子宫内膜CD138阳性细胞对胚胎移植失败患者再次移植妊娠率的影响研究

目的了解慢性子宫内膜炎的宫腔镜表现与内膜CD138细胞免疫组化阳性的关系,分析胚胎移植后种植失败的风险因素。方法回顾性分析2021年12月至2022年6月因胚胎移植后种植失败在我院行宫腔镜检查的不孕症患者资料。以组织病理学诊断标准作为金标准,评价宫腔镜表现(微小息肉、内膜充血和间质水肿)与组织病理学(内膜CD138免疫组化阳性)的相关性。再次胚胎移植后比较种植成功(妊娠)与种植失败(未妊娠)患者的相关指标差异,通过Logistic回归分析胚胎移植中种植失败的影响因素。结果共有224例患者纳入研究,内膜活检结果显示CD138阳性者49例(21.9%)。微小息肉与CD138阳性的相关系数为0.576(P<0.001),而内膜充血、间质水肿与CD138阳性无相关性(P>0.05)。胚胎移植后种植成功(妊娠者)111例(49.5%)。Logistic回归分析发现年龄[OR=0.73,95%CI(0.65,0.93),P<0.001]、移植日内膜厚度[OR=1.23,95%CI(1.09,1.35),P=0.03]和CD138阳性[OR=0.23,95%CI(0.07,0.44),P=0.01]是影响胚胎种植结局的独立危险因素。结论病理发现CD138阳性细胞是胚胎种植失败的独立影响因素。宫腔镜检查与内膜CD138免疫组化结果相关性不佳,无法替代内膜CD138免疫组化。

HPV L1壳蛋白检测联合TCT、HPV-DNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值

探讨人乳头瘤病毒L1(HPV L1)壳蛋白检测联合宫颈薄层液基细胞学(TCT)和高危型HPV-DNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值。方法:选择来重庆市妇幼保健院做宫颈癌筛查的妇女共1086例,同时实施TCT和HPV-HC2检测,并对TCT检测阳性的患者行HPV L1壳蛋白检测,以病理组织学诊断结果为金标准进行对照研究。结果:1086例患者中的TCT阳性率为14.6%,TCT阳性患者随着TCT分级的升高,HR-HPV的阳性率逐渐升高,与病理组织学CINⅢ的符合率越高,随着病理组织学分级的升高,HPV L1壳蛋白阳性表达率降低,宫颈癌患者中不表达。结论:HPV L1壳蛋白检测对子宫颈病变进展的风险评估有重要的指导价值,联合TCT和高危型HPV-DNA检测不仅能够更有效的筛查出宫颈病变,还能对患者进行最佳的分流管理和治疗。

胃癌组织和细胞中P115、MIF的表达及意义

目的观察胃癌组织和细胞中高尔基体转运蛋白P115和MIF的表达情况,探讨其在胃癌发生、发展中的意义。方法用S-P、Western blot和RT-PCR法检测P115及MIF在正常胃黏膜和胃癌组织,3种细胞株(正常胃黏膜上皮GES-1,不同分化程度的胃癌细胞株MKN-28,BGC-823)中的蛋白和mRNA表达情况。结果 P115和MIF在胃癌组织中的阳性表达率分别为73.3%、80%,在正常胃黏膜中的阳性表达率分别为40%、46.7%,胃癌组织中P115和MIF的表达明显高于正常胃黏膜(P<0.01),且P115的表达和MIF的表达呈正相关(r=0.433,P=0.017);胃癌组织中P115、MIF的蛋白和mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜组织(P<0.01)。免疫细胞化学,Western blot和RT-PCR结果显示:P115、MIF在胃癌细胞株MKN-28、BGC-823中的蛋白及mRNA表达水平明显高于正常胃黏膜上皮GES-1(P<0.01);且低分化胃癌细胞株BGC-823中P115和MIF的表达水平明显高于高分化胃癌细胞株MKN-28(P<0.05)。结论 P115和MIF的过表达,可能在胃癌的发生过程中起协同作用;对P115和MIF相互作用机制的深入探讨有可能使其成为研究胃癌发生、发展的分子机制的新靶点。

p115和MIF在肝癌细胞和正常肝细胞的表达情况

目的:研究人肝癌低分化SMCC-7721细胞株,高分化HepG2细胞株和人正常肝细胞株LO2的高尔基体转运蛋白p115和巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitoryfactor,MIF)的表达情况。方法:采用RT-PCR方法检测3组细胞株中p115和MIF的mRNA表达水平。用Western blot方法和细胞免疫组化方法检测3组细胞株中p115和MIF的蛋白表达情况。结果:SMCC-7721,HepG2的p115和MIF mRNA表达和蛋白表达水平明显增加且SMCC-7721表达更强,与对照组正常肝细胞株LO2的表达量比较有显著差异(P<0.05);细胞免疫组化方法结果显示:SMCC-7721,HepG2中p115在主要位于除高尔基体外的细胞质中,但在细胞质中HepG2着色相对较淡,而LO2中位于细胞核旁的高尔基体上。MIF主要分布于细胞质中,其在SMCC-7721、HepG2、LO23组细胞表达量呈明显减弱,统计学有显著差异(P<0.05)。结论:p115和MIF的含量在SMCC-7721、HepG2、LO2 3组细胞株中呈递减性变化。说明随着细胞恶性程度增加,p115和MIF表达增高,提示二者可能与肿瘤细胞的异常分化有关。

shRNA抑制p115表达对胃癌体外血管形成的影响

目的初步探讨胃癌BGC-823细胞高尔基体囊泡转运蛋白(golgi-vesicular transport protein,p115)对胃癌血管形成的影响及其可能机制。方法采用脂质体介导法将p115 shRNA-1318转染入胃癌BGC-823细胞株,经G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western blot、RT-PCR和细胞免疫荧光方法检测转染后的p115抑制效应及其对MIF、p-Akt、VEGF-A的调控情况;采用细胞活性检测实验、Transwell体外侵袭实验和血管形成实验方法分别检测转染p115 shRNA的胃癌BGC-823细胞对人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖,迁移和血管形成的影响。结果 p115 shRNA-1318转染后胃癌BGC-823细胞p115、MIF、p-Akt和VEGF-A的蛋白及mRNA表达明显抑制(P<0.01);细胞免疫荧光:与对照组相比,p115 shRNA组p115、MIF及VEGF-A的色泽暗红且抑制率分别为63%、65%、68%;细胞活性检测:与对照组相比,p115 shRNA组HUVECs增殖能力明显降低(P<0.05);Transwell侵袭实验:p115 shRNA组HUVECs较空白对照组,阴性对照组(shNC)细胞侵袭能力明显降低,24 h穿过Transwell的细胞数分别为:(39±5)、(174±4)、(179±4),与对照组相比差别具有统计学意义(P<0.05);血管形成实验:p115 shRNA组HUVECs不能在Matrigel胶上形成网状结构,空白对照组、shNC组成管指数分别为:(1 289±37)、(1 329±33),p115 shRNA组成管指数为:(422±41),与对照组相比差别具有统计学意义(P<0.05)。结论 p115基因沉默下调胃癌的VEGF-A表达及抑制血管生成;其分子机制可能与MIF通过PI3K/Akt信号通路途径调节胃癌血管形成有关。

高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ和E-钙黏素在正常肝组织及肝癌组织中的表达及其意义

目的探讨高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(GMⅡ)和E-钙黏素(E-cadherin)在正常肝组织及不同分化的肝癌组织中的表达及其意义。方法采用RT-PCR法检测GMⅡ和E-cadherin mRNA在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织中的表达;免疫组化SP法及Western blot法检测GMⅡ和E-cadherin蛋白在3种肝组织中的表达,并对GMⅡ和E-cadherin的差异表达进行相关性分析。结果 RT-PCR及Western blot分析显示,GMⅡmRNA和蛋白在正常肝组织中表达水平最低,在中低分化肝癌组织中表达水平最高,在高分化肝癌组织中表达居中,E-cadherin的表达则相反,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);免疫组化SP法检测显示,GMⅡ主要表达于正常肝组织及肝癌组织的胞浆,在正常肝组织、高分化及中低分化肝癌组织的表达阳性率分别为40%、64%和86%,E-cadherin在正常肝组织的胞膜、胞浆中均有表达,而在肝癌组织中则主要表达于胞浆,其表达阳性率分别为70%、33%和9%,各组间表达差异均有统计学意义(P<0.05);GMⅡ和E-cadherin表达的Pearson相关系数r值为-0.415,P值为0.01。结论 GMⅡ和E-cadherin在肝癌组织中的表达呈负相关,GMⅡ对肝癌的发生发展可能发挥一定的作用。

p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制

目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白(Golgi-vesicular transport protein)p115基因沉默对人胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响及其机制。方法采用脂质体法将质粒pGPU6/GFP/Neo/p115(p115 shRNA)和阴性对照质粒(shNC)分别转染至BGC-823细胞中,并设空白对照组。转染后48 h,采用RT-PCR、Westernblot和细胞免疫荧光法检测各组细胞中p115基因及蛋白表达的变化,及其对巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metallopro-teinase-2,MMP-2)、MMP-9基因和蛋白表达的调节;细胞划痕及Transwell小室试验检测细胞迁移及侵袭能力的变化。结果p115 shRNA组细胞中p115、MIF、MMP-2、MMP-9在基因和蛋白水平的表达均较shNC组和空白对照组明显下降(P<0.01);p115shRNA组细胞的划痕愈合能力明显低于两个对照组(P<0.01);p115 shRNA组的穿膜细胞数明显低于两个对照组(P<0.01)。结论在BGC-823细胞中,抑制P115的表达后,可能通过下调MIF、MMP-2、MMP-9的表达,抑制肿瘤细胞的侵袭运动。

miR-141在不同宫颈病变中的表达及临床意义

目的探讨miR-141在不同宫颈病变中的表达情况并探讨临床意义。方法重庆市妇幼保健院收治并获得宫颈组织病理学诊断的238例患者及同期行子宫肌瘤全子宫切除术患者37例纳入研究,采用RTPCR检测不同宫颈病变组织中miR-141水平,随访子宫颈癌患者术后2年时肿瘤复发/转移情况,分析术后复发/转移的风险因素。结果 (1) miR-141的表达水平与CIN分级呈正相关(P <0.05);(2) miR-141的表达水平与癌组织分化程度、FIGO临床分期和淋巴结转移情况有关(P <0.05);(3)术后2年时有11例患者发生肿瘤复发/转移,其余38例未发生肿瘤复发/转移;(4)单因素分析及Cox回归分析结果显示癌组织分化程度、FIGO临床分期、淋巴结转移和肿瘤组织miR-141水平是影响宫颈癌临床预后的独立危险因素(P <0.05)。结论宫颈病变程度影响miR-141的表达水平,随着宫颈病变程度的加重其表达水平升高,miR-141可能与宫颈癌的分化和转移有关,并且影响宫颈癌患者的临床预后。

RNA干扰P115基因对胃癌细胞巨噬细胞移动抑制因子表达的抑制作用

目的构建高尔基体转运蛋白P115基因shRNA表达载体,探讨P115基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)表达的影响。方法设计4对针对P115基因的shRNA序列,构建重组表达质粒,转染高表达P115的胃癌细胞株BGC-823。RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学检测P115及MIF的mRNA和蛋白的表达。结果 4个P115基因shRNA质粒经单酶切和测序证实构建正确;转染BGC-823细胞后,均能抑制P115基因的表达,其中以pGPU6/GFP/Neo-shP115-2的沉默效果最好,其对P115基因mRNA表达的抑制率为75.07%,对P115蛋白表达的抑制率为70.97%;转染pGPU6/GFP/Neo-shP115-2后,MIF基因的mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论 P115基因沉默后,BGC-823细胞MIF的表达明显降低,提示P115可能参与调节胃癌细胞MIF的表达,P115基因可作为研究胃癌发生发展分子机理的新靶点。

35岁以下年轻宫颈癌患者的临床病理特征以及危险因素分析

目的探讨35岁以下年轻女性宫颈癌患者的临床病理特征及危险因素。方法选取2011年1月-2013年12月该院收治的64例35岁以下年轻宫颈癌患者为观察组,同时随机选择该院同期收治的128例35岁以上中老年宫颈癌患者为对照组,对两组患者临床资料进行回顾性分析并比较。结果观察组患者临床Ⅰ期发病率为60.94%,高于对照组患者（39.06%）,差异有统计学意义（χ^2=8.858,P〈0.05）。观察组病理类型为腺癌者占15.63%,高于对照组（3.13%）,差异有统计学意义（χ^2=10.278,P〈0.05）。观察组外生型宫颈癌占56.25%,高于对照组（35.94%）,差异有统计学意义（P〈0.05）。观察组有淋巴结转移者占29.69%,高于对照组（15.63%）。观察组结婚年龄≤20岁比例、吸烟比例及口服避孕药比例均高于对照组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论与35岁以上中老年宫颈癌患者相比,35岁以下年轻宫颈癌患者病理学特征上主要表现为临床分期较早、腺癌所占比例较高、病灶类型以外生型为主、淋巴结转移率较高。年轻女性宫颈癌发病可能与结婚过早、吸烟及口服避孕药等密切相关。

高尔基体囊泡转运蛋白P115基因沉默对胃癌细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白P115基因沉默对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响及其可能的相关机制。方法将含p115基因的重组质粒p115 shRNA-1318转染BGC-823细胞,并设shNC(阴性对照)转染组和空白对照组,免疫荧光显微镜检测转染效果;RT-PCR法检测细胞中p115和巨噬细胞游走抑制因子(Macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因mRNA的转录水平;Western blot检测细胞中P115、MIF及核内肿瘤抑制蛋白质P53的表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的分布。结果转染后48 h,荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白的表达,表明转染成功;与对照组相比,p115 shRNA-1318组细胞中的p115和MIF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05),细胞核内P53蛋白的表达水平明显增加(P<0.05),细胞的增殖活力明显下降(P<0.05),细胞凋亡数量明显增加(P<0.05),G1/G2期细胞数量明显增多,S期细胞数量明显减少(P<0.05)。结论沉默p115基因可促进胃癌细胞的凋亡,其调控机制可能是通过调控MIF因子来完成的。

shRNA沉默P115基因对胃癌细胞增殖相关蛋白表达的影响及机制

目的探讨高尔基体囊泡转运蛋白(colgi-vesicular transport protein,P115)基因沉默对胃癌细胞株BGC-823中增殖相关因子细胞周期素D1(cyclinD1)、微小染色体维持缺陷蛋白2(mini chromosome maintenance protein 2,Mcm2)和增殖细胞核抗原(proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA)表达的影响及其可能的机制。方法采用脂质体介导法将重组表达质粒P115-shRNA2(P115-shRNA2组)和阴性对照质粒shNC(阴性对照组)转染至高表达P115的胃癌细胞株BGC-823中,并设未转染组,经G418筛选出稳定转染细胞,实时定量PCR(Real-time PCR)法检测细胞中P115、巨噬细胞移动抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)、cyclinD1、Mcm2和PCNA基因mRNA的转录水平;Western blot法检测细胞中P115、MIF、pERK1/2、cyclinD1、Mcm2和PCNA蛋白表达水平;免疫共沉淀法检测BGC-823细胞中P115与MIF间的相互作用;ELISA法检测细胞上清液中MIF的分泌水平。结果与未转染组和阴性对照组相比,P115-shRNA2组细胞中P115、MIF、cyclinD1、Mcm2和PCNA的mRNA和蛋白表达水平均明显降低,ERK1/2的磷酸化水平明显下调,BGC-823细胞培养上清中MIF的含量明显降低;P115蛋白可在抗MIF的免疫沉淀物中检出,P115和MIF在BGC-823细胞中存在特异性的相互作用。结论 P115基因沉默下调胃癌细胞中cyclinD1、Mcm2和PCNA的表达,其分子机制可能与P115通过调控MIF的表达和分泌,进而启动下游的ERK1/2信号通路有关。P115可作为研究胃癌细胞增殖分子机制的新靶点。

人P115基因重组真核表达质粒的构建及其对肝癌细胞增殖的影响

目的构建人P115基因重组真核表达质粒,并探讨其过表达对人肝癌细胞HepG2增殖活性的影响。方法采用RT-PCR从HepG2细胞中扩增人P115基因,插入pEGFP-N1 Vector(+)载体,构建重组真核表达质粒pEGFP-N1 Vector(+)-USO1,将重组质粒转染至HepG2细胞,免疫荧光及流式细胞术检测转染效率;RT-PCR及Western blot检测转染细胞中P115基因及蛋白的表达;MTT法检测转染细胞的增殖活性、流式细胞术检测细胞周期变化。结果重组真核表达质粒pEGFP-N1 Vec-tor(+)-USO1经酶切鉴定及测序证明构建正确;重组质粒转染HepG2细胞的转染效率达84.83%;重组质粒转染的HepG2细胞中P115基因和蛋白的表达水平及细胞增殖活性均明显高于空载体转染和未转染的细胞;重组质粒转染的细胞G1/G2期比例明显减少,S期比例明显增加。结论已成功构建了人P115基因重组真核表达质粒,其在肝癌细胞中过表达P115可促进肝癌细胞增殖。