分离、培养仔猪关节软骨细胞,从中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA,与pM D 18-T载体相连,转化JM 109大肠杆菌,提取质粒,鉴定所扩增片断为目的片断后,培养仔猪关节软骨细胞,并在培养液中添加不同水平的铜,分别在0、12、24、48 h...分离、培养仔猪关节软骨细胞,从中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA,与pM D 18-T载体相连,转化JM 109大肠杆菌,提取质粒,鉴定所扩增片断为目的片断后,培养仔猪关节软骨细胞,并在培养液中添加不同水平的铜,分别在0、12、24、48 h培养结束时,收集细胞,提取细胞总RNA。采用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA,以-βactin为内参,用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析,以TGF-β的cDNA的光密度值与-βactin的cD-NA的光密度值之比作为TGF-βmRNA基因表达的相对水平。结果表明,细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中TGF-βmRNA基因表达,其中以31.2μm o l/L效果最佳。展开更多
从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA,根据已发表的猪的G hre lin mRNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了282 bp的片段。将该片段克隆于pM D-18T载体后进行序列分析,确认PCR产物为G hre lin cD-NA。从阳性克隆中提取质粒,经N...从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA,根据已发表的猪的G hre lin mRNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了282 bp的片段。将该片段克隆于pM D-18T载体后进行序列分析,确认PCR产物为G hre lin cD-NA。从阳性克隆中提取质粒,经N heⅠ和X hoⅠ双酶切,回收282 bp的目的片段,定向克隆到pET-28a表达载体中,提取质粒并再次转化到BL 21(DE 3)中,成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出猪G hre lin基因的表达。展开更多
文摘分离、培养仔猪关节软骨细胞,从中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA,与pM D 18-T载体相连,转化JM 109大肠杆菌,提取质粒,鉴定所扩增片断为目的片断后,培养仔猪关节软骨细胞,并在培养液中添加不同水平的铜,分别在0、12、24、48 h培养结束时,收集细胞,提取细胞总RNA。采用RT-PCR法扩增出TGF-β的cDNA,以-βactin为内参,用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析,以TGF-β的cDNA的光密度值与-βactin的cD-NA的光密度值之比作为TGF-βmRNA基因表达的相对水平。结果表明,细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中TGF-βmRNA基因表达,其中以31.2μm o l/L效果最佳。
文摘从猪下丘脑、胃等组织中提取总RNA,根据已发表的猪的G hre lin mRNA序列设计合成引物,通过RT-PCR进行cDNA扩增,获得了282 bp的片段。将该片段克隆于pM D-18T载体后进行序列分析,确认PCR产物为G hre lin cD-NA。从阳性克隆中提取质粒,经N heⅠ和X hoⅠ双酶切,回收282 bp的目的片段,定向克隆到pET-28a表达载体中,提取质粒并再次转化到BL 21(DE 3)中,成功地筛选出阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出猪G hre lin基因的表达。