外泌体环状RNA在胃癌中作用机制的研究进展

胃癌是世界上高发且病死率较高的肿瘤之一,诊断时的临床分期与患者的预后息息相关,寻找灵敏的诊断标志物以提高早期诊断准确率便成为十分迫切的议题。外泌体是由多种细胞分泌的纳米级胞外囊泡,通过在肿瘤微环境中转运生物活性物质,从而在细胞通讯中发挥重要作用。环状RNA是一类具有特定结构的非编码RNA,由于不易降解得以富集在外泌体中并参与到其介导的各种病理生理过程。外泌体环状RNA可以影响肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移及耐药等过程,在临床上具有比常规诊断标志物更显著的优势,可能成为诊断胃癌潜在的生物标志物。该文分别介绍了外泌体和环状RNA的特征、形成机制及在胃癌中的作用,详细论述了外泌体来源的环状RNA在胃癌发生发展中的作用,讨论了其在胃癌诊断与治疗中潜在的临床应用价值和面临的挑战。

单细胞转录组测序技术在肝纤维化中的研究进展

肝纤维化是一种严重威胁人类健康的疾病,单细胞转录组测序技术为揭示其复杂的病理机制提供了全新途径。传统的研究方法在识别肝纤维化中不同细胞亚群及其基因表达变化方面存在局限,难以深入理解疾病机制。概述了单细胞转录组测序技术在肝纤维化过程中对不同细胞亚群类型的研究进展,单细胞RNA测序技术能够精确地解析不同细胞类型的基因表达及异质性,揭示肝纤维化过程中细胞亚群的动态变化及相关基因的表达,进而有助于理解各类细胞亚型在肝纤维化中的功能、相互作用及其对疾病进展的贡献。进一步探讨了该技术在肝纤维化研究中的重要意义与应用前景,通过这一技术,可以鉴定出与纤维化相关的关键基因和信号通路,为早期诊断、治疗靶点的发现以及新疗法的制定提供理论依据。此外,结合空间转录组测序技术,研究者可以在空间维度上观察细胞在组织中的分布,进一步提升对肝纤维化微环境的理解。该技术有助于深入理解肝纤维化的病理机制,为寻找新的治疗靶点和制定早期诊断及治疗策略提供了创新思路。

猪体细胞核移植的研究进展和影响因素

自2000年Polejaeva I A获得第1头克隆猪后,短短几年时间全世界已有10多例成功的报 道,使得猪的体细胞核移植有了长足的发展,但目前猪的体细胞核移植效率依然低下(1-2％), 人们对核移植中重编程分子机理的认识知之甚少。简要综述了猪体细胞核移植近年来的研究进 展,就猪核移植中的技术难点和影响因素进行了分析,涉及供体细胞种类的选择、体外长期培养 和高压筛选对随后核移植的影响以及供核细胞细胞周期的选择,核质双方的协调,去核和注核方 法的选择,融合和激活程序的优化,妊娠的维持等。

间充质干细胞迁移特性的研究进展

间充质干细胞是具有多向分化潜能的干细胞,除了具有造血支持、免疫调节、多向分化为骨、软骨、脂肪的特性外,还具有特异迁移到损伤和肿瘤部位的特性。然而,对于MSC迁移的具体机制还知之甚少,因此深入理解MSC迁移的机制,有望发展新的治疗肿瘤的策略,如利用MSC特异迁移到肿瘤部位的特性携带抗肿瘤蛋白以抑制肿瘤的生长等。本文主要从生长因子,趋化因子,黏附分子,Toll样受体等介导的MSC体外迁移等问题进行综述。

Oct4对鼠-猪异种核移植胚胎早期发育的影响

目的探讨Oct4转录因子能否促进鼠-猪异种核移植胚胎的早期发育。方法RT-PCR获得小鼠Oct4基因,构建pEGFP-N1-Oct4-EGFP融合质粒及pEGFP-N1-Oct4-EGFP终止质粒,pEGFP-N1质粒为阴性对照,脂质体法转染小鼠NIH3T3细胞,阳性克隆经RT-PCR,荧光显微镜验证正确后,移入去核的猪卵母细胞,观察并记录发育率。结果未转染的NIH3T3阴性对照组、转染Oct4-EGFP的小鼠NIH3T3细胞和转染pEGFP-N1组均能够支持猪异种核移植胚胎的早期发育,但转染pEGFP-N1-Oct4-EGFP实验组重构胚的卵裂率和8细胞发育率与转染pEGFP-N1组和未转染的NIH3T3组的重构胚发育率差异不显著。结论NIH3T3细胞能够支持鼠-猪异种核移植胚胎早期发育,Oct4对鼠猪异种核移植胚胎的发育并没有表现出促进作用,可能也受到NIH3T3来源的异种核移植胚胎本身发育率低以及本实验室核移植显微操作水平的限制,具体的机制尚需进一步探讨。

教师发展视域下北京一流学科建设高校教师职称评审政策分析——基于两所高校的案例

我国“双一流”建设目标的实现以高素质的高校教师队伍为基础,更需合理的激励制度进行维护与保障。教师职称晋升作为高校教师评聘环节中最为重要的激励制度,对教师发展有明确的导向作用。本研究梳理了教师发展的内涵、理念与作用,建立了教师发展视域下的政策分析框架与标准,并采用案例法对北京市两所一流学科建设院校的教师职称评审政策文本从完整度、清晰度和适切性上进行了理念与使命、结构与内容、方法与程序、反馈与改进四个方面的分析,并提出了相应的问题与政策建议。

IGF-I、TGF-α、bFGF对猪卵母细胞体外成熟和卵裂的影响

研究了IGF-I、bFGF、TGF-α3种细胞因子单独或者联合作用对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活后卵裂的影响,以确立猪卵母细胞体外成熟的最佳条件。结果表明,3种细胞因子对卵母细胞的成熟和激活后卵裂呈现双重效应(1)20ng·ml-1的IGF-I的成熟率和卵裂率显著的高于对照组和10、30、40、50、100ng·ml-1组[(85.3±2.11)%,(85.4±2.81)%;(71.1±1.91)%,(62.5±0.98)%;(77.5±2.5)%,(59.1±3.93)%;(61.9±1.72)%,(54.3±3.48)%;(58.6±4.26)%,(53.1±1.23)%;(44.4±5.10)%,(49.8±3.55)%;(33.9±3.48)%,(46.1±3.59)%,P<0.05),当IGF-I的浓度达到100ng·ml-1时,成熟率(33.9±3.48)%和卵裂率(46.1±3.59)%降低,与其它各组相比差异显著(P<0.05)。(2)20ng·ml-1的bFGF的成熟率(85.0±1.70)%和卵裂率(85.0±2.82)%最高,和其它各组相比,差异显著(P<0.05)。(3)15ng·ml-1的TGF-α的成熟率(86.9±0.46)%和卵裂率(86.3±2.01)%最高,和其它各组相比,差异显著(P<0.05)。(4)15ng·ml-1TGF-α和20ng·ml-1bFGF联用组,卵母细胞成熟率和分裂率显著高于20ng·ml-1bFGF和20ng·ml-1IGF-I联合组;15ng·ml-1TGF-α和20ng·ml-1IGF-I联合组;与20ng·ml-1bFGF、20ng·ml-1IGF-I和15ng·ml-1TGF-α三者联用组。[(89.2±1.44)%和(88.8±0.17)%.(75.6±0.98)%和(78.3±1.65)%;(77.2±2.54)%和(80.2±2.26)%;(76.4±1.28)%和(77.4±3.73)%,P<0.05]。

利用Taguchi法以高岭土为原料制备高硅NaY分子筛(英文)

采用Taguchi试验方法优化出了以高岭土为原料制备高硅NaY分子筛的最佳合成参数,考察了硅溶胶的加入量、反应体系的碱度、加水量以及晶化时间对NaY分子筛硅铝比和结晶度的影响。结果表明,高硅NaY分子筛的最佳合成条件是:反应体系各组分的物质的量比为7.5SiO2:1.0Al2O3:2.2Na2O:120H2O,晶化时间为16h。同时发现,对合成样品性能的影响最为显著的因素是硅溶胶的加入量和碱度。采用X射线衍射、N2静态容量吸附法和扫描电镜对利用最佳条件所合成样品的硅铝比、比表面积、孔分布以及表观形貌进行了表征。结果显示,以高岭土原料制备的NaY分子筛比参考样品拥有更高的硅铝比和更大的比表面积。

小鼠Nanog基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

按照nanog基因编码序列设计合成引物,利用RT-PCB从小鼠的囊胚期胚胎中扩增得到该 基因,并将该基因克隆到pET-28b(+)载体上,获得pET-28b(+)-nanog原核表达重组质粒,限制 性酶分析和DNA序列测定均证实该克隆插入片段为nanog基因编码序列。重组质粒转化大肠杆 菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,在大肠杆菌表达系统中获得了高效表达,western杂交证实该 蛋白具有6-His抗原活性,从而证实目的蛋白为Nanog蛋白。

序贯培养法对猪孤雌激活胚胎发育能力的影响

经体外成熟、孤雌激活和培养获得猪胚胎,研究了不同培养体系、共培养体细胞和序贯培养对猪孤雌激活胚胎发育的影响。试验表明:孤雌激活卵母细胞在SOF+10%FCS培养体系中分裂效果最好,添加胎牛血清的NCSU-23和颗粒细胞对胚胎发育有促进作用,培养6d后发育到桑囊胚的比率增加(P<0.05)。在序贯培养的前3d,SOF培养基(不含葡萄糖)和颗粒细胞对胚胎的发育有促进作用,分裂率(P<0.05)和突破4细胞阻滞的数目显著增加,在培养的后3d,添加胎牛血清的NCSU-23和输卵管上皮细胞能支持较多胚胎发育到桑囊胚,桑囊胚的发育率为(59.5±3.2)%(P<0.05)。结果表明,SOF培养基和颗粒细胞+添加胎牛血清的NCSU-23和输卵管上皮细胞的序贯培养系统能较好的促进胚胎的发育。

小鼠睾丸支持细胞的生物学特性研究

目的:获得高纯度的小鼠支持细胞,用以研究睾丸支持细胞在诱导胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化过程中的作用,同时借助睾丸支持细胞减少进行体内诱导试验时可能产生的免疫排斥反应。方法:用胶原酶和胰蛋白酶组合消化结合选择性贴壁法从1周龄昆明白小鼠睾丸分离获得睾丸支持细胞,纯化后进行体外培养,观察其体外培养的生物学特性。结果:睾丸支持细胞体外培养3～4h即贴壁,贴壁后伸出3～4个突起,为成纤维型细胞,在体外培养2～3d即长满全瓶。油红Ο染色显示,其胞质含有大量脂滴。透射电镜观察结果表明,支持细胞核仁周围有卫星核小体。RT-PCR结果显示获得的细胞表达缪勒管抑制物,不表达促黄体素受体和小鼠VASA同源物。结论:获得了较高纯度的小鼠睾丸支持细胞,可以用于诱导小鼠胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的体内和体外试验。

染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因

目的:利用染色质免疫沉淀法筛选转录因子Nanog调控的目的基因。方法:用甲醛固定胚胎干细胞,利用超声将其染色质随机断裂成0.5～1.0kb的染色质片段,通过免疫沉淀富集与Nanog结合的DNA片段,回复交联后分离纯化DNA片段,最终用凝胶迁移阻滞实验验证Nanog与DNA片段的结合。结果:我们发现fzr为Nanog调控的目的基因,并通过电泳迁移率变动分析证明了二者的结合。结论:Fzr在细胞周期调控中发挥重要作用,这为阐明Nanog的作用机理奠定基础。

间充质干细胞与肿瘤转移

间充质干细胞是一类能够自我更新、具有多向分化潜能的成体干细胞。近年来,有证据认为间充质干细胞是肿瘤组织中基质细胞的祖先,因此间充质干细胞微环境与肿瘤转移的关系逐渐成为研究热点,但间充质干细胞对肿瘤转移是促进还是抑制,目前的研究并不一致。我们简要综述了间充质干细胞参与肿瘤转移的研究进展。

癌相关成纤维细胞的特性及其调控肿瘤进程的研究进展

肿瘤组织是由恶性上皮细胞及其周围的基质细胞微环境形成的复杂混合体。在肿瘤的发生发展过程中,肿瘤细胞与肿瘤微环境相互作用相互影响,其中癌相关成纤维细胞(CAF)是肿瘤微环境的重要组成部分。CAF不仅促进肿瘤细胞的增殖与转移、肿瘤微血管生成以及耐药性产生,还能抑制机体的抗肿瘤免疫,从而促进肿瘤的恶性进展。本文简要综述癌相关成纤维细胞的特性及其在调控肿瘤发生发展中的作用。

HDAC6 基因敲除的人肝癌细胞系的构建及其生物学功能鉴定

背景肝癌的发病率和死亡率逐年攀升,对肝癌发生发展机制的研究尤为重要。目的应用CRISPR/Cas9技术在人肝癌HepG2细胞中敲除组蛋白去乙酰酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)基因,构建HDAC6基因敲除的HepG2稳定表达细胞系,并检测其对人肝癌细胞生长的影响。方法根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则设计特异性识别HDAC6基因的单向导RNA(single guide RNA,sgRNA)序列,构建LentiCRISPR-HDAC6-sgRNA真核重组表达质粒,测序鉴定后包装慢病毒感染HepG2细胞,用嘌呤霉素(puromycin)抗性筛选得到敲除HDAC6基因稳定表达的细胞系,Western blot鉴定HDAC6基因的敲除效果,CCK-8生长曲线实验检测HDAC6基因敲除对细胞增殖能力的影响,划痕实验和Transwell迁移实验检测HDAC6基因敲除对细胞迁移能力的影响。Western blot鉴定HDAC6基因敲除对调节α-tubulin乙酰化的影响,细胞存活曲线实验检测HDAC6基因敲除后HepG2对HDAC6抑制剂ACY-1215的敏感度,采用流式细胞术检测HDAC6基因敲除对HepG2细胞周期分布和凋亡的影响。结果成功构建HDAC6基因敲除的HepG2稳定表达细胞系后,经实验证明HDAC6基因敲除能够显著抑制HepG2细胞的增殖和迁移,使α-tubulin的乙酰化表达增强且能降低HepG2对ACY-1215的敏感度,还能使HepG2细胞发生G1期阻滞,促进HepG2细胞的凋亡。结论敲除HDAC6基因可以抑制HepG2细胞增殖和迁移,使α-tubulin乙酰化程度增加,调节HepG2细胞对ACY-1215的敏感度,且影响HepG2细胞的周期和凋亡,为进一步研究HDAC6在肝癌中的功能机制奠定了基础。

核糖核蛋白hnRNPK结合lncRNA调控肿瘤发生发展的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)参与肿瘤发生和发展过程,可作为肿瘤诊断与治疗的靶点。异质性胞核核糖核蛋白(hnRNP)家族成员hnRNPK广泛分布于多种肿瘤细胞内,具有调控基因表达、信号转导等功能。hnRNPK作为高度保守的DNA/RNA结合蛋白,可与lncRNA相互作用调控基因的转录、剪切、翻译过程,影响肿瘤的进展。因此,了解hnRNPK和lncRNA的功能及作用机制,特别是深入研究hnRNPK与lncRNA相互作用在肿瘤中的功能,可为肿瘤的临床治疗提供参考。

不同电融合和激活参数对猪体细胞核移植胚胎发育的影响

目的:摸索猪体细胞核移植最佳的融合和激活条件。方法:利用体外成熟的去核猪卵母细胞为受体,颗粒细胞为供核细胞,透明带间隙注射法构建重构胚,对电融合和激活的参数(电场强度、脉冲宽度、脉冲次数、融合液中Ca2+浓度、联合激活参数)进行摸索。结果:发现在电场强度1.5 kV/cm,脉冲宽度30μs,2次脉冲(间隔3 s),电融合液中0.1 mmol/L的Ca2+浓度下进行电激活,进而用(CB,7.5μg/m l)+(6-DMAP,2 mmol/L)激活3.5 h发育率最高,48 h卵裂率为72.5%,第6天桑葚胚率为35.1%;初次尝试了在胚胎培养前48 h加入0.05 mol/L的甘露醇来增加渗透压以减少电激活后重构胚的碎片化程度,但发现卵裂率及桑葚胚发育率与对照组差异不显著。结论:初步得到了适宜的猪体细胞核移植的融合和激活条件,为随后克隆胚早期发育基因的研究打下了基础。

不同培养体系对猪卵母细胞体外发育潜力的影响

目的:研究猪卵母细胞体外成熟的最佳条件,为用体细胞核移植的方法生产转基因克隆猪提供大量优质的MⅡ期卵母细胞。方法:采用猪卵母细胞体外成熟技术,研究了不同激素组合、猪卵泡液、半胱氨酸和颗粒细胞对猪卵母细胞体外成熟和发育潜力的影响。结果与结论:以15U/mlPMSG+20U/mlhCG成熟率最高,为(70.0±3.30)%,显著高于15U/mlFSH+30U/mlLH、10U/mlPMSG+10U/mlhCG〔成熟率分别为(45.6±5.10)%,(60.0±3.30)%〕,添加激素能促进卵母细胞的分裂,添加15%的猪卵泡液成熟率最高,为(86.7±3.35)%,显著高于5%,10%和20%组〔成熟率分别为(73.3±3.35)%,(71.2±5.08)%和(70.0±6.70)%〕,添加猪卵泡液促进了激活卵母细胞的分裂,在培养基中添加半胱氨酸和颗粒细胞,实验组和对照组成熟率差异不显著(P>0.05),但孤雌激活后卵裂率显著提高(P<0.05)。

SIRT1对肝癌细胞耐药敏感性的影响

目的构建沉默信息调节因子(silent information regulaor,Sir)样蛋白1(Sirtuin 1,SIRT1)的特异性短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,获得敲低SIRT1的肝癌细胞系,以探讨其对肝癌细胞的增殖和耐药敏感性的作用。方法设计针对SIRT1靶点特异性的干涉序列,连接到经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切的pSicoR-GFP载体,慢病毒包装293T产生病毒,感染肝癌细胞,建立肝癌细胞SIRT1低表达的稳定株。利用实时定量PCR检测SIRT1的干涉效果;通过平板克隆形成实验、CCK8细胞增殖实验检测SIRT1被干涉后对肝癌细胞增殖能力的影响;通过细胞耐药敏感性实验及实时定量PCR检测耐药基因的表达,考察SIRT1干涉对肝癌细胞耐药敏感性的影响。结果实时定量PCR实验证明该慢病毒干涉载体能显著抑制肝癌细胞中SIRT1的表达,SIRT1干涉可抑制肝癌细胞的增殖能力,下调耐药基因的表达,增强肝癌细胞的药物敏感性。结论 SIRT1抑制肝癌细胞耐药性。

β-拉帕醌联合帕博西尼抑制肝内胆管细胞癌细胞及肿瘤干细胞球的增殖

目的探讨β-拉帕醌以及联合帕博西尼对肝内胆管细胞癌(ICC)细胞、肿瘤干细胞球的抑制作用及其作用机制。方法首先,利用CCK-8和克隆形成实验检测β-拉帕醌单药及与帕博西尼联用对人ICC HuCCT1和QBC939细胞系增殖的影响;其次利用肿瘤干细胞球形成实验检测β-拉帕醌单药,帕博西尼单药及联合用药对人ICC细胞中肿瘤干细胞球形成的影响;进一步应用qRT-PCR和Western印迹检测β-拉帕醌处理组与对照组的肿瘤干性相关基因mRNA和蛋白表达水平的影响。结果β-拉帕醌单药及与帕博西尼联用对人ICC肿瘤干细胞球的形成具有显著的抑制作用,且协同效果更加显著。结论β-拉帕醌联合帕博西尼能够显著抑制人ICC细胞及肿瘤干细胞球的增殖。