基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术的静宁方入脑、入肠及粪便成分分析

目的基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术对静宁方给药后的大鼠入脑、入肠及粪便中的成分进行分析和鉴定。方法采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS,以0.1%甲酸-乙腈(A)和0.1%甲酸-水(B)为流动相进行梯度洗脱,流速0.2 mL·min^(-1),进样量5μL,加热电喷雾离子化源(HESI),正、负离子扫描。结合对照品比对、文献报道、数据库比对等方式对成分进行分析鉴定。结果共鉴定出42种成分,其中脑、回肠、结肠、粪便中分别鉴定出9、33、20、27种成分。结论本实验初步阐明静宁方入脑、入肠及粪便成分,为阐明其药效物质基础及作用机制提供了依据。

基于网络药理学和实验验证探究黄精增强免疫功能的作用机制

目的:探究黄精增强免疫功能的作用机制。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)收集黄精活性成分,通过SwissTargetPrediction数据库获得对应靶点基因。使用GeneCards、DrugBank数据库筛选免疫抑制(IS)相关靶点基因,并通过Venny数据库获得与黄精靶点基因的交集基因。使用String数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,使用Cytoscape软件构建“黄精-有效成分-靶基因-免疫抑制”网络,利用Metascape数据库对交集基因进行基因本体(GO)富集分析以及京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析,使用分子对接对有效成分和靶点进行验证。体外细胞试验采用脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞模型,通过MTT法检测不同浓度黄精提取物对细胞的毒性反应;采用Griess法检测黄精提取物对细胞中一氧化氮(NO)的影响。结果:经过筛选,ESR1、SRC、IGF1R、PTGS1、PTGS2等均参与了多个关键生物过程和关键通路。GO富集表明,细胞活化、炎症反应、细胞对应激的反应等为主要生物过程;KEGG富集表明,糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、AMPK、核因子κB信号通路等是关键通路。分子对接结果显示有效成分与核心靶点对接结果良好。体外试验结果显示,与LPS组比较,50,200,800μg/mL的黄精提取物组RAW264.7细胞中NO生成量均显著降低(均P<0.01)。结论:本研究初步预测了黄精增强免疫功能的ESR1、SRC等作用靶点和AMPK、核因子κB等信号通路,并结合Griess法表明黄精可通过调控炎症模型RAW264.7细胞NO的释放来发挥免疫作用。

基于网络药理学和分子对接技术探讨鼻渊通窍颗粒治疗鼻炎的作用机制

目的:通过网络药理学及分子对接技术,探讨鼻渊通窍颗粒治疗鼻炎的分子作用机制。方法:应用中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform,TCMSP)、中药综合数据库(traditional Chinese medicines integrated database,TCMID)数据库并结合文献,收集鼻渊通窍颗粒的活性成分及其作用靶点。通过OMIM,GeneCards,DisGeNET,GenCLiP和TTD等5个疾病数据库,检索鼻炎相关的疾病基因。利用Cytoscape构建“药物-化合物-靶点”网络、鼻炎相关蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络、鼻渊通窍颗粒治疗鼻炎的“化合物-靶点”网络、鼻渊通窍颗粒治疗鼻炎的PPI网络及“关键化合物-核心靶点-通路”网络,利用R软件进行基因本体功能富集分析,京都基因与基因组百科全书通路富集分析。运用Autodock_vina软件对筛选出的关键化合物及核心靶点进行分子对接。结果:鼻渊通窍颗粒中的活性成分有297个,治疗鼻炎的潜在作用靶点有113个;关键成分主要包括槲皮素、木犀草素、山柰酚和汉黄芩素等;核心靶点主要包括STAT3、TNF、JUN、MAPK1、IL-6和PTGS2等;涉及AGE-RAGE、IL-17、TNF和Toll样受体等多条通路;关键成分与核心靶点具有较强的结合活性。结论:本研究结果初步验证了鼻渊通窍颗粒发挥作用的多成分、多靶点、多途径的机制,为进一步探讨其药理作用机制和临床应用奠定了基础。

重楼总皂苷的现代研究进展与展望

重楼具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的作用,重楼皂苷是重楼的主要活性成分。研究表明,重楼总皂苷抗肿瘤作用显著,对乳腺癌、肺癌、胃癌、肝癌等实体瘤和白血病等非实体瘤有明显的抑制作用,其机制与抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,调控细胞周期,诱导凋亡和非凋亡的死亡途径,调节机体代谢与肿瘤微环境等密切相关。此外,重楼总皂苷在抗炎、抗氧化、抑菌、止血、缩宫等方面也表现出很好的药理活性。与此同时,重楼总皂苷可能诱导正常细胞凋亡、诱发炎症反应与氧化应激、导致机体代谢紊乱,近年来其肝损伤、生殖损伤、胃肠损伤、溶血等不良反应报道逐渐增多。药代动力学研究显示,不同给药方式的重楼总皂苷在机体内代谢存在着较大的差异,注射给药清除速度较快,口服则可能存在肝肠循环,同时由于溶解度低、并能激活P-糖蛋白(P-gp),导致其原型吸收差、在肠道渗透率和回收率低,影响重楼总皂苷的生物利用度,借助现代技术制备新剂型或新型载药系统一定程度上可提高其生物利用度。基于上述研究,该文将“重楼总皂苷”“Rhizoma Paridis Total Saponins”作为关键词,通过检索中国知网、维普、Web of Science等国内外中英文数据库,对重楼总皂苷的药理作用、药代动力学及不良反应展开综述,以期能为重楼总皂苷的研究开发及临床应用提供参考。

中药活性成分诱导肿瘤细胞铁死亡的研究进展

铁死亡是一种不同于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型细胞程序性死亡方式,与多种生理和病理过程有密切的联系。铁介导的活性氧积累是铁死亡发生的主要原因,铁死亡的发生机制与细胞内脂质代谢、铁代谢和抗氧化防御系统途径相关,多条信号轴和众多调节因子联合调控铁死亡的发生和中断。研究发现铁死亡对肿瘤细胞的生长和增殖具有一定的调节作用,诱导肿瘤细胞铁死亡能够有效抑制肿瘤的生长、转移及多药耐药等,因此铁死亡针对各类肿瘤细胞的作用效果和机制途径成为抗癌研究的热点话题。与此同时,铁死亡诱导剂的研究迅速发展,已有多种铁死亡诱导剂应用于临床癌症化疗阶段,且疗效显著,因此铁死亡类抗癌药物的研究成为肿瘤治疗发展的新路线。中药活性成分如石蒜碱、齐墩果酸、双氢青蒿素、土槿皮乙酸、麦冬皂苷B等,能通过脂质代谢、铁代谢、胱氨酸/谷氨酸转运体系统或谷胱甘肽过氧化酶4/谷胱甘肽等途径诱导肿瘤细胞铁死亡,调控肿瘤疾病的发展进程,展现出巨大的临床治疗潜力。该文从信号通路和调节因子及作用特点等方面介绍铁死亡的代谢调控网络,并结合铁死亡发生机制的理论基础,对中药活性成分诱导肿瘤细胞铁死亡的研究进展进行综述,为中药活性成分抗肿瘤应用提供新策略。

重楼总皂苷诱导乳腺癌MCF-7细胞铁死亡抗肿瘤机制研究

探讨重楼总皂苷诱导乳腺癌MCF-7细胞的铁死亡作用及机制,为重楼总皂苷临床治疗乳腺癌提供理论依据。通过噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测不同浓度重楼总皂苷对MCF-7细胞增殖能力的影响;倒置显微镜观察MCF-7细胞形态改变;平板克隆实验检测MCF-7细胞克隆形成能力;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放实验检测MCF-7细胞膜的完整性;划痕实验检测MCF-7细胞迁移能力;利用荧光倒置显微镜检测MCF-7细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平,利用试剂盒检测MCF-7细胞中Fe2+的含量;透射电镜观察MCF-7细胞线粒体超微结构;采用Western blot检测重楼总皂苷对MCF-7细胞中p53、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4(acyl-CoA synthetase long-chain family member 4,ACSL4)、转铁蛋白受体1(transferrin receptor protein 1,TFR1)表达的影响。结果显示,1.5、3、4.5、6、7.5、9μg·mL^(-1)重楼总皂苷均能显著抑制MCF-7细胞增殖,IC50为4.12μg·mL^(-1),对细胞形态有明显的损伤,导致细胞形成空泡,逐渐皱缩并脱落;抑制MCF-7细胞的克隆形成能力,破坏细胞膜促使细胞内LDH释放,缩短MCF-7细胞的迁移距离抑制迁移能力;显著提高MCF-7细胞中ROS的含量,诱导细胞氧化损伤,导致细胞内Fe^(2+)堆积,线粒体结构也发生明显的改变,线粒体膜密度增加,嵴减少甚至消失;促进p53蛋白表达,下调SLC7A11和GPX4表达并增强ACSL4和TFR1表达。因此,重楼总皂苷可显著抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移能力、破坏细胞结构,其机制可能与诱导细胞铁死亡有关。

重楼皂苷Ⅱ诱导肝癌HepG2细胞铁死亡作用机制

目的:探讨重楼皂苷Ⅱ(PPⅡ)诱导肝癌HepG2细胞发生铁死亡作用及其机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)比色法检测PPⅡ(0、1.5、3.0、4.5、6.0、9.0、18.0 mg·L^(-1))对HepG2细胞体外增殖能力的影响;平板克隆实验检测HepG2细胞克隆形成能力;划痕实验检测HepG2细胞迁移能力;利用试剂盒检测HepG2细胞中乳酸脱氢酶(LDH)的含量;借助荧光倒置显微镜观察HepG2细胞的活性氧(ROS)水平;利用试剂盒检测HepG2细胞中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和游离Fe^(2+)的含量;利用透射电镜观察HepG2细胞的线粒体超微结构;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测HepG2细胞中铁死亡相关蛋白p53、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、长链脂酰辅酶A合成酶4(ACSL4)及转铁蛋白受体1(TFR1)表达的情况。结果:与空白组比较,PPⅡ组HepG2细胞存活率显著下降,并呈浓度依赖性(P<0.01),细胞克隆数显著减少(P<0.01),划痕愈合距离明显缩短,迁移距离和药物浓度呈反比(P<0.01),细胞LDH的泄漏显著增多(P<0.01),细胞内ROS相对荧光强度显著增强,细胞内脂质过氧化物MDA积累量显著增多(P<0.01),细胞内GSH含量随着药物浓度的增大而显著减少(P<0.01),细胞FeRhoNox-1荧光强度显著增强(P<0.01),细胞出现空泡,线粒体明显皱缩,线粒体嵴减少甚至消失。与空白组比较,PPⅡ组细胞中p53、ACSL4、TFR1蛋白表达明显上调,SLC7A11、GPX4蛋白表达明显下调(P<0.05)。结论:综上,PPⅡ通过调控p53/SLC7A11/GPX4信号通路轴,促进ACSL4表达和细胞摄取Fe3+,使抗氧化系统失衡,诱导HepG-2细胞铁死亡。