目的:利用RNA干扰技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)比值变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法:实验于2006-05...目的:利用RNA干扰技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)比值变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法:实验于2006-05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室(国家重点实验室)完成。①实验材料:体外化学合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用Lipofectin2000TM转染成骨细胞。②实验方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应检测RANKL mRNA的表达,筛选出最有效的干扰序列。③实验分组:分为最有效的siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组,每组设5个平行样本。采用免疫组织化学染色检测成骨细胞中RANKL、OPG蛋白的表达,观察RANKL/OPG比值变化。④实验评估:采用成骨细胞、破骨细胞共培养技术观察以上3组转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响。结果:①4种siRNA敲除RANKL基因后mRNA的表达:4种siRNA转染成骨细胞后,相对空白对照组,siRNA4分子对RANKLmRNA的抑制作用最为明显,达到89%。siRNA1,siRNA3对RANKLmRNA的抑制作用大于50%,而siRNA2对RANKLmRNA的也有相当的抑制作用。②各组成骨细胞中RANKL和OPG蛋白水平:RANKL和OPG的阳性表达均显示为棕黄色颗粒,RANKL主要分布于成骨细胞的胞浆和胞膜,OPG主要分布于成骨细胞的胞浆。siRNA4转染组RANKL表达(平均积分光密度值)低于空白对照组(分别为3.05±2.17,11.31±1.26),差异有显著性意义(P<0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P>0.05)。siRNA4转染组、阴性对照组OPG表达与空白对照组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)siRNA4转染组RANKL/OPG比值低于空白对照组(分别为0.12±0.03,0.45±0.04),差异有显著性意义(P<0.01)。③转染的成骨细胞对破骨细胞生成的影响:各组共培养形成的破骨细胞形态与分离的成熟破骨细胞相似,为不规则形,胞浆红染,并有伪足形成。siRNA4转染组破骨细胞形成低于空白对照组、阴性对照组[分别为(12±2),(31±7),(28±5)个/孔],差异有显著性意义(P<0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:RNA干扰沉默RANKL表达可下调成骨细胞RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的生成。展开更多
目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/OPG比值的变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(s...目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/OPG比值的变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(siRNA),用Liopfectamin2000转染成骨细胞,采用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测RANKL的表达,筛选出最有效的干扰序列,并用Western blot技术检测成骨细胞的RANKL、OPG的表达,观察RANKL/OPG比例的变化,采用成骨细胞破骨细胞共培养技术探讨转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响。结果合成的4对siRNA中有一对可使大鼠成骨细胞的RANKL mRNA水平下降89%,蛋白表达下降76%;同时OPG的蛋白表达无明显变化,RANKL/OPG比例明显下调,破骨细胞的生成明显受到抑制。结论RNAi沉默RANKL基因表达可显著下调成骨细胞RANKL/OPG的比值,抑制破骨细胞的生成。展开更多
目的分析显微镜辅助下MIS-TLIF联合Mantis螺钉治疗中老年峡部裂型腰椎滑脱症的效果。方法选取郑州大学第一附属医院2015年9月至2017年9月收治的46例单节段中老年峡部裂型腰椎滑脱症患者,采用随机数表法分为微创组和开放组,微创组患者接...目的分析显微镜辅助下MIS-TLIF联合Mantis螺钉治疗中老年峡部裂型腰椎滑脱症的效果。方法选取郑州大学第一附属医院2015年9月至2017年9月收治的46例单节段中老年峡部裂型腰椎滑脱症患者,采用随机数表法分为微创组和开放组,微创组患者接受显微镜辅助下MIS-TLIF联合Mantis螺钉手术治疗,开放组患者接受PLIF手术治疗。比较两组患者术中出血量、术后引流量、切口长度等手术相关指标,比较两组视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)、手术并发症发生率、术后椎间融合率等。结果与开放组比较,微创组的手术时间及术后卧床时间较短,术中出血量、术后引流液量及手术切口较小,术后3 d VAS评分、ODI评分及手术并发症发生率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。椎间融合率两组并发症发生率及椎间融合率差异无统计学意义(P>0.05)。结论显微镜辅助下MIS-TLIF联合Mantis螺钉是治疗中老年峡部裂型腰椎滑脱症的一种有效、微创的手术方式。展开更多
文摘目的:利用RNA干扰技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/骨保护素(osteoprotegerin,OPG)比值变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法:实验于2006-05/10在四川大学华西医院移植免疫实验室(国家重点实验室)完成。①实验材料:体外化学合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),用Lipofectin2000TM转染成骨细胞。②实验方法:采用荧光实时定量聚合酶链反应检测RANKL mRNA的表达,筛选出最有效的干扰序列。③实验分组:分为最有效的siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组,每组设5个平行样本。采用免疫组织化学染色检测成骨细胞中RANKL、OPG蛋白的表达,观察RANKL/OPG比值变化。④实验评估:采用成骨细胞、破骨细胞共培养技术观察以上3组转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响。结果:①4种siRNA敲除RANKL基因后mRNA的表达:4种siRNA转染成骨细胞后,相对空白对照组,siRNA4分子对RANKLmRNA的抑制作用最为明显,达到89%。siRNA1,siRNA3对RANKLmRNA的抑制作用大于50%,而siRNA2对RANKLmRNA的也有相当的抑制作用。②各组成骨细胞中RANKL和OPG蛋白水平:RANKL和OPG的阳性表达均显示为棕黄色颗粒,RANKL主要分布于成骨细胞的胞浆和胞膜,OPG主要分布于成骨细胞的胞浆。siRNA4转染组RANKL表达(平均积分光密度值)低于空白对照组(分别为3.05±2.17,11.31±1.26),差异有显著性意义(P<0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P>0.05)。siRNA4转染组、阴性对照组OPG表达与空白对照组比较,差异均无显著性意义(P>0.05)siRNA4转染组RANKL/OPG比值低于空白对照组(分别为0.12±0.03,0.45±0.04),差异有显著性意义(P<0.01)。③转染的成骨细胞对破骨细胞生成的影响:各组共培养形成的破骨细胞形态与分离的成熟破骨细胞相似,为不规则形,胞浆红染,并有伪足形成。siRNA4转染组破骨细胞形成低于空白对照组、阴性对照组[分别为(12±2),(31±7),(28±5)个/孔],差异有显著性意义(P<0.01);阴性对照组与空白对照相比,差异无显著性意义(P>0.05)。结论:RNA干扰沉默RANKL表达可下调成骨细胞RANKL/OPG比值,抑制破骨细胞的生成。
文摘目的利用RNA干扰(RNAi)技术抑制大鼠成骨细胞核激活因子受体配体(Ligand of receptor activator of NF-κB,RANKL)的表达,观察成骨细胞RANKL/OPG比值的变化,探讨成骨细胞与破骨细胞生成的相关性。方法合成4条RANKL序列特异性小干扰RNA(siRNA),用Liopfectamin2000转染成骨细胞,采用荧光实时定量聚合酶链反应(PCR)检测RANKL的表达,筛选出最有效的干扰序列,并用Western blot技术检测成骨细胞的RANKL、OPG的表达,观察RANKL/OPG比例的变化,采用成骨细胞破骨细胞共培养技术探讨转染后的成骨细胞对破骨细胞生成的影响。结果合成的4对siRNA中有一对可使大鼠成骨细胞的RANKL mRNA水平下降89%,蛋白表达下降76%;同时OPG的蛋白表达无明显变化,RANKL/OPG比例明显下调,破骨细胞的生成明显受到抑制。结论RNAi沉默RANKL基因表达可显著下调成骨细胞RANKL/OPG的比值,抑制破骨细胞的生成。
文摘目的分析显微镜辅助下MIS-TLIF联合Mantis螺钉治疗中老年峡部裂型腰椎滑脱症的效果。方法选取郑州大学第一附属医院2015年9月至2017年9月收治的46例单节段中老年峡部裂型腰椎滑脱症患者,采用随机数表法分为微创组和开放组,微创组患者接受显微镜辅助下MIS-TLIF联合Mantis螺钉手术治疗,开放组患者接受PLIF手术治疗。比较两组患者术中出血量、术后引流量、切口长度等手术相关指标,比较两组视觉模拟评分(VAS)、Oswestry功能障碍指数(ODI)、手术并发症发生率、术后椎间融合率等。结果与开放组比较,微创组的手术时间及术后卧床时间较短,术中出血量、术后引流液量及手术切口较小,术后3 d VAS评分、ODI评分及手术并发症发生率较低,差异有统计学意义(P<0.05)。椎间融合率两组并发症发生率及椎间融合率差异无统计学意义(P>0.05)。结论显微镜辅助下MIS-TLIF联合Mantis螺钉是治疗中老年峡部裂型腰椎滑脱症的一种有效、微创的手术方式。