猪瘟单克隆抗体的制备及ACI-ELISA检测猪瘟病毒的研究

本研究用猪瘟石门毒(CSFV-Shimen)免疫BALB/C小鼠,按常规单克隆抗体(McAb)技术方法制作,最终获得4株McAb,分别命名为AC9、CF8、DG5和EC9,4株McAb与基因工程CSFV E2蛋白反应结果表明:AC9、CF8和EC9是抗CSFv E2蛋白的McAb。用AC9和CF8McAb对CSFV进行抗原捕获间接ELISA试验(ACI-ELISA),通过一元McAb和二元McAb CAI-ELISA试验的比较,结果表明AC9与CF8两种McAb有协同作用,其捕获CSFV的能力比一元McAb显著提高。方阵试验结果表明:McAb和血清多抗(PcAb)的最佳工作稀释度分别为1:400和1:200。特异性试验和敏感性试验结果显示本法特异性强,敏感性高。最后用ACI-ELISA与PCR对30份病料的检测结果比较,表明ACI-ELISA与PCR检测结果相符。上述结果说明本研究所获得AC9和CF8可用作猪瘟诊断试剂盒的研制,是检测CSFV的有效方法。

玉米花粉多糖对猪瘟免疫效果的研究

本研究采用醇沉淀法从 350 g玉米花粉提取得粗提复合物 38.3 g。经用蒽酮反应、α萘酚反应、间苯二酚反应、碘化反应及高效液相色谱法鉴定 ,证实为多糖。用上述多糖作为免疫增强剂按剂量 50、 1 0 0、2 0 0 mg分别与猪瘟弱毒细胞冻干苗共同免疫猪 ,测定其免疫效果。结果表明 ,各剂量组的 IHA抗体效价均高于对照组 ;T细胞活性 E花环试验测得各剂量的活性 E花环百分率分别为 2 1 .84 %、2 5.4 6%、2 1 .92 % ,均高于对照组 1 5.91 % ;T淋巴细胞转化试验显示 ,各试验组的 T淋巴细胞转化率分别为 55.32 %、 56.39%、54.2 7% ,均高于对照组 4 7% ,上述三种方法测定的结果均显示显著差异。对 T淋巴细胞亚群的测定结果为 ,各试验组的 CD3、CD4、CD8T淋巴细胞的测定平均值均明显高于对照组 ,但 NK细胞的变化不显著。根据试验结果选取 1 0 0 mg剂量组在两个猪场进行田间扩大试验 ,测得的 IHA抗体效价亦高于对照组。研究结果表明 ,玉米花粉多糖既可增强体液免疫 ,又能增强细胞免疫。

伪狂犬病病毒广西B、W株gE基因的扩增、克隆及序列分析

在已鉴定了的伪狂犬病病毒(Pseudorabies Virus,PRV)11种糖蛋白中,gE是其中十分重要的一种非必需糖蛋白,是伪狂犬病病毒重要的毒力基因,它在介导感染细胞的融合,病毒在细胞间的扩散,病毒粒子的释放等方面均起着十分重要的作用[1],尤其是在影响伪狂犬病病毒神经嗜性和毒力方面的作用.利用PRV gE基因缺失疫苗,结合血清学方法可以区分疫苗接种猪和野毒感染猪[2].

RT-PCR诊断猪瘟的应用

应用猪瘟病毒特异性引物A1/A2进行RT-PCR反应,对1999年11月至2001年1月期间来自广西16个市县、19个养猪场的58份疑似猪瘟病料进行了检测,证明其中34份为阳性,阳性率为58.62%。

猪瘟犊牛睾丸细胞苗与兔体组织苗免疫效果的比较观察

本试验采用细胞苗和组织苗在三个猪场做免疫对比试验,结果显示,细胞苗免疫后10日龄、15日龄、20日龄、25日龄抗体水平分别有13%、30%、40%、53%,不在保护线,而组织苗则在20、25日龄才分别有10%、13%不在保护线。这表明组织苗免疫后仔猪母源抗体比细胞苗维持时间长。经几年抗体水平调查显示,细胞苗在14～16、19～21、24～26日龄抗体水平分别有16 9%、19 8%、26 2%不在保护线,而组织苗才分别有6 7%、7 9%、13 3%不在保护线。调查几个猪场显示1998～2000年用细胞苗后,仔猪存活率分别83%、85%、87%,而改用组织苗后,存活率分别为91%、93%、93%。由此表明,组织苗的免疫效果似比细胞苗好。

猪母乳抗E2抗体水平的调查研究

本实验对采至广西某猪场的270份母乳奶样,应用间接ELISA和间接血凝试验,分别对其进行了抗猪瘟E2抗体水平和猪瘟全抗体水平的检测。检测结果显示,在270份样品中,间接ELISA检测呈阳性的(即含有抗E2抗体的)占总样品的94.45%,而间接血凝试验检测出这些样品的效价在1∶16以上(具有保护力的)高达97.78%。从实验结果可以看出,该猪场母猪在哺育阶段的母乳含有抗E2抗体,仔猪能从母乳获得抗体,从而获得对猪瘟的免疫力。从两个试验的检测结果对照可知,两个数据差异不显著,说明用间接ELISA检测抗E2抗体、用间接血凝试验检测猪瘟抗体来监测猪瘟抗体免疫水平是可行的。本实验进一步论证了E2抗体就是猪瘟的保护性抗体,同时为监测猪瘟开创了一种新的可行方法,这对监测猪瘟真正的免疫水平,帮助猪场制定有效的免疫程序具有很现实的重要的意义。

免疫抑制法制备单克隆抗体的研究

用马的红细胞作抗原，先用不含靶抗原的Ｍ２６红细胞和环磷酰胺免疫小鼠，而后再用含靶抗原的Ｍ１７红细胞免疫小鼠。结果显示：经用环磷酰胺抑制后，试验组产生抗非靶抗原抗体的孔数为１５孔，而对照组为１７９孔。试验组获得仅与Ｍ１７红细胞起反应的抗体为１１孔，对照组为８孔。经克隆后，结果显示：在与５５匹含靶抗原的马红细胞反应中。试验组与５２匹起反应，而对照组与４６匹起反应。在与１０１匹不含靶抗原的马红细胞反应中，试验组与３４匹起反应，而对照组与６０匹起反应。这表明，采用环磷酰胺做抑制剂的免疫抑制法，可有效的抑制抗非靶抗原抗体的产生，减少筛选的工作量，而获得的单克隆抗体（单抗）特异性要比对照组强。

广西猪瘟流行毒株生长特性的初步研究

本实验以来自广西梧州、博白和北海地区的3株猪瘟野毒和中国标准石门株病毒、疫苗毒为材料,研究其在宿主体内和体外PK-15细胞中增殖的基本特性和差异。结果显示,广西的一部分毒株很可能在毒力和生长特性上已经发生了一些变异。本实验用免疫酶实验检测PK-15细胞中的猪瘟病毒抗原,发现其主要存在于细胞的核膜以及内质网和高尔基体富集的区域。

乳胶凝集反应检测牛轮状病毒感染的结果

使用维尔根轮状病毒乳胶凝集反应检测了临床上出现腹泻症状的１３９头犊牛，同时用补体结合反应试验（补反）与之作对照检测。结果显示：凝反的检出率为９５．６８％，而补反的检出率为７３．３８％。证明此凝反检测牛轮状病毒感染，具有检出率高、快速和操作简便的优点。

广西某农场应用回肠炎活疫苗改善猪生产性能的报告

回肠炎（猪增生性肠炎）是世界广泛流行的、由胞内劳森氏菌引起的一种常见的猪肠道病，经粪口途径传播，病猪排泄物内含有胞内劳森氏菌。该菌可导致猪肠道功能严重损坏、腹泻、肠出血，从而降低猪保育期和育肥期的增重，增加饲喂成本，加剧猪群体重分化。McOrist于2003年调查显示，近90％的猪场，至少有1头猪被诊断感染胞内劳森氏菌。近期的研究显示该病的流行率达到100％。

广西流行的猪瘟病毒株E2基因序列测定及分析

目的对广西流行的猪瘟病毒E2基因进行序列测定及分析。方法应用PCR对15株猪瘟病毒E2基因进行扩增、克隆及测序,利用DNAstar分析软件对所测定的15株毒株与兔化弱毒(HCLV)、石门(Shimen)毒株的相应基因片段进行同源性分析。结果得到长度为1092nt猪瘟病毒E2基因,编码364个氨基酸残基的目的基因片段。广西株与HCLV、Shimen株的核苷酸同源性分别为81.5%～82.8%和82.8%～84.3%,推导的氨基酸同源性分别为87.1%～88.8%和88.5%～89.9%,广西毒株之间核苷酸与推导的氨基酸同源性分别为92.3%～99.9%和94.8%～100%。广西15株猪瘟病毒E2蛋白上的全部半胱氨酸(Cys)位点均未改变,推测其E2蛋白的抗原结构保持很高的稳定性。但广西毒株中与特定单克隆抗体结合的724、725、729、734和738位的氨基酸发生了变异,这些变异可能导致不完全免疫保护。把所测定的广西15株与国内外已发表的19株病毒相应序列进行比较,建立系统发育树,所比较的34株猪瘟病毒被分为两个群,广西毒株皆属于基因群Ⅱ。结论成功进行了广西流行猪瘟病毒E2基因序列分析,为进一步探讨猪瘟病毒E2蛋白的抗原结构提供了依据。

RT-PCR技术检测猪瘟病毒的应用研究

本试验应用反转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,37份为阳性 ,阳性率为 13 4 %。其中健康猪扁桃体带毒较高 ,2 4 6份扁桃体中有 35份阳性 ,占 14 2 %。采自柳州健康猪的 2 6份淋巴结材料全为阴性 ,只有邕宁县的 1份健猪淋巴结阳性。结果表明 ,RT_PCR技术可应用于猪瘟的临床诊断。

猪支原体肺炎研究进展

猪支原体肺炎是猪肺炎支原体所引发的一种以气喘为主要症状,以肺部对称性肉变为主要病理变化的慢性接触性呼吸道传染病,在世界各地普遍存在,严重危害养猪业的健康发展。随着对猪肺炎支原体的深入研究,发现其单一感染致死率虽低,但是易引发其他病毒或细菌等病原的续发或并发感染,导致猪呼吸道疾病综合征,使得疫情变得更为复杂,增加猪病诊断与防控的难度,造成巨大的经济损失。论文根据猪肺炎支原体的最新研究进展,从病原学、流行病学特点、主要抗原蛋白的研究、诊断、疫苗研制、防控措施等六个方面做一综述,从而为猪肺炎支原体的进一步研究及该病的防控提供新思路。

RT-PCR技术诊断猪瘟的应用研究

应用反转录_聚合酶链反应 (RT_PCR)对猪瘟进行诊断应用研究。应用RT_PCR对来自广西不同地区的 135份疑似猪瘟病料进行检测 ,84份诊断为阳性 ,阳性率 6 2 .2 %。从百色、柳州地区等采集的健康猪扁桃体和淋巴结共 2 76份 ,经RT_PCR检测 ,37份为阳性 ,阳性率为 13.4 %。其中健康猪扁桃体带毒较高 ,2 4 6份扁桃体中有 35份阳性 ,占 14 .2%。采自柳州健康猪的 2 6份淋巴结材料全为阴性 ,只有邕宁县的 1份健猪淋巴结阳性。结果表明 。

RT-PCR检测猪瘟病毒初探

本研究建立了反转录聚合酶链反应 ( RT PCR)技术检测猪瘟病毒 ( Hog Cholera Virus,HCV)方法。合成的二对引物 HCV 1 / HCV 2和 HCV A1 / HCV A2成功地扩增兔化弱毒株、法国株和石门株的核酸 ,并对采自博白县 3个、贵港市 1个和武宣县 1个猪场共 1 3份病料进行检测。结果从博白县和贵港市的 1 1份材料中检测到 HCV的核酸。

猪伪狂犬病病毒桂W株的分离鉴定

从南宁市郊某猪场采集的发病仔猪大脑和内脏病料中分离到一株病毒。病毒接种家兔后引起典型的伪狂犬病症状而死。病毒接种RK细胞出现典型的细胞病变 ,感染细胞形成合胞体。毒价 (TCID50 )为 10 7.86/0 .1ml。病毒能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和 ,血清中和效价为 1∶10 7。电镜观察到圆形、有囊膜、直径 80～ 12 0nm大小的病毒颗粒。PCR反应可扩增特异性 2 17bpDNA片段。证实分离的病毒株为伪狂犬病病毒 ,并命名为伪狂犬病病毒桂W株。

南方三省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查研究

根据VR2332和CH-1aE基因序列设计一对特异性引物,对广西、广东、海南三省15个猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株E基因进行RT-PCR扩增,将扩增出的668bp片段插入pMD18-T载体中,进行序列测定。结果显示,15个毒株的E基因核苷酸序列之间的相似性为84.1%～100%,推导编码的氨基酸序列之间的相似性为81.1%～100%;与VR2332、CH-1a、LV株核苷酸之间的相似性分别为85.4%～98.5%、87.1%～96.2%、62.5%～63.8%,与VR2332、CH-1a、LV株氨基酸之间的相似性分别为83.1%～95.5%、86.1%～95.0%、51.7%～57.2%,表明15个毒株的E基因区域变异较大,均属美洲型。将15个流行毒株与国内外已发表的37株猪繁殖与呼吸综合征病毒相应序列进行比较,建立的遗传进化树表明这15个毒株分别属于3个亚群。推导编码氨基酸的比较结果表明,分别属于不同亚群的不同地区流行的猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株在E基因编码蛋白的潜在糖基化位点数目、抗原表位区域和与毒力相关的氨基酸等均存在变异。