C_(60)对体外培养癌细胞的光致作用研究

研究结果表明用C60 磷脂酰胆碱与体外培养的HeLa细胞融合后 ,以 4 0 0 0lx光强度激发C60(C60 浓度 2 0mg/L)对HeLa细胞具有显著的光致杀伤作用 .生化测定证实光激发C60 导致膜蛋白巯基含量减少、膜脂过氧化、丙二醛含量增高 ,SDS PAGE证明膜蛋白交联 ,荧光偏振显示膜流动性降低 ,电镜超微膜结构破坏 ,经MTT法检测 ,大部分细胞死亡 .C60 的强烈光致作用证实了Arbogast等认为光激发C60 可产生单线态氧的观态 .

发菜的生态条件及其规律分析

本文研究了甘肃永登和内蒙阿拉善左旗的发菜生态条件,发现了发菜生长中的水分节律现象。发菜生于干燥的高原荒漠草原地带,属大陆性气候。其年平均气温为4.5-8℃≥10℃积温为2231-2800℃年,年温差大,昼夜温差明显。年平均降水量为201-290mm,集中在6-8月。年平均相对湿度为45-58%,有露水的天气约80天。土壤主要是由第三纪红土母质发育而来的棕钙土,营养贫乏,石灰质沉积明显,呈强碱性反应。年日照时数3000±300小时,辐射强烈。发菜在结构和生理上表现出强烈的旱生生态适应性,包括它的耐旱、耐贫瘠、嗜阳、嗜碱以及对温度变化的适应性强。发菜生长中具有明显的水分节律现象。在5-10月,在暂短的降雨和露水后,藻体迅速吸取水分而得以生长。尔后,水分又很快被蒸发,藻体变干,生长停滞。发菜在这种湿润(?)干燥的反复节律中得到不断的断续生长和积累,从而完成发菜在干燥条件下的年生长过程。

C_(60)对小鼠S_(180)肉瘤光动力学作用模型的建立

为验证C60 对活体肿瘤的光动力学损伤作用,我们从两方面进行实验 :C60 对荷瘤小鼠的S180实体瘤的光动力学杀伤作用和C60 对离体S180 肿瘤细胞的光动力学杀伤作用。在小鼠的瘤体上注射C60 光敏剂 ,在511nm和578nm混合黄绿色激光照射下 ,激发C60,产生大量的单线态氧 ,杀伤活性肿瘤。在激光光强为500mW ,C60 浓度为30μg/ml时 ,荷瘤小鼠寿命平均延长5天 ,瘤径减小1cm,瘤重减轻0.8克 ,在活体水平上验证了C60 的光动力学作用 ;另外,在离体的S180 肿瘤细胞中加入细胞培养物和C60 脂质体光敏剂 ,用碘钨灯照射激发C60。经MTT法和FDA -PI双色荧光分光光度法检测 ,离体S180 肿瘤细胞也明显被杀伤。C60 具有强的光敏剂作用 ,它不仅在活体水平上可以杀伤S180 实体瘤而且对离体的S180 实体瘤细胞有强的杀伤作用。

对Folin-酚法测定藻类蛋白质的改进

在实验室中用以测定藻类蛋白质的方法很多,其中,Folin-酚法是应用最广泛的一种微量测定方法。该法综合了Folin和双缩脲法的优点,其所显的颜色比酚试剂单独使用时增加3—15倍,而灵敏度比双缩脲法增加近100倍。但是,Folin-酚法在测定藻类蛋白质时存在着样品的蛋白质提取问题,藻类细胞一般具有坚厚的细胞壁。

银对几种藻类的毒性浓度及其积累

银对水生生物是一种有毒金属.本文以不同浓度的AgNO_3加入培养液中,通过对藻类生长的测定研究了银对三种常贝藻类的毒性浓度。1-2.5ppm的银对球衣藻和斜生栅藻是安全浓度范围,当银增至10ppm时,这两种藻类被明显致毒,生长繁殖被完全抑止.颤藻在10~3ppm银浓度中生长正常,对银具有较大的耐性,同时,以原子吸收光谱测定证明每0.2克(干重)颤藻可从这一浓度的含银水体中吸收10.17微克银,对银具有一定的积累能力.本文试验结果可供考虑含银水质排放标准、含银水体的生物净化及银的生物回收可能性之参考.

蛋白质工程进展

蛋白质工程进展钱凯先，张欣欣（浙江大学生物科学与技术系，杭州）蛋白质工程是第二代基因工程，它是通过修饰蛋白质的基因或改变结构来获得具有新特性的蛋白质，具有重大的科学和应用价值。野生型微生物都需经过一系列诱变、筛选．通过改变蛋白质来提高产量才能应用于特...

盐泽螺旋藻变种的生长和生化特性

采用1984年在美国加利福尼亚大学研究和培育成功的盐泽螺旋藻变种，经扫描电镜、生物量测定和生化分析，进一步研究其基本特性。结果表明，其藻丝呈紧密的逆时针向等宽螺旋结构、它在36℃的平均生长速率（K）=0．12,产量可达48．4g／（m2·d）（干重）；蛋白质含量平均为50.47％；氨基酸17种；铁超氧物歧化酶含量为0.05mg／g（鲜重）；β-胡萝卜素含量为3.5mg／g（干重）。以上结果证明，盐泽螺旋藻变种具有优良的性状，可以应用于大规模生产开发。

人体与动物细胞大量培养的进展

人体与动物细胞是许多重要生化产物的来源。20多年来,随着体外细胞培养研究的发展,已逐步建立了以人体与动物细胞的大量培养来获取各种疫苗、人体干扰素、单克隆抗体、胰岛素、生长激素、血纤维溶血因子、凝血因子等一系列产物,而成为细胞工程的一个重要系统。例如,早在70年代,Hayflick等就从人胚组织中分离和建立了两个细胞株——MRC-5和WI-38,它们被广泛应用于病毒疫苗的细胞培养商业生产,Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞,并通过杂交瘤细胞的大量培养来制备单克隆抗体等等。

国外螺旋藻的生产和应用

目前世界上尚有很大部分地区的人们生活在饥饿和营养不良之中。近几十年来,寻求蛋白质新的来源已成了一个世界性的重大研究课题。许多国家注意到用某些微生物来生产单细胞蛋白(Single cell protein,简称SCP),以丰富人类所需的蛋白质。这不仅是因为这些微生物比传统农作物的单位产量高得多。

绿球藻TC品系提取液促进鼠肝癌细胞的生长

以长期热诱导建立了一种绿球藻(Chlorococcum infusioum)的嗜温品系,简称CTCS。在PBS(磷酸缓冲液)中的CTCS细胞提取液明显促进H_4肝癌细胞株在DME培养基和0.5％FSB(胎牛血清)中的生长。当CTCS提取液蛋白质浓度为12.4微克/毫升时,可使H_4肝癌细胞数量在6天中比对照(不加CTCS提取液)增加12.5倍。

鞭枝藻与其突变体提取液对人膀胱癌细胞生长的影响

本文以EMS(乙基甲烷磺酸盐,Sigma)诱变嗜温的层理鞭枝藻(Mastigocladus laminosus),并经9T24C人膀胱癌细胞生长选择获得突变体。在0.3％FBS(胎牛血清)+DME/F12培养液中加入100μg/ml层理鞭枝藻突变体提取液可促进9T24C癌细胞数在6天中增长3.1倍,而在同样条件下野生型层理鞭枝藻的提取液则对9T24C癌细胞无明显刺激生长作用。这种未知的刺激癌细胞生长的活性物质分子量>3500。

苏云金芽孢杆菌(Bt)晶体毒蛋白基因在烟草叶绿体中的表达

将全长３．５ｋｂ的Ｂｔ基因３'端缺失，得到长为２．１ｋｂ、１．８ｋｂ的基因。分别将这３个长度 （１．８ｋｂ２．１ｋｂ、３．５ｋｂ）的基因置于水稻叶绿体ｐｓｂＡ基因的启动于和终止子调控之下，并与选择 标记基因ａａｄＡ（编码氨基糖苷－３'－腺苷酸转移酶，具壮观霉素抗性）表达盒相连５以烟草叶绿 体基因ｔｒｎＨ－ｐｓｂＡ－ｔｒｎＫ为同源片段，构建成叶绿体转化载体ｐＢＴ３、ｐＢＴ８和ｐＢＴ２２。用基因枪 把Ｂｔ基因导入烟草叶绿体中，以壮观霉素筛选，获得转化再生植株。经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ、Ｗｅｓｔｅｒｎ检测 分析证明Ｂｔ基因已整合进入烟草叶绿体基因组中并得到表达。且子代呈现壮观霉素抗性，即 外源基因得到稳定的遗传。利用转基因植株叶片对棉铃虫进行杀虫实验，有些转化植株表现 出较强的抗虫性。总体上来说，转Ｂｔ全长基因的烟草植株，其杀虫效果最好，其余两种差异不 大。首次报道将Ｂｔ基因成功转入高等植物叶绿体并获得表达。

丙肝病毒融合抗原基因NS_3-C定点整合入衣藻叶绿体基因组的研究

用ＰＣＲ 方法从丙型肝炎病毒（ＨＣＶ） ｃＤＮＡ 文库中克隆了两段ＤＮＡ 片段，即ＨＣＶ 基因组非结构ＮＳ３区抗原基因（约０．７ ｋｂ）和核心抗原Ｃ区抗原基因（约０．６ ｋｂ）的ｃＤＮＡ 片段。在两段ｃＤＮＡ 间加入连接肽Ｓｅｒ－ Ｐｒｏ－ Ｇｌｙ－ Ｓｅｒ 的密码子序列，构建成融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ。将该融合基因与衣藻叶绿体基因ａｔｐＡ 的启动子和ｒｂｃＬ 基因的３′末端连接，得到丙肝病毒融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ表达盒，再将该表达盒与选择标记基因ａａｄＡ 表达盒和衣藻叶绿体基因组同源片段连接，构建成衣藻叶绿体转化载体ｐＳＳ６。基因枪法转化衣藻叶绿体，经壮观霉素筛选获得转化再生的单藻落，对转基因衣藻的ＰＣＲ 和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 杂交分析表明，融合抗原基因ＮＳ３－ Ｃ已整合到衣藻叶绿体基因组中。

除草剂抗性基因bar导入烟草叶绿体

将编码Phosphinothricin acetyltransferase的bar基因与水稻叶绿体psbA基因的启动子和终止子构建成表达盒,连同烟草叶绿体基因组同源片段rpl2-trnH-psbA和trnK-ORF509A以及选择标记基因aadA一起构建成烟草叶绿体转化载体pTZBA.基因枪法转化烟草叶片,经壮观霉素筛选获得转化再生植株.分别以1.0kb的叶绿体同源片段trnK-ORF509A和0.6kb的bar基因为探针,对转基因烟草叶绿体DNA进行Southern杂交检测,证明外源基因已整合入烟草叶绿体基因组中.抗性试验表明,转基因植株具备除草剂(PPT)抗性.

藻蓝蛋白的抗癌活性研究

活细胞脱氢酶催化四唑盐 (MTT)还原 ,生成溶于有机溶剂的蓝色甲月赞结晶 ,可定量反映细胞生长 .流式细胞技术可根据细胞中 DNA的质量分数来检测其所处的细胞周期 .采用上述两种方法 ,研究了藻蓝蛋白 (PC)对 He La细胞的抗癌活性 .实验证明 ,PC对 He La细胞生长有明显的抑制作用 ,当 PC浓度为 80 mg/L时对癌细胞的抑制率达 31.0 %.初步认为这种抑制机理为 :PC使 He L a细胞由合成期(S)或分裂期 (M)向 G1期转变和积集 ,细胞 DNA合成衰减 .

病毒诱导草鱼产生干扰素活性因子的研究

采用细胞病变抑制法测定了病毒诱导前后草鱼外周血中干扰素的活性变化。结果表明，经病毒诱导的草鱼血清中出现明显的干扰素抗病毒活性，２５℃水温下诱导３天，其活性达到高峰，在草鱼细胞中的效价（Ｌｏｇ２ＣＰＥＩ５０／０．１ｍｌ）可达１１．０８±０．５８以上。草鱼血清干扰素具有１０００００ｇ离心不沉降，耐热，在ｐＨ２．０－１０．０范围内活性稳定，抗ＤＮａｓｅ和ＲＮａｓｅ，对胰蛋白酶、糖苷酶和ＮａＩＯ４敏感等性质，其抗病毒作用依赖于细胞内ＲＮＡ和蛋白质的合成。在鱼类细胞中具有抑制不同病毒的能力，但在人、哺乳类、鸟类和贝类等细胞中无抗病毒作用，表现出抗病毒的广谱性和相对的种属特异性。

高纯度藻蓝蛋白分离纯化及光谱特性研究

藻蓝蛋白（ＰＣ） 具有特征性吸收光谱和荧光光谱， 是一种新颖的荧光分子探针． 为了获取高纯度ＰＣ， 经过反复探索研究建立了ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００ 、ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５、ＨＡ、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ２００ 的分离纯化程序。此法效果理想： ＰＡＧＥ显示为单条电泳带； 纯度值（ Ａ６１５／ Ａ２８０） 高达１４，

提高产抗生素链霉菌紫外诱变正变率的研究

将UV诱变了的产抗生素链霉菌(Streptomycessp.)AP19 1菌株之孢子,置于适宜的生长温度27℃与接近抑制生长的胁迫温度33℃下培养,结果表明:在33℃下生长获得的子代菌株中,产抗生素水平超过其出发菌株的正向突变体所占的比例,明显比在27℃下培养的高。27℃下培养,正向突变体占总子代菌株数的25.8%,而在33℃下培养则为58.1%。用17种随机引物对出发菌株与UV诱变子代菌株进行总DNA的RAPD测验证明,在接近抑制生长的温度33℃下培养获得的子代,发生在其DNA水平上的变异程度比在27℃的要高得多。这一方法能较大幅度提高链霉菌紫外诱变育种的工作效率,同时也为链霉菌经紫外诱变后突变形成机制的进一步研究提供了新途径。

磁杆菌HMB-1的磁小体特性及其合成条件的研究

从西安段家坡黄土剖面６１个土样中，分离纯化出一株磁杆菌ＨＭＢ１，并对其磁性特点及磁小体的合成条件进行了研究；同时用Ｘ射线能谱分析测定了磁小体的组成成分，主要为铁和钴。

鲈PPARγ基因的克隆、组织表达及其抗体制备

根据GenBank上其他物种的PPARγ基因序列设计兼并引物,从鲈肝脏cDNA中扩增得到鲈PPARγ基因cDNA序列1588bp,分析表明该基因的开放阅读框为1569bp,编码522个氨基酸,理论等电点6.06,分子量59.02ku。将鲈PPARγ氨基酸序列比对后发现与欧洲鲈同源性最高,为93.1%;与金头鲷的同源性为92.3%,与人同源性也达到为61.8%。用RT-PCR分析该基因组织表达模式,结果表明,鲈PPARγ主要分布于肝脏、鳃和脂肪组织。将鲈PPARγ开放阅读框1569bp序列克隆至原核表达载体pET-28a(+)构成pET-28a-PPARγ1569重组体,并转化大肠杆菌BL21(DE3),以终浓度1mmol/L的IPTG对其进行诱导表达4h,SDS-PAGE电泳分析表明,pET-28a-PPARγ1569菌株在66ku处有1条特异的蛋白带,Western-blotting检测表明该蛋白为鲈PPARγ融合蛋白。用镍离子亲和柱纯化的鲈PPARγ融合蛋白免疫小鼠得到其多克隆抗体。用间接ELISA法检测鲈PPARγ抗体的抗体效价约为1∶16000。实验结果为进一步研究鲈PPARγ蛋白的生物学特性及功能奠定了基础。