分泌型卷曲相关蛋白4在不同DNA错配修复功能状态Ⅱ期肠癌中的表达及意义

目的探究分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)在DNA错配修复(MMR)功能正常与MMR功能缺陷的Ⅱ期结肠癌中的表达及意义。方法收集新鲜的Ⅱ期结肠癌组织标本,并根据MMR状态分为pMMR和dMMR组。利用Affymetrix Human oeLncRNA基因芯片检测两组不同MMR状态结肠癌组织中差异表达的mRNA情况。通过q-PCR和Westernblot技术检测dMMR和pMMR肠癌组织、细胞株中SFRP4的表达并分析两组间表达差异情况;通过免疫组化技术检测增殖标志物Ki-67的表达并分析SFRP4与Ki-67表达的相关关系。利用HCT116细胞株,干扰SFRP4的表达,通过流式细胞术检测干扰SFRP4前与干扰后HCT116细胞株的凋亡率并分析其差异。结果 PCR和Western blot的结果提示SFRP4在dMMR状态的肠癌组织、细胞株中的表达明显高于pMMR的肠癌组织(P=0.014)、细胞株(P=0.0079),免疫组化结果提示SFRP4与Ki-67蛋白在肠癌组织的表达呈负相关关系(P=0.041)。siRNA干扰SFRP4的表达后HCT116细胞株凋亡率下降,包括早期凋亡(P=0.003)和晚期凋亡率(P=0.024)。结论 SFRP4在dMMR型肠癌表达较pMMR型表达增高,促进肠癌细胞凋亡、抑制增殖,可能有助于改善MMR缺陷型Ⅱ期肠癌预后。

循环肿瘤细胞数目与血清中Cyfra21-1、CEA、Fg表达水平的关系

目的:探讨肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞(CTCs)与常用的肿瘤指标细胞角质素19可溶片段(Cyfra21-1)、癌胚抗原(CEA)及凝血功能指标纤维蛋白原(Fg)表达水平的关系,比较CTCs阳性组和阴性组转移灶数目差异。方法:采集66例进展期晚期肺癌住院患者治疗前7.5ml外周血,保存于4℃冰箱中,24小时内由益善生物技术公司使用"免疫去除结合纳米过滤法"行CTCs检测。同时检测血清中Cyfra21-1、CEA、Fg水平,收集并分析CTCs数目与转移灶数目、临床T分期、转移淋巴结的关系。结果:纳入患者中CTCs检出率为86.4%。CTCs数目与Cyfra21-1水平有相关关系,相关系数为0.365(P=0.003);CTCs数目与Fg水平相关,相关系数为0.330(P=0.007);CEA与CTCs两变量无明显相关性。两组患者的肿瘤转移器官数目大于3个的比例有显著差异。结论:两组患者Cyfra21-1异常增高率有显著差异,且CTCs数目与Cyfra21-1表达水平正相关,可由Cyfra21-1初步估计CTCs水平。而外周血中Fg异常增高率无显著差异,但二者表达水平呈明显正相关,因此分析CTCs数目需要考虑Fg表达水平的影响。

稳定表达新抑癌基因WTX的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞株的建立

目的构建含有全长WTX(Wilms tumor gene on the X chromosome)目的基因的表达载体,建立稳定表达WTX基因的胃癌BGC-823/WTX-EGFP细胞系,为WTX基因功能研究提供保障。方法以人胚肾293FT细胞为模板,经PCR扩增获得全长WTX cDNA序列,将全长WTX目的基因序列克隆入带有绿色荧光蛋白报告基因的pEGFP-N1表达载体,建立pEGFP-WTX表达载体。经限制性内切酶酶切鉴定、测序并转染293FT细胞观察报告基因表达情况,判断pEGFP-WTX表达载体构建是否成功。构建成功的pEGFP-WTX表达载体转染人胃癌BGC-823细胞,建立稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞。qRT-PCR及免疫组化检测转染细胞WTX表达。结果 PCR方法从人胚肾293FT细胞扩增获得全长WTX cDNA,经测序鉴定序列完全正确;pEGFP-WTX质粒DNA经酶切鉴定片段大小正确、转染294FT细胞可见清晰的绿色荧光表达。BGC-823/WTX-EGFP细胞能够稳定表达WTX。结论本研究成功构建了含有全长WTX cDNA的表达载体系统,建立了稳定表达WTX的BGC-823/WTX-EGFP细胞,为WTX基因功能研究奠定了良好基础。

胃肠间质瘤靶向治疗及进展

胃肠间质瘤是最常见的胃肠道肉瘤,大部分存在Kit、PDGFR突变,对靶向药物伊马替尼治疗有效率高。低危型的早期患者选择手术治疗有治愈机会,但对于中高危型及晚期患者,靶向治疗则占据十分重要的地位。不过伊马替尼治疗容易出现耐药。本文将详细阐述胃肠间质瘤各线靶向治疗,并对当前研究现状及发展作一综述。

ApoG2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬的最低浓度探讨

目的:探究不同浓度棉酚衍生物Apo G2对乳腺癌细胞株MDA-MB231诱导自噬的最低浓度,寻找抗肿瘤效应的最适合浓度。方法:CCK8法检测细胞的增殖活性;透射电镜下观察细胞超微结构;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期阻滞情况;细胞免疫荧光法检测各组细胞LC3-II荧光强度;RT-PCR及Western blot法检测细胞自噬蛋白LC3-I及LC3-II表达强度。结果:CCK8法示Apo G2对乳腺癌MDA-MB231细胞呈浓度、时间依赖性抑制增殖且各组间差异存在统计学意义;透射电镜下发现Apo G2可诱导凋亡及自噬;流式细胞仪检测发现Apo G2诱导凋亡呈浓度依赖性,使细胞周期阻滞于S期且10μmol/L浓度组最明显;细胞免疫荧光法发现10μmol/L组细胞LC3-II荧光最弱;RT-PCR及Western blot法示细胞自噬蛋白LC3-I表达各组间无明显差异,LC3-II在10μmol/L浓度组表达量最弱,80μmol/L浓度组表达量最强。结论:10μmol/L为Apo G2诱导乳腺癌细胞MDA-MB231自噬最低浓度,也是抑制自噬,促进凋亡的抗肿瘤最适浓度。

盐霉素联合ApoG2诱导鼻咽癌CNE-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨盐霉素联合Apogossypolone(Apo G2)对鼻咽癌细胞CNE-2的促凋亡作用及其可能的机制。方法:CCK-8测定不同浓度盐霉素和Apo G2单药毒性及联合应用对CNE-2细胞的增殖抑制作用;迁移实验观察单药及联合用药时细胞迁移能力的改变;Hoechst33258染色观察细胞凋亡;比色法检测caspase-3酶活性变化;流式细胞术检测细胞凋亡率的改变。结果:CCK8结果显示,盐霉素及Apo G2对细胞的抑制作用均随着药物浓度的增加而增强,且联合组抑制作用强于单药组。迁移实验结果显示两药均能抑制CNE-2细胞迁移,且联合组强于单药组;Hoechst33258染色显示联合用药后出现更多的核固缩和碎裂等凋亡现象;caspase-3活性药物组均较对照组增加,且联合组比单药组更明显;流式细胞术检测显示,联合用药后的凋亡率较单药组增加。结论:盐霉素和APOG2联合应用能协同抑制鼻咽癌细胞增殖和迁移能力,且能诱导细胞发生凋亡。

盐霉素对人鼻咽癌CNE2/DDP细胞顺铂耐药的影响及其机制

目的探讨盐霉素对人鼻咽癌CNE2/DDP细胞顺铂耐药的影响及其可能的作用机制。方法将人鼻咽癌CNE2/DDP细胞随机分为四组,分别加入2μg/m L顺铂(顺铂组)、8μmol/L盐霉素(盐霉素组)、2μg/m L顺铂和8μmol/L盐霉素(联合组)、0.1%二甲基亚砜(对照组)进行处理。采用CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测Wnt/β-catenin信号通路(β-catenin、p-LRP6)、m TORc1信号通路(P70S6K、p-P70S6K、S6、p-S6)相关蛋白相对表达量,荧光分光光度法检测caspase3、caspase9活性。结果与对照组比较,顺铂组、盐霉素组、联合组细胞增殖抑制率、凋亡率和caspase3、caspase9活性均升高(P均<0.05);顺铂组、盐霉素组和联合组上述指标均逐渐升高,两两比较P均<0.05。β-catenin、p-LRP6、p-P70S6K、p-S6蛋白相对表达量:顺铂组和对照组均高于盐霉素组和联合组(P均<0.05),顺铂组与对照组、盐霉素组与联合组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。P70S6K、S6蛋白相对表达量:各组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论盐霉素可以逆转人鼻咽癌CNE2/DDP细胞的顺铂耐药;激活caspase活性、抑制Wnt/β-catenin和m TORc1信号通路可能是其作用机制。

姑息化疗对晚期肝癌疗效的Meta分析

目的:评价阿霉素等传统化疗药物是否能使晚期肝癌患者的总生存率得到获益。方法:使用系统评价方法。检索MEDLINE、EMBASE等国内外数据库中的相关文献,选择治疗组为姑息化疗并对症支持治疗,对照组只给予对症支持治疗(包括部分非细胞毒性药物)的晚期肝癌的随机对照试验(RCT)。由2位评价者分别按以上检索策略收集资料,按选择标准入选,主要对半年生存率及一年生存率进行Meta分析。结果:姑息化疗与最佳支持治疗对比,姑息化疗不能提高半年和一年生存率,差异无统计学意义。结论:目前姑息化疗不推荐用于晚期肝癌,需要开展一系列大规模的随机对照临床试验以解决这一争议。

肿瘤突变负荷对初诊野生型晚期非鳞状细胞非小细胞肺癌化疗效果的影响

目的探讨瘤突变负荷(TMB)与野生型晚期非鳞状细胞非小细胞肺癌化疗疗效、预后的关系。方法120例野生型晚期非鳞状细胞非小细胞肺癌患者根据TMB检测结果分为低、中、高水平3组,观察及对比3组患者临床指标相关性、临床疗效、TMB临界值及其与无进展生存时间(PFS)、总生存时间(OS)关系。结果高水平组有吸烟史者多,客观缓解率(ORR)最高,PFS最短,OS最长(P<0.05)。高水平TMB可明显影响其PFS、OS(P<0.05)。结论TMB对野生型晚期非鳞状细胞非小细胞肺癌化疗患者有一定影响,可为临床初诊野生型晚期肺癌患者治疗提供指导。

克唑替尼治疗晚期非小细胞性肺癌患者64例临床疗效观察

目的:研究对于非小细胞型肺癌晚期患者使用克唑替尼治疗的临床疗效。方法:回顾性分析2015年1月~2019年1月我院使用克唑替尼靶向治疗非小细胞型肺癌患者晚期共64例(以下简称克唑替尼组),同时另选使用标准化疗方案(多西他赛+顺铂)的晚期非小细胞型肺癌64例作为对照组(以下简称DP组),相对比以上不同两组肿瘤患者的反应疗效指标(包括CR、PR、SD、PD、ORR、DCR)、化疗所产生的毒副反应(包括有白细胞相对减少、血小板也相对减少、贫血、以及胃肠道不良反应、肝功能产生障碍、和皮疹)、生存分析指标(PFS、OS)。结果:两组的肿瘤疗效指标CR,PR,SD,PD,ORR,DCR均无统计学差异。两组患者的化疗毒副反应无显著差异。克唑替尼组的PFS显著长于DP组;克唑替尼组的OS显著长于DP组。结论:克唑替尼的肿瘤反应与DP标准化疗方案疗效相当,且毒副反应未增加,但可以显著增加患者PFS和OS。目前临床上,对于治疗非小细胞型肺癌的值得有效推广的方法是克唑替尼靶向治疗。