)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Twist与Slug等易感基因在宫颈癌中的表达水平。方法选择2010年3月至2014年5月在该院就诊的宫颈癌患者128例为观察组,同时选择健康者100例作为对照组。测定MiR-96、HIF-1α、Twist与Slug等在宫颈癌组织中的表达水平。(1)HIF-1α:采用HIF-1α试剂盒对单克隆抗体HIF-1α进行检测,按照试剂盒的要求进行染色及制备组织标本,显微镜下观察阳性细胞率大于10%者为阳性;(2)MiR-96、Twist与Slug:用Trizol试剂按照试剂盒的说明提取总RNA,将RNA进行反转录,通过PCR定量检测MiR-96、Twist与Slug的相对表达值。结果(1)HIF-1α在正常组织中无阳性表达,而在肿瘤组织中阳性表达率远高于正常组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);(2)MiR-96在肿瘤组织中的相对表达值远高于正常组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);(3)Twist与Slug基因在肿瘤组织中的相对表达量远高于正常组织,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论与正常组织相比,MiR-96、HIF-1α、Twist与Slug基因在肿瘤组织中有显著的高表达。

血清sFlt-1和PIGF检测早期诊断女性产前子痫的价值研究

目的分析检测血清血管内皮生长因子受体-1(sFlt-1)和胎盘生长因子(PIGF)对于早期诊断女性产前子痫前期的价值。方法选取本院2017年1月至2019年12月收治的94例产前子痫前期患者的血清标本作为观察组,将妊娠20~33+6周58例患者设为早发组,将妊娠34周~分娩前36例患者设为晚发组;选取同时段100名健康孕妇作为对照组。检测3组血清sFlt-1与PIGF水平及sFlt-1/PIGF比值,并比较3者对子痫前期的诊断价值。结果3组血清sFlt-1、PIGF及sFlt-1/PIGF比较差异有统计学意义(P<0.05),其中早发组血清sFlt-1与sFlt-1/PIGF均显著高于晚发组及对照组,且晚发组高于对照组(P<0.05);早发组血清PIGF显著低于晚发组及对照组,且晚发组低于对照组(P<0.05);轻度子痫前期患者的血清sFlt-1水平及sFlt-1/PIGF显著低于重度子痫前期组,其血清PIGF水平显著高于重度子痫前期组(P<0.05);sFlt-1、PIGF及sFlt-1/PIGF的ROC曲线下面积均>0.80,sFlt-1/PIGF诊断的灵敏度及特异度均高于sFlt-1、PIGF(P<0.05),总体诊断价值优于单项血清指标诊断。结论血清sFlt-1与PIGF水平在产前子痫患者体内变化明显,sFlt-1/PIGF可作为早期诊断产前子痫的重要指标,临床价值高。

人BNIP3基因在Hela细胞中的表达及定位

目的:构建BNIP3-HA融合蛋白的真核表达载体,观察BNIP3在Hela细胞中表达及其定位。方法:采用两步克隆法将HA和BNIP3的编码序列以融合表达的形式克隆到载体pcDNA3上,随后转染Hela细胞。BNIP3经AlexaFluor 488免疫荧光标记,线粒体用MitoFluor Red 589染色后在荧光显微镜下观察BNIP3的表达和定位。结果:重组质粒经酶切、聚合酶链反应(PCR)和测序鉴定构建正确,并在Hela细胞中能够表达,在荧光显微镜下观察,BNIP3-HA融合蛋白分布于线粒体。结论:成功构建BNIP3-HA融合蛋白表达载体并在Hela细胞线粒体中表达。

一种新方法检测阴道毛滴虫的临床应用

目的探讨常规湿片与聚合酶链反应技术(PCR)在阴道毛滴虫检测中的应用价值。方法选取2018年1月至2019年6月本院收治的疑似阴道毛滴虫感染患者200例作为研究对象,分别应用常规湿片与PCR检测,并采用PCR技术扩增滴虫目的基因,后行琼脂糖凝胶电泳,依据扩增与电泳结果判断PCR诊断阴道毛滴虫感染的有效性。通过于其他常见阴道微生物PCR结果比较,判断设计引物具备的特异性;依据模板DNA的稀释倍数判断引物的敏感性。结果本研究中,测序检测阳性80例,阴性120例,常规湿片检查检出阳性45例,PCR检查检出阳性79例,漏诊1例。PCR检测毛滴虫阳性率高于常规湿片检查,差异具有统计学意义(c2=16.854,P<0.05);以阴道常见微生物DNA作为模板扩增结果均呈阴性;滴虫DNA稀释1000倍后仍可见明显扩增。结论阴道毛滴虫检测中PCR的应用效果较好,具备较高的特异性与敏感度,可作为批量检测的常用方法。

微生物检验进修生临床教学实践与体会

进修学习是医务人员学习新知识、新方法、新技术、充实理论知识和提高操作技能的重要途径,我院作为教学医院,检验科除了临床工作外,进修生的临床带教也是其重要工作任务之一,我院检验科充分利用教学医院的优势,结合基层医院进修生的特点,通过建立个性化的培训方案,运用案例教学和疑难病例讨论,强化进修生的专业理论知识和实践操作技能,提高进修生的临床沟通能力,以达到提高进修生综合能力的目标。

产前诊断del(10)(q11.21q21.2)1例

10q11.2的间质缺失病例和临床结果已有充分报道[1-5]。Holden等[6]描述了1例新发10号染色体长臂间质缺失9岁女孩的病例,其核型为46,XX,del(10)(q11.2q21),临床表现为腭裂、双侧上睑下垂、发育迟缓、轻度张力减退、语言功能缺陷、传导性听力损失、智力低下和癫痫发作。同样,Lobo等[7]描述了1例染色体断裂点相似的12个月大的女孩,核型为46,XX,del(10)(q11.1q22.1),临床表现为面部畸形、斜视、精神运动迟缓、肌张力减退及室间隔缺损。在此,本研究报告了1例没有明显表型异常的胎儿及母亲del(10)(q11.21q21.2)。

LncRNAs在鼻咽癌中作用机制的研究进展

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是中国常见的恶性肿瘤之一,其发病机制通常与环境因素、EB病毒感染等有关。最近越来越多的研究发现,一些异常表达的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)在鼻咽癌的发生发展起重要作用。LncRNAs是一类长度>200个核苷酸,缺乏蛋白质编码能力,可以调控很多基因的表达。尽管很多证据表明LncRNAs在鼻咽癌中的重要性,但目前还没有系统性地阐明这些lncRNAs与鼻咽癌的关系。这篇文章总结LncRNAs在鼻咽癌中的作用机制,并介绍LncRNAs可能作为鼻咽癌诊断、预后生物标志物以及潜在的治疗靶标。

模拟微重力对K562细胞增殖的影响

目的:研究微重力环境"航天贫血症"发生的相关机制。方法:采用美国国家航空航天局提供的旋转式细胞培养系统(RCCS-1)模拟微重力环境,培养人白血病K562细胞。用牛巴氏计数板计数细胞,用流式细胞术检测细胞周期,用Western-bloting方法检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达及其磷酸化水平。结果:模拟微重力环境培养的K562细胞的增殖速度显著低于地面普通培养对照组;同时还显著抑制细胞周期进程,使其停滞在G0/G1期;模拟微重力环境培养的细胞磷酸化ERK1/2表达随时间延长逐渐下降。结论:模拟微重力环境使细胞周期阻滞于G0/G1期,可能是由模拟微重力作用下ERK1/2磷酸化水平下降所致。