新疆石榴皮总多酚有效部位的抗氧化、抗菌及抗肿瘤活性

目的:研究和评价新疆石榴皮总多酚粗提物和有效部位在体外的生物活性。方法:采用DPPH法、平皿二倍稀释法和MTT法分别对总多酚粗提物和有效部位进行抗氧化活性、抗菌和体外抗肿瘤活性测定。结果:石榴皮总多酚提取物清除DPPH自由基的效果显著,并且有效部位清除能力优于粗提物;石榴皮总多酚有效部位对临床常见致病菌有明显的抑制作用,具有广谱性,并且对一些临床耐药性的致病菌也有抑制作用;同粗提物相比,总多酚有效部位有较好的抗肿瘤活性。结论:石榴皮中的总多酚有效部位具有较好的抗氧化、抗菌及抗肿瘤活性。

准噶尔无叶豆片断化居群的遗传变异及克隆多样性

准噶尔无叶豆(Eremosparton songoricum)是豆科无叶豆属小半灌木,既能开花结实进行有性繁殖,又可以靠根茎进行无性克隆繁殖,为国家三级保护植物,在中国仅片断化分布于新疆古尔班通古特沙漠局部区域。本文采用ISSR分子标记对采自古尔班通古特沙漠腹地及边缘的7个准噶尔无叶豆自然居群共148个个体进行了遗传变异和克隆多样性分析。8个引物共扩增出84个位点,其中77个为多态性位点,物种水平上的多态位点百分比PPB为91.67%,Nei's基因多样性指数I为0.3192,Shannon信息指数H为0.3540;居群水平上的多态位点百分比PPB为58.45%,Nei's基因多样性指数I为0.2248,Shannon信息指数H为0.3270。居群间的遗传分化系数GST为0.2978。AMOVA分析表明,有31.88%的遗传变异存在于居群间,表明居群间存在显著的遗传分化。克隆多样性分析表明,居群水平上,居群G的Simpson多样性指数和均匀度指数最高,分别为0.9400和0.9885;居群E最低,分别为0.8457和0.9021。物种水平上,Simpson多样性指数为0.9858,均匀度指数为0.9673。本研究结果表明,和其他荒漠植物相比,准噶尔无叶豆表现出较高的遗传变异水平和克隆多样性,这主要与该物种兼性生殖的繁育方式及多克隆起源有关;而居群间产生了显著的遗传分化则主要由于人为干扰引起的生境片断化和居群减小而导致的基因交流障碍所致。遗传变异水平和遗传结构的研究将为分析准噶尔无叶豆致濒原因及进化潜力提供重要资料,对该物种保护具有指导意义。

石榴皮化学组分体外活性筛选及抗肿瘤机理的初步研究

目的对石榴皮中没食子酸、鞣花酸、槲皮素、异槲皮素、木犀草素、柚皮苷、山萘酚、熊果酸的8个化合物进行体外抗氧化、抗肿瘤活性筛选,并进行活性组分抑制肿瘤机理的初步研究。方法用DPPH法测定石榴皮中8个化合物的抗氧化活性;MTT法分别测定8种化合物对Hela细胞、胃癌BGC-823、结肠癌SW-480细胞株的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测活性组分对胃癌BGC-823细胞周期分布及细胞凋亡率影响。结果石榴皮中的8种化合物,除柚皮苷外,清除DPPH自由基能力依次为没食子酸>鞣花酸>木犀草素>槲皮素>异槲皮素>山萘酚>熊果酸;没食子酸、鞣花酸和熊果酸对人宫颈癌细胞株Hela细胞、胃癌BGC-823、结肠癌SW-480细胞株增殖有一定程度的抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期分布,发现没食子酸对BGC-823细胞阻滞在S期,木犀草素可使BGC-823细胞阻滞在G2/M期,熊果酸阻滞BGC-823细胞在G1/G0和G2/M期;流式细胞仪检测细胞凋亡结果表明,木犀草素和熊果酸均可诱导BGL-823细胞凋亡。结论石榴皮中抗肿瘤活性有效成分是鞣质和萜类,可抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性。

木犀草素抑制人胃癌BGC-823细胞增殖作用的研究

目的研究木犀草素(Luteolin,Lu)对人胃癌BGC-823细胞增殖的体外抑制作用及其机制。方法 DPPH法测定Lu抗氧化活性;MTT法测定Lu对BGC-823细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期分布影响及诱导凋亡的作用;倒置显微镜下观察细胞形态学变化。结果 Lu清除自由基的能力与其浓度呈正相关(r2=0.979);5,10,20,40μmol/L的Lu作用48 h后对BGC-823细胞增殖抑制率分别为5.08%,7.09%,25.27%和53.77%,半数抑制浓度(IC50)为(37.88±5.81)μmol/L;Lu以浓度依赖性阻滞细胞周期在G2/M期,且S期细胞比例呈下降趋势。40μmol/L的Lu作用72 h后,BGC-823细胞凋亡率显著增高(P<0.01);镜下观察发现经Lu处理后细胞固缩并伴随细胞膜破裂的现象。结论 Lu在体外对人胃癌BGC-823细胞增殖有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;抗氧化、改变细胞周期及诱导细胞凋亡是其抗肿瘤作用的机制。

荒漠昆虫小胸鳖甲几丁质酶抗血清的制备及抗体效价检测

目的几丁质酶是昆虫重要的防御物质,本研究采用DNA-蛋白质联合免疫策略制备荒漠昆虫小胸鳖甲几丁质酶(MpCHI786)的抗血清,用于检测小胸鳖甲在外界不良条件下几丁质酶的变化。方法从小胸鳖甲成虫中提取总RNA,反转录后RT-PCR扩增Mpchi786 cDNA,构建原核表达载体pET30a-Mpchi786,在大肠杆菌BL21中用IPTG诱导表达获得融合蛋白His-MpCHI786。对融合蛋白切胶纯化后与弗氏佐剂混合作为抗原。另外,构建真核表达质粒pcDNA3.0-Mpchi786,对小鼠尾静脉高压注射,8 h后RT-PCR检测其在肝脏的瞬时表达。以pcDNA3.0-Mpchi786肌肉注射免疫小鼠3次后,再用His-MpCHI786融合蛋白加强免疫2次,DNA免疫和免疫结束后收集免疫小鼠的血清,ELISA和Western blot法检测抗血清效价和特异性。结果 RT-PCR结果显示尾静脉高压注射8 h后,pcDNA3.0-Mpchi786质粒在小鼠肝脏有特异性表达。Western blot检测表明,用His-MpCHI786融合蛋白作为抗原,pcDNA3.0-Mpchi786DNA质粒免疫3次的抗血清和His-MpCHI786融合蛋白加强免疫2次后的抗血清都显示了特异性反应条带。ELISA检测结果显示抗血清效价高达1∶204 800以上。结论利用DNA-蛋白质联合免疫法能够获得效价高、特异性的小胸鳖甲几丁质酶MpCHI786的抗血清。

荒漠拟步甲科昆虫总RNA的有效提取及电泳图谱分析

[目的]获得高质量的总RNA是开展分子生物学研究的重要一步,由于不同生物的机体组成成分有较大差异,需要针对不同类型的物种建立各自有效的RNA提取方法。鞘翅目昆虫富含几丁质的外壳,常规方法难以获得高质量的RNA。[方法]以鞘翅目拟步甲科昆虫小胸鳖甲(Microdera punctipennis)为例,采用TRIzol试剂提取分离总RNA,方法略有改进,并对总RNA的电泳谱带特征进行鉴定。[结果]利用该方法从小胸鳖甲成虫中所获得的总RNA纯度较高完整性好,进一步实验证明提取的总RNA可满足RT-PCR等多种后续实验。琼脂糖凝胶电泳分析表明,其总RNA电泳谱带主要以18S带为主,28S则很弱。[结论]该提取方法对其他荒漠拟步甲科昆虫,尤其是含几丁质外壳的甲虫总RNA提取具有指导作用,小胸鳖甲总RAN的电泳谱带与哺乳动物肿瘤细胞的不同。

3D打印技术赋能“浸润式”美育在“组织学与胚胎学”的应用

本文依据教育部开展“以浸润作为美育工作的目标和路径,将美育融入课程教学活动各环节”的要求,“组织学与胚胎学”课程从学科特点出发,融合3D打印技术赋能的“浸润式”课程美育,改变传统医学课堂的教学模式,形成以学生为中心的体验式学习,为医学院校课程美育的建设提供新思路。

准噶尔小胸鳖甲短时低温胁迫响应的转录组分析

【目的】拟步甲科昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis是分布于中国新疆古尔班通古特沙漠的特有物种,具有很强的耐寒性,但其低温响应的分子机制尚不明确。本研究旨在利用转录组测序技术丰富小胸鳖甲的已知基因信息,分析在短时低温胁迫下,上调表达基因的主要类群及参与的主要代谢通路。【方法】利用Trinity软件对分别在4℃低温和25℃(对照)下处理3 h的小胸鳖甲成虫RNA-Seq数据进行从头组装,利用Blast2go软件进行基因注释。通过DESeq和GFOLD软件分析差异表达基因,并对上调表达基因进行GO(Gene Ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)代谢途径富集分析。【结果】测序过滤后得到68 165 001个有效读序,51 712个平均长度为984 bp的非冗余基因,其中29 925个基因(约57.87%)有同源序列(E-value<10-5),与拟步甲科的赤拟谷盗Tribolium castaneum相应基因相似性最高(核苷酸序列一致性为72.75%)。低温响应上调表达基因有514个,富集到35个GO类群,18个KEGG途径。其中胁迫响应类群、生物调节类群和免疫系统过程类群都占有重要比例,嘌呤代谢、硫胺素代谢、糖酵解/糖异生等代谢通路显著富集。在胁迫响应类群中,热激蛋白Hsp90基因、超氧化物歧化酶(SOD)基因和钙联接蛋白Calnexin基因等8个非生物胁迫相关基因显著上调表达。【结论】荒漠昆虫小胸鳖甲低温转录组揭示,在4℃冷驯化过程中,代谢过程、胁迫响应、生物调节和免疫系统等生物学过程相关基因表达显著上调,其中几个非生物胁迫响应基因提示小胸鳖甲可能从分子伴侣、细胞周期阻滞、线粒体稳定性、抗氧化胁迫等多方面应对低温胁迫。KEGG富集分析所揭示的小胸鳖甲在低温下的转录组代谢通路与其他物种有较大差异。研究结果为后续生物信息学分析及小胸鳖甲耐寒关键基因的发掘及耐寒机制的揭示提供了基础数据。

荒漠昆虫小胸鳖甲抗菌肽Attacin基因的克隆及低温表达模式分析

昆虫在低温冷驯化过程中会发生很多基因表达的改变， 从转录组层面上开展广泛的研究有助于全面认识昆虫对冷响应的分子机制。为了对荒漠昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis的 4℃低温转录组数据中一个上调表达的Attacin基因（MpAttacin1）进行深入了解并分析其对低温诱导的响应情况， 本研究通过生物信息学分析对该基因进行了鉴定， 并利用实时荧光定量PCR对其在低温下的mRNA水平进行了检测。结果表明： 获得的MpAttacin1 cDNA长度为523 bp， 包含一个456 bp的开放阅读框和67 bp的5′端非翻译区。MpAttacin1编码含有151个氨基酸残基的多肽， N端含有17个氨基酸的信号肽序列。同源性分析表明， 其氨基酸序列与其他鳞翅目、 双翅目和鞘翅目昆虫的抗菌肽Attacin具有30%~40%的一致性。以邻接法（neighbor-joining， NJ）构建的系统进化树表明， 小胸鳖甲Attacin1与其他鞘翅目昆虫的Attacin起源于共同的祖先， 属于Attacin_C超家族。实时荧光定量PCR分析结果显示， 在4℃与-4℃低温胁迫时， MpAttacin1基因的转录都呈现先升高后降低的应激反应趋势， 但在对低温的响应时间和强度上有所不同。在4℃处理5 h和9 h后， MpAttacin1的表达量分别为对照组的2.3和3.8倍， 而在-4℃处理7 h和9 h后， 分别为对照组的2.4和1.5倍。这些研究表明， 除已知的抗菌功能外， Attacin在昆虫的低温适应过程中可能也发挥着重要的作用。

熊果酸对H22荷瘤小鼠抗肿瘤及免疫调节作用

目的探讨熊果酸(UA)对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用及免疫功能的影响。方法皮下移植建立H22荷瘤小鼠模型,腹腔注射不同剂量UA,检测抑瘤率和免疫器官指数,MTT法检测脾脏T、B淋巴细胞增殖能力,流式细胞术检测CD4+、CD8+T细胞亚群含量及比例,ELISA法检测血清细胞因子IL-2、IL-4和TNF-α的表达量。结果 UA对小鼠皮下移植性肿瘤H22有显著的抑制作用,可降低免疫器官中异常增大的脾指数,增强脾脏中T、B淋巴细胞增殖能力,提高淋巴细胞亚群CD4+T细胞表达及CD4+/CD8+T细胞亚群比例,促进血清IL-2、TNF-α表达,降低IL-4表达。结论 UA可抑制小鼠肝癌H22肿瘤生长,体内可以提高荷瘤小鼠的免疫能力,其抗肿瘤作用可能与机体的免疫调节作用相关。

棕色棉F3'H-羟化酶基因的克隆与生物信息学分析

根据葡萄的类黄酮3'-羟化酶(F3'H)基因全长cDNA序列Blast所得棉花的EST序列设计引物,以开花后16 d(DPA16)的新彩棉5号(XC-5)纤维为材料,利用RACE和RT-PCR技术分离得到了2个类黄酮3'-羟化酶基因cDNA序列,此2个序列编码区完全相同,仅在3'UTR区存在片段长短的差异,推测可能是基因转录后加工方式不同所造成。克隆所获得的棉花F3'H基因编码区全长1 533 bp,编码510个氨基酸,氨基酸序列分析预测表明,该基因所编码蛋白含有一个跨膜结构域,是一种分泌蛋白,定位于内质网上,并含有一段与细胞色素P450功能区相匹配的保守功能域;序列比对结果表明,棉花F3'H基因与其他多个物种的F3'H基因在氨基酸序列上有较高的同源性;聚类分析结果表明,棉花F3'H蛋白与双子叶植物大豆的F3'H亲缘关系较为接近,而与单子叶植物高粱等作物则较远。

荒漠甲虫小胸鳖甲胞外信号调节激酶ERK基因的克隆与低温表达谱分析

昆虫属变温生物,冷胁迫是其最常见的环境刺激。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与细胞应对外界刺激密切相关,为了解MAPK信号通路在荒漠甲虫小胸鳖甲耐寒机制中的作用,从小胸鳖甲4℃转录组数据中筛选出胞外信号调节激酶(ERK)基因的全长c DNA,命名为Mp ERK。生物信息学分析表明,Mp ERK全长1125 bp,编码374个氨基酸。Mp ERK的理论分子量是43 k Da,含有ERK激酶所共有的磷酸化位点,属于MAPK超家族,与其它物种ERK的一致性达80%以上。实时定量PCR检测Mp ERK基因在低温下的表达谱发现,4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的7.5倍,5 h时达到高峰,为对照的15倍。-4℃处理1 h后,Mp ERK基因的表达上调为对照的8.4倍,5 h时达到高峰,为对照的13.75倍。研究结果表明Mp ERK基因是冷响应的,可能在小胸鳖甲应对低温时发挥信号转导作用。

文本生成系统中知识库构造设想

本文探讨了文本生成系统中知识库的内容与地位,它的结构要求,并从具体实现角度给出了初步设想.

转基因大穗小麦与受体小麦差异基因的初步研究

文章以转基因大穗小麦和春麦761幼苗叶片为实验材料,采用化学发光生物素探针标记Southern杂交法检测转基因大穗小麦中的特异性外源DNA片段,为进一步研究分析转基因大穗小麦中该特异性外源DNA片段奠定基础。结果表明,大赖草生物素标记探针与转基因大穗小麦酶切总DNA杂交有一条特异性杂交条带,片段长度约为750 bp~1000 bp,与春麦761酶切总DNA杂交后为空白,推测特异性条带所显示的外源性DNA片段来自大赖草总DNA。

欠发达地区乡村旅游环境卫生优化若干问题探讨——基于曹角湾村旅游环境卫生实地调研的思考

在全域旅游发展模式下,优化环境卫生是乡村旅游"全域化"发展的起始点。根据对曹角湾村的实际调查,发现欠发达地区乡村旅游环境卫生优化有其特殊性,解决其环境卫生优化问题必须进行明确的责任区分并尽快建立和落实基于不同主体责任的长效机制。

荒漠甲虫小胸鳖甲低温响应几丁质酶基因Mpcht19的克隆及表达模式分析

【目的】探索荒漠昆虫小胸鳖甲Microdera punctipennis低温响应的分子机理并挖掘其耐寒基因。【方法】根据低温转录组数据筛选并克隆小胸鳖甲几丁质酶基因,并进行生物信息学分析;通过实时荧光定量PCR和免疫组织化学法分析该基因在成虫不同组织中和4℃低温胁迫下的表达模式分析。【结果】从小胸鳖甲成虫克隆获得一个几丁质酶基因Mpcht19(Gen Bank登录号:KY126382)。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白Mp CHT19属于Ⅳ型昆虫几丁质酶,理论分子量约为27.18 k D,无信号肽,具亲水性。系统进化分析表明,Mp CHT19与赤拟谷盗Tribolium castaneumⅣ型几丁质酶Tc CHT19同源性最高,氨基酸序列一致性为34.05%。实时荧光定量PCR结果显示,Mpcht19在成虫脂肪体和后肠中高表达,具有组织特异性;该基因的表达还受4℃低温诱导。免疫组织化学分析结果显示,在4℃低温下Mp CHT19蛋白在脂肪体和后肠中表达。【结论】Mpcht19基因的表达具有组织特异性,并受低温诱导。研究结果有助于深入研究几丁质酶与小胸鳖甲耐寒性的关系。

莪术醇的结构修饰以及抑制黑色素含量研究

我们利用从莪术油中分离得到的莪术醇考察对B16细胞黑色素的影响,发现其对黑色素有抑制作用。为了进一步对莪术醇的化学结构进行修饰,设计合成了8个莪术醇的衍生物,其中2、3、5a、5b、6为新化合物。经筛选发现两个衍生物5b和6抑制黑色素含量比莪术醇有所增强,但并无较大的显著性差异,经Grphpad prism软件分析,其P值均大于0.05,分别为0.80和0.22。黑色素含量测定结果表明莪术醇环外双键经环氧化、水解及酯化后可提高其抑制黑色素含量。

氨基酸酯基二硫代甲酸酯类化合物的合成及体外生物活性评价

目的合成18种氨基酸酯基二硫代甲酸酯类化合物(化合物1～18),并进行体外抗肿瘤活性以及抗乙肝病毒(HBV)活性评价。方法以L-苯丙氨酸、L-丙氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-谷氨酸及L-甘氨酸的甲酸酯为原料,通过碱催化,与CS2和卤代烷缩合反应,合成18种氨基酸酯基二硫代甲酸酯类化合物。化合物的结构及组成经过质谱、1 H-NMR和熔点仪测试技术进行了表征。利用MTT法测定目标化合物1～18对子宫颈癌HeLa、肝癌HepG2、胃癌BGC-823、乳腺癌MCF-7、结肠癌SW-480细胞株的增殖抑制作用;ELISA法测定对HBsAg和HBeAg的抑制效果;实时荧光定量PCR法检测上清液中HBV DNA的表达量。结果化合物11、12、17和18对上述5种肿瘤细胞株增殖有较好的抑制作用;相对于阳性对照拉米呋啶,化合物14和15能够较好的抑制HBV抗原的分泌和病毒DNA的复制。化合物14抑制HBV DNA、HBsAg和HBeAg的IC50值分别是0.43、0.28和0.1mmol·L-1;化合物15的IC50值分别为0.24、0.02、0.03mmol·L-1。结论这些二硫代甲酸酯类衍生物中,化合物11、12、17和18在体外具有抑制肿瘤细胞增殖的活性;化合物14和15在体外对HBV有较好的抑制作用。该研究为进一步开发二硫酯在抗肿瘤及抗病毒方面奠定了很好的基础。

读者剧场在初中英语阅读教学中的应用探究

分析初中英语阅读教学存在的问题,介绍读者剧场的概念和应用方法,提出将读者剧场应用于初中英语阅读教学的意义。结合读者剧场的实际操作和应用体会,探讨如何在初中英语阅读教学中培养学生的阅读能力和综合能力。

木犀草素对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应及其机制

目的评价木犀草素对人胃癌BGC-823细胞裸鼠移植瘤的作用及其作用机制。方法建立BGC-823胃癌裸鼠移植瘤模型，裸鼠皮下接种BGC-823细胞，成瘤后，根据裸鼠体重，进行区组随机化分组，共分成5组（各8只）：对照组（生理盐水，0．2ml／只），5氟尿嘧啶组（30mg／kg），木犀草素低（10mg／kg）、中（20mg／kg）、高（40mg／kg）剂量组；各组给药期间测定瘤体积，绘制肿瘤生长曲线；各组用药结束后处死，称瘤重，计算抑瘤率，比较各组荷瘤鼠瘤重的差异；利用HE染色观察肿瘤形态学变化，免疫组化检测肿瘤血管内皮生长因子A（VEGF—A）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达变化。结果肿瘤生长曲线结果表明，5氟尿嘧啶组，木犀草素低、中、高剂量组的肿瘤均有不同程度被抑制；木犀草素高剂量组肿瘤重量显著低于对照组[（0．29±O．01）比（0．38±0．03）g，P〈0．01]，抑瘤率达到24．87％；HE染色结果表明，随着木犀草素剂量的增大，瘤体坏死灶边缘有较多淋巴细胞浸润，且坏死区面积有增大趋势；免疫组化结果显示：中、高剂量组VEGF—A阳性细胞积分分别为1．25±0．17和1．00±0．07，均明显低于对照组（1．50±0．15，均P〈0．05）；高剂量组MMP-9阳性细胞积分亦显著低于对照组（3．75±1．43比9．00±1．08，P〈0．01）。结论木犀草素在体内可抑制肿瘤生长，其主要机制是可刺激体内免疫反应，同时抑制肿瘤细胞的EGF—A、MMP-9蛋白表达。