用实验室常备染液显示白喉杆菌异染颗粒

异染颗粒是白喉杆菌染色性一大特征,在鉴别该菌上有重要价值。目前所用的白喉杆菌异染颗粒染色法有:奈瑟法、阿勃脱(Alben)法、史氏法及美兰染色法等。前两种方法染色结果,异染颗粒与菌体对比清晰;后两种方法虽然比较简单,但异染颗粒与菌体对比度差。上述诸方法中除美兰染色外,染色时染液需临时配制,给实验室工作常带来不便。为了解决这个问题,作者采用实验室常备的革兰氏染液来显示白喉杆菌异染颗粒,效果良好,报道如下。

2008年高考文言文考题规律探析及对今后教学和备考建议

2008年全国高考文言文18套考题,已经在各类媒体上先后刊出,认真研究这些考题,从中总结出规律性的东西,对今后的中学文言文教学和毕业班的高考备考,都有着十分重要的意义。笔者不揣谫陋,从多个角度对试题进行了具体的解读,以期从中发现规律,为中学文言文教学和高考文言文备考献上一孔之见。

人白细胞介素-2真核表达质粒的构建及鉴定

目的构建高效表达人IL－2的真核表达质粒，为IL－2的肿瘤基因治疗提供重要的工具。方法运用PCR扩增出人IL－2基因，经BamHI及EcoRI双酶切后，回收片段与BamHI及EcoRI处理的表达载体pcDNA3在T4DNA连接酶的作用下连接，并用多种限制性内切酶对重组质位进行酶切鉴定。结果PCR扩增片段的长度约为480bp，重组质粒经酶切显示，构建的质粒中含480bp的IL－2插人片段，将此重组质粒命名为pcDNA3－IL－2。结论本研究结果为进一步研究表达IL－2质粒的肿瘤基因治疗及免疫调节作用打下了基础。

PET应用中的硅光电倍增器研究

本文介绍了硅光电倍增器(SiPM)研制所取得的最新进展及PET应用中SiPM的研究现状。新器件实验室(NDL)制造出光敏面积为2.2mm×2.2mm的SiPM器件,并将SiPM与2mm×2mm×10mm的LYSO晶体耦合,实验结果显示,器件探测FDG 511keV光子的能量分辨率达12.83%,符合时间分辨率达564ps。

开辟非洲市场:商机与风险并存

非洲经济在经历了10年的危机之后,1993年出现转机,由负增长转为正增长。在以后的4年中,国内生产总值增长率逐渐平稳回升,1996年扭转了多年来人均收入下降的局面。这次非洲经济回升是普遍性的,各类国家经济都有了增长,整个宏观经济环境有了一定程度的改善。

细胞因子诱导人脐血间充质干细胞分化过程中细胞巢蛋白、神经丝亚单位和端粒酶逆转录酶mRNA的表达

目的:观察细胞因子EGF和bFGF联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中细胞 巢蛋白(nestin)、神经丝亚单位M(NF M)和端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的变化。方法:采集健康自然分娩产 妇脐血,密度梯度离心分离单个核细胞(MNCs),PBS洗涤2次后重悬于含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12 中,接种于T 75培养瓶内(细胞密度为1×106ml-1),一组加入细胞因子EGF和bFGF,终浓度各为10μg/L,另一 组不加细胞因子,剩余细胞用液氮冻存。培养24h倾去全部液体以除去未贴壁细胞,以后每3d全量换液1次,倒 置显微镜下观察细胞形态。分别收集培养1d、4d、7d、14d贴壁细胞和冻存细胞,采用RT -PCR方法检测nestin、 NF M、hTERTmRNA的表达。结果:未培养的脐血MNCs(内含MSCs)nestin、NF M、hTERTmRNA均表达阳性。培 养后nestin、hTERTmRNA表达下降,至第7d已不能检出;而NF MmRNA的表达随培养时间延长而增强。与对照 组相比,细胞因子组NF MmRNA表达较高,nestin、hTERTmRNA表达的下降趋势延迟。结论:细胞因子EGF和 bFGF在联合诱导脐血MSCs分化为神经细胞的过程中,能下调hTERTmRNA的表达。

联合沙格列汀治疗老年糖尿病肾病对炎症因子和单个核细胞PI3K-Akt通路的影响

目的观察沙格列汀治疗老年糖尿病肾病对外周血TNF-α、IL-1和IL-6水平以及外周血单核细胞PI3K、Akt的磷酸化水平的影响。方法选取许昌市中心医院60例早期老年糖尿病肾病患者,比较治疗前后对照组和实验组各项指标变化。另外,沙格列汀治疗8周后观察临床各项指标包括空腹血糖、糖化血红蛋白(Hb A1 c)、24 h尿白蛋白量(24 h UPro)和血肌酐(Cr),以及血浆中TNF-α、IL-6和IL-1水平。同时,检测外周血提取的单核细胞的PI3K和Akt的磷酸化水平。结果与对照组相比,实验组外周血清空腹血糖水平显著下降(P<0.05),同时Hb A1 c显著下降(P<0.05),24 h UPro显著下降(P<0.05),血肌酐(Cr)水平显著降低(P<0.05);另外,与对照组相比,实验组患者血浆中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-β的表达水平显著降低(P<0.05);与对照组相比,实验组的外周血提取的单核细胞中PI3K的磷酸化水平和Akt表达水平也显著升高(P<0.05)。结论沙格列汀治疗老年糖尿病肾病患者可显著降低Hb A1 c、24 h UPro和Cr,进而改善肾功能,同时可降低外周血TNF-α、IL-6和IL-1β水平,缓解外周炎症免疫反应,并显著上调外周血单核细胞的PI3K和Akt磷酸化水平。沙格列汀在改善外周血高血糖状态时,进一步恢复PI3K/Akt磷酸化活化水平,参与抑制炎症反应。

应用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌体内表达基因

为寻找新型抗结核药物靶标 ,采用体内诱导抗原技术筛选结核分枝杆菌的体内诱导基因。首先构建了结核分枝杆菌基因组质粒表达文库 ,库容量为 1 0 2× 1 0 5CFU。再用经过结核分枝杆菌和大肠杆菌的裂解产物吸附过的结核病人血清 ,通过原位免疫印迹来筛选基因组表达文库 ,共获得 1 6个阳性克隆。对阳性克隆进行测序和生物信息学分析 ,发现该 1 6个阳性克隆可能包含 2 2个开放阅读框 (ORF)。按照功能将其分为 7类基因 :脂类代谢 2个、信号途径 5个、PE/PPE蛋白家族 2个、中间产物与能量代谢 6个、细胞壁与细胞处理 1个、假想蛋白 4个和与牛型分枝杆菌定向进化同源的 2个 ,其中部分基因可能与毒力相关 。

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化

目的:探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向神经细胞体外定向诱导分化的条件。方法:从正常SD大鼠骨髓中分离获取MSC,体外培养扩增纯化后传代于塑料培养皿中,采用丁羟茴醚(BHA)和二甲亚砜(DMSO)对传至3～5代的细胞进行体外诱导分化,采用免疫细胞化学对诱导后的细胞进行鉴定。结果:诱导1 h、2 h、3 h后有部分细胞表达神经干细胞标志蛋白nestin,且随诱导时间延长呈下降趋势;诱导5 h后,大部分细胞具有典型神经元形态,表达神经元标志物-神经元特异性烯醇化酶(NSE),少部分细胞呈星型胶质细胞状,表达胶质细胞标志物-胶质纤维酸性蛋白(GFAP)。结论:骨髓间充质干细胞可以在体外培养扩增并诱导成为神经元样细胞和星型胶质样细胞。

EGF和bFGF联合诱导人脐血MSCs向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化

目的 :检测重组人表皮生长因子 (EGF)和碱性成纤维生长因子 (bFGF)联合诱导人脐血间充质干细胞(MSCs)向神经细胞分化过程中端粒酶活性的变化 ,以探讨人脐血MSCs的增殖性和安全性 ,为其临床应用提供实验和理论依据。方法 :采集健康自然分娩产妇志愿捐献的脐血 ,密度梯度离心分离单个核细胞 ,接种于含体积分数为2 0 %胎牛血清的DMEM/F12中 ,对照组不加细胞因子 ,实验组加入EGF和bFGF ,终浓度均为 10 μg/L ,剩余细胞用液氮冻存。培养 2 4h后倾去全部液体以去除未贴壁细胞 ,以后每 3d全量换液 1次。分别收集培养 1d、4d、7d、10d、14d、2 1d的贴壁细胞和冻存细胞 ,将细胞密度调整一致 ,采用反转录 -多聚酶链反应 (RT -PCR)方法检测脐血MSCs培养前后各时间段的巢蛋白 (nestin)和神经丝亚单位M(NF -M)mRNA表达 ;采用端粒重复序列扩增 -酶联免疫吸附实验 (TRAP -ELISA)法检测人脐血MSCs向神经细胞分化过程中的端粒酶活性变化。结果 :RT -PCR检测发现 ,未培养的脐血细胞nestin、NF -MmRNA均呈阳性表达 ;培养后NF -MmRNA的表达随培养时间延长而增强(P <0 .0 1) ;实验组与对照组相比 ,细胞因子能明显促进NF -MmRNA的表达 (P <0 .0 1)。而nestinmRNA的表达随培养时间延长而下降 (P <0 .0 1) ,至第 7d已不能检出 ;

人骨髓间充质干细胞源性多巴胺神经元的结构和功能特征(英文)

背景:研究人骨髓间充质干细胞定向分化为多巴胺神经元及分化后细胞的功能特征,对细胞移植治疗包括帕金森病在内的神经精神性疾病具有重要临床意义。目的:采用脑源性神经营养因子、forskolin及多巴胺联合诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元定向分化,观察诱导产生的多巴胺神经元的结构和功能。设计:随机对照观察。单位:郑州大学及河南大学。材料:实验于2005-03/2006-09在郑州大学和河南大学实验室完成。实验用骨髓取自15名健康志愿者。脑源性神经营养因子、多巴胺、forskolin及单克隆抗体酪氨酸羟化酶为美国Sigma公司产品。方法:①通过密度梯度离心获取人骨髓中的单个核细胞,贴壁培养纯化骨髓间充质干细胞。采用50μmol/L脑源性神经营养因子,10μmol/Lforskolin和10μmol/L多巴胺联合对骨髓间充质干细胞进行诱导。②诱导2周后应用电子显微镜观察细胞超微结构;免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶(NSE)和酪氨酸羟化酶(TH)的表达;采用RT-PCR检测多巴胺神经元分化过程中转录因子Nurr1,Ptx3,Lmx1b及酪氨酸羟化酶mRNA表达;同时以未诱导的细胞为对照,应用高效液相色谱检测细胞多巴胺的释放水平。主要观察指标:①细胞超微结构。②NSE和TH的表达变化。③细胞内关键转录因子及酪氨酸羟化酶mRNA变化。④细胞释放多巴胺情况。结果:①细胞超微结构:诱导2周后细胞胞浆中有大量密集的呈扁平囊状的粗面内质网及其间的一些游离核糖体以及神经微丝的形成。②NSE和TH表达的变化:免疫细胞化学染色结果表明诱导分化后NSE和TH阳性细胞的表达随诱导时间的延长逐渐增高(P<0.001)。③细胞内酪氨酸羟化酶及关键转录因子变化:RT-PCR结果显示细胞均可表达Nurr1,Ptx3,Lmx1b和酪氨酸羟化酶的mRNA。④细胞释放多巴胺情况:诱导2周后的细胞多巴胺释放水平高于未经诱导的细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脑源性神经营养因子、forskolin及多巴胺可在体外诱导人骨髓间充质干细胞向多巴胺神经元分化,并具有多巴胺神经元的结构和功能特征。

我国水的问题亟待解决

我国水的问题亟待解决中国社会科学院研究员陈宗德水是人类赖以生存和发展的一种最重要的资源。但我国是一个人均水资源贫乏的国家，由于特定的自然条件，水资源在全国的分布不均匀，加之人口众多以及近年来社会经济持续快速发展，我国水的问题已愈来愈突出了。一、我国水...

小楼寄语

小楼看似怯怯地蜗伏在周围鳞次栉比的高楼大厦中间,岁月的雨雪风霜已将它当初嫩黄的衣裳剥蚀得有些斑斑点点。它仿佛已青春不再,风华远逝。常常会叩响这座小楼的一扇木门,那里是徐业毅老师的家。你难以想象这里空间的狭窄和逼仄,家具的陈旧与寒伧,布局的随意和简单。然而,这却是一个盛产才情与思想的空间。

氨基脲敏感胺氧化酶对弓形虫感染小鼠组织器官毒性作用研究

[目的]以真核单细胞微生物弓形虫为实验对象研究氨基脲敏感胺氧化酶(SSAO)的细胞毒性作用。[方法]通过腹腔注射和脂肪组织感染途径小鼠感染来自腹腔液传代弓形虫,6d后,取脂肪组织制备组织切片并进行HE染色,观察脂肪组织病变及弓形虫在脂肪组织的存在情况,并采用酶联分光光度法检测小鼠脏器组织SSAO的活性。根据弓形虫P1基因设计引物,通过PCR方法检测脂肪组织、肝脏、脾脏、肺和脑各组织弓形虫的感染情况。[结果]腹腔注射组小鼠脂肪细胞病变严重,且发现有大量弓形虫存在,脂肪组织注射组小鼠非注射处脂肪组织结构基本正常,且没有检测出弓形虫感染,而其他组织器官检测到大量弓形虫感染。与其他组织器官相比较,小鼠脂肪组织中SSAO的活性最高。[结论]脂肪细胞由于表达大量SSAO其分解底物后对真核生物的细胞感染具有毒性作用,这可能与SSAO所致血管内皮细胞损伤从而引起的动脉粥样硬化的产生与发展有着内在的联系。

人血管内皮生长因子mRNA靶向siRNA表达载体的构建和表达

目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)mRNA靶向siRNA表达载体,观察其表达情况。方法:设计人VEGF靶向的发夹样siRNA,依据设计,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneo-GFP载体,转化扩增后得到重组载体pSUPERneo-GFP-siVEGF,进行序列测定。用脂质体转染法将重组载体转染食管癌细胞株Eca109,采用RT-PCR检测转染细胞VEGF mRNA的表达水平。结果:经过酶切鉴定与测序,pSUPERneo-GFP-siVEGF构建成功。稳定转染该重组体的Eca109细胞VEGF mRNA表达水平明显降低。结论:成功构建了针对VEGF mRNA的siRNA载体,转染细胞后可显著抑制VEGF mRNA的表达。

医学机能学实验教学体系的改革初探

医学机能学实验教学在医学院校培养高级人材方面具有非常重要的作用。文章介绍自2002以来年在医学机能学实验教学方面的一些改革,其中包括实验室体制与管理模式的改革及课程体系与教学内容方法的改革,形成了跨学科综合性实验课程体系,获到了单科教学难以达到的效果。自行设计实验的开设极大地挖掘学生的学习潜力,提高学生学习欲望,激发学生的科研能力和创新意识,全方位多层次地锻炼学生的综合能力。

荧光定量PCR检测B19病毒方法的建立

中图分类号R373摘要目的:建立采用荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)检测人微小病毒B19的方法。方法:根据B19病毒VP2基因序列,设计并合成引物和荧光标记探针。将PCR扩增的B19病毒VP2区基因片段克隆入pGEMT载体,重组质粒pGEM-T-VP2经筛选、鉴定后,作为阳性模板,用于标准曲线的制定和样品检测;对15例B19病毒感染血标本和几种其他病毒进行PCR测定。结果:应用重组质粒制作的定量曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系;与定量对照曲线比较计算,15例B19病毒感染标本中B19拷贝数为4.8×105μl-1～8.7×108μl-1;对其他几种病毒的扩增均无信号出现。结论:成功建立了检测B19的荧光定量PCR方法,较常规PCR技术更为简便、快速、准确,有很好的应用前景和研究价值。

综合性医学基础课程建设与发展趋势的探索

随着医学科学的发展和教学改革的深入,实验教学在医学教育和人才培养中的重要地位更显突出,医学教育模式也正在发生深刻的变化,逐渐形成以系统、器官、疾病、技术为中心的综合性医学基础课程的发展趋势和从宏观至微观、形态至机能、计算机信息技术至分子生物学,从基础至临床的纵向、横向综合的发展趋势。结合我院近年来实验教学改革的思路和成就,探讨了综合性医学基础课程发展趋势和综合性医学基础课程建设的必要性,为今后进一步改革和完善综合性实验课程教学奠定了基础。

基础医学实验教学体系的探索

该文结合郑州大学基础医学院近年来实验教学改革的思路和成就,探讨了基础医学实验教学体系和综合性医学基础课程体系的构建及其实践效果,为今后进一步改革和完善创新人才培养的基础医学实验课程教学奠定基础。