环孢素A和他克莫司的高效液相色谱-串联质谱检测及其室内质控评价

目的建立环孢素A和他克莫司治疗药物监测的高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)质控方法,应用Westgard多规则理论对质控样品进行评估。方法利用HPLC-MS/MS建立人全血中环孢素A和他克莫司的血药浓度检测方法。对治疗药物监测过程中低、中、高3个浓度水平的质控样品进行统计分析,绘制Levery-Jennings和Z分数质控图,应用Westgard多规则理论进行室内质控评估。结果环孢素A和他克莫司的线性范围分别为10.40~1040.00和0.50~49.50 ng·mL^(-1),定量下限分别为10.40和0.50 ng·mL^(-1),提取回收率分别为108.61%~113.24%和101.99%~109.37%,内标归一化的基质因子分别为106.68%~111.27%和95.70%~97.81%,日内和日间的准确度及精密度均小于15.0%,其他参数也均符合生物样本定量分析要求。Levery-Jennings和Z分数质控图显示,2022年第三季度26组质控样品的检测结果提出警告4次(违反12s规则),未出现失控现象。结论建立的环孢素A和他克莫司治疗药物监测室内质控体系能够有效保障血药浓度检测的准确性。

18β-甘草次酸哌嗪衍生物A30抑制SMMC-7721肝癌细胞增殖

目的研究18β-甘草次酸(18β-GA)哌嗪衍生物A30抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖的机制。方法实验分为对照组、18β-GA组、A30组,采用MTT法检测SMMC-7721细胞增殖,流式细胞术检测SMMC-7721细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测胱天蛋白酶8(caspase-8)和Bcl2蛋白水平。结果 (2~128)μg/m L A30均可抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈剂量依赖性。18β-GA和A30均可诱导SMMC-7721细胞凋亡,并且A30处理细胞的凋亡率显著高于18β-GA组。与对照组相比,18β-GA和A30组的G2/M期细胞显著增加,caspase-8蛋白水平均显著升高,而Bcl2水平均显著降低。结论 A30能抑制SMMC-7721细胞增殖,抑制效果强于18β-GA,与降低细胞Bcl2水平和增加caspase-8水平有关。

贝伐珠单抗在我院抗肿瘤治疗中的应用分析

目的:了解贝伐珠单抗在抗肿瘤治疗中的应用情况,以促进该药的临床合理使用。方法:回顾性收集2011年1月-2015年12月我院接受贝伐珠单抗治疗的265例肿瘤患者的病历资料,对患者的肿瘤类型、贝伐珠单抗的临床地位、治疗方案、用药次数、治疗周期进行统计和分析,计算主成分参数并进行主成分分析和聚类分析。结果:265例患者共涉及18类恶性肿瘤,以结直肠癌(48.68%)、卵巢癌(20.75%)、肺癌(9.43%)为主;贝伐珠单抗抗肿瘤治疗用于一线、二线、三线的比例分别为10.28%、26.39%、23.61%;其肿瘤治疗涉及肿瘤类型主要为结直肠癌、卵巢癌、肺癌;其抗肿瘤治疗的肿瘤类型可聚为4类,结直肠癌为一类,卵巢癌为一类,肺癌为一类,其他为一类。贝伐珠单抗与化疗药物联用方案有347例次(90.84%),贝伐珠单抗单用方案有35例次(9.16%);在贝伐珠单抗与化疗药物联用方案中,以与含氟尿嘧啶等抗代谢类药物联用(50.54%)、与含紫杉类药物联用(18.05%)、与铂类药物联用(16.50%)为主。有1例患者最多使用了69次贝伐珠单抗,有44例患者各使用了1次;有1例次治疗了51个周期,有85例次治疗了1个周期,以治疗1~4个周期最为常见。结论:贝伐珠单抗作为首个上市的抗血管生成药物,在临床恶性肿瘤(实体瘤)的治疗中具有一定的地位,已成为结直肠癌、卵巢癌和肺癌的一线治疗药物,但由于其药理作用的局限性,该药与化疗药物的联用仍是主要方向。

基于GEO数据库的近端与远端结肠癌特征基因生物信息学研究

目的:通过分析近端与远端结直肠癌的差异基因集和其集中的关键通路,区分不同部位结肠癌的分子表达特征基因谱。方法:利用GEO数据库中高通量基因芯片数据筛选出具有结肠癌患者肿瘤部位近远端信息的芯片。采用GO基因功能注释和KEGG通路富集分析,筛选出可表征远端与近端结肠癌生物特性的特征基因簇和通路,并进行蛋白质相互作用网络可视化分析。结果:经差异基因分析后,发现不同部位结肠癌基因表达具有显著差异,且主要存在于一些重要的肿瘤相关信号通路,如Wnt信号通路,细胞外基质相关通路和免疫调控通路等。结论:本文利用生物信息学方法,从多种角度定义了近端和远端结肠癌的差异分子表达特征,为结肠癌的精准治疗提供理论依据。

基于生物信息学的胃癌特征基因网络关键节点及预后关联分析

目的:本研究旨在利用生物信息学筛选胃癌的特征基因,探索胃癌的恶性机制。方法:通过GEO数据库筛选胃癌相关基因芯片作为训练集,并利用GEO2R工具分析胃癌组织相较于正常组织的差异基因,进而在验证集患者中对所筛选基因进行验证;采用String数据库计算其蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络。根据Cytoscape软件的Centiscape等插件分析PPI网络中的关键节点,分析蛋白相互作用相关性;并利用DAVID数据库对差异基因和PPI关键模块基因进行基因功能富集及注释。随后对关键节点基因进行生存分析。结果:所筛选出的63个特征差异基因对胃癌与正常组织区分度良好,主要参与调控细胞外基质受体相互作用、PI3K-AKT信号通路等。PPI网络中关键节点调控肿瘤增殖、转移。对关键节点基因进行生存性分析发现,ITGB1、COL1A2表达高的患者,其生存率远低于低表达患者(P<0.05)。结论:本文可为寻找胃癌发生发展的关键基因,探索胃癌治疗新靶点提供一定的理论依据。

基于网络药理学探讨脑心通胶囊治疗冠心病的作用机制

目的:研究脑心通胶囊治疗冠心病的活性成分、作用靶点及通路,并探讨可能的分子作用机制。方法:基于网络药理学的研究策略,根据文献中的高分辨质谱数据收集脑心通胶囊的化学成分并进行ADME(包括药物吸收、分布、代谢、排泄)分析;利用TCMSP、STITCH、Binding DB数据库获取脑心通胶囊候选活性成分的靶点;采用TTD、Drug Bank、PharmGKB、MalaCards、CTD数据库收集冠心病相关的靶点,与成分靶点比对筛选脑心通胶囊治疗冠心病的潜在作用靶点;采用Cytoscape软件构建"活性成分-潜在靶点"网络并分析关键活性成分和关键靶点;利用R软件的cluster Profiler包对潜在靶点进行基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果:通过筛选共获得82个脑心通胶囊的候选活性成分,对应560个作用靶点,与199个冠心病相关靶点进行对比筛选出62个交集靶点,作为脑心通胶囊治疗冠心病的潜在作用靶点。通过构建"活性成分-潜在靶点"网络获得26个关键活性成分和15个关键靶点。GO功能注释和KEGG通路分析的结果表明,脑心通胶囊治疗冠心病主要涉及了动脉粥样硬化、血小板激活、血液循环、类固醇代谢以及晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素-17(IL^(-1)7)、低氧诱导因子-1(HIF-1)、C型凝集素受体、血管内皮生长因子(VEGF)等信号通路。结论:脑心通胶囊中的槲皮素、染料木素、山奈酚、芹菜素、芦丁等活性成分,主要作用于前列腺素G/H合成酶2(PTGS2)、前列腺素G/H合成酶1(PTGS1)、凝血因子2(F2)、肾上腺素能受体β2(ADRB2)、雌激素受体α(ESR1)、一氧化氮合酶3(NOS3)等靶点,通过抗血小板聚集、抑制炎症反应、抗心肌缺血等途径发挥治疗冠心病的作用。本研究揭示了脑心通胶囊通过多成分-多靶点-多途径治疗冠心病的作用特点,为其临床应用及深入研究其药理作用机制提供重要的理论参考。

抗肿瘤药物在伴第三间隙积液患者中的药动学研究进展

第三间隙积液(third space fluid,TSF)是晚期恶性肿瘤常见的并发症之一,主要包括恶性胸腔积液、恶性腹腔积液等。TSF是影响抗肿瘤药物药动学(pharmacokinetics,PK)的潜在因素。药物可经体循环分布于TSF,对TSF产生治疗作用;可能导致血药浓度减少,或可降低全身抗肿瘤疗效;若在TSF中蓄积则可能引发毒性反应。本文综述抗肿瘤药物在恶性肿瘤伴TSF患者中的PK研究进展,总结药物在血液和TSF中的PK特征,以期为患者安全、有效地应用抗肿瘤药物提供参考。

从肺癌组织提取高纯度总RNA方法的优化及应用

目的通过对传统TRIzol提取组织中RNA的方法进行优化,建立一种较为简便、高效、经济的提取方法,并用优化后的方法检测非小细胞肺癌组织中ERCC1、RRM1和BRCA1的m RNA表达水平。方法非小细胞肺癌的组织标本(包括肿瘤组织和正常组织)36例,采用传统和优化后的方法提取肺癌组织及正常组织中RNA,以SYBR Green荧光实时定量PCR分析各组织中ERCC1、RRM1、BRCA1以及管家基因GAPDH的m RNA表达水平。结果传统方法的RNA浓度和纯度分别为(0.76±0.07)mg·m L?1和1.87±0.04,优化方法的RNA浓度和纯度分别为(1.12±0.07)mg·m L?1和1.95±0.03;琼脂糖凝胶电泳表明RNA没有降解,各个引物的熔解曲线均呈单峰,特异性良好。实时荧光定量显示,肺癌组织中ERCC1、RRM1和BRCA1的相对m RNA表达高于正常组织;ERCC1和BRCA1在不同病理类型(腺癌、鳞癌)的肿瘤组织中表达无显著性差异,RRM1在肺鳞癌中的表达显著高于腺癌(P<0.05);不同性别中的基因表达均无显著性差异。结论相比传统方法,利用优化后的方法提取样本的总RNA浓度、纯度和完整性均显著提高,能满足各种基因表达和定量检测实验的需要。非小细胞肺癌中ERCC1、RRM1和BRCA1的表达水平与肿瘤增殖活性密切相关,与临床肿瘤的病理类型也有一定的相关性。

基于GEO数据库的HPV阳性口咽癌特征基因生物信息学研究

目的通过分析HPV阳性与阴性口咽癌患者基因芯片数据,寻找差异基因及其关键通路,区分不同HPV感染状态下口咽癌的分子表达特征基因谱。方法利用GEO数据库中高通量基因芯片数据库筛选出口咽癌患者具有HPV感染状态信息的芯片。采用GO基因功能注释和KEGG通路富集分析,筛选出可表征不同HPV感染状态口咽癌生物特性的特征基因簇和通路,并进行蛋白质相互作用网络可视化分析。结果经差异基因分析后,发现HPV感染状态可影响口咽癌的生物学特征,并显著改变一些重要的肿瘤信号通路,如Wnt信号通路和PI3K-Akt信号通路等。结论本研究利用生物信息学方法,从多种角度定义了口咽癌不同HPV感染状态下的分子表达特征,为口咽癌的精准治疗提供理论依据。

川芎嗪诱导小鼠肝药酶Cyp3a11的作用及其机制研究

目的考察川芎嗪对小鼠肝药物代谢酶Cyp3a11(CYP3A4同源基因)的作用及相关机制。方法 24只8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组和川芎嗪低、中、高剂量(25,50,100 mg·kg-1)组,连续灌胃给药15 d。以RT-PCR法检测肝脏Cyp3a11m RNA表达。采用差速离心法提取肝微粒体,以Cyp3a11经典底物咪达唑仑进行孵育,HPLC-MS/MS检测肝脏Cyp3a11活性。以双荧光报告基因法分析川芎嗪对CYP3A4转录活性的影响。结果川芎嗪可诱导小鼠肝脏中Cyp3a11的m RNA表达,且诱导作用呈剂量依赖性增加。高剂量组可诱导Cyp3a11的代谢活性升高。川芎嗪可通过核受体PXR途径激活CYP3A4启动子转录活性。结论川芎嗪对CYP3A4同源基因Cyp3a11的表达和活性具有一定的诱导作用,提示在临床使用过程中可能存在潜在的药物相互作用风险。

基于GEO芯片数据的肝癌特征基因生物信息学及预后关联性分析

目的通过生物信息学方法利用GEO芯片数据分析肝癌组织中的特征基因及预后的相关性。方法在GEO数据库中获取肝癌芯片数据,并利用GEO2R工具分析肝癌组织与正常肝组织之间的差异表达基因;利用GO数据库和KEGG数据库对差异表达基因进行富集和功能注释;基于STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白质互相作用网络(protein-protein interaction,PPI),分析其关键基因;用在线工具Kaplan Meier-Plotter对这些关键基因进行生存分析;用The Human Protein Atlas数据库对这些关键基因在肝癌组织中的蛋白质表达进行免疫组化分析。结果共鉴定出338个差异表达基因,其中97个为上调基因,241个为下调基因。其中上调的差异表达基因显著富集在细胞核有丝分裂、细胞分裂、有丝分裂成对染色单体分离、成对染色单体凝聚等生物过程;下调的差异表达基因显著富集在环氧化酶P450途径、氧化还原过程、外源性药物分解代谢过程等生物过程。根据PPI网络,对关键模块的24个关键基因进行鉴定,发现这些关键基因的高表达与肝癌患者的生存率低有相关性,并截取关键差异表达基因免疫染色代表性图像。结论本研究发现的关键差异基因有助于更全面地了解肝癌发生的分子机制,可作为肝癌预后的生物标志物以及潜在的肝癌治疗分子靶点。

胃癌新辅助化疗耐药机制及治疗策略研究

目的利用生物信息学筛选影响胃癌化疗耐药的特征基因,深入探讨化疗耐药的分子机制,为胃癌的化疗提供新策略。方法在GEO数据库筛选胃癌DCS方案(多西他赛+顺铂+替吉奥)耐药表达谱芯片,利用GEO2R工具筛选胃癌耐药组织特征基因;构建差异基因的蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络;并分析PPI网络的关键节点和稳定模块,进而对差异基因和关键节点及模块基因进行功能富集及注释;再对差异基因进行化合物靶点模拟,筛选出潜在药物。结果筛得胃癌化疗耐药差异基因共609个,构建PPI网络的关键节点为ACLY和AKT1。差异基因GO功能富集与KEGG通路富集结果显示,主要集中在免疫及肿瘤生长相关通路。C-MAP分析结果提示7个候选化合物吻合度评分>0.9。结论本研究利用生物信息学筛选了影响胃癌化疗耐药的特征基因,深入探讨化疗耐药的分子机制,为胃癌的化疗提供了新策略。

小春花药材质量标准研究

目的制定并考察小春花药材质量标准,为进一步开发小春花药材提供基础。方法采用紫外-可见分光光度法建立小春花中总黄酮的含量测定方法;采用HPLC同时测定小春花药材中槲皮素和山奈酚的含量。结果建立小春花总黄酮的测定方法,槲皮素为在30.23~181.40μg·m L^(-1)呈良好线性关系,R^2=0.998 4;确定药材中槲皮素、山奈酚的含量测定方法,槲皮素在2.64~21.12μg·m L^(-1)呈良好的线性关系,R^2=0.999 8,山奈酚在2.00~16.00μg·m L^(-1)呈良好的线性关系,R^2=0.999 9;小春花总黄酮以槲皮素计不得<0.2‰,山奈酚计不得<0.6‰。结论本研究对小春花药材进行质量控制,提升并建立了新的小春花药材质量标准。

肿瘤微环境对肿瘤代谢的影响及研究进展

肿瘤能量代谢的重要特征为其主要通过糖酵解供能,即众所周知的Warburg效应。肿瘤微环境不仅为肿瘤生长提供能量支持,而且调控肿瘤信号通路,促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。全文就肿瘤微环境及其对肿瘤代谢的调控作用进行综述。

中药抗阿霉素心脏毒性的中医理论及其药理作用研究进展

阿霉素是治疗多种实体瘤和血液恶性肿瘤最有效、应用最广的药物之一。然而,它会诱发累积性和剂量依赖性的心脏毒性不良反应。阿霉素心脏毒性的发生机制涉及氧化应激、炎症、线粒体损伤、铁代谢、钙离子超载等多种因素。目前,临床上笔者尚未见能够减轻阿霉素诱导的心脏毒性且不影响其抗肿瘤活性的较有效药物。中药因具有不良反应少、药理作用广泛等特点,在防治阿霉素心脏毒性方面具有很强的潜力。根据阿霉素心脏毒性气阴两虚、心阳不振的病因病机,益气类、养阴类、回阳温阳类、补血活血类中药被证实能够有效防治阿霉素心脏毒性,其机制与抗氧化应激、抑制炎症反应、拮抗细胞凋亡等有关。文章就近年来中药提取物、中药制剂及中药成分在防治阿霉素心脏毒性方面的研究进行综述,以期更好地为临床中药与阿霉素的合理应用提供参考。

基于Westgard多规则理论建立甲氨蝶呤治疗药物监测的室内质控评估方法

目的 建立甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)血药浓度检测方法,并应用Westgard多规则理论对MTX血药浓度监测的室内质量控制进行评价。方法 利用LC-MS/MS建立MTX血药浓度检测方法并进行方法学验证。对实际治疗药物监测过程中低、中、高3个浓度的MTX质控样品的检测结果进行统计分析,绘制Levery-Jennings和Z分数质控图,运用Westgard多规则法对质控图进行评价。结果 MTX的定量下限为10.4 ng·mL^(–1),线性范围为10.4~5 200 ng·mL^(–1),各浓度日内、日间准确度及精密度均<15%,提取回收率为102.43%~103.26%,基质效应为113.58%~118.33%,符合生物样本定量分析的要求。对Levery-Jennings和Z分数质控图进行Westgard多规则质控评价发现,2020年11月期间MTX的血药浓度监测提出警告2次(违反1_(2s)规则),其余样品均在控。结论 建立的MTX血药浓度检测方法专属性好,灵敏度高,快速准确,且该方法在MTX血药浓度的长期检测中具有较好的稳定性。应用质控图及Westgard多规则质控评价方法对保证MTX血药浓度检测的可靠性具有重要意义。