龟板抑制破骨分化改善骨质疏松性骨折

目的基于网络药理学和实验验证探讨龟板(plastrum testudinis,PT)治疗骨质疏松性骨折(osteoporotic fracture,OF)的潜在机制。方法借助BATMAN数据库得到PT成分及其对应靶标,检索GeneCards、OMIM数据库获得OF相关靶点,在STRING数据库输入交集靶点得到蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)信息,借助Cytoscape3.7.2软件进行PPI网络及“龟板-活性成分-靶标-骨质疏松性骨折”网络的构建,使用Cytoscape3.7.2软件、R软件进行GO功能富集分析及KEGG通路富集分析。此外,为了验证网络药理学研究结果的可靠性,还进行体内实验验证龟板改善OF的作用,并通过体外实验探究了龟板干预下的人外周血单核细胞(human peripheral blood monocytes,HPBMs)表型。结果获得龟板6个活性成分,342个作用靶标,其中与OF相关靶标34个,GO功能富集分析共有802个结果(P<0.05),KEGG富集分析有67个结果,其中相关信号通路有22条(P<0.05),主要涉及TNF、MAPK、Estrogen、NF-κB等信号通路。值得一提的是,体内实验证实龟板可有效治疗OF模型大鼠的骨缺损;体外实验发现龟板能抑制RANKL诱导的HPBMs破骨分化。结论龟板可能通过多种化合物、靶点和通路调节炎症反应、激素代谢及细胞周期来治疗OF,其中抑制破骨分化可能是龟板抗骨质疏松性骨折的重要机制。

由“阳有余而阴不足”探讨自噬调节糖皮质激素介导的破骨分化

目前,糖皮质激素(glucocorticoids,GC)在临床上被广泛应用于抑制炎症反应与免疫系统,然而GC的长期大量应用会引起破骨细胞过度活跃,导致骨质疏松症以及相关骨折,被称为糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)。GIOP属于中医学“骨痿”“骨枯”的范畴,“骨痿”的发病病机与机体阴阳失衡密切相关。细胞自噬作为一种自我保护机制,对维持机体内环境平衡、调节“成骨-破骨”形成的骨稳态至关重要。成骨细胞与破骨细胞介导的骨稳态与中医理论中的阴阳自和理论不谋而合。本文基于GIOP发病的病机“阳有余而阴不足”探讨通过“调节自噬-平衡阴阳”来调控骨稳态,为防治GIOP提供新的思路。

龟板提取物抑制细胞衰老缓解SOP小鼠骨量丢失及海马退变

目的探讨龟板提取物(Plastrum testudinis extract,后简称PTE)通过抑制细胞衰老缓解SOP小鼠的骨量丢失及海马退变的作用。方法动物实验:应用传统半乳糖皮下注射+去势法建立老年性骨质疏松症(senile osteoporosis,SOP)模型,将C57/BL6小鼠分为雌性或雄性的CON组、SOP组、SOP+PTE组;SOP+PTE组在造模过程中用PTE 0.5 g/mL灌胃干预4周,取材前1周进行行为学实验,后取大脑、L4椎体,检测骨和海马组织形态学;细胞实验:利用过氧叔丁醇(TBHP)诱导MC3T3/HT22细胞衰老,分别观察诱导后HT22半乳糖苷酶染色、衰老标志物和MC3T3成骨、衰老标志物的变化及PTE相应的治疗效果。结果MicroCT提示雌雄小鼠中,与CON组相比,SOP组骨量丢失,SOP+PTE组骨量则得到了恢复;骨HE切片结果与MicroCT结果相符;海马组织切片提示,与CON组相比,SOP组海马出现退变,而SOP+PTE组退变则得到缓解。在新物体识别实验和时序实验中,与CON、SOP组相比,雄性SOP+PTE组记忆能力明显恢复;但雌雄小鼠旷场实验均无明显变化。②TBHP可诱导MC3T3衰老,降低成骨能力及增加衰老蛋白表达,而当加入PTE后,均能逆转TBHP导致的成骨能力降低与蛋白下降;TBHP亦可增加HT22半乳糖苷酶染色区域,增加衰老蛋白表达,而加入PTE后,上述变化均得到逆转。结论PTE通过抑制前成骨细胞与海马神经元细胞的衰老,缓解SOP小鼠的骨量丢失和海马衰老退变。

血红蛋白与老年骨质疏松性骨折的相关性分析

目的探讨血红蛋白水平与老年骨质疏松骨折的关系。方法选取2021年1月至2022年5月在广州中医药大学第一附属医院骨二科住院的50岁以上且诊断为脊柱骨折的324例患者。从电子病历中收集患者骨密度、血红蛋白等医疗数据。结果对男性骨质疏松骨折,贫血发生率明显升高,血红蛋白水平明显降低(P<0.001);而女性未发现相关性。以贫血分组,两性的骨密度均因贫血而降低(P<0.01)。相关性分析显示,男性血红蛋白与L_(1~4)骨密度(r=0.466,P<0.001)、左股骨颈骨密度(r=0.424,P<0.001)、左髋骨密度(r=0.469,P<0.001)相关;女性血红蛋白与L_(1~4)骨密度(r=0.199,P=0.002)、左股骨颈骨密度(r=0.326,P<0.001)、左髋骨密度(r=0.341,P<0.001)相关。二元Logistic回归发现男性中血红蛋白水平与骨质疏松症之间存在关联(OR=0.956,95%CI:0.917~0.997,P=0.035);女性未发现关联。结论血红蛋白水平和骨密度相关,血红蛋白水平降低可能会致老年男性骨质疏松骨折高风险。

从少火生气理论探讨肾气丸促巨噬细胞M2型极化影响成骨的作用

目的基于少火生气理论探讨肾气丸原组方(SQW)和肾气丸去除桂枝、附子(SQQ)诱导巨噬细胞M2型极化对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)成骨分化作用的效果差异。方法采用CCK8法分别检测SQW、SQQ对RAW264.7细胞存活率的影响,以确定药物干预的安全作用浓度。将RAW264.7细胞分为CON组、IL-4组、IL-4+SQW组、IL-4+SQQ组。将不同药物组诱导巨噬细胞M2型极化后分泌的细胞上清液作为条件培养基培养BMSC,评估BMSC成骨分化的能力。用碱性磷酸酶染色法(ALP)及茜素红染色法(ARS)检测各组BMSC成骨分化能力;使用免疫荧光技术(IF)检测BMSC成骨标志蛋白骨形态发生蛋白4(BMP4)、骨保护素(OPG)的分布和表达;使用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测M2型巨噬细胞极化相关的精氨酸酶1(ARG1)、白细胞介素10(IL-10)的表达以及BMSC成骨相关的BMP4、RUNT相关转录因子2(RUNX2)的表达。结果与IL-4+SQQ组相比,IL-4+SQW组更加显著促进M2型巨噬细胞极化相关因子ARG1、IL-10上调(P<0.01),且其条件培养基培养的BMSC的ALP及ARS染色增强,成骨蛋白BMP4、OPG、RUNX2表达升高(P<0.05)。结论肾气丸原组方与肾气丸去除桂枝、附子两味药相比,具备更强的促进巨噬细胞M2型极化与增强BMSC成骨分化能力,为少火生气理论提供了实验依据。

黄芩素对TBHP诱导小鼠髓核细胞衰老的保护作用

目的研究黄芩素(Baicalein,BAI)对叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导的小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)的影响。方法取8周龄小鼠,体外分离培养髓核细胞,传代至P2~P3代。将实验分为对照组、模型组及黄芩素组3组。β半乳糖苷酶染色检测髓核细胞衰老变化。实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测聚集蛋白聚糖(aggrecan)、Ⅱ型胶原蛋白(collagenⅡ)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、p53、p16 mRNA表达。免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测TNF-α表达水平。免疫印迹试验(Western blot)检测白细胞介素-6(IL-6)、aggrecan、p53、p16、IL-1β、TNF-α蛋白表达。结果TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,干预时间4 h;黄芩素最佳干预浓度为1.0μg/mL,干预时间为24 h。与对照组比较,模型组β半乳糖染色阳性率较对照组显著升高(P<0.05),p53、p16、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),MMP-3 mRNA表达显著升高(P<0.05),MMP-9 mRNA表达升高,差异无统计学意义(P>0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),collagenⅡmRNA表达降低,差异无统计学意义(P>0.05),IL-6蛋白表达升高,差异无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,黄芩素组β半乳糖染色阳性率较模型组明显降低(P<0.05),p53、p16、IL-1β、TNF-αmRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05),MMP-3、MMP-9 mRNA表达显著降低(P<0.05),aggrecan mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05),collagenⅡmRNA表达显著升高(P<0.05),IL-6蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论黄芩素能延缓TBHP诱导的小鼠髓核细胞衰老的进程。

小鼠髓核细胞体外衰老模型的建立及评价

目的:建立并评价小鼠髓核细胞(nucleus pulposus cells,NPCs)体外衰老模型.方法:取8周龄C57BU6雄性小鼠,体外分离培养小鼠NPCs,并采用细胞免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测NPCs标志蛋白聚集蛋白聚糖(aggrecan)的表达进行细胞鉴定.取不同浓度(0μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L)的叔丁基过氧化氢(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)干预NPCs,采用CCK8法检测干预2h、4h后的细胞活性,筛选TBHP的最佳干预浓度及时间.应用最佳干预浓度TBHP、最佳干预时间干预P1代NPCs后换成完全培养基继续培养24h、48h、72h,采用衰老相关β半乳糖苷酶染色(senescence-associatedβ-galactosidase staining,SA-β-gal)检测各时间点的衰老NPCs阳性率,观察不同时间点NPCs的衰老变化.将P2代NPCs分为对照组和模型组,对照组在完全培养基中培养,模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测两组细胞衰老相关基因p53、p21、p16以及Aggrecan、Ⅱ型胶原蛋白(collagen Ⅱ)、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶-5(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs-5,ADAMTS-5)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、基质金属蛋白酶-13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)mRNA表达,免疫印迹法(Western blot,WB)检测Aggrecan、Collagen Ⅱ、MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达水平.结果:分离培养的细胞高表达Aggrecan,为NPCs.TBHP最佳干预浓度为100μmol/L,最佳干预时间为4h.在100μmol/L TBHP干预4h后培养24h、48h、72h,NPCs的SA-β-gal染色阳性率均显著性增加(P<0.05),三个时间点间无统计学差异(P>0.05),后续模型组加入最佳干预浓度TBHP干预最佳时间干预后换成完全培养基培养24h,对照组培养相同时间.RT-qPCR检测模型组p53、p21、p16、MMP-3、MMP-13、ADAMTS-5 mRNA表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ mRNA表达较对照组显著性降低(P<0.05);WB检测模型组MMP-3、MMP-13、p53、p21蛋白表达较对照组显著性升高(P<0.05),Aggrecan、Collagen Ⅱ蛋白表达较对照组显著性降低(P<0.05).结论:采用TBHP诱导能成功构建小鼠NPCs体外衰老模型,可为椎间盘退行性变的发病机制研究提供良好的研究样本.

左归丸上调ALKBH5对小鼠BMSCs成骨分化的作用

目的基于去甲基化酶ALKBH5探讨左归丸对小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化的作用。方法体外分离培养小鼠BMSCs,将3~5代细胞随机分成:①成骨诱导0、3、7 d;②空白组(CON)、左归丸组(ZGW,1000μg/mL);③使用小干扰RNA(siRNA)转染小鼠BMSCs,构建ALKBH5沉默的小鼠BMSCs,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测沉默效率,而后将细胞分成对照组(si-NC)、左归丸组(si-NC+ZGW)、沉默组(si-ALKBH5)、沉默+左归丸组(si-ALKBH5+ZGW)。以碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红(ARS)染色法检测各组BMSCs成骨分化水平与矿化能力;RT-qPCR检测各组成骨分化相关因子COL1A1、BMP4、Osx以及去甲基化酶ALKBH5的mRNA表达水平;通过免疫印迹法(Western-blot)检测各组BMSCs中成骨相关蛋白Runx2、BMP4、BMP2以及ALKBH5的蛋白表达水平。结果小鼠BMSCs成骨分化过程中,ALKBH5 mRNA和蛋白表达均上调。左归丸能够上调ALKBH5的蛋白表达水平,上调成骨相关蛋白Runx2、BMP2的表达,促进小鼠BMSCs成骨分化。使用siRNA沉默ALKBH5后,Runx2、Osx的mRNA表达和蛋白表达均下调,左归丸干预ALKBH5沉默细胞逆转了ALKBH5的蛋白表达下调,Runx2、BMP2相应表达上调,成骨分化能力下降被抑制。结论小鼠BMSCs成骨分化过程中ALKBH5去甲基化酶的表达水平上调。左归丸上调ALKBH5促进小鼠BMSCs成骨分化。

用于骨折延迟愈合和骨折不愈合的中药汤剂的用药规律研究

目的:探讨用于治疗骨折延迟愈合和骨折不愈合的中药汤剂的用药规律。方法:应用计算机检索中国知网、万方数据、维普网及中国生物医学文献数据库建库至2018年6月1日收录的所有口服中药汤剂治疗骨折延迟愈合和骨折不愈合的文献。通过阅读题目、摘要及全文筛选文献,提取文献中涉及的方剂及药物,分析用药规律。结果:最初共检索到2203篇文献,通过筛选后纳入110篇文献,涉及方剂115首、药物57种,57种药物共出现1151次。57种药物中,出现频次≥20次的药物有22种,按照出现频次从高至低排在前10位的依次为当归(79次)、骨碎补(65次)、熟地黄(61次)、续断(56次)、甘草(51次)、自然铜(46次)、黄芪(45次)、丹参(41次)、牛膝(40次)、川芎(38次)。57种药物涉及的药性包括温、平、寒、热,以温(639次)、平(329次)、寒(177次)为主;酸、苦、甘、辛、咸、淡、涩7种药味均有涉及,以甘(788次)、苦(512次)、辛(441次)味药为主;归各脏腑经络的药物均有,以归肝经(860次)、肾经(509次)、脾经(454次)、心经(343次)、肺经(207次)、胃经(141次)药物为主; 57种药物中具有活血化瘀(452次)、和营止痛(285次)、接骨续筋(247次)、补益肝肾(242次)、补气养血(146次)、补脾养胃(125次)作用的药物出现的频次较多。结论:用于骨折延迟愈合和骨折不愈合的中药汤剂中的高频中药包括当归、骨碎补、熟地黄、续断、甘草、自然铜、黄芪、丹参、牛膝、川芎,药性以温、平、寒为主,药味以甘、苦、辛为主,归经以归肝经、肾经、脾经、心经、肺经、胃经为主,功效以活血化瘀、和营止痛、接骨续筋、补益肝肾、补气养血、补脾养胃为主。

不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律研究

目的探讨不同代数骨髓源性巨噬细胞增殖及诱导破骨分化的规律。方法选取8周龄C57BL/6小鼠P0~P4共5代骨髓源性巨噬细胞,随机选择镜下视野计数杂质细胞与衰老细胞;运用CCK8法检测骨髓源性巨噬细胞的增殖能力;诱导巨噬细胞破骨分化,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色量化破骨细胞数量与破骨细胞面积,比较不同代数之间指标差异。结果P0组、P1组骨髓源性巨噬细胞的杂质较P2组、P3组、P4组更多,且差异有统计学意义;96 h内,P2组骨髓源性巨噬细胞的增殖能力最强,P3组、P4组次之,P0组、P1组最差;诱导破骨分化后,P2组骨髓源性巨噬细胞诱导出破骨细胞数量最多,面积最大,P3组次之,P0组、P1组、P4组诱导出破骨细胞数量少,面积小。结论P2组骨髓源性巨噬细胞的纯度最高,增殖速度最快,破骨分化能力最强。

经皮椎间孔镜技术治疗腰椎间盘突出症的应用进展

腰椎间盘突出症(LDH)是骨科临床常见病,其治疗方式有非手术治疗与手术治疗。许多文献报道了非手术治疗方法令人振奋的治愈率,但遗憾的是,其研究结果大多未经严谨科学的论证。在手术治疗方面,传统开放手术具有创伤大、并发症多、易复发等缺点;微创技术具有创伤小、恢复快、并发症少等优点,使微创手术更受青睐。随着经皮椎间盘切吸术、经皮激光汽化椎间盘减压术、经皮低温等离子射频消融髓核成形术、臭氧髓核消融术、胶原酶溶解术、显微内镜椎间盘切除术等新方法的出现,腰椎间盘突出症手术治疗有了新的进步,但因以上方法的适应症较窄、疗效不确定等因素,以至于临床应用不甚广泛。随着脊柱外科微创和内镜技术的发展,经皮内镜技术治疗腰椎间盘突出症的临床实践越来越多,本文从经皮内镜技术的发展史、临床应用、并发症等几个方面作一综述。

黄芩素通过BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨作用的实验研究

目的探讨黄芩素(BAI)对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)成骨分化的作用及其分子机制。方法将MC3T3-E1分为对照组(正常培养)和BAI组(以Baicalein处理),在成骨分化条件培养下采用CCK-8检测BAI对MC3T3-E1细胞增殖的影响;分别以碱性磷酸酶染色(ALP)、茜素红染色(ARS)检测MC3T3-E1细胞成骨分化水平与矿化能力,实时荧光定量PCR检测成骨标志基因ALP、COL1A1、RUNX2、OSX的mRNA表达水平,通过免疫印迹法(Western-blot)检测MC3T3-E1细胞中BMP-2、Smad1、p-Smad1蛋白表达水平,通过免疫荧光技术(IF)检测RUNX2、COL1A1表达水平。结果与对照组比较,BAI干预1 d后发现,BAI组COL1A1(P<0.001)、RUNX2(P<0.05)、OSX(P<0.05)mRNA表达水平在成骨分化中表达上升;干预3 d后发现,与对照组比较,BAI组ALP(P<0.05)、RUNX2(P<0.001)mRNA表达上升;干预7 d后发现,与对照组比较,BAI组COL1A1(P<0.05)mRNA表达水平较对照组上升,BMP-2、p-Smad1/Smad1蛋白表达水平上升(P<0.05)。免疫荧光中成骨标志蛋白RUNX2、COL1A1表达增多(P<0.05)。结论BAI可通过激活BMP-2/Smad通路促进MC3T3-E1成骨分化。

mTORC1抑制自噬调控Wnt/β-catenin信号通路在激素环境下对MC3T3-E1成骨分化的影响

目的探讨激素环境下,mTORC1是否通过抑制自噬调控Wnt/β-catenin信号通路介导前成骨细胞MC3T3-E1向成骨细胞分化。方法对前成骨细胞MC3T3-E1进行以下分组及处理:对照组、地塞米松(Dexamethasone,DEX)组、DEX+mTORC1激活剂组,其中DEX为1μmol/L,mTORC1激活剂为10μmol/L的MHY1485。应用ALP及ARS染色检测MC3T3-E1的成骨能力。Real-time PCR检测mTORC1组成中的关键基因Raptor,自噬相关基因Beclin-1、Atg5,Wnt/β-catenin信号通路相关基因Wnt3、β-catenin及成骨相关基因Runx2的表达。Western-Blot检测Raptor、Beclin-1、Atg5、Wnt3、β-catenin、Runx2的蛋白表达水平。结果与对照组相比,DEX组的ALP及ARS染色较浅,成骨相关基因Runx2 mRNA及蛋白质表达下降,说明DEX抑制MC3T3-E1的成骨分化,且Raptor的mRNA及蛋白质水平下降,自噬相关基因Beclin-1、Atg5 mRNA及蛋白表达水平上升,说明DEX诱导MC3T3-E1自噬,而Wnt3、β-catenin mRNA及蛋白质表达下降。与DEX组相比,DEX+mTORC1激活剂组ALP及ARS染色较深,Raptor、Wnt3、β-catenin、Runx2 mRNA及蛋白质表达上调,而Beclin-1、Atg5 mRNA及蛋白质表达下降,表明应用mTORC1激活剂后抑制自噬并上调Wnt/β-catenin信号通路,从而逆转DEX对MC3T3-E1向成骨细胞分化的抑制作用。结论在激素环境下,MC3T3-E1成骨分化显著被抑制,mTORC1下调,自噬激活且Wnt/β-catenin信号通路被抑制,而应用mTORC1激活剂则能逆转该过程,表明mTORC1抑制自噬并调控Wnt/β-catenin信号通路介导激素环境下的MC3T3-E1成骨分化。

左归丸下调自噬抑制破骨分化治疗老年性骨质疏松症

目的:探讨左归丸通过下调自噬抑制小鼠骨髓源性巨噬细胞(BMMs)破骨分化治疗老年性骨质疏松症(SOP)。方法:构建SOP小鼠模型,随机将20只小鼠分为2组,分别是衰老组(SOP组)和左归丸治疗组(左归丸组)。左归丸治疗2个月后,Micro-CT检测骨体积分数(BV/TV),TRAP染色检测骨小梁表面破骨细胞(OCs)数量,免疫组化(IHC)检测骨组织中P-BECLIN1的表达情况。提取小鼠BMMs,用不同浓度左归丸干预BMMs的破骨分化过程,TRAP染色观察OCs数量,RT-qPCR检测自噬标志基因Atg5、Atg12、LC3、P62 mRNA表达水平,Western Blot检测细胞中NFATC1、CTSK、LC3、P62和P-BECLIN1的蛋白表达水平。结果:体内实验中,与SOP组比较,左归丸组BV/TV明显增高(P<0.01);TRAP染色提示左归丸组骨小梁表面OCs数量明显少于SOP组(P<0.01);IHC检测发现左归丸组小鼠骨髓腔中P-BECLIN1表达量较SOP组显著下调(P<0.01)。体外实验中,与对照组比较,10、100、1000μg/mL左归丸均可抑制RANKL诱导的BMMs破骨分化(P<0.01),在抑制破骨分化过程中,自噬基因Atg5、Atg12、LC3 mRNA表达显著下降(P<0.05,P<0.01),P62 mRNA表达显著上升(P<0.01)。Western Blot显示左归丸可以下调NFATC1、CTSK、LC3、P-BECLIN1的蛋白表达,上调P62的蛋白表达。结论:左归丸下调自噬,抑制OCs形成,为临床治疗SOP提供新的思路。

龟甲提取物干扰NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路改善老年性骨质疏松的研究

目的:探讨龟甲提取物对NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路的调节作用及改善老年性骨质疏松的起效机制。方法:超高效液相联用质谱技术完成龟甲水提液中有效成分的鉴定。体外实验中,TRAP染色法检测龟甲提取物对骨髓源性巨噬细胞破骨分化的影响,使用NF-κB信号通路激动剂与抑制剂验证龟甲提取物对NF-κB信号通路的影响,使用NLRP3炎症体激动剂与抑制剂验证龟甲提取物对NLRP3炎症体活性的影响,RT-qPCR检测Nfatc1、Ctsk基因的表达量,Western Blot法检测p50、p-p50、NLRP3、IL-1β、pro-IL-1β的表达量。体内实验中,将6只3月龄C57BL/6小鼠作为对照组,12只22月龄自然衰老小鼠随机分为老年性骨质疏松模型组、龟甲提取物干预组,每组6只,连续干预8周。结果:筛选出龟甲水提液有效成分肉豆蔻酸。体外实验:与对照组比较,肉豆蔻酸显著抑制破骨分化(P<0.01),Nfatc1、Ctsk基因的表达量被显著抑制(P<0.05,P<0.01),p-p50、NLRP3、IL-1β、pro-IL-1β的表达量显著下调(P<0.01)。体内实验:与模型组比较,肉豆蔻酸有效提高骨体积分数(P<0.05),抑制骨髓腔中炎症体的表达量(P<0.01)。结论:龟甲提取物肉豆蔻酸改善老年性骨质疏松可能与干扰NF-κB-NLRP3炎症体正反馈回路,抑制破骨细胞形成相关。

从“肾主骨生髓”揭示骨质疏松症炎症微环境的中医理论基础

骨质疏松症与炎症微环境密切相关,提示炎症微环境可能是骨质疏松症发病的重要机制。骨质疏松症属于中医“骨痿”范畴,肾虚作为骨质疏松症发病的核心病机,肾精亏虚,气血津液生化不足,运行无力,从而痰瘀内生,激活炎症微环境,导致骨稳态失衡,诱发骨质疏松。因此,文章从“肾主骨生髓”角度,探讨骨质疏松症炎症微环境的中医内涵。深入探讨“肾主骨生髓”理论与炎症微环境之间的现代内涵,为诠释骨质疏松症病因病机提供新视角。

基于肾脑相关理论探讨龟甲治疗老年性骨质疏松症的作用

目的:从肾脑相关理论探讨龟甲改善自然衰老小鼠骨质疏松症和海马衰老的作用。方法:(1)动物实验:22月龄C57/BL6雌性自然衰老小鼠分为模型组(4只)、龟甲干预组(7只),分别予0.9%氯化钠溶液或龟甲4 g/kg干预8周,取材前1周行旷场实验和水迷宫实验,然后取小鼠大脑、股骨,检测股骨微细结构、组织形态学和海马组织形态学。(2)细胞实验:提取胎鼠海马神经元,龟甲干预,CCK8和免疫荧光分别检测龟甲对海马神经元增殖的作用和标志物Nestin表达;收集龟甲干预海马神经元的上清液作为条件培养基,干预小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC),观察对BMSC成骨分化和矿化的作用。结果:(1)动物实验:与模型组比较,龟甲干预组可显著提高小鼠运动总距离(P<0.05),降低静止时间和四周运动时间(P<0.01,P<0.05);增加水迷宫实验中穿越站台次数(P<0.05),降低逃避潜伏期时间(P<0.01);改善模型组小鼠股骨微细结构,增加骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数量(Tb.N)(P<0.05),降低骨小梁分离度(Tb.Sp)(P<0.01);改善股骨组织形态学,促进成骨细胞表面(Ob.S/BS,P<0.01)和数量(Ob.N/BS,P<0.05),抑制破骨细胞表面(Oc.S/BS,P<0.01)和数量(Oc.N/BS,P<0.05);改善海马组织形态学,增加海马CA3区尼氏体的数量(P<0.05)。(2)细胞实验:龟甲在1μg/mL促进海马神经元细胞增殖(P<0.05)和Nestin蛋白表达(P<0.01)。龟甲干预的海马神经元条件培养基提高了碱性磷酸酶(ALP)染色面积和茜素红(ARS)染色矿化面积(P<0.05)。结论:龟甲能改善自然衰老小鼠骨质疏松症和海马衰老,并且促进海马神经元增殖,其干预后的海马神经元条件培养基能够促进小鼠BMSC成骨分化。

从肾-脑-骨生物轴探讨老年性骨质疏松症海马-下丘脑-垂体-性腺轴失衡的神经内分泌机制

肾-脑-骨生物轴是对中医肾脑相关理论及“肾主骨”理论内涵的高度概括与整合,指出肾、脑、骨三者之间相互联系、相互影响,且髓是沟通三者的物质基础。老年性骨质疏松症归属于中医“骨枯”“骨痿”范畴,是肾-脑-骨生物轴中“骨”病变的体现。研究证实,海马不仅与衰老密切相关,同时是下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的高级调控中枢,提示海马-HPG轴失衡可能是老年骨质疏松发生的重要机制。因此,文章基于肾-脑-骨生物轴,探讨老年性骨质疏松症海马-HPG轴失衡的神经内分泌机制,并提出补肾填精是维持肾-脑-骨轴生理功能及纠正该轴失衡的根本要法,可能在防治老年性骨质疏松症中具有良好的应用前景。