干酪乳杆菌发酵人参茎叶提取物对锦鲫免疫及抗氧化功能的影响

为了研究干酪乳杆菌发酵人参茎叶提取物对锦鲫的免疫及抗氧化功能的影响,实验先用3%、4%、5%、6%(记为L3、L4、L5、L6)的干酪乳杆菌菌液发酵人参茎叶提取物,再分别添加到基础饲料(记为L0)中,对初始平均体重为(25.00±0.05)g的锦鲫进行为期5周的饲喂实验。周期性取样,采集锦鲫血清、肝胰脏、中肾、脾脏和全肠,以检测相关免疫指标的变化。在饲喂实验结束后进行嗜水气单胞菌攻毒保护性实验。结果显示,与L0组相比,L5组碱性磷酸酶(AKP)、免疫球蛋白M(IgM)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量显著升高,L5组丙二醛(MDA)含量显著低于L0组。各组织中IL-10、TNF-α、TGF-β、IFN-γ、IL-1β基因表达水平均有不同程度的升高,表现出时空差异,其中IL-10的基因水平表达升高更为敏感。在攻毒保护性实验中,L5组的存活率达到30%,相较于其他组而言存活率最高。研究表明,本实验条件下,当干酪乳杆菌的接种量为5%时,人参茎叶提取物发酵对锦鲫的应用效果最好,能够提高锦鲫抗氧化能力及免疫相关基因的表达,并对降低嗜水气单胞菌的感染有较好的预防作用。

中国不同来源狂犬病病毒野毒株G基因主要功能区的序列分析

对我国不同来源的狂犬病病毒野毒株８２０２、ＢＲＶ、ＭＲＶ的Ｇ基因４０５～１１４６位核苷酸序列，进行了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增、克隆和序列测定，并应用计算机对这３个毒株的测定序列和已发表的中国人源毒株（ＣＧＸ８９）的相应序列进行了分析比较。结果表明，这４个中国不同来源狂犬病病毒的Ｇ基因同源性较低，８２０２与ＢＲＶ的核苷酸同源性只有７９．５％，与ＭＲＶ的氨基酸同源性亦只有８２．２％；同一地区自不同动物分离的ＭＲＶ株与ＢＲＶ株其亲缘关系较远。４个野毒株的糖基化位点和主要的诱导中和抗体产生的抗原决定簇内某些氨基酸亦不同，从而证明我国存在亲缘关系较远的狂犬病野毒株。

河南牛、鼠源狂犬病毒G基因主要功能区的比较分析

本研究对从我国河南牛狂犬病疫区分离的狂犬病病毒牛源毒ＢＲＶ和鼠源毒ＭＲＶ的糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区进行反转录—聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增、克隆、测序和两者的比较分析。分别得到了每个毒株Ｇ基因膜外区７４２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段（位于Ｇ基因４０５～１１４６号碱基）和推导的氨基酸序列，它含有可以诱导产生中和抗体的多个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合位点。计算机的比较分析表明两者在这一基因片段的同源性很低，核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为８１．１％和８５．４％，主要抗原决定簇ＡｇⅡ的２０２位和ＡｇⅢ的３３２位氨基酸两者不同，并且ＭＲＶ在２０２位形成糖基化位点。研究结果证明ＢＲＶ和ＭＲＶ是亲缘关系较远的毒株，甚至有型或亚型的差别，两者的核苷酸和氨基酸序列均有较大差异，ＢＲＶ不可能是ＭＲＶ在短时间内演化而来的毒株。

鹿狂犬病病毒G基因主要功能区的序列分析

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出了中国鹿狂犬病野毒株（８２０２株）糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区的２个片段，共约８００个ｂｐ（３７０～１１７９），含有可以诱导中和抗体的２个抗原决定簇的基因片段和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将２个片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａⅠ位点，采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。将这一序列与国内外已发表的１１株狂犬病病毒的相应序列输入计算机进行比较分析，结果表明８２０２株主要功能区与上述１１个毒株核苷酸序列的同源性在７３．０％～９６．４％之间，氨基酸序列的同源性在８６．４％～９４．４％之间，８２０２株与中国疫苗株无论是核苷酸序列还是氨基酸序列的同源性均最高，而与中国街毒（ＣＤＸ－１）的核苷酸序列同源性最低，与ＣＶＳ株的氨基酸序列的同源性最低。

狂犬病病毒糖蛋白基因主要功能区的克隆和序列比较分析

对我国不同来源的狂犬病野毒株８２０２、ＢＲＶ、ＭＲＶ以及无毒疫苗株ＳＲＶ９的Ｇ基因４０５～１１４４位核苷酸序列进行了ＲＴ－ＰＣＲ扩增、克隆和序列测定，并应用计算机对其进行了分析比较。结果证明，鹿源８２０２株与中国人用疫苗株为同源株（同源性达９７．０％），因此我国鹿狂犬病极可能是人用疫苗毒株污染所致；同地不同动物分离的ＭＲＶ株和ＢＲＶ株为亲缘关系较远毒株，表明ＢＲＶ引起的牛狂犬病不是由于ＭＲＶ感染所致；疫苗株ＳＲＶ９与３个野毒株同源性在８３％～８４％之间。３个野毒株８２０２、ＢＲＶ、ＭＲＶ及疫苗株ＳＲＶ９的糖基化位点和抗原决定簇内某些氨基酸亦不同。由计算机建立的系统树首次证明我国存在着狂犬病病毒基因亚型。８２０２、ＭＲＶ、ＳＲＶ９和其他对照株的同源性在８５．３％以上，为Ⅰａ亚型；ＢＲＶ与它们的同源性仅为８２．３％，被分为Ⅰｂ亚型。

非结核分枝杆菌及其致病性的研究进展

非结核分枝杆菌是指除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌之外的其他分枝杆菌,种类多,分布广泛,属于致病菌或条件致病菌。近年来,非结核分枝杆菌患病率和分离率不断提高,引起广大医学工作者的高度重视,成为当前医疗工作者和科研工作者的主要研究目标。

RV野毒株的鉴定、毒力实验及其核酸探针的研究

对从我国不同地区、不同动物分离的３个疑似狂犬病毒分离物８２０２、ＢＲＶ、ＭＲＶ和无毒疫苗株ＳＲＶ９进行了ＥＬＩＳＡ和核酸探针的鉴定。同时，对它们的致病性和毒力进行了测定。结果表明，３个分离物均为狂犬病病毒（ＲＶ），其毒力以鼠源ＭＲＶ最强，牛源ＢＲＶ最弱，同地不同动物分离的ＢＲＶ和ＭＲＶ毒力差异很大。疫苗株ＳＲＶ９对１２ｇ小鼠无致病性。研制的狂犬病毒地高辛标记核酸探针敏感性高、特异性强。

狂犬病无毒疫苗株SRV_9G基因主要功能区的序列分析

通过反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出了狂犬病无毒疫苗株（ＳＲＶ９）糖蛋白（Ｇ）基因膜外主要功能区的两个片段，共约７４０个ｂｐ（４５０～１１４４），含有可以诱导中和抗体的两个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。通过平端连接将两片段克隆到ｐＵＣ１８的ＳｍａＩ位点。采用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧终止法测定ｃＤＮＡ片段的核苷酸序列，并推导出其氨基酸序列。将这一序列与已发表的狂犬病病毒ＳＡＤＢ１９株的相应序列通过计算机进行比较分析。结果证明两者核苷酸序列的同源性为９８．６％，推导氨基酸序列的同源性为９５．９％，主要抗原区内的几个重要氨基酸（如３３３位精氨酸等）发生了变异，糖基化位点也改变。

鸽源H5N1亚型禽流感病毒株的全基因克隆及序列分析

根据已知禽流感病毒(AIV)的8个基因序列设计合成11对特异引物,通过反转录-聚合酶链式反应技术,分别成功扩增出鸽源H5N1亚型的全基因序列,将其分别克隆到pMD18-T载体后进行序列测定。同时将8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较,绘制各基因的进化树。结果表明所克隆到的8个片段均包含相应病毒基因的完整开放阅读框架,长度分别为1 7301、3711、5422、3222、3302、2331、020、884 bp核苷酸,分别编码568、450、499、757、759、716、351、230个氨基酸。该毒株有7个潜在糖基化位点;在HA裂解位点附近有6个碱性氨基酸序列插入,符合高致病力禽流感病毒的特点。该毒株与参考毒株的序列比较分析结果表明分离株基因具有多样性。

2株狂犬病街毒株全基因组测序及分子进化研究

利用RT-PCR方法,对梅花鹿源(DRV)和鼠源(MRV)2个狂犬病毒街毒株进行全基因组测序,获得2个毒株全基因组序列(GenBank登录号分别为DQ875051和DQ875050)。DRV和MRV毒株全基因组分别与具有代表性的毒株全基因组进行N、P、M、G、L基因的核苷酸和氨基酸同源性比较。不同毒株的全基因组构建的分子系统进化树表明,DRV和MRV分属2个进化支。DRV与Ni-CE、RC-HL和SRV9的亲缘关系最近;MRV与HEP-Flury的亲缘关系最近,并与HHV-RAB-H街毒株同属一个进化支。

牛分枝杆菌三重PCR检测方法的建立

为建立快速检测牛分枝杆菌(M.bovis)的三重PCR方法,本研究以M.bovis ValleeⅢ株染色体DNA为模板,分别以其recA、IS6110、IS1081基因特异性引物进行PCR扩增,建立检测M.bovis的recA-IS6110-IS1081三重PCR反应。通过PCR扩增获得大小约为860 bp、520 bp和340 bp的DNA片段。BLAST序列分析表明,这3个基因片段与GenBank中登录的相关基因的核苷酸序列同源性均达到99%。同时,recA、IS6110和IS1081PCR扩增的敏感性分别达到585 fg、19.5 fg和19.5 fg。特异性较强,只有M.bovis和人结核临床分离株扩增反应为阳性,为进一步研究recA、IS6110和IS1081基因以及其在牛结核病诊断中的应用奠定了基础。

浅谈海上救援井钻井设计思路

在世界海洋石油钻探工作中，井喷失控的事故时有发生。井喷失控事故发生后，常常需要设计并实施救援井，使事故井恢复正常。设计一口救援井，一般需要从救援井井位选择、钻井装置选择、井身结构设计、磁探测工具选择、轨迹设计、连通方式及压井方法等方面来重点考虑。

浅谈海上救援井钻井设计思路

在世界海洋石油钻探工作中,井喷失控的事故时有发生。井喷失控事故发生后,常常需要设计并实施救援井,使事故井恢复正常。设计一口救援井,一般需要从救援井井位选择、钻井装置选择、井身结构设计、磁探测工具选择、轨迹设计、连通方式及压井方法等方面来重点考虑。

副结核分枝杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

本试验通过6次细胞融合,经过3次反复克隆化与长时间培养和两次液氮中冻存、复苏,获得了10株稳定、高效地分泌抗副结核分枝杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。这些杂交瘤细胞的染色体数量均较其两种母源细胞有明显地增加,但少于两者之和;经培养产生的含单克隆抗体的培养上清液效价在1/100～1/300之间,腹水效价达万倍以上。这10株单克隆抗体都是分枝杆菌特异性的,但在分枝杆菌之间却有广泛的交叉反应。

番禺地区防漏与堵漏技术

番禺地区在珠江坳陷的低隆起构造带上,断层发育,破碎带多,从已钻探井和开发井实践经验来看,从浅部到深部都有不同程度渗漏和井漏的现象。通过室内研究分析,针对水基钻井液和油基钻井液不同情况,对钻井工艺及钻完井液封堵性能进行了优化,基本解决了该地区防漏和堵漏问题。

狂犬病病毒鹿源野毒株与人疫苗株G基因的分子差异

本文通过反转录—聚合酶链反应 (RT- PCR)扩增并克隆了我国狂犬病病毒 (RV)鹿源野毒株 (82 0 2 )糖蛋白 (G)基因膜外主要功能区的两个片段 ,共 742个 bp(40 5～ 1 1 46) ,含有可以诱导中和抗体的多个抗原决定簇和决定毒力及与神经细胞受体结合部位的基因片段。采用 Sanger双脱氧终止法测定了克隆 c DNA片段的核苷酸序列并推导出了氨基酸序列。将82 0 2株与已发表的人疫苗株 (3a G)的相应序列输入计算机进行比较分析。结果表明两者在这一基因片段核苷酸序列和氨基酸序列分子差异很小 ,同源性极高 ,分别为 97%和 95.5% ,抗原决定簇内的氨基酸均未发生改变 ,只是 82 0 2株在 N2 4 7位缺少一糖基化位点。结合流行病学调查可推断 82 0 2株与中国疫苗株属于同源毒株 ,本研究结果提示应用人狂犬病疫苗预防鹿狂犬病将具有很好效果。

应用单克隆抗体对副结核分枝杆菌抗原性的研究

通过四次细胞融合,获得了5株产生抗副结核杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。将这5株单克隆抗体与13株副结核杆菌抗原进行ELISA,结果表明,13株副结核杆菌可初步被5株单克隆抗体分成三组:C_1、C_3、P_(10)、Teps为A组;C_2、C_4、C_5、C_6、C_8、C_(11)、C_(12)、1555为B组;P_(18)为C组。

随钻地质导向技术在PY断块气田MFS18.5-2均质储层中的应用

针对PY气田构造特征复杂,MFS18.5-2砂岩储层厚度大、均质和疏松等特点,在水平开发井地质导向过程中,运用斯伦贝谢公司随钻测井工具(ADN和GVR)和旋转导向工具(Powerdrive X5)提供的实时自然伽马、侧向电阻率及其成像、密度和中子孔隙度测量资料以及与之适配的地质导向技术,在钻井、地质、测井及录井等多部门通力协作基础上,高效地实现了水平井的钻井目标,保证了储层钻遇率以及预期的产能,同时也丰富了地质导向技术的应用经验。通过实例介绍了12.25in着陆段地质导向技术及8.5in水平段地质导向技术。