牛支原体NM001株单克隆抗体的制备与鉴定

为获得抗牛支原体NM001株单克隆抗体,并评价其特性,以牛支原体分离株NM001作为抗原免疫6周龄BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术和间接ELISA方法筛选到2株能稳定分泌抗牛支原体的单克隆抗体细胞,命名为2C5和7G3。其细胞上清的间接ELISA抗体效价分别为6.4×10^(3)和1.2×10^(4)。经亚型测定,单抗2C5和7G3均属于IgG1类,轻链均是λ型。制备腹水并对单抗进行纯化和特性鉴定,两株单抗的间接ELISA抗体效价分别为1.02×10^(5)和4.09×10^(5),且两株单抗与无乳支原体、山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、绵羊肺炎支原体、牛巴氏杆菌均无交叉反应。Western Blot结果显示,2株单抗均能特异性识别牛支原体全菌蛋白中的相应蛋白。试验表明,单抗2C5和7G3能够与牛支原体发生特异性反应,从而为牛支原体血清学检测提供一定的物质基础。

重组犬IFN-γ的原核表达及生物学活性研究

为了探究犬γ干扰素(canine interferon gamma,CaIFN-γ)的原核可溶性表达方法及其生物学活性,试验首先采用PCR方法扩增优化后的CaIFN-γ基因成熟肽序列,以此构建重组表达质粒pCold-SUMO-10His-CaIFN-γ;然后将重组表达质粒转化至表达菌株Lyophilized BL21(DE3)Chaprone中,并用IPTG进行诱导表达;最后对表达的重组蛋白rCaIFN-γ进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定、IPTG浓度优化、Ni-IDA亲和层析,以及采用CCK-8法测定重组蛋白rCaIFN-γ的细胞毒性,实时荧光定量PCR(相对定量)法检测凋亡相关基因和干扰素刺激基因(ISGs)转录水平变化,用细胞病变(CPE)法测定抗水疱性口炎病毒(VSV)效价,实时荧光定量PCR(绝对定量)法测定抗犬流感病毒(CIV)H3N2亚型感染的能力。结果表明:优化后的CaIFN-γ基因PCR扩增产物大小为494 bp,且重组表达质粒pCold-SUMO-10His-CaIFN-γ经菌液PCR、双酶切和测序验证构建成功;阳性菌株经诱导后表达的重组蛋白rCaIFN-γ大小为35.1 ku,该蛋白质能以可溶性形式表达,且可以与His Tag和HA Tag的鼠源单克隆抗体发生特异性反应;IPTG最佳诱导表达浓度为0.05 mmol/L;纯化后的重组蛋白rCaIFN-γ最大安全浓度为20μg/mL。以最大安全浓度的重组蛋白rCaIFN-γ分别作用MDCK细胞、MDCK(PB_(2))细胞4 h和6 h后,促凋亡基因p53和Bcl2相关X蛋白(Bax)的相对表达量无显著变化(P>0.05),γ干扰素受体2(IFNGR2)基因相对表达量降低(P<0.01或P>0.05),信号转导及转录激活因子1(STAT1)和干扰素调节因子1(IRF1)基因相对表达量均升高(P<0.05或P<0.01);MDCK细胞中,作用6 h IFNGR2、STAT1和IRF1基因相对表达量略高于4 h,但差异不显著(P>0.05);MDCK(PB_(2))细胞中,作用6 h IFNGR2和IRF1基因相对表达量极显著高于4 h(P<0.01),而STAT1基因相对表达量显著低于4 h(P<0.05)。再以最大安全浓度的重组蛋白rCaIFN-γ分别刺激MDCK和MDCK(PB_(2))细胞24 h,干扰素诱导跨膜蛋白1(IFITM1)、抗黏病毒蛋白1(MX1)、干扰素诱导蛋白与四肽重复1(IFIT1)、干扰素刺激基因15(ISG15)、2′-5′寡腺苷酸合成酶1(OAS1)5种ISGs转录水平均升高,且MDCK细胞中的转录水平均极显著高于MDCK(PB_(2))细胞(P<0.01)。该蛋白质在MDCK细胞中抗VSV的病毒活性效价为6.4×10~5 U/mL,并且对H3N2亚型CIV有一定的抑制作用。说明重组蛋白rCaIFN-γ在大肠杆菌中成功地实现了可溶性表达,并且具有良好的生物学活性。

羊口疮实验室检测方法研究进展

羊口疮是由羊口疮病毒(Orf Virus,ORFV)引起的嗜上皮性人畜共患传染病。该病在国内外均有流行,对养羊业造成了巨大的经济损失。快速高效的检测方法对羊口疮的防治至关重要,目前常用的羊口疮实验室检测方法包括病毒分离鉴定、病毒中和试验(VNT)、酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫荧光试验(IFA)、琼脂扩散试验(ATD)、蛋白质印迹法(WB)、侧流免疫层析测定法(LFIA)、聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR(qPCR)等。本文概述了ORFV实验室检测方法的研究进展,为快速、准确的诊断ORFV提供依据。

企业智能客服人机对话管理模型构建

针对传统客服智能化程度低,不能满足客户需求的问题,构建企业智能客户人机对话管理模型。该模型在RNN深度神经网络单轮对话模型的基础上融入顺序位置信息,增强注意力单轮对话模型结构,同时在Transformer架构中增加顺序信息模块。该模型测试结果表明,所构建的模型提升了企业智能客服人机对话管理水平与客服智能化水平,该模型对满足企业智能客服需求具有一定的应用价值。

针灸联合推拿防治儿童假性近视的临床研究

目的:探究中医针灸联合推拿的综合疗法在防治儿童假性近视中的临床疗效及安全性。方方法法:选取江西中医药大学附属医院儿科、眼科在2020年9月至2021年8月间收治的儿童假性近视(肝肾亏虚型)中资料较为齐全的90例(180眼),随机分为针灸组、推拿组、观察组各30例。针灸组采用醒脑开窍针刺疗法联合热敏灸治疗,推拿组采用推拿治疗,观察组予三者联合治疗。比较三组的裸眼视力、屈光度(DPT)、主症及中医证候积分改善情况及总有效率、安全性。结果:(1)治疗8w后,观察组的裸眼视力、DPT改善显著高于其他治疗组(P<0.05)。三组主症及中医证候积分均有下降(P<0.05)。(2)治疗8w后,观察组总有效率均显著优于其余治疗组(P<0.05),针灸组与推拿组疗效相当(P>0.05)。(3)三组实验观察中均未见明显不良反应。结论:针灸联合推拿在防治儿童假性近视的临床研究中具有较好疗效,可显著改善患儿视力,尤其在后期维持治疗过程中彰显优势,安全易施行,值得临床推广应用。

指向思考力课堂的学习单设计

学习单是教师从教学目标、教学内容和具体学情出发设计的适合学生自主学习和合作探索的方案,更是构建思考力课堂的“线路图”.教师想要用学习单串联课堂,应主张“对比”“分层”“出错”和“留白”,以打开学生的思维通道,构建精彩的思考力课堂.

有效塑造小学生数学自主学习意识的教学对策

自主学习能力与意识是每一名小学生都应当具备的,在系统性数学学习过程中,学生应当尝试逐渐抛开学习的“拐杖”,在没有教师全程引导的情况下也能凭借自主学习能力探究新知识、巩固旧知识,从而可以在逐渐摸索、不断探索的过程中实现数学综合水平的提升。教师应当结合学生的学习趋向及规律,采用合适的引导教学手段,帮助学生逐步适应自主学习,消除学生内心的依赖情绪。教师需要通过课堂教学、课后引导及其他多样化角度为学生寻找多种引导塑造途径,最终达成这一教学目标。

应用LSDV-ELISA抗体检测试剂盒检测羊痘疫苗免疫牛血清抗体水平

目前国内尚无商品化的牛结节性皮肤病疫苗,对于该病的防控,我国采用羊痘疫苗进行紧急免疫。为了验证牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒对羊痘疫苗免疫血清抗体水平检测的适用性,本研究采用实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒和病毒中和试验对羊痘病毒活疫苗免疫血清、在研牛结节性皮肤病灭活疫苗(山羊痘AV41株)免疫血清进行抗体水平评价。结果显示,对于羊痘活疫苗免疫血清,ELISA方法和病毒中和试验方法对免疫15d抗体阳性率分别为84.4%和75.6%,免疫30d抗体阳性率分别为100%和95.6%,免疫60d抗体阳性率分别为97.8%和91.1%;与病毒中和试验符合率为86.1%。对于牛结节性皮肤病灭活疫苗(山羊痘AV41株)免疫血清,ELISA方法和病毒中和试验方法对一免28d抗体阳性率分别为64%和56%,二免28d抗体阳性率分别为94%和88%,二免42d阳性率均为100%;与病毒中和试验符合率为86.5%。试验证明,实验室试制的牛结节性皮肤病病毒ELISA抗体检测试剂盒与病毒中和试验符合率较高,检测结果较为一致,且本试剂盒敏感性高于病毒中和试验。因此本试剂盒可用于牛结节性皮肤病抗体水平检测。

坚硬K2灰岩顶板水压致裂强制放顶设计与应用

【目的】铁新煤业9226工作面回采后端头区域坚硬K2灰岩顶板难以正常垮落,在工作面后方悬露较大空顶区域,威胁工作面作业安全,需要对其进行水压致裂强制放顶处理。【方法】针对9226工作面端头长距离悬顶带来的安全隐患,根据9226工作面坚硬K2灰岩顶板工程地质条件,通过理论计算方法设计9226工作面超前水压预裂参数,确定超前水压预裂实施流程,开展现场试验和观测。【结果】结果表明,水压致裂放顶技术解决了9226工作面后方厚硬石灰岩顶板难以及时垮落的问题,保证了工作面推进速度。【结论】本研究为水压致裂技术在类似条件煤炭开采中的推广应用奠定了基础。

预算编制对于企业财务内控的重要性研究

在经济全球化的大背景下,企业面临的风险也在逐渐增多。企业应当不断调整既定战略,并对财务内控措施予以革新,从根本上确保企业的经济效益达到较高的水准。目前,随着人工智能、财务数字化转型以及共享财务中心等研究力度的不断加深,企业在开展财务管理工作的过程中,应普遍采用全面预算管理模式,以促使企业的经济效益得到大幅度提高,但这也给企业的发展带来深刻影响。因此,企业管理者应当制定完善的全面预算管理机制,以确保企业的财务内控体系得以高效运行。因此,企业管理者应当对预算管理工作的任何一个环节予以关注。而预算编制作为全面预算管理工作的首要环节,就更应当引起财务人员的重视。

基于动机激发策略的外科干预在胃癌患者围术期的应用效果及对患者预后的影响研究

目的 探讨基于动机激发策略的外科干预在胃癌患者围术期的应用效果及对患者预后的影响。方法 选取2020年1月—2021年1月厦门大学附属第一医院收治的84例胃癌患者,采用随机法分为对照组和观察组,各42例。对照组采用常规护理,观察组采用基于动机激发策略的外科干预,比较2组患者的疾病感知度、心理状态、应对方式、术后恢复情况、并发症发生情况和预后。结果 干预后,观察组简易疾病感知问卷(brief illness perception questionnaire,BIPQ-R)评分、状态焦虑量表(state-trait anxiety inventory,SAI)评分、患者健康抑郁问卷(patient health questionnaire-9,PHQ-9)评分均低于对照组(P<0.05)。干预后,观察组医学应对问卷(medical coping modes questionnaire,MCMQ)面对应对评分高于对照组,回避应对和屈服应对评分均较对照组低(P<0.05)。观察组术后首次排气时间、首次排便时间、首次下床活动时间和住院时间均较对照组短(P<0.05)。观察组术后并发症发生率为9.52%,较对照组的26.19%低(P<0.05)。随访1年,观察组胃癌复发2例(4.76%),对照组胃癌复发3例(7.14%),差异无统计学意义(P>0.05)。结论 基于动机激发策略的外科干预可降低患者疾病负性感知,改善患者的心理状态及其应对方式,促进术后恢复,减少术后并发症的发生。

伊托必利对重症患者营养不良及肠道屏障功能的改善效果评估

目的探讨伊托必利对重症患者营养不良及肠道屏障功能的改善效果。方法108例重症患者,依据随机数字表法分为对照组和观察组,每组54例。对照组给予常规肠内营养治疗以及益生菌肠内营养干预,观察组在对照组基础上联用伊托必利治疗。比较两组患者不良事件发生情况及治疗前后营养状态[血清总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、血红蛋白(Hb)、微营养评估量表(MNA-SF)评分]、胃肠功能[肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)、血管活性肠肽(VIP)]、肠道屏障功能(D-乳酸、二胺氧化酶及细菌内毒素)。结果治疗2周后,两组患者血清TP、Alb、Hb水平以及MNA-SF评分均高于本组治疗前,且观察组患者血清TP、Alb、Hb水平以及MNA-SF评分分别为(65.71±4.12)g/L、(34.37±3.58)g/L、(101.65±6.46)g/L、(12.56±1.25)分,均高于对照组的(61.24±3.97)g/L、(32.46±3.21)g/L、(98.44±7.11)g/L、(11.08±1.69)分,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗2周后,两组患者IFABP低于本组治疗前,VIP高于本组治疗前,且观察组患者IFABP(25.69±5.73)μg/L低于对照组的(32.82±6.01)μg/L,VIP(47.35±5.68)ng/L高于对照组的(41.63±6.23)ng/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗2周后,两组患者D-乳酸、二胺氧化酶、细菌内毒素均低于本组治疗前,且观察组患者D-乳酸、二胺氧化酶、细菌内毒素分别为(15.52±4.02)mg/dl、(9.26±2.21)U/L、(14.11±4.67)U/L,均低于对照组的(20.76±5.79)mg/dl、(12.29±3.89)U/L、(16.29±4.83)U/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组患者恶心呕吐、感染发生率明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者腹痛腹泻、食欲减退发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论伊托必利可改善重症患者的营养不良状态,促进肠道屏障功能的恢复,纠正胃肠功能紊乱,降低不良事件发生风险,具有良好的临床应用价值。

阿莫西林联合奥美拉唑用于胃炎合并胃溃疡患者的效果研究

探讨确诊为胃炎以及胃溃疡的患者治疗过程中使用联合用药方案所产生的实际效果。方法 病例选择220例,分组后,研究组在用药期间联合阿莫西林、奥美拉唑,对照组采用单一用药治疗。结果 研究组总有效率98.18%高于对照组总有效率90.90%;研究组胃灼热感、饱胀嗳气、腹痛、反酸、饥饿不适在治疗后的分值是(0.45±0.11)分、(0.55±0.12)分、(0.57±0.05)分、(0.71±0.27)分、(0.66±0.12)分,均低于对照组;研究组治疗后MMP-3、MMP-7、TIMP-1依次是(14.21±1.95)ng/L、(55.42±7.91)ng/L、(1.44±0.31)ng/L,均低于对照组;研究组治疗后TNF-α、IL-6依次是(20.25±2.48)pg/L以及(39.85±3.45)μg/L,均低于对照组;研究组Hp根除率97.27%,高于对照组;以上结果对比为P<0.05。治疗前对比两组各项症状积分以及相关实验室指标,还有炎性因子水平,对比不良反应,均为P>0.05。结论 胃炎与胃溃疡合并情况下实施阿莫西林、奥美拉唑联合治疗的效果确切。

泵站电机故障诊断与自动化维护系统研究

水泵站电机为供水系统核心设备,其运行状况直接决定供水稳定性及效能。文章明确了泵站电机在供水系统中的作用,剖析了其常见故障类型,阐述了泵站电机故障诊断技术,提出了一种泵站电机自动化维护系统的整体框架,以为泵站电机故障诊断与自动化维护提供参考。

特定视角聚焦护理在老年胆石症伴原发性高血压患者围术期的应用

目的探讨特定视角聚焦护理在老年胆石症伴原发性高血压患者围术期的应用效果。方法选取我院2021年5月至2022年5月92例老年胆石症伴原发性高血压患者,按随机数数字表法分为两组,对照组46例予行常规护理,观察组46例行特定视角聚焦护理。比较两组血压、心理状态及并发症。结果护理后,观察组舒张压及收缩压较对照组降低(P<0.05);护理后,观察组SDS评分、SAS评分较对照组降低(P<0.05);观察组并发症发生率(6.52%)低于对照组(21.74%)(P<0.05)。结论特定视角聚焦护理能改善老年胆石症伴原发性高血压患者的血压,调节心理状态,降低并发症风险。

伤口造口护理小组对临床压力性损伤预防与治疗的应用价值分析

评估伤口造口护理小组在预防和治疗临床压力性损伤中的作用。方法 我们选择了68名患者进行分组研究,分别实施了常规护理和伤口造口护理小组模式。结果 在伤口造口护理小组的护理下,患者的生活质量评分较高,压力性损伤发生率较低,患者的损伤情况也较轻微。此外,患者对护理满意度更高,整体数据与对照组存在显著差异(p<0.05)。结论 伤口造口护理小组可有效降低患者发生压力性损伤的风险,提高护理质量和患者生活质量。

初中化学教学中互动式教学法的应用研究

通过实验探究、问题解决、小组讨论等多元化方法,互动式教学可以显著提高学生的学习兴趣、主动性和学习效率,同时促进学生间的交流与合作。这种教学模式不仅关注学生的学业成就,也重视教师的专业发展,可以实现教学相长。基于此,探究初中化学教学中互动式教学法的应用,强调开放、包容的教学评价体系的重要性,通过展示互动教学法的实施过程和效果,为初中化学教学提供科学、有效的教学策略,通过师生、生生间的互动交流,提升学生的科学素养和创新思维,旨在推动化学教育的改革与发展,促进学生的全面发展。

浅析茶陵县关停煤矿矿涌水污染综合整治技术

已关闭煤矿突然涌出大量酸性矿涌水,酸性废水pH值在3~4左右,酸性较强,水中铁、锰重金属含量严重超标,同时因矿涌水中铁、锰离子浓度较高,铁、锰氧化形成的沉淀物附着于底泥会导致河床呈铁锈色,观感极差,酸性矿涌水未经妥善处理直接外排,导致下游土壤、水体及底泥酸化、重金属富集,严重影响土壤和水体的正常功能。矿涌水污染综合整治,刻不容缓,矿涌水污染综合整治技术尤为重要。

基于项目驱动的Web程序设计基础课程改革研究

针对传统Web程序设计基础教学中存在的理论知识讲授和实践能力培养脱节、教学内容陈旧、缺乏项目工程思维等问题,分析课程改革的必要性,探讨基于项目驱动的Web程序设计基础课程改革思路。通过分析实践项目的案例,详细阐述基于项目驱动的Web程序设计基础课程的教学模式和教学方法,并且对该教学模式进行评估和总结。实践结果表明,基于项目驱动的Web程序设计基础课程教学模式是一种有效的教学方法,学生能够深入理解并掌握Web程序设计的基本原理和技术,并且在实践中积累经验,提升综合素质和实际应用能力。

牛结节性皮肤病病毒研究进展

牛结节性皮肤病(LSD)在全世界范围内均有流行和记载,对我国养牛业构成了严重的威胁。接种疫苗是目前防控LSDV最有效的方法,其中减毒活疫苗在许多国家均有使用。近年研究表明,LSDV活疫苗的使用会造成疫苗重组病毒的流行,接种后会引起动物不同程度的不良反应。对LSDV的病原学特征、分离鉴定方法、流行病学的情况、检测方法以及LSDV疫苗的研究进展进行了阐述,以期为牛结节性皮肤病的免疫预防以及鉴别诊断提供研究思路。