绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体的构建及鉴定

为了构建绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体,并在人胚肾细胞(HEK-293T细胞)中筛选及鉴定载体干扰效果,试验采用Invitrogen BLOCK-iTTM RNAi Designer在线软件设计PLC-γ1基因的4条shRNA干扰序列(PLC-γ1-shRNA-1~4)和1条阴性对照序列(PLC-γ1-shRNA-NC),将其分别克隆至慢病毒干扰载体pLentiLox3.7(pLL3.7)中构建PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,用其转染HEK-293T细胞,48 h后通过倒置荧光显微镜观察荧光蛋白表达情况,并利用实时荧光定量PCR法和Western-blot检测HEK-293T细胞中PLC-γ1基因和蛋白质的表达情况,筛选出干扰效率最高的PLC-γ1-shRNA干扰序列并计算慢病毒含量。结果表明:试验成功设计出PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,大小为120 bp。PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体均具有较高的干扰效率,在倒置荧光显微镜下均可观察到绿色荧光蛋白表达,其中PLC-γ1-shRNA-2序列的干扰效率最高,其PLC-γ1基因和蛋白质的相对表达量最低,极显著低于PLC-γ1-shRNA-NC的干扰(P<0.01),慢病毒含量为1.1×10^(7)IU/mL。说明针对PLC-γ1基因筛选出的PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体从基因和蛋白质水平上均能有效地抑制PLC-γ1的表达。

马流行性感冒的实验室诊断与疫苗研究进展

马流行性感冒是马A型流感病毒感染导致的一种急性呼吸道传染病。该病流行范围广,传播速度快,呈急性爆发。许多赛马机构和马术团体制定强制免疫政策,但疫苗免疫不能做到无病毒免疫,免疫动物仍可能向外排毒,成为马流行性感冒病毒传播的传染源,严重影响我国马产业的健康发展。及时的实验室诊断和疫苗免疫对于马流行性感冒的预防具有重要意义。该文主要论述马流行感冒的病原学特征、流行病学及临床症状展开叙述,总结近年马流行性感冒的实验室诊断方法及疫苗研究进展,以期为该病的诊断和防控提供参考。

猪繁殖呼吸综合征的实验室诊断及防控措施

猪繁殖呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)感染导致以母猪繁殖障碍及仔猪和育肥猪呼吸道症状为主的一种高度接触性传染病。因出现耳部发绀特征症状,又得名“猪蓝耳病”。按照最新分类可分为PRRSV-1型和PRRSV-2型两种,PRRSV-1型(欧美型)仅限于欧美传播,PRRSV-2型(北美型)仅限于北美传播,目前在全球广泛流行。无论各种日龄、品种的生猪均受到PRRSV的威胁,其中仔猪和妊娠母猪最易感。临床特征为母猪不孕、晚期胎儿木乃伊、流产、死胎和弱胎,仔猪产出后常因呼吸道疾病和继发感染而很快死亡。年龄较大的猪可能出现轻度呼吸道症状,有时因继发感染而使病情复杂,严重影响我国养猪业的健康发展。本文总结了其病原学特征、流行病学及临床症状、近年来PRRS的实验室诊断方法,提出了相关的防控措施,以期为PRRS的防控提供参考。

猪伪狂犬病的流行诊断及防控措施

伪狂犬病(PR)又称奥杰斯基病,是由疱疹病毒1型伪狂犬病毒(PRV)感染人和无尾猿以外的其他哺乳动物中枢神经系统和呼吸道等靶器官的一种传染病。猪是PRV的自然宿主,各阶段均可被感染,且病猪康复后仍呈隐性感染(除大多死于脑炎的2周龄以下仔猪外)可长期带毒、排毒。自2011年底,部分疫苗免疫猪出现以神经系统疾病和仔猪高死亡率为特征的PRV突变株后,严重影响了我国养猪业的发展,也对PR防控提出了新的需求。

国际马术赛事中生物安全与感染控制的基本策略

传染性疾病是马发病和死亡的一个重要原因。对国际马术赛事而言,马传染性疾病带来的影响,决定了比赛能否顺利举行。国际马术赛事中,马即是运动员,作为比赛中不可或缺的一部分,保障马匹健康首先要做的就是降低传染病发病、传播的风险。虽然传染病无法被完全预防,但完全可以采取措施限制病原体侵入马体或限制病原体生存的因素。

猪流感的诊断与防治

猪流感是由猪流感病毒导致的一种高度传染性病毒病,多发于春冬两季,各品种、年龄的猪均可发病,给养猪业带来了重大的经济损失。本文从猪流感的流行情况及临床症状展开叙述,总结近年来猪流感的实验室诊断方法,提出相关防治措施,以期为猪流感的防控提供参考。

三种猪日本脑炎疫苗免疫效果比较

为筛选出免疫效果较好的猪日本脑炎疫苗,本研究从某猪场选出15头45日龄左右的仔猪,随机分成3组(A组、B组和C组),分别接种3种不同厂家的猪日本脑炎疫苗。采集疫苗免疫前、首次免疫后21 d和二次免疫后21 d三个时间点猪血液样本,通过荧光定量PCR和ELISA方法对免疫前病毒感染情况和免疫后抗体水平进行对比和分析。结果显示,试验仔猪未出现猪日本脑炎病毒感染;A组所用疫苗较B组、C组所用疫苗,抗体水平最高,首次免疫、二次免疫均表现出极显著差异(P<0.01),表明A组所用疫苗的免疫效果最好,可用于易感动物猪的免疫,以减少病毒由蚊虫向马匹感染的风险。

猪伪狂犬病检测技术研究进展

猪伪狂犬病是一种由伪狂犬病毒(pseudorabies virus,PRV)感染引起的急性传染性免疫抑制病,可破坏机体免疫系统,继发其他疾病,给养殖户带来极大损失。鉴于猪伪狂犬病净化的临床需求,以及目前PRV新型变异毒株的出现使疫苗免疫出现了不完全保护和隐性感染等问题,高灵敏度的检测方法成为临床猪伪狂犬病防控和净化的首选。文章综述了PRV检测技术的最新进展,以期为临床猪伪狂犬病防控过程中选择更合适的检测方法提供参考。

主题意义引领下的小学英语复习课教学策略

主题意义引领下的小学英语复习课教学,关注学生知识体系的构建、思维品质的发展、情感态度价值观的塑造,符合《义务教育英语课程标准(2022年版)》课程理念和育人目标。教学时教师可以从词汇、对话和语法三部分进行活动策略探究。

绵羊PLC-γ1基因真核表达载体的构建及鉴定

目的旨在构建携带红色荧光蛋白(RFP)报告基因的绵羊PLC-γ1非融合性真核表达载体。方法在原有PUC57-PLC-γ1克隆载体基础上,对目的片段N端前加入P2A序列和3个连续Flag序列后使用HindⅢ酶和SalⅠ酶双酶切获得P2A-3×Flag-PLC-γ1片段,将其连接至pDsRed2-C1载体获得重组质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1;然后采用Lip 2000转染试剂将该重组质粒转染至HEK-293T细胞,最后利用荧光显微镜、qRT-PCR、Western blot、免疫共沉淀(IP)和免疫荧光(IF)法鉴定重组质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1的表达及亚细胞定位情况。结果双酶切和测序结果显示质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1构建成功,观察到红色荧光;免疫荧光的亚细胞定位检测出PLC-γ1蛋白在细胞质中表达;qRT-PCR和Western blotting法均能检测出PLC-γ1表达,与对照组有显著性差异(P>0.01);免疫共沉淀也纯化分离出含有Flag标签的PLC-γ1蛋白。结论本研究成功构建绵羊PLC-γ1基因的真核表达载体,在P2A肽作用下实现目的蛋白PLC-γ1与DsRed2的表达,构建的载体可用于研究PLC-γ1在早期胚胎发育中的作用。

PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达分析

为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、睾丸、卵巢、子宫)及淋巴组织(颈前淋巴、肩前淋巴、网胃淋巴、瓣胃淋巴、瘤胃淋巴、肠系淋巴、十二指肠淋巴、腹股沟淋巴、空肠淋巴和回盲淋巴)的表达规律进行研究。结果表明:哈萨克绵羊胰腺PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01),卵巢PLC-γ1基因的相对表达量显著高于肾脏和子宫(P<0.05),其余器官PLC-γ1基因相对表达量均差异不显著(P>0.05);十二指肠淋巴PLC-γ1基因的相对表达量显著高于瓣胃淋巴(P<0.05),瓣胃淋巴PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他淋巴组织(P<0.01)。说明PLC-γ1基因在哈萨克绵羊各系统器官和淋巴组织中均有表达,并且在胰腺、卵巢、十二指肠淋巴、瓣胃淋巴中的表达明显,对机体免疫、生殖和消化等方面具有重要作用。

机器学习在重点领域信用风险分类应用研究——以电梯维保企业为例

国家高度重视涉及人民群众生命财产安全的电梯等特种设备重点领域安全监管。面对目前电梯保有量持续增长、电梯安全监管形势复杂的情况,市场监管部门提出了对电梯维保企业实施信用风险分类监管的需求。本文在研究通用型企业信用风险分类模型的基础上,考虑电梯专业领域风险因素,并引入机器学习算法构建了电梯维保企业信用风险分类指标体系和模型。通过H省电梯维保企业的验证结果发现,该模型结果能够较好地反映电梯维保企业存在的问题,能够有效提高监管及时性、精准性、有效性,有助于合理配置监管资源并提升监管效能,推动监管更加公平有效。

无疫区兽医实验室的工作任务及作用

为保障2022年第19届亚运会马术比赛顺利举办,维护桐庐无规定马属动物疫病区(以下简称“无疫区”)正常运行,及时掌握规定动物疫病现状与传入传播风险,自2019年起每年全面开展马属动物及易感动物监测工作,通过易感动物饲养和疫病情况调查、日常巡查、主动监测等方式掌握区域内马传染性贫血、马鼻疽、日本脑炎、马流行感冒、马梨形虫病、马病毒性动脉炎、马媾疫、伊氏锥虫病、非洲马瘟、亨德拉病、西尼罗河热、尼帕病毒病、水泡性口炎、马脑脊髓炎(东方和西方)、马传染性子宫炎、委内瑞拉马脑脊髓炎、狂犬、炭疽、马鼻肺炎等19种规定马属动物疫病的疫病状况。

不同养殖模式土鸡寄生虫病精准防治技术的研究

为探讨不同饲养模式下土鸡寄生虫病精准防控技术,本研究从存栏3500羽规模的仙居鸡群中,随机抽取1号鸡舍624羽仙居鸡,并随机分成3个处理组(A组、B组、C组),进行球虫病防治对比试验;随机抽取2号鸡舍635羽仙居鸡,并随机分成3个处理组(E组、F组、G组),进行线虫病(蛔虫病)防治对比试验。试验统计分析了地面平养、离地平养和地面放养、笼养等不同饲养模式的防治效果。结果显示,采用离地平养,并配合相应的抗寄生虫药物,能够发挥高效的精准防治效果。

绵羊NYD-SP27基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定

构建并筛选针对干扰绵羊NYD-SP27基因的shRNA慢病毒载体。使用RNAi Target Sequence Selector软件设计并合成针对绵羊NYD-SP27基因的4条shRNA表达序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3、shRNA4)及1条阴性对照序列(NC),分别将其连接到载体pLentiLox3.7(PLL3.7)中,得到4个shRNA干扰载体NYDSP27-shRNA及1条阴性对照载体NC-shRNA,同时将构建好的干扰载体及辅助质粒瞬时共转染至HEK-293FT细胞中,收集病毒液纯化后感染SP27-21细胞,48h后用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测NYD-SP27相对表达量,将干扰效果最好的载体用于进一步的研究中。结果表明,构建了重组慢病毒干扰载体,并成功包装成干扰慢病毒NYDSP27-shRNA-LV以及用来感染BHK-SP27-21细胞,48h后用实时定量PCR筛选出高效干扰绵羊NYD-SP27的片段NYDSP27-shRNA-1。为进一步研究NYD-SP27基因表达下调对绵羊精子发育的影响奠定了基础。

绵羊NYD-SP27基因真核表达载体的构建及表达

为了构建绵羊NYD-SP27基因重组真核表达载体,进一步研究该基因的功能,试验根据GenBank中公布的绵羊NYD-SP27基因序列设计引物,克隆绵羊NYD-SP27基因,将其连接至真核表达载体pmcherry-n1中,在目的基因和红色荧光蛋白之间通过猪捷申病毒2A肽（P2A）连接以实现共表达,将重组质粒pmcherry-Flag-NYDSP-P2A转染至HEK-293FT细胞中,48 h后通过荧光显微镜可观察红色荧光,构建NYD-SP27真核表达载体成功。结果表明：重组质粒pmcherry-Flag-NYDSPP2A在HEK-293FT细胞中得以表达;P2A在NYD-SP27蛋白和红色荧光蛋白翻译过程中已起到自我剪切的作用。

尼帕病毒感染和传播机制

尼帕病毒(NiV)是一种重要的新发人与动物共患病原,能够感染包括人在内的多种动物,引起尼帕病毒病(NVD)。NVD最早于1998年在马来西亚暴发,之后在新加坡、孟加拉国引起流行,2019年印度NVD疫情暴发,NVD再次引起世界各国的广泛关注。NVD对人和动物致死率较高,且存在跨物种传播的现象。目前我国尚无NVD的相关报道,但由于毗邻我国的东南亚各国均出现过NVD报道,NVD也是我国重点关注和预防的人与动物共患病之一。近年来,各国研究机构针对NiV的研究取得了较大的进展,论文主要从NiV的病毒基本结构、感染机制、传播途径、免疫逃逸方式等方面综述NiV传播机制的研究进展,以期为NiV的研究及防控提供参考。

新疆哈萨克羊NYD-SP27基因的克隆及序列分析

本研究通过新疆哈萨克羊NYD-SP27基因的克隆及序列分析,为研究绵羊NYD-SP27表达调控机制奠定基础。根据Genbank中公布的人类的NYD-SP27基因序列设计引物,本研究以新疆哈萨克羊的睾丸组织的总DNA为模板,采用RT-PCR扩增方法对绵羊NYD-SP27基因序列进行研究。结果显示:哈萨克羊NYD-SP27基因全长为1901 bp,其中只含有1617 bp组成的开放阅读框(ORF),共编码538个氨基酸;相对分子质量61995.66,理论PI值为6.16,正电荷残基数(Arg+Lys)为61,负电荷残基数(Asp+Glu)为67;分子式C2798H4319N737O819S19;体外半衰期为30 h,不稳定系数46.96(不稳定);总平均吸水性-0.403。结论:哈萨克羊NYD-SP27基因属于PLCζ家族;同时将所得序列已提交到Gene Bank(登录号:KX905090)。

八面通林区国土资源局

八面通林区国土资源局围绕“土地与生态文明建设”宣传主题，于6月19日至6月25日开展了全国土地日宣传周活动。

一例犬阴道脱出与子宫脱出的诊治

犬的阴道脱出与子宫脱出,常见于发情期及分娩前后母犬体内激素平衡失调,致使阴道黏膜过度增生、阴道黏膜水肿松弛而引起阴道壁及子宫的一部分脱出阴门,挤压尿道引起尿频、尿闭、排尿困难等症状。为探讨临床上阴道脱出、子宫脱出的诊断及治疗方法,该文就一例犬阴道脱出及子宫脱出的一般检查方法、临床症状与特殊检查法相结合,通过手术治疗取得满意疗效的病例进行分析与总结。为该病的临床诊疗提供一定的理论与实践指导意义。