猪流行性腹泻病毒Nsp6蛋白的分段表达及多克隆抗体制备

猪流行性腹泻病毒(PEDV)的非结构蛋白Nsp6在诱导宿主细胞自噬中起着重要作用。为进一步确定Nsp6蛋白诱导细胞自噬的关键功能域,本研究利用RT-PCR扩增技术获得了Nsp6及其3个分段基因。首先构建了重组原核表达质粒pSUMO-Nsp6,并转化至大肠杆菌Rosetta感受态中,经IPTG诱导并纯化后,所得蛋白用于小鼠免疫,制备抗Nsp6蛋白的多克隆抗体。再将Nsp6及其3个分段基因分别构建至真核表达载体pCMV-HA,并将其转染至IPEC-J2细胞进行真核表达,通过Western blot和双荧光标记法来确定蛋白表达情况。结果:Nsp6蛋白在Rosetta中成功表达,并通过免疫小鼠获得了效价为1∶10240的多克隆抗体,该抗体具有与PEDV和Nsp6蛋白特异性结合的能力;免疫荧光及Western blot结果表明,Nsp-6及其截短基因在IPEC-J2细胞中成功表达,且与制备的Nsp6多克隆抗体发生特异性结合。综上,本研究原核表达了Nsp6蛋白并制备了相应的特异性抗体,验证了Nsp6及其分段基因的在细胞中的真核表达,为进一步研究Nsp6蛋白的特性和功能奠定了基础。

软土地基施工技术在公路桥梁施工中的应用要点分析

软土地基具有不稳定性和易压缩性特征,成为了当代路桥工程建设中的难题,软土地基施工技术的创新也成为了延长工程使用寿命的关键。我国地质条件特殊,湿地、沼泽地众多,如何有效改善和加固软土地基成为工程技术研究的重要方向。为了提高路桥工程软土地基施工质量,加强软土地基施工技术在路桥工程中的应用,本文将选取具体的工程案例,结合公路桥梁施工中软土地基施工技术的重要性,在对堆载预压法、强夯法、加筋法等技术进行分析的基础上,就软土地基施工技术在公路桥梁施工中的具体应用进行深刻探究。

基于机器视觉的数控机床对刀技术概述

介绍了数控机床对刀技术的概念,详细阐述了现在常用的几种对刀方法的原理及其优缺点,描述了基于机器视觉的数控机床刀具补偿技术的实现原理和实现过程,针对机器视觉对刀技术研究热点的国内外发展现状进行了详细研究,重点探讨了视觉对刀仪和刀具图象处理算法的国内外研究现状,并指出了基于机器视觉的对刀技术的发展趋势和特点,对中国基于视觉技术的对刀仪的开发具备一定参考意义,对中国的数控机床自动对刀技术智能化改造具备一定的指导意义。

叶片空化清洗器单空泡动力学研究

基于叶片空化清洗器流场模型,对叶片空化清洗器流场进行面积等效处理,利用MATLAB对流场面积进行参数化编程。以Rayleigh-Plesset方程为基础,应用4-5阶Runge-Kutta法对推导的等效流场的单空泡动力学模型进行数值求解,得到了叶片清洗器单空泡生长、溃灭的流场特性变化规律。结果表明:面积等效方式为复杂流场中单空泡流场特性的分析提供一种手段;空泡溃灭位置位于流场入口x/x_0=0.155处,溃灭时产生高温、高压和高速微射流,可有效去除管道垢质。

Stathmin基因在^(131)I抑制甲状腺癌细胞生长中的作用

目的探讨微管不稳定蛋白(stathmin)基因在^(131)I抑制甲状腺癌细胞生长中的作用及相关机制。方法将^(131)I抵抗甲状腺癌细胞株(res⁃TPC⁃1)随机分为对照组、^(131)I组、si⁃NC组、si⁃stathmin组、^(131)I+si⁃NC组和^(131)I+si⁃stathmin组。采用MTT实验检测res⁃TPC⁃1细胞存活率。克隆形成实验检测克隆形成数。流式细胞术检测凋亡率。TUNEL染色检测凋亡指数。Transwell检测迁移数。Western blot检测stathmin、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl⁃2)、基质金属蛋白酶-2(MMP⁃2)、基质金属蛋白酶-9(MMP⁃9)、β-连环蛋白(β-catenin)和c⁃Myc蛋白表达水平。结果Stathmin在res⁃TPC⁃1细胞中的表达水平明显高于TPC⁃1细胞,差异有统计学意义(t=-18.552,P<0.05)。与对照组比较,^(131)I组res⁃TPC⁃1细胞存活率、克隆形成数、迁移数、CyclinD1、Bcl⁃2、MMP⁃2和MMP⁃9水平明显降低,差异有统计学意义(t值分别为3.786、6.293、5.226、5.979、6.882、6.578和4.500,P<0.05),凋亡率、凋亡指数、p21、Bax、β-catenin和c⁃Myc水平明显增加,差异有统计学意义(t值分别为-8.131、-11.496、-6.240、-6.600、-13.950和-10.262,P<0.05)。与si⁃NC组比较,si⁃stathmin组res⁃TPC⁃1细胞存活率、克隆形成数、迁移数、CyclinD1、Bcl⁃2、MMP⁃2、MMP⁃9、β-catenin和c⁃Myc水平明显降低,差异有统计学意义(t值分别为3.793、9.199、9.193、10.733、9.430、9.907、7.496、9.261和12.862,P<0.05),凋亡率、凋亡指数、p21和Bax水平明显增加,差异有统计学意义(t值分别为-12.675、-14.712、-6.626和-6.091,P<0.05)。与^(131)I+si⁃NC组比较,^(131)I+si⁃stathmin组res⁃TPC⁃1细胞存活率、克隆形成数、迁移数、CyclinD1、Bcl⁃2、MMP⁃2、MMP⁃9、β-catenin、c⁃Myc水平明显降低,差异有统计学意义(t值分别为7.134、11.324、8.589、8.558、10.817、10.401、11.833、10.490和9.098,P<0.05),凋亡率、凋亡指数、p21、Bax水平明显增加,差异有统计学意义(t值分别为-13.190、-13.284、-10.817和-10.419,P<0.05)。结论抑制stathmin表达可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路增强^(131)I对res⁃TPC⁃1细胞的杀伤效果。

槲皮素联合伊马替尼体外抑制人胃癌SNU-1细胞生长和诱导细胞凋亡的研究

目的观察槲皮素联合伊马替尼对人胃癌SNU-1细胞生长和细胞凋亡的影响。方法以12.5~200.0μmol/L槲皮素和0.125~2.000μmol/L伊马替尼单药以及二者联合用药处理细胞24 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用蛋白印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果槲皮素和伊马替尼单药均能使细胞活力降低,0.250μmol/L伊马替尼和2 5.0μmol/L槲皮素联合用药对细胞活力具有显著抑制作用,差异有高度统计意义(P<0.01),且可诱导人胃癌SNU-1细胞凋亡;二者联合处理还可以显著诱导半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的上调,差异有高度统计意义(P<0.01)。结论槲皮素联合伊马替尼能抑制胃癌SNU-1细胞的生长并诱导细胞凋亡,其作用机制主要是通过上调Caspase-9和Caspase-3的表达从而启动细胞凋亡来实现的。

计划控制指标与实绩之间的关系

在世纪之交的特殊阶段,中国将如何发展自己?《纲要》为我们描绘了一个蓝图、从这个蓝图中，我们可以了解今后15年、5年，以及明年，将做什么，怎样来做。

甲状腺癌患者术后感染的病原学特点及临床指标诊断价值分析

目的分析甲状腺癌患者术后感染的病原学特点,探讨血PCT、MCP-1、免疫球蛋白对患者术后并发感染的诊断价值。方法选取2020-2022年福建省泉州市第一医院收诊的105例甲状腺癌术后并发感染患者为本次研究对象,同时随机选取同期进行甲状腺癌手术未发生感染的90例患者作为对照组。采集患者标本并进行培养和病原菌鉴定,采用K-B纸片扩散法对主要病原菌进行药敏试验。采集所有患者静脉血,采用化学发光免疫分析法检测降钙素原(Procalcitonin,PCT)、单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)水平,采用免疫比浊法测定免疫球蛋白G(Immune globulin G,IgG)、免疫球蛋白A(Immune globulin A,IgA)、免疫球蛋白M(Immune globulin M,IgM)水平。采用受试者工作特征曲线(ROC)分析术后1 d、3 d的PCT、MCP-1、IgG、IgA、IgM水平对术后并发感染的诊断价值。结果105例甲状腺癌患者发生术后感染,感染部位主要为呼吸道系统(41.90%),其次为切口部位(30.48%)。本次研究中共检出病原菌87株。革兰阳性菌(29株,33.33%)主要为金黄色葡萄球菌(12株,13.79%)、肺炎链球菌(11株,12.64%)。革兰阴性菌(52株,59.77%)主要为肺炎克雷伯菌(26株,29.89%)、铜绿假单胞菌(17株,19.54%)。真菌(6株,6.90%)主要为白色念珠菌(3株,3.45%)。革兰阳性菌金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌对常用抗菌药物克林霉素、青霉素、红霉素的耐药性均高于60%,对利福平的耐药率低于20%,未产生对利奈唑胺、万古霉素、喹诺普汀/达福普汀的耐药株。革兰阴性菌肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌对常见抗菌药物庆大霉素、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星的耐药率均高于50%,对阿米卡星、亚胺培南的耐药率低于15%,未产生对多粘菌素B的耐药株。感染组患者术后1 d、3 d的PCT、MCP-1水平均高于对照组患者水平,术后1 d、3 d的IgG、IgA、IgM水平均低于对照组患者水平,差异有统计学意义(P<0.05)。采用ROC曲线评估术后1 d、3 d的PCT、MCP-1水平对并发感染的诊断价值显示,术后3 d MCP-1水平的曲线下面积(AUC)最大,为0.998(95%CI:0.995~1.000)。采用ROC曲线评估术后IgG、IgA、IgM水平对并发感染的诊断价值显示,术后3 d IgM水平的曲线下面积(AUC)最大,为1.000(95%CI:0.999~1.000)。结论甲状腺癌患者术后感染多发生于呼吸道系统,以革兰阴性菌为主要病原菌。通过检测患者PCT、MCP-1、IgG、IgA、IgM水平变化可以有效预测患者术后感染的发生。